Universidad Nacional de Agricultura

Bioquímica
Prácticas de laboratório
Proteínas
Ing. Danelia Medina
Por David Alexander Obando Gomez.

OBJETIVOS
General
 Reconocer, analizar y comprender algunas propiedades de las proteinas mediante
sencillos experimentos.

Especifico
 Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.
 Conocer algunas propiedades de las proteínas.
 Conocer reacción xantoproteica y de biuret.
 Aprender cómo reacciona la albumina ante las sustancias respectivas.

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son principios inmediatos orgánicos constituidos por largas cadenas de
aminoácidos, los cuales se unen entre sí mediante enlaces peptídico. La existencia del enlace
peptídico, de aminoácidos azufrados, puede ponerse de manifiesto en el laboratorio mediante
una serie de reacciones coloreadas específicas, que sirve para la identificación de proteínas.

MARCO TEÓRICO

Las proteínas son macromoléculas compuestas por unidades de alfa –aminoácidos que se unen entre sí
mediante enlaces petídicos y que alcanzan un peso molecular igual o superior a 5000 D.
El enlace peptídico, característico de estos compuestos, resulta de la reacción del grupo carboxilo de un
aminoácido con el grupo amino del otro aminoácido, lo cual da lugar a un enlace covalente de tipo
carbamida .

REACION XANTOPROTEICA:
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína
soluble en una solución, empleando nítrico concentrado pero en nuestro caso en el laboratorio
utilizamos H2SO4 . La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con Aminoácidos portadores
de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.
El REACCION DE BIURET:
Es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más
enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
Está hecho de KOH y sulfato cúprico (CuSO4).El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia
de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta.

MATERIALES Y MÉTODOS

III.1. Materiales
Muestra
Clara de huevo

Materiales de vidrio
Tubos de ensayo
Gradilla

Varillas de vidrio

Mechero
Vasos de precipitados

Pipetas

Reactivos

Acido nítrico concentrado

Hidróxido de sodio

III.2. Métodos

Usamos el método experimental en el cual implica la observación, manipulación, registro de las

variables (dependiente, independiente e intervinientes) que afectan un objeto de estudio. A continuación
con este método es indispensable usar el método analítico en el cual se fundamenta en la aplicación del
método científico, sus características son la exactitud, precisión, sensibilidad, limite de detección,
intervalo dinámico, selectividad, seguridad

DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA

REACCIÓN XANTOPROTEICA

 Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml de solución problema en este caso clara de huevo

 Añadir 1 ml de HNO3 concentrado.
 Calentar al baño maría a 100 ºc
 Enfriarlo
 Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%. se torna color amarillo oscuro esto debido a
la presencia de una sustancia alcalina ( existe grupos aromáticos)
 Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por ende determina la
presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la de Biuret, y se hace
un análisis espectro fotométrico.

REACCIÓN DE BIURET
  Coger un tubo de ensayo y poner unos 3 ml de albúmina de huevo.
 Añadir 2ml de solución de hidróxido sódico al 20%.
 A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.
 Aparecerá una coloración violeta-rosácea característica esto debido a la presencia de enlaces
peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos.

El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se
combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción,
pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.
Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar la
concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una
longitud de onda de 560 nm (para detectar el ión Cu2+).

REACCIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS AZUFRADOS (CISTEÍNA Y METIONINA)

Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml de albúmina de huevo (clara de huevo) se añade 2 ml de solución

de hidróxido sódico al 20%.luego se añade 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%.
Calentar el tubo hasta ebullición. se forma un precipitado de color negruzco lo cual nos indica que se ha
formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar
proteínas que tienen en su composición.

Cálculos:
Para todas las reacciones se ha preparado Hidróxido de sodio a 20 % esto a partir de Hidróxido de sodio
a 40 %, en una disolución:
Numero de moles (inicio) = numero de moles ( final )
Por lo tanto molaridad x volumen ( inicio) = molaridad x volumen ( final)
La preparación de sulfato cúprico al 1 % fue de la siguiente manera;
Se toma 9.9 g de sulfato cúprico con 0.1g de agua destilada
Se combina y agita ambas sustancias y luego se forma la disolución deseada
La preparación del acetato de plomo al 5 % fue:
Se toma 0.5 ml de acetato concentrado con 9.5 ml de agua destilada
Se agita las sustancias y se obtiene la disolución

CONCLUSIONES

Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se basan en el
reconocimiento de aminoácidos.
Este proceso nos sirve para reconocer si existe proteínas o no en ciertos tipos de sustancias en
una solución.
Según los resultados, ninguna sustancia muestra la misma composición que la solución
original.
Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas, formando precipitados.