MÉTODOS GENERALES DE OBTENCIÓN DE

PRINCIPIOS ACTIVOS: SEPARACIÓN,

PURIFICACIÓN Y ELUCIDACIÓN
ESTRUCTURAL

DOCENTE: Mg.Q.F. Daniel Ñañez del Pino

dandel_79@hotmail.com
 INTRODUCCIÓN
A nivel mundial la biodiversidad está adquiriendo cada vez mayor importancia en
tres aspectos:

➢ Recursos genéticos
➢ Obtención de nuevos compuestos químicos
➢ Productos para fines cosméticos y relacionados.
El Perú es un país de una extraordinaria biodiversidad debido a la gran
cantidad de recursos vivos y ecosistemas que presenta. Nuestro país se
encuentra entre los 12 países megadiversos del planeta.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
Diversidad de Ecosistemas

La biodiversidad es de gran importancia actual y

potencial para el desarrollo del país, y su uso
sostenible ofrece objetivas posibilidades para el
futuro.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

En todos los países amazónicos se han realizado en los últimos años
numerosas investigaciones etnobotánicas con la finalidad de:

➢ dar prioridad a los inventarios de plantas útiles

➢ dar prioridad a los estudios sobre las relaciones entre las plantas y la
cultura.
➢ Interpretar el impacto de las plantas en la cosmovisión de la sociedad y el
impacto en su economía.

Todos estos trabajos están sustentados en la visión actual de la

Etnobotánica y confieren un importante valor al manejo de las plantas, a
su potencialidad económica y a su conservación.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
Flora
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Fuentes de Obtención Vegetal Especies vegetales

Animal Hormonas, sueros,

gelatina.

Algas, esponjas,
Marino moluscos, erizos ,
etc.
Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
La biodiversidad es de gran importancia actual y potencial para el
desarrollo del país, y su uso sostenible ofrece objetivas posibilidades
para el futuro.

Por estas razones es necesario que los recursos naturales sean

utilizados de manera racional porque del manejo correcto de los
ecosistemas depende en gran parte la calidad de nuestra vida presente
y futura.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

➢ Es importante la participación de un trabajo
multidisciplinario en las actividades de investigación.

➢Las etnias nativas, han sufrido la pérdida de sus

tradicionales conocimientos sobre el manejo de las
plantas y su utilización en la alimentación,
construcción de viviendas, confección de vestidos y
tratamiento de las enfermedades.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

Las plantas desde la antigüedad se
utilizaban para su alimentación y curación
de las enfermedades, dichas plantas
medicinales, que eran muy apreciadas por
sus poderes curativos, los cuáles se
transmitieron de generación en generación
y que constituyen un valioso uso en la
medicina tradicional.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

En nuestro país debido a la riqueza de nuestra flora se utiliza mucho las plantas
medicinales, por ello existe gran interés por la investigación de ellas:

➢para analizar y estudiar los efectos terapéuticos

➢para determinar los compuestos activos responsables de la actividad
farmacológica
➢separarlos de las plantas que los contienen
➢determinar su estructura química
➢procurar su síntesis
➢proponer modificaciones estructurales en la búsqueda de una mayor actividad
➢dar a conocer a la humanidad los resultados de estos estudios
Éstos análisis son producto de un trabajo multidisciplinario con la participación de
botánicos, químicos, farmacognosistas y farmacólogos.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
 EXTRACCIÓN

Separación sustancias medicinalmente activas a partir

de los tejidos de las plantas y animales, mediante el uso
de solventes selectivos, correctamente estandarizados.

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La extracción es un proceso complejo que contempla varios
fenómenos por separado o en conjunto como son: la diálisis, la
desorción, la disolución, la difusión.

Para realizar un proceso de extracción puede trabajarse con material

fresco o seco.

Para evitar las transformaciones enzimáticas, la planta se somete a

un tratamiento con alcohol o un proceso de desecado provocado por
calor.

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Existen muchos métodos para la preparación de extractos,
así como también para el análisis de la composición
química de las plantas, así como métodos biológicos
utilizados para la detección y seguimiento de una actividad
farmacológica.

No todos los componentes químicos elaborados por las

plantas poseen el mismo interés para el farmacéutico.

