BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

TRANSPORTE DE MOLECULAS:
Transporte a través de la membrana y Transporte vesicular

1. OBJETIVOS
1. Observar los diferentes tipos de transporte que se utilizan en la incorporación y
liberación de moléculas y el efecto de la concentración del medio sobre las células y
comprobar el proceso de ósmosis.
2. Observar el transporte vesicular de macrófagos en preparados histológicos fijos: (a)
célula de kupffer en tejido hepático y (b) macrófago en bola de edema

2. INTRODUCCION

Toda célula posee un sistema complejo de membranas, cuya función general es el

intercambio de materiales entre la célula y el medio acuoso externo o fluido extracelular y
entre los orgánulos y el citoplasma de las células. Las membranas sirven igualmente para
compartimentalizar enzimas y metabolitos celulares.

Las membranas poseen la propiedad funcional de PERMEABILIDAD SELECTIVA, Esta

propiedad le permite a la célula ser selectiva en el paso de las moléculas de agua y de solutos
La permeabilidad puede verse afectada por cambios de temperatura, tóxicos, solventes
orgánicas y la composición química del medio que rodea la célula., factores que de alguna
afectan la velocidad de transporte de éstas.

Los diferentes tipos de transporte que permiten el paso de las diversas sustancias de un
espacio o compartimento a otro y dependiente del tamaño de su molécula; pueden ser
TRANSPORTE A TRAVÉS DE LA MEMBRANA y TRANSPORTE EN MASA o VESICULAR.
El transporte a través de la membrana a su vez se puede clasificar en TRANSPORTE PASIVO
(sin gasto de ATP y con velocidad de pasaje tope o máxima) y el TRANSPORTE ACTIVO (con
gasto de ATP).

El transporte en masa o vesicular, es un transporte activo que requiere de energía y

reorganización del citoesqueleto como de la membrana. Es un transporte que también
podemos clasificarlo en dos: ENDOCITOSIS y EXOCITOSIS.

Entre los tipos de transporte pasivos podemos señalar: la difusión, la diálisis y la osmosis.
La DIFUSION es un proceso físico de gran importancia en el equilibro molecular de la célula
con el compartimento extracelular. La membrana plasmática celular permite la difusión de
moléculas hidrofóbicas, iones, aminoácidos, monosacáridos, etc., gracias a sus proteínas
transportadoras, las mismas que permiten el pasaje de los solutos a velocidades diferentes
por la carga y el peso molecular que presentan. En la célula se realiza DIFUSIÓN SIMPLE y la
DIFUSIÓN FACILITADA, sin gasto de ATP y con velocidad de pasaje siempre proporcional.

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

La DIALISIS: Fenómeno físico en que los cristaloides son separados de las proteínas en virtud
de sus tasas diferenciales de difusión a través de una membrana semipermeable. Algunos
autores denominan diálisis a la difusión pasiva de sustancias a través de una membrana
semipermeable artificial, limitando la denominación de HEMODIÁLISIS al proceso físico vital
realizado en vertebrados a nivel de glomérulo renal en donde la sangre es depurada de sus
sustancias de desecho conllevando a la formación de un filtrado de cristaloides que después
originarán la orina.

La OSMOSIS: Es la difusión de agua a través de la membrana citoplasmática semipermeable

como respuesta a la diferencia de concentración salina entre la célula y su entorno.
Movimiento de agua (solvente) de una solución de concentración menor a una de
concentración mayor. El ingreso de agua a la célula se denomina endósmosis originando un
aumento en el volumen celular (llamándose hemólisis y turgencia en células animales y
vegetales, respectivamente); el pasaje contrario es exósmosis, induciendo la pérdida de
volumen en la célula (crenación y plasmólisis en células vegetales, respectivamente

