FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

QUIMICA FARMACÈUTICO BIOLÒGICA

 EXTRACCIÒN Y ANÀLISIS DE LÌPIDOS DE

LA YEMA DE HUEVO
 ANÀLISIS E IDENTIFICACIÒN DE LÌPIDOS
DE LA YEMA DE HUEVO POR
CROMATOGRAFÌA EN CAPA FINA

BIOQUÍMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I

EQUIPO: 1

GONZÁLEZ HERNÁNDEZ DULCE MARIA

JUÁREZ MARTÍNEZ VANESSA
LÓPEZ LÓPEZ YAHIR
VALDES GUERRA JESSICA ANDREA

GRUPO: 1401

FECHA DE ENTREGA: 09 DE OCTUBRE DE 2017

*OBJETIVOS:
-Analizar las propiedades de los lípidos.

-Extraer los lípidos de la yema de huevo.

-Cuantificar fosfatos de lípidos fosforilados y no fosforilados.

-Analizar la importancia biológica de los lípidos presentes en la yema de huevo

-Identificar los lípidos de la yema de huevo, por medio de la técnica de

cromatografía en capa fina.

-Estudiar los fundamentos de la cromatografía en capa fina.

*RESULTADOS Y GRÀFICA

TABLA DE LAS LA OBTENCION DE ABSORBANCIAS DEPENDIENDO DEL VOLUMEN

ABSORBANCIA 0 0.020 0.053 0.092 0.179 0.257

VOL.SOLUCIÒN 0 0.2 ml 0.6 ml 1.0 ml 2.0 ml 3.0 ml

PATRÒN

µm/ ml 0 2 6 10 20 30

10 µm/ml

10 µg-------1ml 10 µg------1ml 10 µg--------1ml 10 µg------1ml 10 µg-----1ml

X= 2 µg-----0.2ml x= 6 µg ------0.6ml x=10 µg-----1ml 20 µg-----2 ml x=30 µg---3ml

TABLA DE ABSORBANCIA

NO FOSFORILADOS 0.007

FOSFORILADOS 0.030
*CÀLCULOS:

*PORCENTAJE DEL FÒSFORO EN EL ESTÀNDAR:

PM= 136.086 g/mol 100%

P= 30.97 g/mol 22.75%

1000ml ---------- 0.4394 g

0.4394g ---------100%

0.099 g --------- 22.75 %

0.09996 g/L (1 g) ( 1 L) = 99.9635 µg/ml entre 10 = 9.99635 µg/ ml ≈ 10 µg / ml

(1x10ˉ⁶µg) (1000ml)

Dilución 1 en 10

*FACTOR DE DILUCIÒN 50 ml

- NO FOSFORILADOS: x= 0.3284 µg …. ES EL ERROR

- FOSFORILADOS: y =3.0249 µg

YA ESTÀ A 1 ml
10mg aforo a 50 ml

1 ml

FOSFORILADOS:

1 ml-------------3.0249 µm

50ml----------- x= 151.245 µg del P

*PESO REAL DE LOS FOSFORILADOS:

1 mg------1000 µg 10000 µg-------100%

10 mg---------y= 10,000 µg 151.245 µg------ z= 1.51%

*PM de la fosfatidilcolina …. 780 g/mol

780 g/mol ---------100%

31 g/mol de P-------x=3.9743% TEÒRICO!

≈ 4% DE LOS FOSFORILADOS

NO FOSFORILADOS:

1 ml------- 0.3284 µg 10,000 µg-------100%

50 ml------x= 16.42 µg 16.42 µg-------x= 0.1642%

* ERROR DE CONTAMINACIÒN *
 *RESULTADOS DE LA CROMATOGRAFÌA:
Revelado de las placas con yodo.

Fosfatidilcolina

IMAGEN 1

IMAGEN 2 Fosfatidilcolina

Se hicieron dos placas de dos equipos diferentes en las dos se puede observar
que la mancha más pronunciada y grande es la de la fosfatidilcolina debido a que
es el lípido que hay mayor cantidad en el huevo, las manchas que se ven más
dispersas están presentes los lípidos que están en menor proporción como
esfienfomielina y lisolecitina.

El revelado de yodo se usa para ver los lípidos insaturados.

Reactivo de Bismuto

Fosfatidilcolina.

*El reactivo de bismuto se utiliza para fosfolípidos con colina.

Con el bismuto no se apreciaban muy bien los lípidos, las que más se alcanzaron
a visualizar fue la fosfatidilcolina como en la prueba con el yodo solo que aquí casi
no se alcanza a percibir las manchas.

Reactivo de molibdato

Fosfatidilcolina

En esta placa se utilizó como reactivo el molibdato el cual nos revela los
fosfolípidos en general y las machas que se ven más marcadas indican el lípido
que está en mayor proporción que como se sabe es la lecitina, y las manchas más
dispersas indican los lípidos en menor proporción como la fosfatidiletanolmina.
Reactivo de ninhidrina:

Fosfatidilcolina

*El reactivo de ninhidrina nos revela los grupos amino primario y

secundario.

*ANÀLISIS DE RESULTADOS:
Como se puede ver en la lectura de r de la gráfica que nos da un valor de 0.9989
por lo que se pueden tomar como confiables los resultados ya que es mayor a
0.98.

Se interpolaron los valores de Absorbancia que nos dio el espectrofotómetro y la

concentración de fosforo en los lípidos Fosforilados y No Fosforilados del huevo
que nos dio fueron de g/mL y g/mL respectivamente, si comparamos estos con el
valor que teóricamente nos debería de dar (g/mL) podemos ver que es muy
parecido.

La cantidad de fòsforo encontrado en los forforilados es de 0.9945 mg/ml y en los

no foforilados de 1.12515 por lo cual podemos observar que el resultado es
correcto ya que se encuentra más fosforo en los fosforilados.

En el caso de la cromatografía se puede observar que:

 En el caso del yodo se pudo observar 2 manchas significativas las cuales

se deducen son de abajo hacia arriba Lisolecitina y Esfingomielina ya que el
yodo detecta lípidos con insaturaciones.
 Con la ninhidrina que se tuvo que meter a la estufa para poder observar las
manchas moradas, se identificaron de abajo hacia arriba a la
Fosfatidilcolina a la par de la Fosfatidilserina y hasta arriba a la
 Fosfatidiletanolamina pues con esta se identifica a los grupos amino. Se
pudo detectar a la Serina gracias a que sus manchas parecen corazónes.
 Con el bismuto se pudo observar de abajo hacia arriba a la lisolecitina,
fosfatdilcolina y Fosfatidiletanolamina.
 Con el reactivo de molibdatol de sodio se pudieron observar a todos los
fosfolípidos en general.

Los errores en la comparación se pueden deber a la calidad de los solventes

usados ya que arrastraron mucho las muestras y por esa razón no se puede
saber al 100 que compuesto es cada uno pues sus Rf´s características no son
confiables.

*CONCLUSIÒN:
Se concluye que los resultados obtenidos en está práctica fueron favorables ya
que se cumplieron dichos objetivos. Por lo que en los cálculos realizados se dice
que hay más fosforo en los fosforilados por lo que está dentro del rango.

*BIBLIOGRAFÌA:
Harper H.A. Bioquímica de Harper. 28ª ed. México. Mc Graw-Hill Interamericana,
2010.

Voet D, Voet JG, Pratt W. Fundamentos de Bioquímica. La vida a nivel molecular.

2ª ed. Buenos aires, Argentina: Editorial Médica Panamericana, 2007.