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FACULTADDEQUMICA
DEPARTAMENTODEFARMACIA
FarmacologaI
Clavedelamateria1408
GuindePrcticas
2007
AndrsNavarreteCastro
LianaMedinaCruz
JosLuisBalderasLpez
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Estematerialsedesarrolloconelapoyodel
ProgramadeApoyoaProyectosparalaInnovacinyMejoramientodelaEnseanzaPAPIME
conlaclavePE205306
Proyecto:Desarrollodeprocedimientosparalaenseanzadelafarmacologaexperimental
basadaenelprincipiodelas3Rs:Reduccin,RefinamientoyReemplazodeanimalesde
laboratorio.
ElcontenidodeestematerialfuerevisadoporlosprofesoresdeLaboratoriodeFarmacologaI
delsemestre20071.
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Tabladecontenido.
PRCTICAS.
1. Marcoconceptualdellaboratoriodefarmacologa
2. Determinacindelaventanadeactividadbiolgicayladosisefectiva50
conunsistemasimulado.
3. Determinacindelaconcentracinletal50(CL50)dedicromatodepotasio
13
enArtemiasp.
4. Determinacindeparmetrosfarmacocinticosenunmodelodevidrio.
21
29
ratones.
6. Influenciadelavadeadministracinsobrelarespuestafarmacolgica.
36
7. Excrecinrenaldecidoacetilsaliclicoenvoluntarios.
40
8. Demostracindelefectosinergistayantagonistaenunsistemasimulado.
46
9. Demostracindelefectosinergistayantagonistaenunsistemadergano
54
aislado.
APNDICES.
ApndiceI.TabladeconversindeproporcinaunidadesProbit.
63
ApndiceII.Tcnicasdemanejoeidentificacindeanimalesdelaboratorio(rata
yratn).
64
ApndiceIII.InstructivoparaelusodelpolgrafoBiopacSystemMP100.
69
FarmacologaI.GuindePrcticas.
1.Marcoconceptualdellaboratoriodefarmacologa.
Lafarmacologaesunacienciaexperimentalporexcelencia.Losmtodosutilizadosparaevaluar
laseguridadylaeficaciadelosfrmacosutilizasistemasbiolgicosquevandesdefragmentos
celularesomacromolculasaisladashastapoblacionesenteras.Enunagranpartedelproceso
de investigacin farmacolgica se utilizan animales de laboratorio ntegros. Sin embargo, la
creciente sensibilidad respecto a la prctica de la experimentacin en animales en la
investigacinyenlaenseanzadelascienciasbiomdicas,ylabsquedadeenfoquesnuevos
enlosaspectosprcticosdelamismasonpartedeundebateactual(JukesyChiuia,2003).
Losmtodosutilizadosenlainvestigacin,paralaevaluacindelaseguridady/otoxicidadyen
laenseanzaestnencontinuoprogresoyaqueloscientficosestnenpermanentebsqueda
FarmacologaI.GuindePrcticas.
deposiblesalternativasquemejorenlacalidaddesutrabajo.Elloesdebido,enparte,alalgica
evolucin de los conocimientos cientficos y de sus aplicaciones tecnolgicas, y en parte, a
consideracionesticas,logsticas,econmicas,sociopolticasylegales(SterlingyRispin,2002).
El nmero de animales utilizados en Europa con fines educativos es relativamente pequeo
comparado con el nmero total de animales utilizados en investigacin y se ha venido
reduciendoenlosltimosaos,peroapesardeellotodavasepuedereducirms.EnMxicoel
uso de animales en docencia es alto aunque no se cuentan con datos precisos de cuantos
animales se sacrifican en cada ciclo escolar. Por otro lado la aplicacin de la Norma Oficial
Mexicana(NOM062ZOO1999)hasidolentaenloslaboratoriosdeenseanzadelasciencias
biomdicas. En cambio, en el artculo 25 de la Convencin Europea para la Proteccin de los
Animales Vertebrados utilizados en Experimentacin y otros Fines Cientficos se especifica:
"aquellosprocedimientosllevadosacaboconfineseducativosodeentrenamientosedeben
restringir a los absolutamente necesarios para los fines relativos a la enseanza y el
entrenamiento y se permitirn nicamente si sus objetivos no pueden ser conseguidos por
mtodos audiovisuales u otros que sean suficientemente efectivos". En las legislaciones
relacionadasconlaproteccindelosanimalesdetodoslospasesdelaComunidadEuropease
considerafundamentalaplicarelprincipiodelas3Rs,promulgadoporRussellyBurchen1959
(Russell y Burch, 1959). Este principio nos indica la necesidad de Reemplazar los animales de
experimentacinporotrosmtodos,siemprequeseaposibleyqueelnuevomtodonosaporte
elmismogradodeinformacin,deReducirelnmerodeanimalesdeexperimentacincuando
su uso sea necesario y se presente como el nico mtodo vlido y finalmente, de Refinar las
tcnicasempleadasconlosanimales,conelfindemejorarsueficaciaodisminuireldoloroel
gradodesufrimientoinfligido(vanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003).
Enelcasodeladocenciaseplanteaelreemplazodelosanimalesdeexperimentacinporotros
mtodos.Entrelosmtodospropuestossepuedencitar:
a) Modelos,maniquesysimuladoresmecnicos.
b) Pelculasyvdeos.
FarmacologaI.GuindePrcticas.
c) Simulacionesdeordenadorysistemasderealidadvirtual.
d) Autoexperimentacinenelpropioindividuo.
e) Experimentosconvegetalesincluyndosehongosyalgas.
f) Usodematerialprocedentedelosrastros.
g) Estudiosinvitroconlneascelulares,organismosinferiorescomobacterias,nematodos,
insectosopecesenetapatemprana.
h) Aprovechamiento de animales muertos de forma natural o utilizados despus de un
procedimientocientfico(VanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003).
EnelLaboratoriodeFarmacologaIseplanteaeldesarrollodeprocedimientosexperimentales
yactividadesenlosquebajoelprincipiodelastreserressereduzca,sereemplaceyserefine
elusodeanimalesdelaboratorioparacubrirlosobjetivosdelaenseanzaexperimentaldela
farmacologa.
FarmacologaI.GuindePrcticas.
4) Autoexperimentacin.Sinponerenriesgoenningngradolaintegridadylasaluddelos
estudiantes.Serealizarunaprcticaparaobservaralgunosprocesosfarmacocinticos
deunfrmaco(cidoacetilsaliclico).
Cualquiera que sea la modalidad del procedimiento que se realice cada uno de ellos debe
comprender las siguientes partes: familiarizacin con el procedimiento, ejecucin del
procedimientoydiscusindelprocedimiento.
Conestosprocedimientossepretende:
Facilitarelaprendizajedelosaspectosfundamentalesdelafarmacologa.
Familiarizaralosestudiantesconelmtodocientficoenexperimentosdefarmacologa.
Enseartcnicasyhbitosdellaboratoriodefarmacologa.
BIBLIOGRAFA.
EderC,FalknerE,NehrerS,LosertUySchoefflH.(2006).Introducingtheconceptofthe
3Rsintotissueengineeringresearch.AltexAlternativenZuTierexperimenten.23:1723.
JukesN,ChiuiaM.(2003).FromGuineaPigtoComputerMouse.2Edicin.InterNICHE.
Lndres.
FarmacologaI.GuindePrcticas.
MeyerB,FerrigniN,PutnamJ,JacobsenL,NicholsD,McLaughlinJ.(1982).BrineShrimp:
Aconvenientgeneralbioassaysforactiveplantconstituents.PlantaMedica.45:3134.
RussellW,BurchR.(1959).ThePrinciplesofHumaneExperimentalTechnique.Methuen,
Lndres.
TallaridaR.(2000).Drugsynergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC.
EUA.
VinardellP.(2003).Alternativasalusodeanimalesdeexperimentacinenlasprcticas
defisiologa.BoletndelaSociedadEspaoladeCienciasFisiolgicas.6(1).
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:1sesin(ejecucinyanlisis).
TemasrelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaI:Farmacometra,curvadosisrespuestacuantal.
I.INTRODUCCIN
Dentrodelascienciasbiolgicas,entreellaslaFarmacologa,losanimalesmuchasvecestienen
unpapelcentralenlasclasesprcticasenellaboratorio.Cientosdemillonesdeanimalesson
usadosparaexperimentososacrificadosparasudiseccincadaaoentodoelmundo.
La visin actual del uso de animales es una educacin completamente humana, donde los
objetivosdelaenseanzasonalcanzadosusandomtodosalternativos,ydondelacompasin,
respectoalavida,yelpensamientocrticosonvaloradosydesarrollados.Esunavisindonde
los alumnos tienen libertad de conciencia y la relacin negativa con los animales ha sido
transformada al pensamiento positivo en lugar del uso daino de animales (Jukes y Chiuia
2006).