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 EXTRACCIÓN

SEPARACIÓN AISLAMIENTO

principios nuevas
activos sustancias
conocidos activas
Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
Para poder realizar el aislamiento de un principio natural en
condiciones óptimas, se debe tener en cuenta una serie de
dificultades, inherentes a la propia planta o materia prima como al
tipo de compuesto a extraer.

Por esta razón la planta se somete a una serie de operaciones

previas que facilitan y mejoran el rendimiento de la extracción.
Asimismo se deben tener en cuenta los siguientes factores:
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 Tipos de extractos

Líquidos o Masa plástica

Extracto pulverizado
semilíquidos de denominada
o polvo seco.
consistencia siruposa extracto sólido

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 Tipos de
métodos

Infusión y Lixiviación o
Maceración Digestión
Decocción percolación

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 METODOS DE EXTRACCION

EXTRACCION EXTRACCION CON

DESTILACION
MECANICA DISOLVENTES

EXPRESION ARRASTRE DE
INCISION VAPOR

DISCONTINUA CONTINUA

MACERACION
DIGESTION PERCOLACION
INFUSION SOXHLET
DECOCCION
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 EXTRACCION MECANICA
EXPRESION

Ciertas sustancias químicas pueden s

er extraídas de la droga vegetal por
expresión.

Este método extractivo se emplea

para obtener zumos de cítricos,
aceites, y otros.

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EXTRACCION POR
INCISIONES.

Este método se aplica para

extraer exudados, como:
gomas, resinas, y otros
productos que brotan en gran
cantidad al realizarle incisiones
o cortes a la planta viva.

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 PROCESO DE DESTILACION
DESTILACION POR ARRASTRE DE VAPOR

Extracción de aceites esenciales.

Son productos grasos,
compuestos químicos
aromáticos muy volátiles de estructura
y composición muy compleja
( terpenos de bajo peso molecular).

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La destilación es un proceso físico muy
sencillo. Una destiladora se compone de:

▪ Caldera

▪ Vaso de destilación

▪ Refrigerante

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FACTORES QUE INFLUYEN EN LA EXTRACCION

▪ Característica de la Droga:
▪ La droga deberá estar seca y molida.
▪ Naturaleza del Disolvente:
▪Agua. Mezclas hidroalcohólicas. Propilenglicol.
Disolventes orgánico

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FACTORES QUE INFLUYEN EN LA EXTRACCION

▪ TEMPERATURA: El calor favorece y acelera la extracción pero

puede descomponer los principios activos de la droga.
▪ TIEMPO DE EXTRACCION: depende de las características de la
droga (dureza, grado de división) y de la naturaleza de los principios
activos (volátiles, hidrolizables, oxidables, entre otros

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EXTRACCIÓN DISCONTINUA CON
DISOLVENTES

Se sumerge la droga en el disolvente, el

total de la droga contacta con el
disolvente, difundiéndose los principios
activos de la droga al disolvente hasta
alcanzar el equilibro.

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1. MACERACION

Se realiza a T° ambiente
dejando la mezcla en reposo durante un
tiempo determinado
(3 - 10), pasado el tiempo de
maceración, separar el extracto
y eliminar el residuo vegetal. Una
variante de este método es la
DIGESTION, la que se realiza
con calentamiento.

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2. INFUSION

El disolvente se hierve y posteriormente se introduce la droga a

extraer, dejándose enfriar hasta temperatura ambiente.

3. DECOCCION O COCIMIENTO

La droga se cubre con el disolvente y el conjunto se lleva a

ebullición, manteniéndose así
por 15 a 30 minutos. Posteriormente se enfría y se filtra.

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EXTRACCIÓN CONTINUA CON DISOLVENTES
El disolvente se hace pasar por la droga, arrastrando
a los P.A. de un paso.
Permite extraer casi por completo los compuestos
químicos.

1. PERCOLACION
La droga esta en contacto permanente con el
disolvente . Constantemente se adiciona disolvente
compensar la cantidad de disolvente que sale por la
parte inferior.

