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REPUBLICA DE PANAMÁ

UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PANAMÁ

FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL

LICENCIATURA EN INGENIERÍA AMBIENTAL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

INFORME N°5

TEMA: TINCIÓN SIMPLE

INTEGRANTES:

EDUARDO ABAD 8-937-2246

JUAN CARLOS OSORIO 8-850-1884

EMMANUEL CEDEÑO 8-902-2441

GRUPO: 1IB-132

FACILITADORA: DANNA VILLAREAL

1ER SEMESTRE
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Introducción

Una de las características más importante de las bacterias es su morfología, definida por el t
amaño, la forma, el arreglo y la estructura. Existen bacterias en forma redondeada denomin
adas cocos, en forma cilíndrica, denominadas bacilos y una tercera morfología como son la
s que tienen forma de espirales, denominadas espirilos. A su vez cada categoría puede subcl
asificarse con base a diferentes arreglos.
Es por ello que se emplea el estudio microscópico en el cual se utiliza La Tinción; que es u
n proceso por el cual las moléculas de un colorante se absorben a una superficie. El uso de
colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar l
a observación en el microscopio óptico. En este informe vamos a reconocer dos de estos tip
os de colonias como cocos y bacilos. Desarrollaremos los métodos de tinción y daremos a c
onocer los análisis de los resultados obtenidos en la práctica.
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Índice

Contenido
Marco teórico ..................................................................................................................................................................... 4

Objetivos ............................................................................................................................................................................. 5

Materiales ............................................................................................................................................................................ 6

Procedimiento ..................................................................................................................................................................... 8

Análisis y Resultados ....................................................................................................................................................... 11

Conclusión ........................................................................................................................................................................ 13

Recomendaciones ............................................................................................................................................................ 14

Bibliografía ....................................................................................................................................................................... 15
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Marco teórico

La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno y

por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. ... En Microbiología todas las tincio
nes se realizan a partir de suspensiones de microorganismos extendidas en un portaobjetos (
frotis), secadas y fijadas.
La mayoría de los colorantes utilizados en las tinciones positivas son colorantes
derivados de las anilinas, sales orgánicas intensamente pigmentadas que proceden del
alquitrán.
Se denominan colorantes básicos si el cromóforo (porción coloreada) de la
molécula está cargada positivamente, por ejemplo, cristal violeta (Fig. 5) y azul de
metileno son colorantes básicos. Otros colorantes de esta categoría utilizados con
frecuencia en bacteriología son safranina, fuchina básica y verde malaquita. Bajo
condiciones normales de crecimiento, la mayor parte de los procariotas tienen un pH
interno próximo a la neutralidad (pH 7.0) y una superficie celular cargada
negativamente, así los colorantes básicos son los más eficaces. Colorantes ácidos con
rojo Congo, rosa de bengala, eosina y fuchina ácida tiene un cromóforo cargado
negativamente y son utilizados para teñir positivamente ciertos componentes como
las proteínas.
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Objetivos

 Que el estudiante maneje las Técnicas de Tinción Simple

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Materiales

Asa bacteriologíca El asa bacteriológica es un instrumento de labor

atorio tipo pinza que consta de una base que pu
ede estar hecha de platino, acero, aluminio y un
filamento que puede ser de nicromo, tungsteno
o platino que termina o en aro o en punta. Se e
mplea para transportar o arrastrar microorganis
mos de un medio a otro para su adecuado desar
rollo, así como para la realización de frotis.

Esterilizador de Asa es un equipo diseñado para esterilizar asas Ede

siembra, agujas y pequeño instrumental por me
dio de incineración a temperaturas entre 650 °C
hasta 700 ºC. Ideal para laboratorios de microbio
logía o de cultivos. Esteriliza asas y cualquier el
emento que pueda penetrar en la abertura del e
quipo. Ideal para aplicaciones en cabinas de fluj
o laminar, donde el mechero no debe emplearse
por afectar el flujo y los filtros.

Aceite de inmersión En general el aceite de inmersión sirve para aum

entar la resolución de un microscopio mediante l
a inmersión del lente objetivo y el espécimen en
un aceite transparente de alto índice de refracció
n.

Safranina es un colorante biológico, de contraste que se uti

liza en la Tinción de Gram para proporcionar un
color violeta más intenso a las bacterias Gram+
y tiñe de rosa a las bacterias G-; en histología y
en citología.

Cristal violeta El violeta de metilo, comúnmente denominado cr

istal violeta o violeta de genciana, es el nombre
dado a un grupo de compuestos químicos emple
ados como indicadores de pH y colorantes. Los
violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-pe
nta y N-hexametil p-rosanilinas

Microscopio es una herramienta que permite observar objeto

s que son demasiado pequeños para ser observ
ados a simple vista. El tipo más común y el prim
ero que fue inventado es el microscopio óptico.
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Placa petri un recipiente redondo, de cristal o plástico, con u

na cubierta de la misma forma que la placa. Se ut
iliza en Microbiología para cultivar células, observ
ar la germinación de las semillas o examinar el c
omportamiento de microorganismos.

Portaobjetos y cu Los portaobjetos de microscopio son esenciales y son l

bre objetos a plataforma para sus muestras. Los portaobjetos de
microscopio se utilizan a menudo junto con un cubre-o
bjeto, una lámina más pequeña y delgada de vidrio que
se coloca sobre la muestra.