Ungrannmerodecompuestosyfrmacoscuentanconladeterminacinexperimentaldelos
valoresdedosisefectiva50(DE50),dosistxica50(DT50)ydosisletal50(DL50).Elclculodeeste
parmetro se puede predecir mediante ecuaciones que explican el fenmeno farmacolgico
(Tallarida,2000).Porloqueutilizandolosvaloresdescritosenlaliteraturaesposiblesimularla
adicin de diferentes dosis o concentraciones de diferentes frmacos en un sistema en
computadora, donde el alumno podr construir curvas dosisrespuesta y por lo tanto
determinarlaDE50,sinelusodeanimalesdelaboratorio.
FarmacologaI.GuindePrcticas.
II.OBJETIVOS
Losobjetivosdeestaprcticason:
1. Comprenderlaimportanciadeladeterminacinlaventanadeactividadbiolgicadelos
frmacos.
2. Aprenderelusodeunsistemasimuladoencomputadora.
3. CalcularlaDE50deunaseriedefrmacospormediodelaecuacindeHill,conlosdatos
obtenidosenelsistemasimulado.
III.MATERIAL
a)
Software
SeutilizarelsoftwareSimCDRver.1.0desarrolladoexprofesoparalaprcticaporelM.
enC.JosLuisBalderasdelaFacultaddeQumicadelaUNAM.
Elsoftwarepuedeserdescargadodelsiguientevnculo:
http://www.paginasprodigy.com/luisbald
IV.PROCEDIMIENTO
a) ManejodelsoftwareSimCDRver.1.0
Para el uso adecuado del software se dividir su manejo por procedimiento con
referenciaalesquemasiguiente:
10
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Informacinbsicadel
frmacoautilizar
Seleccindel
frmacoautilizar
Seleccindel
nmerodedosisque
seevaluarn
Seleccindelas
unidadesdedosis
queseutilizarn
Casillasdecaptura
dedatosdondese
colocarnlasdosisa
evaluar
Botnparaelclculo
delosdatos
Botndeborradode
todoslosdatos
Casillasdedatosde
lasimulacin
1) Iniciodelprogramayejecucindeunnuevoexperimentosimulado.
a) Parainiciarelprogramasedebeoprimirelsiguienteicono:
b) EnlacasilladeFrmacoseseleccionaelfrmacoqueseutilizarenlasimulacin.En
laventanaInformacindelfrmaco,aparecernunabrevedescripcindelmismoas
comosuactividadfarmacolgicamsimportante.
c) Seseleccionanelnmerodedosisautilizarascomolasunidadesqueseutilizarn,
enlascasillasNm.dedosisyUnidades,respectivamente.
d) SellenanlascasillasqueaparecenenlaventanaDosisaprobaryseoprimeelbotn
Calcularel%deefecto.Sialgunadelascasillasanterioresestnenblanco,aparecer
unmensajedeerror.
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
e) EnlaventanaResultadosaparecernlasadosisqueseadministraronsimuladamente
ylosporcentajesderespuestaquedarandichasadministraciones.
f) Para iniciar un nuevo experimento simulado, se deber oprimir el botn Borrar
datos,osiseprefiere,cambiarlosdatosenlascasillascorrespondientes.
V.ANLISISDERESULTADOS
1.
Conlosdatosobtenidosenlosexperimentossimulados:
a) Construirlascurvasdosisrespuestadelosfrmacosutilizados.
b) Calcular la DE50 para la actividad principal de los frmacos utilizados mediante la
EcuacindeHill.
II.BIBLIOGRAFA
TallaridaR.(2000).DrugSynergismandDoseeffectDataAnalysis.Chapman&Hall/CRC.
EUA.
JukesN,ChiuiaM.(2003).FromGuineaPigtoComputerMouse.2Edicin.InterNICHE.
Lndres.
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
TemarelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaI:Farmacometra,curvadosisrespuestacuantal.
I.INTRODUCCIN
Unbioensayopuedeserdefinidocomocualquierpruebaqueinvolucraorganismosvivos,asu
vez se puede sealar como cualquier mtodo por medio del cual alguna propiedad de una
sustanciaomaterial,esmedidaentrminosdelarespuestabiolgicaqueproduce.Larelacin
entrelarespuestabiolgicayladosisolaconcentracindeunasustanciaactivaserelacionaen
lallamadacurvadosisrespuesta.Estarelacinpuededarsedeformagraduadaolarespuesta
puedeserdetipotodoonada,tambinconocidacomocuantal.
Enestaprcticaserealizarunexperimentoenelcualseanalizarelsegundotipoderelacin
curva dosis respuesta, es decir se analizar la curva dosisrespuesta cuantal, que debido a la
formaenlaqueserealizarpropiamentesedebereferircomolacurvaconcentracinrespuesta
cuantal. Se utilizar como sistema biolgico el crustceo Artemia salina en su forma adulta y
comolarvaonauplio,ycomosustanciadepruebaaldicromatodepotasio.
II.OBJETIVOS
Losobjetivosdeestaprcticason:
1. Manejarunsistemabiolgicoalternoalosmamferosyroedoresparaladeterminacin
deunacurvaconcentracinrespuestacuantal.
2. ComprenderelsignificadoylautilidaddelaCL50.
3. RealizarelclculodelaCL50medianteelanlisisProbit
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
III.MATERIAL
1. UtilizandoArtemiasalinaAdulta.
a)
Materialbiolgico
De100a200ejemplaresadultosdeArtemiasalina.
b)
Materiales,cristalerayequipo
Unvasodeprecipitadode500mL
Unapipetagraduadade2mL
Unapipetavolumtricade10mL
24frascosvialesmarcadosparaunvolumende5mL
Unalmparadeescritorio.
1PipetaPasteurconbulbo
Aereadorconmanguerayfiltro
c)
Reactivos
100mLdedisolucindedicromatodepotasio,K2Cr2O7(50mg/mL).
Disolver5gdedicromatodepotasioen50mLdeaguadestilada,unavezdisuelto
aforaraunvolumende100mLconaguadestilada.
2. UtilizandonaupliosdeArtemiasalina.
a)
Materialbiolgico
HuevecillosliofilizadosdeArtemiasalina.
a)
Materiales,cristalerayequipo
Peceradevidriocapacidad2L
Pecerade500mL
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
24frascosvialesmarcadosparaunvolumende2mL
Pipetasdevidrio
Jeringasde1mL
Focosumergiblede5W
Termmetroparapecera
MatrazErlenmeyerde1L
Vasosdeprecipitadosde100,500mL
5PipetasPasteurconbulbo
Aereadorconmanguerayfiltro
b)
Reactivos
100mLdedisolucindedicromatodepotasio,K2Cr2O7(50mg/mL).
Disolver5gdedicromatodepotasioen50mLdeaguadestilada,unavezdisueltoaforar
aunvolumende100mLconaguadestilada.
100mLdedisolucindedicromatodepotasio,K2Cr2O7(25mg/mL).
Disolver2gdedicromatodepotasioen50mLdeaguadestilada,unavezdisueltoaforar
aunvolumende100mLconaguadestilada.
500mLdeaguademarartificial.
Disolver16gdesalmarina(oensudefectoclorurodesodio,NaCl)en500mLdeaguay
colocardosgotasdeanticloro.Dejarreposarpor10minutosyfiltrarsiesnecesario.
Anticloro(tiosulfatodesodio,Na2S2O3,al1%).
IV.PROCEDIMIENTO
1. UtilizandolaArtemiasalinaAdulta.
a) PreparacindelaArtemiaSalina
1) ManteneralaArtemiasalinaenelvasodeprecipitadoconaeracinconstante.
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
2) Portriplicadorotularlosfrascosvialesconlassiguientesconcentraciones:0,4,6,8,12,
16y20mg/mLycoloqueunamarcaaunvolumende5mL.
3) Colocar10artemiasencadavialconayudadelapipetaPasteurcomosemuestraenla
figura siguiente. Utilice la luz de una lmpara como fondo para facilitar el conteo. La
cantidad total de agua que resulta de la adicin de las artemias debe ser de
aproximadamente1mL,siesnecesarioretireelexcedente.