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2. EXTRACCION SOXHLET
Esta técnica se realiza empleando un aparato denominado
Soxhlet, que asegura en todo momento la
provisión de disolvente puro, el que
pasa por la droga arrastrando los P.A. El aparato se compone
de:
• Un matraz
• Un cuerpo extractor
• Un refrigerante
• Un tubo conductor del disolvente
• Un sifón que hace retornar el disolvente.

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CONCENTRACION DEL EXTRACTO
El extracto obtenido suele concentrarse eliminando total o parcialmente el
disolvente.
AL VACIO
Utilizando un rota evaporador. El vacío reduce la temperatura
necesaria para evaporar el disolvente

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 CONCENTRACION DEL EXTRACTO

LIOFILIZACION

Consiste en eliminar el solvente mediante

una congelación a temperatura bajas, seguido de una sublimación del
solvente, que pasa directamente del estado solido a vapor. Este método se
aplica principalmente en el caso de líquidos extractivos acuosos

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CONCENTRACION DEL EXTRACTO
Se pueden clasificar los extractos según la
concentración de P.A. y según su consistencia.
Consistencia líquida

• EXTRACTOS FLUIDOS
concentración de p.a. similar a la concentración de
p.a. en la droga original.

• EXTRACTOS BLANDOS
Concentración de p.a. superior a la de la droga
original. Consistencia semisólida

• EXTRACTOS SECOS
Se obtienen por evaporación total del solvente.

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Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
Estudio Fitoquímico de Plantas Medicinales

Recolección y clasificación
botánica de la especie en estudio.

Extracción, separación y
purificación de los constituyentes
químicos

Determinación estructural

• Ensayos farmacológicos

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Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
 MARCHA FITOQUÍMICA, TAMIZAJE FITOQUIMICO O
SCREENING FITOQUÍMICO

Existen una serie de métodos que han sido desarrollados y aplicados

para una detección de los diferentes constituyentes químicos en las
plantas, basadas en la extracción de éstos con solventes apropiados y
en la aplicación de pruebas de coloración o precipitación.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

Se han propuesto diversos métodos de “Screenings fitoquímicos” a través de
los años, la mayoría desde hace más de 25 años. Los métodos más antiguos
no utilizan las técnicas más recientes de separación ni consideran la presencia
en las plantas de sustancias interferentes que puedan dar lugar a resultados
falsos positivos.

Aún con el uso de las técnicas más modernas de “Screening” puede dar
algunos resultados erróneos, por ello ninguna planta puede ser estudiada sólo
en base de estos resultados preliminares y menos aún el uso de la planta
podría estar basada sólo en los resultados de este “Screening.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

 Nº REACTIVOS METABOLITOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS

S.R. Molisch Carbohidratos en general

S.R. Antrona Carbohidratos en general
S.R. Fehling Carbohidratos reductores
1 S.R. Tollens Carbohidratos reductores
S.R. Cl3 Fe 1% en alcohol Compuestos fenólicos, taninos
S.R. Gelatina 1% Taninos
2 S.R. Agua de Bromo Taninos condensados e hidrolizables
S.R. Shinoda Flavonoides
3 S.R. Cl3 Fe 1% en alcohol Flavonoides
4 S.R. Ninhidrina Grupos aminos libres
S.R. Bertrand Alcaloides
S.R. Bouchardart Alcaloides
S.R. Dragendorff Alcaloides
S.R. Mayer Alcaloides

5 S.R. Popoff Alcaloides

S.R. Sonnenschein Alcaloides
6 S.R. Bortranger Quinonas
7 S.R. Liebermann Burchard Esteroides o triterpenoides
S.R. Bajlet lactonas
8 S.R. Legal lactonas
9 Formación de espuma Saponinas Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
 IDENTIFICACIÓN

REACCIÓN REACTIVO COLORACIÓN

Flavonas, flavanololes e isoflavonas

ALCALIS NaOH o NH3 (amarillas); flavononas y flavonoles
(amarillo a naranja); chalconas
(naranja a rojizo)

Flavonas y flavonoles (fuertemente

ÁCIDOS H2SO4 conc. amarillas), flavanonas (anaranjadas o
guindas), chalconas y auronas (rojo
guinda o rojo azulado)

SALES
FERRICAS FeCl3 Verdes o azuladas

Flavonas y flavonoles (amarillo a rojo),

flavanololes (rojo a magenta),
SHINODA Mg y HCl conc. flavanonas (rojo, magenta, violeta,
azul), isoflavonas (amarillo),
isoflavanonas, chalconas y auronas no
dan coloración
Positivo para Borntrager

Q.F. Daniel Ñañez del Pino

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.