Si una membrana es permeable al soluto, provocará la lisis celular. La razón de ello es que el
soluto penetra por difusión al interior de la célula, provocando la entrada de agua y ruptura
final de la membrana. El tiempo que tarde en producirse la lisis será inversamente
proporcional a la permeabilidad de la membrana para el soluto en cuestión.
Cuando se suspenden hematíes en una solución hipotónica de cloruro sódico estos absorben
agua, se hinchan, adquieren una forma esférica y se hacen más frágiles produciendo una
hemólisis.
La resistencia osmótica del eritrocito (ROE), se refiere a la resistencia de los eritrocitos de no
hemolizarse cuando se les pone en medio hipotónico con respecto al plasma, cuya
concentración decrece de 0,6 a 0.5% aproximadamente. Una membrana eritrocitaria normal,
tanto en estructura como en función es esencial para la vida de la célula, permitir el paso de
agua, pero también restringir el de ciertos solutos iónicos como sodio, potasio, y cloro
principalmente. Las anormalidades hereditarias en la malla proteica esquelética de la
membrana eritrocitaria pueden reducir su estabilidad y flexibilidad, favorecer la perdida de
fragmentos y desviar a la célula de su forma discoide natural. El ROE mide la resistencia de
los eritrocitos al hemólisis frente a condiciones de presión osmótica que dependen del
volumen de la célula, el área de superficie y la función membranal.

Las células normales empiezan a hemolizarse a concentraciones de NaCl de 0.5%. La

hemólisis es completa más o menos a 0.3 % de NaCl. Debido a la proporción
superficie/volumen menor, los esferocitos no pueden expandirse tanto como el eritrocito
discoide normal. Tienen mayor permeabilidad en su membrana, lo que contribuye con su
fragilidad. Por lo tanto, la lisis empieza con concentraciones más altas de NaCl y es completa
a 0.5 – 0,4 % de NaCl.

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

3. MATERIAL Y METODO

1. Material y Equipos
Biológico (*) Laboratorio Reactivos y/o soluciones
03 Buches de pollo embudo Agua destilada
01 Huevo Tubos de ensayo Solución salina (NaCl) al 1%, 0.6%
03 ml de sangre gradillas
Vasos de precipitación Fenolftaleína
Goteros NaOH
pipetas Lugol
Jeringa de 3ml Almidón
Tubo de ensayo con
anticoagulante (*)
Laminas con preparado
de tejido hepático
Con (*) material a Laminas con preparado
traer por el de bola de edema
estudiante el día del
TP.

2. Método
2.1 TRASNSPORTE A TRAVES DE LA MEMBRANA
A) DIFUSION
1. Preparar dos buches de pollo, tratando que uno de los
extremos quede abierto.
2. Luego llenar un buche con 10 ml de agua destilada y
agregar 3 a 5 gotas de fenolftaleína, amarrar la abertura
libre con un hilo pabilo. Posteriormente, llenar un vaso de
precipitación con agua de caño, aproximadamente 300 ml Fenolftaleína
y agregar 10 ml de NaOH. Colocar en este vaso el buche que
contiene fenolftaleína. (Según figura). NaOH
3. Al otro buche llenar con 10 ml de una suspensión de
almidón, amarrar la abertura.
4. Llenar otro vaso de precipitación con aproximadamente 300 ml de agua de caño y
agregar 10 gotas de lugol. (Según figura).
5. Observar el cambio de color del contenido de los buches y las soluciones en las que
fueron colocadas

B) DIALISIS
1. Dentro de un buche seco de ave, colocar 20 ml de solución
de ovoalbúmina (5 ml de clara de huevo + 15 ml de agua
destilada) y 5 ml de solución de NaCl concentrada.
2. Introducir el buche dentro de un vaso de precipitación con
300 ml de agua destilada (AD) (según figura).
3. Dejar el sistema en reposo por 20 minutos. Albumina

4. Cumplido el tiempo retirar el buche y descartarlo. y NaCl

AD

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

5. Tomar del vaso de precipitación una muestra de 20 ml de agua y dividirlo en dos tubos
de ensayo A y B.
6. Al tubo “A” con 10 ml provenientes de la muestra añadir 1ml de NaOH y 5 gotas de
CuSO4
7. Al tubo “B” con 10 ml provenientes de la muestra añadir 5 gotas de AgNO3
8. Observar, esquematizar y fundamentar.
* OPCIÓN 2: En un buche de pollo, colocar solución de albúmina disuelta en cloruro de
sodio y sumergirlo en un vaso de precipitación con agua destilada y dejar reposar 20
minutos. Transcurrido este tiempo del vaso de precipitación colocar en dos tubos de
ensayo 5 ml de la solución y comprobar que compuestos han difundido, efectuando las
reacciones de identificación de cloruros y reacción de Biuret.