Pipeta
Pasteur
1horadeexposicin
bajoluzblanca
Artemiasalina
Volumenfinalde
losviales:5mL
2
3
Control46810121620
CONCENTRACIONES(mg/mL)
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
b) Adicindeldicromatodepotasio
1) Adicionar las siguientes cantidades de dicromato de potasio indicadas en la siguiente
cuadro:
Concentracin
(mg/mL)
Volumendeladisolucinde
dicromatodepotasio(mL)
0(Control)
0.4
0.6
0.8
10
1.0
12
1.2
16
1.6
20
2.0
c) Lecturaderesultados
1) Al trmino del periodo de exposicin se contarn las artemias que sobrevivieron de la
siguientemanera:
a. Las artemias que presentan movimiento, aunque sea este mnimo, se
consideranvivas.
b. Lasartemiasquepermaneceninmviles,seconsideranmuertas.
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FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
2. UtilizandonaaupliosdeArrtemiasalin
na.
ncubacindeeloshueveccillosdelaA
ArtemiaSalin
na
a) In
1. Seearmaeldisspositivodeincubacincomosemu
uestraenlassiguientefigura.
Pecceracondispositivosdeincubacin(1),aerracin(2)eilum
minacin(3).
2. Seecolocan30
00mLdeagu
uademararrtificialenlapeceradeincubacin.
3. Co
olocar una cantidad
c
dee agua corrieente en la pecera
p
mayor, aproxim
madamente a
a una
teemperatura de 2628C y dejar quee alcance el equilibrio con
c el agua de la pecera de
in
ncubacin.
4. Co
onectarlosd
dispositivosdeaeracinyluz.
5. Ad
dicionar los huevecilloss en la peceera de incubacin con una esptu
ula limpia y seca
(aaproximadam
mente10ggdehuevecillos),colocarenlazonaobscuradelapecerade500
m
mL.Dejarincu
ubardurantee48h.
b) Prreparacind
delosvialessyrealizaci
ndelexperrimento.
Apartirdeestemomento
oseseguirn
nlospasosa
a),b)yc)delexperimentollevadoacabo
co
onartemiasadultas,colo
ocandoenlu
ugardeestaasalosnaup
pliosyutilizandoladisolu
ucin
dee25mg/mLdedicromattodepotasio.
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
V.ANLISISDERESULTADOS
1. Setabulanlosdatosobtenidosenelsiguientecuadro:
REPETICIONESDELEXPERIMENTO
CONCENTRACIN
(mg/mL)
ni
ri
ni
DATOSFINALES
ri
ni
ri
ni
ri
pi
yi
CONTROL
4
6
8
10
12
16
20
ni=nmerodeartemiasutilizadasporconcentracinporcadarepeticin
ni=nmerodeartemiastotalesutilizadasporconcentracin
ri=nmerodeartemiasmuertasporconcentracinporcadarepeticin
ri=nmerodeartemiastotalesmuertasporconcentracin
pi=probabilidadporconcentracin(pi=ri/ni)
yi=unidadprobitcalculadaportablasapartirdepi
2. Conlosresultadosobtenidos:
Realicelacurvaconcentracinrespuestacuantalparaeldicromatodepotasio.
CalculelaCL50ysuslmitesdeconfianzadeldicromatodepotasiopormediodelanlisis
Probit.UtilicelatabladeconversindeprobabilidadaunidadesProbitdelApndiceI.
3. Conlagrficarealizadaylosvalorescalculadosanalice:
Losdatosencontradosconrespectoalosdatosinformadosenlaliteratura.
Lasventajasydesventajasdelosbioensayosconrespectoalosensayosconorganismos
superiores.
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
VI.BIBLIOGRAFA
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, clculo de parmetros
farmacocinticos
I.INTRODUCCIN
Lafarmacocinticaeslaramadelafarmacologaqueestudiaelcursotemporaldelosfrmacos
atravsdelorganismo.Comprendelosprocesosdeabsorcin,distribucinyeliminacindelos
frmacos.Laeliminacinalavezcomprendelosprocesosdeexcrecinybiotransformacin.
La curva de concentracin en funcin del tiempo se utiliza para determinar los parmetros
farmacocinticos.Laformadelacurvaconcentracintiempoylosparmetrosquesecalculana
partirdeella,dependedelavadeadministracinydelfluidobiolgicoenelqueselleveacabo
el muestreo y anlisis del frmaco. Despus de una administracin intravenosa es posible
determinar los parmetros farmacocinticos: constante de eliminacin (k), volumen aparente
dedistribucin(Vd),concentracinplasmticaaltiempocero(Cp),depuracintotal(ClT),rea
bajolacurva(ABC)yeltiempodevidamedia(t).Paracuandoelfrmacoseadministraporuna
va que requiere de un proceso de absorcin, es decir, el paso del sitio de aplicacin a la
circulacingeneral,sepuedencalcularlosparmetrosfarmacocinticos:constantedeabsorcin
(Ka), concentracin plasmtica mxima (Cpmax), (tiempo al que se alcanza la concentracin
plasmticamxima(tmax),ademsdek,tyABC.
Enestaprctica,medianteelusodeunmodelodevidrioesposiblehacerunasimulacindela
administracin de frmaco por va intravenosa o por una va que requiere de un proceso de
absorcin. Tambin es posible simular la toma de muestras en sangre y en orina y con ello
realizarlosclculosdelosparmetrosfarmacocinticoscorrespondientesadichassimulaciones.
21
FarmacologaI.GuindePrcticas.
II.OBJETIVOS
Losobjetivosdeestaprcticason:
III.MATERIAL
a) Materiales,cristalerayequipo
Dosvasosdeprecipitadode500mLconbrazorecto
Pipetagraduadade5mL
Perilla
Dosvasosdeprecipitadode500mL
Unvasodeprecipitadode100mL
6matrazvolumtricode10mL
Unmatrazvolumtricode25mL
Unapipetavolumtricade1mL
Dosplacasdeagitacin
Dossoportesuniversal
Dospinzasconnuez
Unembudodeseparacinde1L
Unanilloparasoporteuniversal
DosmatracesErlenmeyerde250mL
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
Uncronometro
24Tubosdeensayo
4litrosdeaguacorriente
Dosbarrasmagnticasdeagitacin
2agitadoresmagnticos
Balanzaanaltica
Espectrofotmetro
b) Reactivos
DisolucindeRojoCongo(4mg/mL)
Disolver100mgdelcoloranteRojoCongoen15mLdeaguayaforaraunvolumende25
mLconaguadestilada.
IV.PROCEDIMIENTO
1. Vaintravascular
a) Colocarelmaterialdeacuerdoalsiguienteesquema:
A
C
23
FarmacologaI.GuindePrcticas.
TIEMPO
(min)
VAINTRAVASCULAR
VASOA
ABSORBANCIA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
CONTROL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120
24
FarmacologaI.GuindePrcticas.
2. Vaextravascular
a)
Colocarelmaterialdeacuerdoalsiguienteesquema:
A
B
25
FarmacologaI.GuindePrcticas.
VAEXTRAVASCULAR
VASOA
TIEMPO
(min)
ABSORBANCIA
VASOB
CONCENTRACIN
ABSORBANCIA
(mg/mL)
CONCENTRACIN
(mg/mL)
CONTROL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120
3.
Determinacindelasconcentracionesdelcolorante
a) Realizar una curva estndar del pesando 1 mg del colorante, disolverlo en agua
destilada,aforara10mLycontinuarconseindicaenelesquemasiguiente:
5 mL
5 mL
5mL
5mL
5 mL
50g/mL
Disol.Stock
100g/mL
25g/mL
12.5g/mL
6.25g/mL
3.125g/mL
Cadamatrazdebe aforarsea10mL
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FarmacologaI.GuindePrcticas.
CURVAESTNDARDEROJOCONGO
TUBO
CONCENTRACIN
(g/mL)
BLANCO
3.125
6.25
12.5
25
50
100
ABSORBANCIA
c) Determinarlaconcentracindelasmuestrasinterpolandoelvalordelaslecturasenla
curvaestndar.
V.ANLISISDERESULTADOS
1. Elaborarunagrficaporcadavadeadministracin,considerandoellogaritmonatural
delaconcentracin[g/mL]contratiempo[min].
2. Calcularlosparmetrosfarmacocinticost,Vd,k,ka,ClT,Cmax,tmax,ABCyF;segnlava
deadministracinsimulada.
3. Analizar la importancia de los modelos farmacocinticos in vitro y de los parmetros
farmacocinticoscalculados
27
FarmacologaI.GuindePrcticas.
VI.BIBLIOGRAFA
GumtowR,ProudfootJyTaladaA(1989).Aninvitropharmacokineticsystemforusein
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pharmacokinetic Bench Model; the glassman patient. Revista Mexicana de Ciencias
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RowlandMyTozerT(1995).Clinicalpharmacokinetics3rd.Ed.LeaandFebiger.EUA.
