UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA

ESCUELA DE QUÍMICA

PROGRAMA DE QUÍMICA INDUSTRIAL

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA.

SESIÓN # 1:
FERMENTACIONES Y METANOGÉNESIS.

OBJETIVOS:

1. Realizar un proceso de fermentación anaerobia a partir de sedimentos orgánicos, con el

fin de evidenciar la acción de algunas bacterias metanogénicas.
2. Cuantificar la producción de gas obtenido en el proceso de Metanogénesis.

MARCO CONCEPTUAL:

En los procesos de fermentación, la energía de los sustratos orgánicos es transferida a trifosfato de

adenosina (ATP) exclusivamente, a través de fosforilaciones a nivel de sustrato. Como las
fermentaciones no requieren de oxígeno, pueden llevarse entonces a cabo en ausencia de aire y
dicho proceso recibe el nombre de anaeróbico. Los productos finales de fermentaciones en
ecosistemas naturales varían dependiendo esencialmente de las capacidades metabólicas de los
organismos presentes y a la naturaleza de la fuente de carbono inicial (Figura 1). Un ejemplo
clásico es la biodegradación de materia orgánica en sedimentos anaeróbicos, donde el primer
grupo de poblaciones bacterianas (aquellas que pueden utilizar directamente la materia orgánica
disponible) la hidrolizan hasta azúcares y compuestos menos complejos. Los productos
metabólicos de este grupo sirven como sustrato a un segundo grupo de fermentadores que
generan diferentes ácidos orgánicos (Ej: butírico, acético, láctico, etc.), dióxido de carbono e
hidrógeno. Finalmente, CH3COO-, CO2 y H2 sirven como materia prima para que bacterias
metanogénicas actúen produciendo metano, que será el producto final de la descomposición
anaeróbica.
Hábitats de bacterias metanogénicas:
Las bacterias metanogénicas abundan en ambientes donde limitan a los aceptores de electrones,
tales como O2, NO3-, Fe3+ y SO42-.
Ambientes como los digestores anaerobios, sedimentos anóxicos, suelos de humedales y tractos
gastrointestinales, son algunos de los hábitats típicos para encontrar este tipo de
microorganismos.

Figura 1. Cadena alimenticia microbiana en ambientes anaerobios.

1. Bacterias hidrolíticas – acidogénicas.

2. Bacterias homoacetógenas.
3. Bacterias acetógenas.
4. Bacterias metanógenas – hidrogenófilas.
5. Bacterias metanógenas – acetocásticas.
Características generales de las bacterias metanogénicas (ver tabla 1):
• Producen grandes cantidades de metano como producto principal de su metabolismo
energético.
• Todos son anaerobios estrictos.
• Son miembros del Grupo Arquea (arqueabacterias).

Tabla 1: Características generales de las principales familias de bacterias metanogénicas.

Reacciones químicas típicas, generadas por bacterias metanogénicas:

4 (H2) + CO2 CH4 + 2 H2O

4 (Formato) CH4 + 3 CO2 + 2 H2O

4 (2-Propanol) + CO2 CH4 + 4 acetona + 2 H2O

2 (Etanol) + CO2 CH4 + 2 acetato

Metanol + H2 CH4 + H2O

4 (Metanol) 3 CH4 + CO2 + 2 H2O

Acetato CH4 + CO2

MATERIALES:
 Tubos de ensayo (25 x 150 mm).
 Tapones de goma con agujero.
 Beaker 500 mL.
 Tubo de goma o manguera tipo catéter.
 Muestra de sedimentos.

REACTIVOS:
 KOH 0,1N.
 H2SO4c.
 Solución A (0,1%NH4Cl, 0,04%K2HPO4, 0,01%MgCl2, 2% acetato de calcio, 1%
metanol, pH 7).

PROCEDIMIENTO:

1. Ensamble un sistema tal cual como se ilustra a continuación:

Sumerja el tubo II en una solución de KOH 0,1N. Este tubo recogerá el gas metano que se
produzca. El metano desplazará la solución de KOH del tubo II.

2. Adicione de 1 a 2 cm de sedimento al tubo I (tubo de fermentación).

3. Complete hasta 75% del volumen del tubo I con la Solución A y cubra la superficie del
beaker con parafina (o en su defecto, teflón). Determine el pH del sobrenadante.
4. Prepare un segundo sistema de manera igual al anterior, PERO reemplazando la Solución A
por 5 mL de H2SO4.
5. Marque el nivel de solución en el tubo colector de gases (representando el tiempo cero).
6. Incube ambos sistemas a temperatura de laboratorio.
 7. Registre semanalmente y durante 3 semanas, los cambios observados en términos de
temperatura, pH, tipo y concentración de sustrato, sales, etc.
8. Determine el pH del medio al finalizar la incubación.
9. Grafique los resultados y aplique análisis estadístico para aceptar o rechazar la hipótesis
nula.

DATOS Y ANÁLISIS:

a. Diligencie la siguiente tabla según sus observaciones semanales:

pH inicial:_____________ pH inicial:_________

pH final:______________ pH final: __________

b. Grafique sus resultados con el fin de observar cómo fluctúa la cantidad de gas con
respecto al tiempo.

PREGUNTAS:

1. ¿Por qué el acetato se adicionó al tubo de fermentación?

2. Explique la función e importancia del KOH.
3. ¿Existen diferencias significativas en la producción de gas entre los sistemas I y II?
Explique.