 REACCIONES DE COLORACIÓN PARA LA DETECCIÓN DE
COMPUESTOS ORGÁNICOS
• Carbohidratos:
• Reacción de Molisch
Gotas de muestra problema + gotas de S. R. de Molisch “A”
(alfa naftol 2% en alcohol), agitar + H2SO4 conc. por las
paredes del tubo…anillo color violeta.
(+) para carbohidratos (azúcares).

▪ Reacción de Antrona
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. de Antrona
(antrona en H2SO4 conc. al 2%) …anillo verde.
(+) para carbohidratos (azúcares).
Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
▪ Reacción de Fehling

Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Fehling A + gotas S. R. Felhing B+ calor por 5-
7 minutos en baño maría…pp color rojo ladrillo.

▪ Reacción de Benedict

Gotas de muestra problema + gotas de S.R. de Benedict + calor por 5-7 minutos en baño
maría…pp color rojo ladrillo.

▪ Reacción de Brown

Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Hidróxido de sodio al 10% + calor hasta
obtener coloración amarilla, luego agregar 1 gota de + ácido pícrico 2%, se obtendrá una
coloración parda por formación de ácido picrámico. Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.
▪Compuestos Fenólicos:
▪Reacción de Cl3Fe
Gotas de muestra problema + gotas de Cl3Fe (Sol. al 1% en
agua o alcohol) …color verde o azul.
(+) presencia de compuestos fenólicos, taninos.
▪Taninos:
▪Reacción de Gelatina
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. gelatina…pp
blanco
(+) Taninos
▪Reacción de Agua de Bromo
Gotas de muestra problema + gotas de agua de bromo…pp.
taninos condensados y no pp taninos hidrolizables.
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• Grupos aminas:

▪ Reacción de Ninhidrina
Gotas de muestra problema + S.R. de Ninhidrina (Ninhidrina al 1% en etanol)…color violáceo.
(+) para aminoácidos libres y amino grupos (calentar en algunos casos).
▪ Flavonoides:

▪ Reacción de Shinoda
Gotas de muestra problema + S.R. Shinoda (Mg metálico + gotas de HCl conc). … color
rojo.
▪ (+) presencia de flavonoides, chalconas, auronas; catequina e isoflavona no dan.

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• Esteroides o Triterpenoides:
▪ Reacción de Lieberman-Burchardat
Gotas de muestra problema + S.R. de Lieberman-Burchardart (gotas de
cloroformo + gotas de anhídrido acético + gotas de H2SO4 conc)….color verde,
azul, naranja, rojo.
(+) presencia de esteroides o triterpenoides.

▪ Grupos Quinonas:
▪ Reacción de Borntrager
Gotas de muestra problema + S.R. Borntrager (gotas de hidróxido de sodio
5%)…color rojo.
(+) naftoquinonas, antronas y antranonas.

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• Alcaloides:
▪ Reacción de Bouchardat o Wagner
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Bouchardat pp pardo oscuro
(+) alcaloides

▪ Reacción de Mayer
Gotas de muestra problema + gotas de R. Mayer…pp. blanco.
(+) alcaloides
▪ Reacción de Dragendorff
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Dragendorff… pp naranja o
rojo naranja
(+) alcaloides (medio ligeramente ácido).
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▪ Reacción de Popoff
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Popoff… pp amarillo
(+) alcaloides

▪ Reacción de Bertrand
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Bertrand… pp blanco
(+) alcaloides.
▪ Reacción de Sonnenschein
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Sonnenschein… pp
amarillo verdoso
(+) alcaloides.
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▪ Reacción de Rosenheim
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Rosenheim (S.R. Yodo Yodurada)…rojo oscuro.
(+) antocianinas y flavonoides catéquicos.