ShargelL,WuPongSyYuA(2004).AppliedbiopharmaceuticsandPharmacokinetics.5th
Edition.McGrawHillMedical,EUA.
28
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Tema relacionado con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacometra y Farmacodinamia, tipo de accin
farmacolgica
I.INTRODUCCIN
Enestaprcticaseutilizarunmodelosencillobasadoenelcomportamientodelosroedoresde
explorar un ambiente extrao. El nmero de levantamientos sobre sus extremidades traseras
estrelacionadoconunestadodealerta.Ladisminucindelnmerodelevantamientosporel
efecto de un frmaco est relacionado con un efecto tranquilizante y en varios trabajos de
investigacin se ha utilizado para medir el efecto sedante de frmacos depresores del SNC
(Olivaetal.,2004;Ugaldeetal.,2005;GonzlezTrujanoetal.,2006).
EnestaprcticasecontempladeterminarlaDE50sedantedepentobarbitalsdicoydeletanol
utilizandoelmodelodeCilindrodeExploracinenratones.
29
FarmacologaI.GuindePrcticas.
II.OBJETIVO
Losobjetivosdeestaprcticason:
1. DeterminarlaDE50paraelefectosedantedelpentobarbitalyetanolenratnutilizando
elmodelodelCilindrodeExploracin.
2. Aplicarlametodologaparaelclculodedosis,administracindefrmacos,observacin
ymanejodedatosdeunexperimentofarmacolgicoenroedores.
III.MATERIAL
a) Materialbiolgico
RatonesICRCD1machosde2530gdepeso
b) Materiales,cristalerayequipo
Cilindro de exploracin(cilindro devidrio de 11 cm de dimetro interno por 30 cm de
altura).
Jeringasde1mLconagujadelnmero27
Balanzaparapesaranimales
Marcadordetintaindeleble
Papel
Cronmetro
Contadormanual
Matrazvolumtricode10mL
6frascosvialesde10mL
c) Frmacosyreactivos
Anestesal(pentobarbitalsdico6.3g/100mL,usoveterinario).Pfizer.
30
FarmacologaI.GuindePrcticas.
DisolucindePentobarbitalsdico3mg/mL.
Transfiera0.47mLdeAnestesalaunmatrazvolumtricode10mLyllveloalaforocon
disolucinsalina.
Etanolabsoluto.
Disolucinsalinafisiolgica(0.9%).
IV.PROCEDIMIENTO
A. EFECTOSEDANTEDEPENTOBARBITAL
a) Pesadoymarcajedeanimales
Cada grupo de trabajo recibir 6 ratones. Marque a sus animales con el marcador de
tintaindelebleenlabasedelacola,pselosyregistreelpesodecadaanimal.
b) Preparacindelasdisolucionesdepentobarbitalsdico
Rotule6frascosvialesconlassiguientesleyendas0,2.5,5,10,15y30mg/kg.Agreguela
cantidadindicadaenelcuadrosiguientedeladisolucindepentobarbitalde3mg/mLy
dedisolucinsalinaal0.9%(p/v):
VOLUMENESAAGREGAR(mL)
FRASCOVIAL
DOSIS
(mg/kg)
CONTROL
2.5
0.25
2.75
0.25
0.5
0.5
0.5
10
15
1.5
1.5
1.5
30
PENTOBARBITAL
(mg/kg)
DISOLUCION
SALINA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
c) Administracindelfrmaco
Asigne aleatoriamente las dosis que recibir cada ratn. Administre por va
intraperitoneal 0.1 mL de la disolucin correspondiente del frmaco o de la disolucin
salinaporcada10gdepesodelanimalyregistreeltiempoalqueloadministr.
31
FarmacologaI.GuindePrcticas.
d) Desarrollodelexperimento
11 cm d.i.
30 cm
Cilindroutilizadoenlapruebadeexploracin.
1) Cerciresedequeelcilindrodevidrioestsecoylimpio.
2) Coloqueelcilindrosobreuntrozodepapelmayoraldimetrodelcilindro(puedenser
hojasrecicladas).
3) 30minutosdespusdehaberadministradoelfrmacoolasolucinsalinaintroduzca
alanimalenelcilindrodeexploracin.
4) Pongaafuncionarelcronmetroyregistreelnmerodelevantamientosquerealiza
el animal en un perodo de 5 minutos. Slo una persona deber cuantificar esta
conductaparaqueseananalizadosbajoelmismocriterio.
5) Limpiehmedoconsolucinhidroalcohlicaelinteriordelcilindroycambieelpapel.
6) Contineconelmismoprocedimientoparalos5animalesrestantes.Noolvidelimpiar
elcilindroentrecadaprueba.
7) Elanimalquerecibilasolucinsalinasetomacomocontrol.
Tiempo(h:min)
Ratn
Peso(g)
Dosis(mg/kg)
Admn.
Inicio
Final
30
35
36
41
12
42
47
18
48
53
24
54
59
30
01:00
01:05
32
Nm.de
levantamientos
FarmacologaI.GuindePrcticas.
B. EFECTOSEDANTEDEETANOL
a) Preparacindelassolucionesdeetanolabsoluto
Rotule 6 matraces aforados de 10 mL con las siguientes leyendas 0, 500, 1000, 2000,
2500 y 3000 mg/kg. Agregue la cantidad indicada en el cuadro siguiente de etanol
absolutoyaforeconsolucinsalinaal0.9%(p/v):
VOLUMENESAAGREGAR(mL)
FRASCOVIAL
DOSIS
(mg/kg)
ETANOLABSOLUTO
DISOLUCION
SALINA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
CONTROL
10
500
0.63
9.37
50
1000
1.26
8.74
100
2000
2.52
7.48
200
2500
3.16
6.84
250
3000
3.8
6.2
300
b) Administracindelfrmaco
Asigne aleatoriamente las dosis que recibir cada animal. Administre por va
intraperitoneal0.1mLdelasolucincorrespondientedelfrmacoodelasolucinsalina
porcada10gdepesoyregistreeltiempoalqueloadministr.
c) Desarrollodelexperimento
1) Cerciresedequeelcilindrodevidrioestsecoylimpio.
2) Coloqueelcilindrosobreuntrozodepapelmayoraldimetrodelcilindro(puedenser
hojasrecicladas).
3) 5minutosdespusdehaberadministradoelfrmacoolasolucinsalinaintroduzcaal
ratnenelcilindrodeexploracin.
4) Registre el nmero de levantamientos que realiza el animal en un perodo de 5
minutos.Slounapersonadebercuantificarestaconductaparaqueseananalizados
bajoelmismocriterio.
5) Limpiehmedoconsolucinhidroalcohlicaelinteriordelcilindroycambieelpapel.
33
FarmacologaI.GuindePrcticas.
6) Contineconelmismoprocedimientoparalos5ratonesrestantes.Noolvidelimpiar
elcilindroentrecadaprueba.
7) Elanimalquerecibiladisolucinsalinasetomacomocontrol.
Tiempo(h:min)
Ratn
Peso(g)
Dosis(mg/kg)
Admn.
Inicio
Final
10
11
16
12
17
22
18
23
28
24
29
34
30
35
40
Nm.de
levantamientos
V.ANLISISDERESULTADOS
a) ClculodelaDE50
1) Calcule el porcentaje de efecto por cada dosis, considerando que el nmero de
levantamientospromediodelosratonescontrolesigualal0%deefecto.
2) Determineelmodeloquesiguenlosdatosobtenidos.
3) CalculelaDE50paraelefectosedantedeacuerdoalmodelodeterminado.
b) Clculodelapotenciarelativa
1) Calcule la potencia relativa del efecto sedante entre etanol y pentobarbital. Con la
relacin:
34
FarmacologaI.GuindePrcticas.
VII.BIBLIOGRAFA
35
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, vas de administracin de
frmacos.
I.INTRODUCCIN
Enestaprcticaseevaluarlaformaenlacuallavadeadministracinmodificalarespuestade
unfrmacobiencaracterizadocomoeselpentobarbital,paraelcualsemedirnelperodode
latenciayladuracindelefectocuandoseadministrapordistintasvas.
36
FarmacologaI.GuindePrcticas.
II.OBJETIVOS
Losobjetivosdeestaprcticason:
III.MATERIAL
a) Materialbiolgico
4ratasWistarmachosde200250gdepeso
b) Materiales,cristalerayequipo
Jeringasde1y3mL
Cnulaparaadministracinesofgica
Balanzaparapesaranimales
Cronmetro
c) Frmacosyreactivos
Anestesal(pentobarbitalsdico6.3g/100mL,usoveterinario).Pfizer.