C) OSMOSIS Y RESISTENCIA OSMOTICA DEL ERITROCITO

1. Medir y adicionar 5 a 10 ml de solución de cloruro de sodio a concentraciones
decrecientes en tubos de ensayo, y rotularlos con las concentraciones que contienen.
2. Añadir a cada tubo 0,2 ml (8 gotas) de sangre heparinizada del paciente.
3. Mezclar bien el contenido de los tubos (por inversión cuatro veces).
4. Dejar en reposo los tubos durante 20 minutos, y volver a mezclar.
5. Inmediatamente después centrifugar todos los tubos a 2000 rpm. Durante 5 minutos.
6. Sacar los tubos, colocarlos en una gradilla y observar la hemólisis inicial y la hemólisis
total.

SOLUCIONES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
NaCl 1% (ml) 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5
Agua Destilada (ml) 0.0 0.5 1.0 2.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5

2.2 TRASNSPORTE VESICULAR

D) ENDOCITOSIS: fagocitosis
1. con la ayuda del tornillo macrométrico baje la platina, coloque el preparado fijado y
enfoque el campo microscópico
2. Seguidamente con la ayuda del tornillo micrométrico, enfoque con nitidez la
observación
3. Observe el tejido utilizando los lentes objetivos de menor aumentos, hasta
localizar zonas donde se puedan identificar claramente a las células fagociticas
(macrófagos).

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

4. Incremente el aumento del lente objetivo hasta 100x utilizando adecuadamente

el aceite de inmersión.
5. Esquematice sus observaciones, indicando los datos de: (a) muestra (b)
observación y (c) coloración

1. RESULTADOS
2.3 TRASNSPORTE A TRAVES DE LA MEMBRANA
A) DIFUSION
………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

B) DIALISIS
………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

C) OSMOSIS Y RESISTENCIA OSMOTICA DEL ERITROCITO

…………………………………………………………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………….

D) TRANSPORTE VESICULAR

OBSERVACION…………………………………………………
MUESTRA…………………………………………………………
COLORACION……………………………………………………
AUMENTO…………………………………………………………

OBSERVACION………………………………………………………
MUESTRA………………………………………………………………
COLORACION…………………………………………………………
AUMENTO………………………………………………………………

5 Actividades de Práctica OCP

 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

2. BIBLIOGRAFÍA



3. RESUELVA
1. Complete el siguiente cuadro.

Difusión Difusión Difusión Transporte Transporte

simple facilitada facilitada activo activo
(canales) (carriers) primario secundario
Dirección (a favor/en
contra del gradiente)
Requieren una proteína
de membrana?
Tipo de sustancias que
transportan
Especificidad
Gasto de ATP
2. Si se inhibe la bomba de Na+:K+:
a. Cambiarán las concentraciones intracelulares de K+ y Na+? ¿Y las extracelulares?
b. Cambiará el potencial de membrana?
c. Cambiará la concentración de Cl- intracelular?
d. Se modificará el volumen celular?
3. Sabiendo que la glucosa ingresa a las células intestinales desde la luz del epitelio
fundamentalmente cotransportada con Na+, ¿cómo espera encontrar su transporte si:
a. Se suprime el Na+ del lado luminal?
b. Desaparece el gradiente de concentración de glucosa entre el medio y la célula?
c. Desaparece el gradiente de potencial eléctrico transmembrana?
d. Se agrega floridzina del lado luminal?
e. Se anula la actividad de la Na+-K+ ATPasa?
4. Mencione ejemplos de sustancias que utilicen cada uno de los mecanismos de transporte
previamente señalados. Grafique representando la bicapa lipídica, las proteínas
involucradas y las moléculas que se transportan en cada caso

5 Actividades de Práctica OCP