DEPURACION DE AIRE CONTAMINADO

ste ejemplo analiza la producción de un anticuerpo monoclonal terapéutico típico. En

En el caso base, se producen aproximadamente 6,2 kg de producto purificado por año en 46 lotes. los
El costo de fabricación para producir cantidades mayores se estima como parte del análisis de sensibilidad.
Descripción del proceso
Sección aguas arriba. El diagrama de flujo completo se muestra en la Figura 11-18. El libre de suero y
el polvo de medios de bajo contenido en proteínas se disuelve en WFI en un tanque de acero inoxidable (V-101), y
La solución se esteriliza utilizando un filtro de pulido de extremo muerto de 0,1 μm (DE-101). La concentración de
El medio en polvo en la solución de alimentación es de 10 g / litro. Se utiliza un biorreactor de tanque agitado (V-102) para crecer
Las células que expresan la inmunoglobulina terapéutica G (IgG). El biorreactor funciona en fedbatch.
modo. Un tiempo de ciclo de 156 horas (132 horas para la fermentación y 24 horas para el cambio)
Se asumió para el biorreactor. El volumen de caldo generado por lote de biorreactor es
aproximadamente 2.200 litros que contienen 220 g de producto (el título del producto es de 100 mg / L). El total
El volumen del recipiente del biorreactor es de 3.000 litros.
Sección aguas abajo. La biomasa generada y otros compuestos en suspensión son
se eliminó utilizando un diafiltros de membrana de 0,65 µm (DF-101). El rendimiento de recuperación del producto de este paso es
95%. Este paso de filtración dura 5,1 horas y requiere un área de membrana de alrededor de 30 m2. El clarificado
La solución se concentra 20 veces utilizando un ultrafiltro de corte de 50,000 MW (UF-101). La recuperación
El rendimiento de este paso es del 95%. Este paso lleva 3,6 h y requiere un área de membrana de 40 m2. La mayor parte
de las proteínas contaminantes se eliminan utilizando una columna de cromatografía de afinidad de proteína A (C-
101). Se hicieron las siguientes suposiciones operativas: (1) la capacidad de unión de la resina es de 15 mg de
producto por ml de resina; (2) el eluyente es una solución 0.1 M de citrato de sodio, y su volumen es
igual a 6 volúmenes de columna (CV); (3) el producto se recupera en 3 CV de tampón de eluyente con un
rendimiento de recuperación del 95%, y el pH se mantiene casi neutral para asegurar la estabilidad del producto; y (4)
El volumen total de las soluciones para el equilibrio, lavado y regeneración de columnas es de 13 CV.
Este paso lleva alrededor de 15,7 horas y requiere un volumen de resina de 24,5 litros. La elución de la proteína A
el tampón se intercambia con tampón fosfato (procedimiento P-11) utilizando el mismo diafilter (DF-101) que
en p-7. El rendimiento de recuperación del producto de este paso es del 95%. La purificación se realiza mediante un intercambio catiónico.
Columna de cromatografía (C-102).
Se hicieron los siguientes supuestos operativos: (1)
la capacidad de unión de la resina es de 20 mg de producto por ml de resina; (2) un paso de elución de gradiente es
Empleado con una concentración de cloruro de sodio que varía de 0.0 a 1.0 M y un volumen de 6
CV's; (3) el producto se recupera en 3 CV de tampón de eluyente con un rendimiento de recuperación del 90%; y
(4) el volumen total de las soluciones para el equilibrio, lavado y regeneración de columnas es de 17 CV.
Este paso lleva alrededor de 13 horas y requiere un volumen de resina de 15,7 litros. El sulfato de amonio es
añadido a una concentración de 2,0 M para aumentar la fuerza iónica de la solución y prepararla para
la etapa de cromatografía de interacción hidrófoba (HIC) (C-103) que sigue. El seguimiento
se hicieron suposiciones operativas para el paso HIC: (1) la capacidad de unión a la resina es de 20 mg de producto
por ml de resina; (2) se utiliza un paso de elución en gradiente en el que la concentración de amonio
el sulfato cambia linealmente de 2.0 M a 0.0 M; (3) el producto se recupera en 2 CV de eluyente
tampón con un rendimiento de recuperación del 95%; y (4) el volumen total de las soluciones para columna.
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El equilibrio, el lavado y la regeneración son de 22 CV. Este paso toma alrededor de 13.5 horas y requiere una
Volumen de resina de 15,7 litros. La solución del producto purificado se concentra dos veces y el HIC.
el tampón de elución se intercambia con el tampón fosfato utilizando el mismo diafilter (P-17 \ DF-101).
A continuación, se agrega glicerol (para la estabilidad del producto) a una concentración de 100 g / L y
La solución se envía a la formulación del producto. La concentración del producto en la solución final es de alrededor de 8.
g / litro. Se hicieron los siguientes supuestos adicionales: (1) WFI se utiliza para la preparación de
soluciones de agua y tampones; (2) para calcular el tiempo de ciclo de las etapas de cromatografía, fue
asumió que la carga y la elución operan a una velocidad lineal de 100 cm / h, mientras que el equilibrio,
El lavado y la regeneración operan a una velocidad lineal de 200 cm / h