DisolucindePentobarbitalsdico40mg/mL.
Transfiera6.35mLdeAnestesalaunmatrazvolumtricode10mLyllveloalaforocon
disolucinsalina.
Disolucinsalinafisiolgica(0.9%).
37
FarmacologaI.GuindePrcticas.
IV.PROCEDIMIENTO
1) Pesadoymarcajedeanimales
Cadagrupodetrabajorecibir4ratas.Marqueasusanimalesconelmarcadordetinta
indeleble,pselosyregistreelpesodecadaanimal.
2) Desarrollodelexperimento
a) Asignealeatoriamenteeltratamientoquerecibircadaanimal:vaoral,intraperitoneal,
subcutneaointramuscularyanteloenelcuadrodeabajo.Administre0.1mLporcada
100gdepesodelasolucindelfrmacoporlavadeadministracinquelecorresponde
acadaanimalyregistreeltiempoalqueloadministrenelcuadrodeabajo.
b) Registre el tiempo en el cual el animal pierde el reflejo de enderezamiento, que se
caracteriza por el hecho que al ponerlo sobre su dorso no presenta resistencia para
intentarvolverasuposicinnatural.
c) La duracin del efecto corresponde al lapso de tiempo entre la prdida del reflejo de
enderezamientoyeltiempoenelcualelanimalvuelveasuposicinnatural.
d) Cubra al animal con un lienzo de franela para reducir la hipotermia producida por el
frmaco.
e) Registresusdatosenelcuadrosiguiente.
RATA
NM.
PESO(g)
VADE
ADMINISTRACIN
VOLUMENA
ADMINISTRAR
(mL)
TIEMPODE
ADMINISTRACIN
INICIO(min)
(min)
EFECTO
TRMINO
(min)
DURACIN
(min)
1
2
3
4
38
FarmacologaI.GuindePrcticas.
V.ANLISISDERESULTADOS
a) Construyaunagrficaparaelperododelatenciayotroparaladuracindelefectoen
funcindelavadeadministracin.
b) Realiceelanlisisestadsticocorrespondienteparaindicarsihayonoinfluenciadelava
deadministracinenelefectodelpentobarbital.
VI.BIBLIOGRAFA
Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger,
EUA.
ShargelL,WuPongSyYuA.(2004).AppliedbiopharmaceuticsandPharmacokinetics.5th
Edition.McGrawHillMedical,EUA.
39
FarmacologaI.GuindePrcticas.
7.Excrecinrenaldecidoacetilsaliclicoenvoluntarios.
Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
TemarelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaI:Farmacocintica,excrecindefrmacos
I.INTRODUCCIN
II.OBJETIVOS
Losobjetivosdeestaprcticason:
1. Comprenderlaimportanciadelaexcrecinrenalcomounodelosprocesosprincipales
delaeliminacindefrmacos.
2. Determinarlaeliminacinporexcrecindelcidoacetilsaliclicoenvoluntariossanos,as
comolosfactoresqueinfluyenenlamisma.
40
FarmacologaI.GuindePrcticas.
III.MATERIAL
a) Sujetosdeestudio
Criteriosdeinclusin:Voluntariosadultosjvenessanos,de18a20aosdeedad,de5565
kgdepeso,preferentementedelgneromasculino.
Criteriosdeexclusin:Noentrarnenelgrupopersonasconproblemasgastrointestinales
(lcera gastroduodenal, gastritis), historia de alergias, problemas en su funcin renal o
intoleranciaasalicilatos,mujeresconproblemasdehemorragiasmenstruales,nisujetos
quehayantomadosalicilatosenlasltimas24horas.Cualquieradeestascontingencias
debeserinformadaalprofesor.
b) Materiales,cristalerayequipo
UnmatrazErlenmeyerde100mL
5matracesErlenmeyerde50mL
Unagradilla
10tubosdeensayode10mL
Unapipetagraduadade5mL
Unapipetagraduadade1mL
Unapipetagraduadade10mL
Unaprobetade500mL
Dosvasosdeprecipitadode50mL
Dosvasosdeprecipitadode250mL
Unvasodeprecipitadode500mL
Unmatrazvolumtricode25mL
Seismatracesvolumtricosde10mL
Placadecalentamiento
Cronmetro
Espectrofotmetro
Potencimetro
41
FarmacologaI.GuindePrcticas.
d) Frmacosyreactivos
Aguapotable
Tabletasdecidoacetilsaliclicode500mg
Salicilatodesodio
ReactivodeTrinderparasalicilatos
Sedisuelven10gdecloruromercricoen200mLdeaguadestiladacaliente.Cuandola
disolucin es completa, se enfra y se aaden 30 mL de cido clorhdrico 1 N.
Posteriormentesedisuelven10gdenitratofrricoenladisolucinyseaforaa250mL
conaguadestilada.
Amoniacoacuoso(hidrxidodeamonio)
Disolucindecidoclorhdrico0.1N
IV.PROCEDIMIENTO
a) Preparacinytomademuestras
Rotular 5 matraces Erlenmeyer (donde se colocarn la muestras de orina) y 5 tubos de
ensayoconlostiempos0,40,60,80y100minutos.Anotarenelcuadroadjuntolahoraen
lacualserealizarncadaunadelastareas.
Obtencindelamuestrasserealizardeacuerdoconelcuadrosiguiente.
42
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Tiempo
(min)
Hora
Desecharlaprimeraorina.
Tomar750mLdeaguapotable.
Colectarlaorina(mnimo100mL).Estaserlaorinabasal.
Medirsuvolumenyanotarlo.
Tomar dos tabletas de cido acetilsaliclico de 500 mg en un
volumendeaguaigualalorinado.
Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.
Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.
Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.
Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.
40
60
80
100
Actividadarealizar
43
FarmacologaI.GuindePrcticas.
b) Anlisisdesalicilatoenorina
Paracadamuestradeorinasecuantificalacantidaddesalicilatosexcretadosdeacuerdoal
siguienteprocedimiento.
1) Calentaraebullicinlostubosdeensayoconlasmuestrasdurante10minutos.
2) Enfriarlostubosconaguafra
3) Aadiraltubo2.5mLdereactivoparasalicilatos.Lareaccindauncolorcuantificable
porespectrofotometraa525nm.
4) Realizar una curva estndar pesando 10 mg de salicilato de sodio, disolverlo en agua
destilada, aforar a 10 mL y continuar con se indica en el cuadro siguiente siguiente,
utilizandomatracesvolumtricosde10mL:
VOLUMEN(mL)DEDISOLUCIN
TUBONM. STOCKDESALICILATODESODIO
(1mg/mL)
CONCENTRACIN
(g/mL)
0.25
25
0.5
50
100
200
300
ABSORBANCIA
5) Lamuestraatiempoceroserutilizadacomoblanco.
6) Interpolarlosvaloresdeabsorbanciadelasmuestrasenlacurvaestndarparaobtener
laconcentracindesalicilatosenlamuestra.
7) Losresultadosobtenidosseanotarnenelsiguientecuadro.
44
FarmacologaI.GuindePrcticas.
MUESTRA
TIEMPO(min)
BLANCO
40
60
80
100
pH
VOLUMEN(mL)
ABSORBANCIA
CONCENTRACIN
(g/mL)
CANTIDADEXCRETADA
DESALICILATOS(g)
CANTIDADEXCRETADA
ACUMULADADE
SALICILATOS(g)
V.ANLISISDERESULTADOS
1) Construyaunagrficadecantidadexcretadaacumuladadesalicilatoscontraeltiempoy
calculelaconstantedeexcrecin.
2) Calculeelporcentajedefrmacoexcretadopororinaen100minutosycomprelaconla
deotrosvoluntarios.
VI.BIBLIOGRAFA
Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger.
EUA.
Shargel L, WuPong S, y Yu A. (2004). Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics.
5thEdition.McGrawHillMedical,EUA.
45
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:1sesin(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometra,relacindosisrespuestagradual.
I.INTRODUCCIN
Lasleccionesprcticassonunaparteimportantedelaenseanzadelafarmacologaendiversas
reas como la medicina, enfermera y farmacia. Los experimentos in vivo e in vitro han sido
ampliamente utilizados en las lecciones prcticas para ayudar a los estudiantes a adquirir
habilidadesenlosexperimentosfarmacolgicos,reforzandosuconocimientoaprendidoconlas
clasestericasylibros.
Aunque los experimentos tradicionales en animales vivos son invaluables, tienen desventajas:
alto consumo de tiempo, dinero y sacrificio de animales; slo pueden probarse un nmero
limitado de frmacos en un periodo de tiempo y requieren frecuentemente de un trabajo
constanteeintenso.