▪ Reacción de Hidroxilamina
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. hidroxilamina…pp coloreado
(+) presencia de grupo carbonilo.

▪ Reacción para Saponinas

1 g de muestra problema + 10 mL de agua destilada. Agitar fuertemente por 1
minuto…producción de espuma por 15 minutos de 0.5 a 1 cm

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• Glicósidos:

▪ Reacción de Vainillín sulfúrico

Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Vainillín

sulfúrico…color rojizo violáceo en anillo de interfase.

(+) Glicósidos.

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 PURIFICACIÓN Y AISLAMIENTO DE PRINCIPIOS ACTIVOS

MÉTODOS
FISICOQUÍMICOS NO
CROMATOGRÁFICOS
MÉTODOS

• MÉTODOS FISICOQUÍMICOS
CROMATOGRÁFICOS

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NO CROMATOGRÁFICO

- Sedimentación
- Decantación
- Centrifugación
- Precipitación selectiva
- Filtración
- Cristalización fraccionada
- Partición
- Sublimación
- Destilación
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 CROMATOGRÁFICOS

▪ De papel CPA, CPD, CPC, CPP.

▪ De capa delgada CCDA, CCDP, CCDB.

▪ De columna liquida adsorción, partición, exclusión, flash, al

vacio, intercambio iónico, CLAR.

▪ En contracorriente CCC.

▪ Gas liquido; gas solido

▪ Electroforesis.
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 Análisis Cromatográfico

Las técnicas cromatográficas separan

las sustancias presentes en una mezcla
compleja.
Los más comunes son CCF,
cromatografía de gases (CGL) y la de
líquidos (HPLC).

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Cromatografía en Capa Fina (CCF)

Se realiza a todo tipo de productos naturales, esta

establecido por las farmacopeas modernas, la cual
permite identificar de forma rápida los componentes
presentes en un determinado material vegetal.

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 Cromatografía de Gases (CGL)

Empleo en sustancias volátiles: Es una técnica selectiva que permite

separar e identificar aceites esenciales, alcanfor, ácidos vegetales,
algunos alcaloides como: opio y tabaco, resinas de cannabis, y
compuestos esteroideos como: sapogeninas y heterósidos
cardiotónicos.
 GAS LÍQUIDO

▪ Fase móvil
▪ Fase estacionaria
▪ Tiempo de retención
▪ Isotérmica gradiente temperatura
▪ Volatilidad y estabilidad
 Cromatografía Líquida de Alta Resolución
(HPLC) (High Pressure Liquid Chromatography)

• Esta técnica permite separar e identificar

moléculas de estructura química muy similar,
incluso isómeros. Es aplicado para
compuestos no volátiles como: heterósidos,
alcaloides, lípidos, esteroides, glúcidos,
flavonoides, y sustancias termolábiles, como
las proteínas y vitaminas.
 CLAR

▪ Eficiencia de columna
▪ Fase normal o reserva
▪ Detector
▪ Tiempo de retención
DETERMINACION ESTRUCTURAL

1. Espectrométricas:
a. UV- visible
b. IR
c. RMN de protón y carbono 13
d. Masas
2. Difracción de Rayos X
3. Reacciones de coloración y Precipitación
4. Propiedades Físicas.
UV- VISIBLE
 1045.821 1.368
0.10 Muestra F3 ( AS)

0.09

0.08
3326.998 15.407 2972.512 0.982
0.07

0.06
Absorbance

0.05 1087.416 0.273

2881.731 0.432
0.04 879.896

0.03
1379.325 0.122
0.02
1327.467 0.105
0.01
1662.210 0.098
0.00

3800 3600 3400 3200 3000 2800 2600 2400 2200 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800
Wavenumber
Q.F. Daniel Ñañez del Pino
 Resultados IR
F Longitud de onda (cm-1) Grupos funcionales

1 3326 O-H

2 2972 CH3

3 2881 CH3

4 1662 C= O

5 1379 CH3

6 1327 C=O

7 1087 O-H

8 1045 C-H

9 879 Grupo aromático

Q.F. Daniel Ñañez del Pino
GRACIAS
El arte nunca podrá existir sin la naturaleza.

Mg. Q.F. Daniel Ñañez del Pino.