Vasos químicos Un vaso de precipitado es un recipiente cilíndric

o de vidrio borosilicatado fino que se utiliza muy
comúnmente en el laboratorio, sobre todo, para
preparar o calentar sustancias, medir o traspasa
r líquidos. Es cilíndrico con un fondo plano; se le
encuentra de varias capacidades, desde 100 ml
hasta de varios litros.

Gotero El gotero es un instrumento de laboratorio, el cu

al se usa para trasvasar pequeñas cantidades d
e líquido vertiéndolo gota a gota.

Medios de cultivo es una técnica de laboratorio que consta de un g

el o una solución que contiene los nutrientes nec
esarios para permitir, en condiciones favorables
de pH y temperatura, el crecimiento de virus, mi
croorganismos, células, tejidos vegetales o inclu
so pequeñas plantas.

Agar nutritivo son aquellos que poseen los componentes míni

mos para que pueda producirse el crecimiento d
Endoagar e bacterias que no necesiten requerimientos esp
eciales. El medio más conocido de este grupo es
Agar marino el agar nutritivo o agar común, que resulta de la
adición de agar al caldo nutritivo. El agar endo e
Agar para esetroc s un medio de cultivo microbiológico de color ros
ocos a pálido. Fue originalmente desarrollado para el
aislamiento de Salmonella typhi, pero ahora es u
sado mayormente como un medio para coliform
es.
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Procedimiento

1. Lave y seque varias portas objetos.

.
2. Utilizando una aguja de inoculación, coloque una pequeña gota de agua limpia en el p
ortaobjeto.

3. Flamee la aguja. Levante la tapa del plato Petri y remueva una porción de una colon
ia con la punta de la aguja.
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4. Con movimiento circular, emulsioné el contenido de la aguja en la gota de agua y espá

rzalo hasta obtener el tamaño de una moneda de 10 centavos. Inmediatamente fleme la
aguj.

5. Permita que ele frotis se seque al aire y luego fíjelo pasándolo dos o tres veces sobre l
a llama, con el frotis hacia arriba.

6. Seleccione uno de los colorantes y cubra el frotis de acuerdo al tiempo señalado: Crist
al Violeta, 60 segundos; Azul de Metileno, 1 a 2 minutos, safranina 15 a 30 segundos.
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7. Luego que el frotis ha sido sometido al colorante por el tiempo recomendado, remuev
a el exceso lavándolo bajo una corriente de agua y séquelo con papel absorbente.

8. Examine la preparación bajo el microscopio utilizando el objetivo de inmersión de ac

eite.
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Análisis y Resultados

Vista en el
microscopio

característica La envoltura celular de las bacterias gramnegativas está compuesta por una
membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada de
peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la
pared celular de estas bacterias.

microorganismo Bacilo(gram negativo)

Vista en el microscopio

microorganismo cocos

es un género de bacterias estafilococáceas de la

clase Cocci. Comprende microorganismos que
están presentes en la mucosa y en la piel de los
definición humanos y de otros mamíferos y aves, incluyendo
a 35 especies y 17 subespecies, muchas de las
cuales se encuentran en los humanos. Las
especies que se asocian con más frecuencia a las
enfermedades en humanos son Staphylococcus
aureus.
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Vista en el microscopio

Los cocos son bacterias que tienen forma esférica.

Es una de sus cuatro formas celulares, las otras
son bacilos (forma de barra o vara), espirilos
característica (forma espiral) y vibrios (forma de "gotas de
agua" o de "medialuna"). Proviene del neolatín
coccus, que a su vez proviene del griego kokkos
(κόκκος) que significa "baya".1

microorganismo Cocos gram positivos

Vista en el microscopio

microorganismo estafilococos

Streptococcus es un género que se agrupa en

cadenas llamadas estreptococos. Sarcina es un
género que se agrupa en forma cuboide en grupos
característica de 8 células. Staphylococcus es un género
agrupado en clústeres de 4 células o en forma
de racimo de uvas de forma irregular, y se los
llama estafilococos.
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Conclusión

En esta experiencia pudimos observar la tinción que es el teñido de los microorganismos ap

licados como muestras el cual podemos ver sus formas y estructuras básicas, mediante este
método se aplica el extendido fijado en un determinado tiempo, luego se lava y al final se s
eca; se le agrega una sustancia para intensificar la coloración lo que permitirá ver el perfil d
e las células. Para observar las preparaciones en el microscopio óptico siempre tenemos que
realizar de forma correcta todos los pasos para tener un buen enfoque de nuestra muestra.
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Recomendaciones

Es aconsejable que cuando agarres la muestra con el asa se del tamaño de una partícula de a
rena, porque si agarras en gran cantidad a la hora de observar en el microscopio se ven las b
acterias muy juntas o em pelotones.
También es recomendable hacer el procedimiento de cubrir con colorante el frotis manejarl
o con cuidado ya que se puede regar y por consecuencia machar el laboratorio.
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Bibliografía

Laboratory Exercises in Microbiology. Pelczar and Chan IV Edición 1977.

Microbiología. Burdon/Williams. Primera Edición. 1971
Microbiología. Geneve gray Young. IV Edición 1961.
http://laboratorio4b.blogspot.com/2011/11/morfologia-de-cocos.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Coco_(bacteria)
http://metabase.uaem.mx/bitstream/handle/123456789/1466/280_2.pdf?sequence=1
https://www.google.com/url?sa=t&source=web&rct=j&url=http://revistareduca.es/index.ph
p/biologia/article/download/819/834&ved=2ahUKEwi8p9367bHiAhUFr1kKHZgoAS4QFj
ABegQIDxAH&usg=AOvVaw1UF54ObeIQCTkNOaTXwqD_