46
FarmacologaI.GuindePrcticas.
II.OBJETIVO
Losobjetivosdeestaprcticason:
III.MATERIAL
a) Software
Se utilizar el software Organ Bath Simulation 2006 ver. 1.2 desarrollado por la
UniversidaddeStrathclyde,Escocia.
Elsoftwarepuedeserdescargadodelsiguientevnculo:
http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/media/2/OBSim%20V1.2%20Setup.exe
IV.PROCEDIMIENTO
A)ManejodelsoftwareOrganBathSimulation2006ver.1.2
Para el uso adecuado del software se dividir su manejo por procedimiento con
referenciaalesquemasiguiente:
47
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Botnparaempezarun
nuevoexperimento
readeregistrodelos
datos
Cursordemedicindela
fuerzadecontraccin
Seleccindel
tejidoautilizar
Seleccindel
agonistaautilizar
Seleccindelaconcentracin
delagonista
Seleccindelvolumena
administrardeagonista
Seleccindel
antagonistaautilizar
Seleccindelaconcentracin
delantagonista
Seleccindelvolumena
administrardeantagonista
Seleccindelsitiodondese
administrarelantagonista
Botndelavadodel
tejido/cmara
Botnparainiciarel
experimento
Botnparafinalizarel
experimento
1. Iniciodelprogramaycomienzodeunnuevoexperimento.
Parainiciarelprogramasedebeoprimirelsiguienteicono:
Paracomenzarunnuevoexperimento:
a) Seleccione en Tissue type, el tejido Guinea Pig Ileum. Este tejido es el que ser
colocadodentrodelacmaraderganoaislado.
b) OprimaelbotnNewExperiment.
c) OprimeelbotnRecord,paracomenzarlalecturadentrodelreaderegistro.
d) Seleccioneyapliquefrmacosdelalistadeagonistasoantagonistascomoseindicaa
continuacin
48
FarmacologaI.GuindePrcticas.
2. Adicindeagonistasalacmaraderganoaislado.
a) EnelapartadoAgonist,seleccioneelagonistaqueseutilizar.
b) Seleccionelaconcentracinmolarqueseutilizar.
c) Introduzcaenelvolumenautilizar:0.10mL
d) OprimaelbotnAddtoOrganBath,paraagregarelagonistaalacmara.Registre
por 12 segundos (un cuadro en la lnea de tiempo) que equivale a 3 minutos en la
simulacin.
e) Para curvas acumulativas, agregue la siguiente concentracin de agonista. Para
curvasporlotesonoacumulativas,oprimaelbotn,FlushReservoir toBath,para
lavareltejidocondisolucinKrebs.
3. Adicindeantagonistasalacmaraderganoaislado.
a) EnelapartadoAntagonist,seleccioneelantagonistaqueseutilizar.
b) Seleccionelaconcentracinmolarqueseutilizar.
c) Introduzcaenelvolumenautilizar:0.10mL
d) En la lista desplegableque se encuentra a la derecha delbotn Add to, seleccione
OrganBath,yoprimaelbotnAddtoparaagregarelantagonistaalacmara.
4. Medicindelarespuestadeltejido.
Paramedirlaamplituddelospicosdelascontraccionesdeltejido:
a) OprimaelbotnStop,paraterminarelexperimento.
b) Usando la barra de desplazamiento horizontal del rea de registro, seleccione la
seccinquecontienelascontraccionesdeltejidoquesernmedidas.
c) Arrastreelcursordemedicinalpuntodelagrficaderegistroquesermedido.La
fuerzadecontraccin(engramos)sermostradadebajodelcursor.
d) Sesugieretomaralmenos5lecturascercanasdentrodelamesetaoreademedida
yobtenerelpromediodelaslecturasparaunmejorresultado.
49
FarmacologaI.GuindePrcticas.
B)Experimentosarealizarenelsoftwaredesimulacin.
Experimento1.
Curvasconcentracinrespuestadeagonistas.
a) Seleccionecomotejidoalleondecobayoeinicieunnuevoexperimento.
b) SeleccioneaHistamina(Histamine)comoelagonistaautilizaraunaconcentracinde
1x108Myunvolumende0.10mL.
c) OprimaelbotnRecordparainiciarelexperimento.
d) Sedejaestabilizarlamuestrapor3minutos(12segundosrealesouncuadrodelreade
registro)yseoprimeelbotnAddtoOrganBath.
e) Cuando la contraccin del msculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan
transcurrido 3 minutos de la simulacin (si es que no hay contraccin), se agrega la
concentracinde1x107Myassucesivamentehastaagregarlaconcentracinde1x100
M.
f) Alterminarlacurva,seoprimeelbotnStop,seguardaelregistro.Ysecalculalafuerza
decontraccinporcadaconcentracinagregada.
g) Serealizaelmismoexperimento,ahoraconCarbacol(Carbachol).
Experimento2.
a) Seleccionecomotejidoalleondecobayoeinicieunnuevoexperimento.
b) SeleccioneaHistaminacomoelagonistaautilizaraunaconcentracinde1x108Myun
volumende0.10mL.
c) Seleccione a Mepiramina (Mepyramine) como el antagonista a utilizar a una
concentracinde1x106Myunvolumende0.10mL.
d) OprimaelbotnRecordparainiciarelexperimento.
50
FarmacologaI.GuindePrcticas.
e) Sedejaestabilizarlamuestrapor3minutos(12segundosrealesouncuadrodelreade
registro) y se agrega el antagonista a Organ Bath oprimiendo el botn Add to del
apartadoAntagonist.Sedejaincubarpor3minutosdesimulacin.
f) Despusdeterminadalaincubacin.Seconstruyelacurvaconcentracinrespuestade
laHistaminacomosedescribeenelexperimento1.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol como agonista y Atropina
(Atropine)comoantagonista.
h) Adicionalmente realice el mismo experimento utilizando dos concentraciones ms del
antagonista con el objeto de tener el efecto del antagonista a tres diferentes
concentraciones,enlaaccindelagonista.
Nota: Se puede experimentar con combinaciones de agonistas y antagonistas con los que
cuentaelsoftwareparademostrarlaselectividaddeestosltimos.
Experimento3.
Efectorelajantedeantagonistas.
a) Seleccionecomotejidoalleondecobayoeinicieunnuevoexperimento.
b) SeleccioneaHistaminacomoelagonistaautilizaraunaconcentracinde1x101Myun
volumende0.10mL.
c) OprimaelbotnRecordparainiciarelexperimento.
d) Sedejaestabilizarlamuestrapor3minutos(12segundosrealesouncuadrodelreade
registro)yseoprimeelbotnAddtoOrganBath.
e) Cuando la contraccin del msculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan
transcurrido3minutosdelasimulacin(siesquenohaycontraccin),seconstruyeuna
curva concentracin respuesta con concentraciones crecientes de Mepiramina (de
1x108Ma1x100M).Tomeencuentaqueahoralafuerzadecontraccindisminuiren
lugardeaumentar.
51
FarmacologaI.GuindePrcticas.
f) Alterminarlacurva,seoprimeelbotnStop,seguardaelregistro.Ysecalculalafuerza
decontraccinporcadaconcentracinagregada.
g) Serealizaelmismoexperimento,ahoraconCarbacolaunaconcentracinde1x103My
comoantagonistaAtropina.
V.ANLISISDERESULTADOS
1. Conlosdatosobtenidosdelexperimento1:
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeHistaminaydeCarbacol.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.
c) CalcularlaCE50paralaHistaminayelCarbacoldeacuerdoconmodelodeterminadoen
elincisoanterior.
2. Conlosdatosdelexperimento2.
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeHistaminaydeCarbacolconcadauno
delosantagonistasutilizados.
b) CalcularlaCE50paralascombinacionesdeHistaminaydeCarbacolconlosantagonistas
utilizadosdeacuerdoconmodelodeterminadoenexperimentoanterior.
c) Calcular cuntas veces se disminuy el efecto del Carbacol y de la Histamina por la
presenciadesusantagonistas.
d) Con las tres curvas concentracinrespuesta de los antagonistas a diferente
concentracin,calculelapotenciaopA2delantagonista.
52
FarmacologaI.GuindePrcticas.
3. Conlosdatosdelexperimento3.
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeHistaminaydeCarbacolconcadauno
delosantagonistasutilizados.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.
c) CalcularlaCI50(ConcentracinInhibitoriamedia)paralascombinacionesdeHistaminay
de Carbacol con los antagonistas utilizados de acuerdo con modelo determinado en el
incisoanterior.
VI.BIBLIOGRAFA
SamuelssonG.(1991).Assaysforpharmacologicalactivity:Nonspecificassays.Methods
inPlantBiochemistry.Volume6.Assayforbioactivity.AcademicPressLimited,EUA,261
280.
TallaridaR.(2000).Drugsinergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC,
EUA.
53
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometra,relacindosisrespuestagradual.
I.INTRODUCCIN
Las preparaciones de tejidos u rganos aislados son comnmente usadas para estudiar los
efectosdeunfrmacosobreuntipoespecficodereceptores.Estaspreparacionessontambin
utilizadas para bioensayos de frmacos, caracterizacin de receptores especficos o sus
subtipos, para determinar la curva concentracin respuesta de un agonista y, para estudiar
antagonismoentreunfrmacoyunnuevofrmacodescubierto.
El leon de cobayo ha sido una preparacin in vitro muy utilizada para estudiar cambios
mediadosporreceptores,paraidentificarnuevosreceptores,yparadeterminarlavariacinen
especies producidas por frmacos anticolinrgicos. Varios receptores, incluyendo los de
histamina, los GABArgicos y adrenorreceptores se pueden estudiar en este tipo de
preparaciones.
La preparacin de leon de rata puede ser usada para ensear los conceptos bsicos del
bioensayo y para demostrar la actividad espasmoltica de frmacos colinrgicos y
anticolinrgicos.Lasventajasdeestapreparacinsonsubajocosto,fcilimplementacinysu
facilidaddemanejo.
En esta prctica se utilizar la preparacin de leon de rata para determinar el efecto del
CarbacolyAtropinasobrelosreceptorescolinrgicospresentesenlapreparacin.
54
FarmacologaI.GuindePrcticas.
II.OBJETIVOS
Losobjetivosdeestaprcticason:
1. Demostrarelefectoconcentracindependientedelcarbacolenleonderata.
2. Determinar el tipo de interaccin farmacolgica de la atropina sobre la actividad del
carbacolenleonderata.
III.MATERIAL
c) Materialbiolgico
UnarataWistarhembrade200250gdepeso,conayunode12hylibreaccesoalagua
d) Materiales,cristalerayequipo
Vasodeprecipitadode1L
Pipetasgraduadasde1mL
6matracesaforadosde10mL
Estuchedediseccin
Placadeagitacin
Balanzaanaltica
PolgrafoBiopacSystemacopladoaunacomputadoraconelsoftwareAcqKnowledge
versin3.7
e) Reactivos
DisolucinKrebsHenseleit(KHS).
ComposicinenmM:NaCl118,KCl4.7,MgSO4.7H2O1.2,CaCl22.5,KH2PO41.2,NaHCO3
25,glucosa(C6H12O6)11.
55
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Cantidadesdelassalesparapreparar1000mLdedisolucinKrebsHenseleit(KHS)
Dglucosa
C6H12O6
1.998g
Sulfatodemagnesioheptahidratado
MgSO4y7H2O
0.2956g
Dihidrogenofosfatodepotasio
KH2PO4
0.1632g
Clorurodepotasio
KCl
0.351g
Clorurodesodio
NaCl
6.903g
Hidrgenocarbonatodesodio
NaHCO3
2.1g
EDTAdisdicodihidratado
C10H14O8N2Na2y2H2O
0.0117g
Clorurodecalciodihidratado
CaCl2y2H2O
0.3677g
Se disuelven todas las sales, una por una, en aproximadamente 500 mL de agua
destilada. Disolviendo al ltimo el cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales y sin
signosdeprecipitacinsellevaaunvolumende1000mLconaguadestilada.
DisolucionesdeCarbacol(1x104,3x105,1x105,3x106y1x106M).
PreparacindeladisolucinStock(1x103M).
Disolver1.825mgdecarbacolenaguadestiladayaforara10mL.
Preparacindelasdisoluciones.
Una vez preparada la disolucin stock deber seguirse la serie de diluciones como se
muestraenelsiguienteesquema,utilizandomatracesaforadosde10mL:
56
FarmacologaI.GuindePrcticas.
1mL
1mL
1mL
1x104 M
1x105 M
1x106 M
1mL
0.3mL
Cadamatraz
debeaforarse a
10mL
Disol.Stock
1x103 M
3x105 M
3x106 M
DisolucindeSulfatodeAtropina(1x106M).
Se pesan 1.692 mg de sulfato de atropina, se disuelven agua destilada y se afora aun
volumende10mL(disolucinStock).Acontinuacinsesigueelesquemadediluciones
comoseindica:
2 mL
1mL
2 mL
5x105 M
1x105 M
1x106 M
Cadamatrazdebe aforarsea10mL
Disol.Stock
2.5x104 M
IV.PROCEDIMIENTO
a)ManejodelPolgrafoBiopacSystem
Para el manejo adecuado del Polgrafo Biopac System por medio del software
AcqKnowledge,vaseelApndiceIIIdeestagua.
57
FarmacologaI.GuindePrcticas.
b)Diseccindelleonderata
1) SacrificarlarataenlacmaradeCO2opordislocacincervical.
2) Abrirelabdomenyrealizarladiseccindelleon.Lalocalizacindelleonsemuestraen
elsiguienteesquema.
2.Duodeno
1.Estmago
3.Yeyuno
5.Ciego
4.leon
6.Colon
3) Disecarunalongitudaproximadade1012cmdeleon,lavarlocondisolucinKHShasta
quelaluzintestinalquedelibremateriaorgnica.
4) Cortar segmentos de aproximadamente 1 cm de largo y colocarlos en disolucin KHS,
conburbujeocontinuodegascarbgeno.
c)Montajedepreparacin.
1) Cada preparacin se suspender en una cmara para rgano aislado con ganchos de
alambre de nicromel, que se incrustan en el tejido. Uno de los extremos se fija a la
cmara y el otro al transductor de fuerza conectado al Polgrafo Biopac System, de
acuerdoalassiguientesfiguras:
58
FarmacologaI.GuindePrcticas.
2) Cada cmara deber contener 10 mL de solucin KHS con burbujeo constante de gas
carbgenoaunatemperaturade371C.
3) Eltejidosesometeaunatensininicialde1gdejndoloestabilizarpor20minutos,con
unlavadointermedioalos10minutos.
4) Realizar2estimulacionescon100Ldecarbacol(1x104M)aintervalosde20minutos,
con un lavado intermedio a los 10 minutos Despus de cada estimulacin se lava el
tejidoconsolucinKHSdosvecesparaeliminaralCarbacol.
Nota:Laconcentracinrealenlacmaraderganoaisladoes100vecesmenordebidoa
ladilucin(1:100).
5) Elcronogramadelospasos2a4eselsiguiente:
Tiempocorrido(min)
Actividad
50
Inicio
(OprimirelbotnStart)
LavadoconKHS
Estimulacin1y
LavadoconKHS
LavadoconKHS
Estimulacin2y
LavadoconKHS
LavadoconKHS
60
LavadoconKHS
70
Iniciodelasevaluaciones
0
10
20
30
40
59
FarmacologaI.GuindePrcticas.
d)CurvaacumulativaconcentracinrespuestadelCarbacol.
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mL de Carbacol 1x106 M (disolucin 1). Las siguientes disoluciones se agregarn
sucesivamente en el momento en que la disolucin anterior alcance una meseta de
contraccin.
Disolucin
ConcentracindeCarbacol
1x106M
3x106M
1x105M
3x105M
1x104M
2) DespusdeevaluarselavaeltejidopordosvecescondisolucinKHSdejandoreposar
porperiodosde10minutosentrecadauno.
d)EfectodelaAtropinaenlaaccindelCarbacol
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mLdeAtropina1x106M.
2) SedejaincubareltejidoconlaAtropinadurante5minutosyposteriormenteserealizala
curvaacumulativaconcentracinrespuestacomoseindicenelincisoe).
V.ANLISISDERESULTADOS
1. ParaanalizarlosdatosesnecesariodescargarelsoftwareAcqKnowledge3.9Demoenla
siguientedireccinelectrnica:
http://www.biopac.com/Demos.asp?did=4&PCDemoResearch=Y
60
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Esnecesarioregistraseparadescargarlo,ydebeinstalarsecomoindicanlasinstrucciones
delsitioweb.
Conayudadelsoftwareydesuprofesordeberllenarelcuadrodedatosanexa.
TABLADEDATOSDELEXPERIMENTO
EXPERIMENTO1.CARBACOL
CONCENTRACIN
(M)CARBACOL
NM.
LOG[CONC(M)]
MUESTRA/CANAL
1
Basal
1
2
3
4
5
6
6
EXPERIMENTO2.CARBACOL+ATROPINA(1X10 M)
CONCENTRACIN
(M)CARBACOL
NM.
LOG[CONC(M)]
MUESTRA/CANAL
1
Basal
1
2
3
4
5
6
2. Conlosdatosobtenidos:
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeCarbacolydeCarbacol+Atropina.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.
61
FarmacologaI.GuindePrcticas.
c) Calcular las CE50 para el Carbacol y para Carbacol+Atropina, de acuerdo con modelo
determinadoenelincisoanterior.
d) Calcular cuntas veces se disminuy el efecto del carbacol por la presencia de la
Atropina.
e) DeterminareltipodeinteraccindelaAtropinasobrelaaccindelCarbacol.
VI.BIBLIOGRAFA
SamuelssonG.(1991).Assaysforpharmacologicalactivity:Nonspecificassays.Methods
inPlantBiochemistry.Volume6.Assayforbioactivity.AcademicPressLimited,EUA,261
280.
TallaridaR.(2000).Drugsinergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC,
EUA.
62
FarmacologaI.GuindePrcticas.
APNDICEI.Tabladeconversindeproporcinaunidades
Probit.
TABLADECONVERSINDEPROPORCIN(pi)AUNIDADESPROBIT(yi)
pi
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.00
2.673
2.945
3.119
3.249
3.355
0.10
3.718 3.773
3.825
3.874
3.920
3.964
0.20
4.156 4.194
4.228
4.261
4.294
4.326
0.30
4.476 4.505
4.532
4.561
4.588
4.615
0.40
4.747 4.773
4.798
4.824
4.849
4.874
0.50
5.000 5.025
5.050
5.075
5.100
5.125
0.60
5.253 5.279
5.305
5.331
5.358
5.385
0.70
5.524 5.553
5.582
5.612
5.643
5.674
0.80
5.841 5.878
5.915
5.954
5.994
6.036
0.90
6.282 6.341
6.405
6.476
6.555
6.645
pi
0.000 0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.97
6.88
6.896
6.911
6.927
6.944
6.960
0.98
7.054 7.075
7.097
7.121
7.145
7.171
0.99
7.327 7.366
7.409
7.458
7.513
7.576
63
0.07
0.08
0.09
FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
APND
DICEII.TTcnicassdeman
nejoeid
dentificaacindeanimale
es
delabor
d
ratorio((ratayraatn).
I.MANEJJODELRAT
N.
Losraton
nes,ascomolamayoraadelosanim
malesdelab
boratorio,puedenserleevantadosp
porsu
cola, la base
b
de la cola es sujeetada entre los dedos pulgar e nd
dice y el raatn entonces es
levantado
o en posici
n vertical. Esta tcnicca resulta muy
m til parra manejar y
y trasladar a los
ratonesd
distanciasco
ortas.Sedeb
betenercuidadodeno sujetarlopo
orlapunta delacolayaaque
podraesscalarlamism
maymorderlamano(fiigura1y2).
Figura1.Form
macorrectademaanejarunratn. Figuraa2.Formaincorreectademanejarun
nratn.
Para la inmovilizaci
n del ratn
n con el objetivo de ad
dministrarlee un frmaco o sustanccia se
procederrdelasiguientemanera:
Se toma al ratn co
omo se expliic anteriormente, y el peso del cuerpo del ratn es apo
oyado
sobrelarrejadelacaja(figura3),setomaah
horalacolad
delratnpo
ormediodelldedomeiquey
conlosdedosndiceypulgarsettomadelap
pieldelanuca(figura4 y5).Sevolteayselevantala
mano dee manera que
q
el vien
ntre del rattn quede expuesto (figura
(
6 y 7). Una buena
b
inmovilizacinevitaq
queelratnsevolteeosemuevaalmomentod
delaadminiistracin.
64
FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
F
Figura6.
Figura7.
Unavez inmovilizado
o elratnseepuedepro
ocederala administracindelfrm
macoosustaancia,
ocuidadodesujetarlofirrmemente.
teniendo
II.MANEJODELARA
ATA.
La rata debe
d
manejaarse por la base de la cola
c
y evitarr levantarla de esta maanera por mucho
m
tiempod
debidoalos movimiento
osquerealizza(figura8).Eltraslado
oserealizardeestamaanera
endistan
nciasmuyco
ortasynosedebersujeetarporlapu
untadelaco
ola.
Figura8.Formaco
orrectademanejaaraunarata.
Para la inmovilizaci
n de la ratta de laboraatorio existeen muchas tcnicas. A continuaci
n se
explicarnlasmsuttilizadas.
65
FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
Tcnica1
1.
Sesujetaalaratapo
orlabasedeelacolacon
nlamanodeerechaycon
nlamanoizq
quierdasecoloca
el cuello de la rata entre los dedos medio e ndice.. La rata en
ntonces es sujetada po
or las
extremidadesanterio
oresyelabdomensin hacerpresi
nsobreel cuello(figurra9,10y11
1).Se
levanta la mano y laa cola es su
ujetada con la mano izzquierda parra dejar exp
puesto el vientre
(figura 12 y 13). Se levanta la mano y la cola es sujeetada con la mano derecha para dejar
expuesto
oelvientre.
Figura12
2. Figura13.
Tcnica2
2.
orlabasedeelacolacon
nlamanodeerechaycon
nlamanoizq
quierdasecoloca
Sesujetaalaratapo
el cuello de la rata entre
e
los deedos pulgar e ndice (figgura 14 y 15
5) de manera que los dedos
d
a la altura de
d las extrem
midades antteriores. Con
n el movimiento naturaal de la man
no, se
queden a
cierrasttademanerraquelasexxtremidadessanteriores delarataquedencruzaadas,selevaantay
sesujetalacolaconlamanoderrechaparadejarexpuesttoelvientree(figuras16
6,17y18).
66
FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
Figu
ura14. Figura15. Figura16.
Figura17
7. Figura18.
III.MARC
CAJEDELRA
ATNYLARA
ATA.
LatcnicaarecomendadaparaelmarcajederatonesyratasenelLab
boratoriodeeFarmacologgase
realiza en
n la cola de
el animal po
or medio dee un marcad
dor indeleble, siguiendo
o la clave que se
muestra enlasfiguraas19a24.EEstatcnica serecomiendacuandoseutilizan pocosanimaalesy
enexperimentosmuycortosenduracin.
Figura1
19.Marcajeenlaccolaconmarcadorr.Figura20.Ratnmarcadoconelnmero1.Figuraa21.Ratnmarcad
doconelnmero 2.
67
FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
Figura22.Ratnmarcadoconelnmero3
3.Figura23.Ratnmarcadoconelnmero4.Figuraa24.Ratnmarcad
doconelnmero5
nmarcadoconelnmero6.
Figura25.Ratn
OGRAFA
IV.BIBLIO
Sh
hortDyWoodnottD(ed
ditores).(1963).TheA.TT.A.manualo
oflaboratorryanimalpra
actice
an
ndtechniquees.CharlesC
C.ThomasPublisher,EU
UA:4757.
68
FarmacologaI.GuindePrcticas.
APNDICEIII.InstructivoparaelusodelpolgrafoBiopac
SystemMP100.
I.MATERIALESYREACTIVOS.
PolgrafoBiopacSystemMP100ACE
Gascarbgeno(oxigeno95%dixidodecarbono5%).
DisolucinKrebsHenseleit(KHS)
DisolucinKrebsHenseleit(KHS)
Dglucosa
C6H12O6
1.998g
Sulfatodemagnesioheptahidratado
MgSO4y7H2O
0.2956g
Dihidrogenofosfatodepotasio
KH2PO4
0.1632g
Clorurodepotasio
KCl
0.351g
Clorurodesodio
NaCl
6.903g
Hidrgenocarbonatodesodio
NaHCO3
2.1g
EDTAdisdicodihidratado
C10H14O8N2Na2y2H2O
0.0117g
Clorurodecalciodihidratado
CaCl2y2H2O
0.3677g
DisolucindeAcetilcolina3x105M
DisolucindeNorepinefrina1x106M
DisolucindeCarbacol1x104M
69
FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.
II.PROCEEDIMIENTO.
A.Calibracin
ndelpolgraafo.
quetodoslo
oscanalesesstnfirmementeconecttadosyajusttados.
1..Severificaq
2..Seenciendelacomputadorayelpolgrafoopriimiendoelb
botnenlap
posicinON..
3..Severifica queelnivelldeaguadeelbaorecirrculadorcub
bralaresisteenciaylabo
omba.
Seeenciendeyydejaestab
bilizarlatem
mperaturaen
n371C.Esstebaopro
oporcionaellflujo
deeaguaquem
mantienelatemperaturadeladisolucinKHSadichatemperatura.
4..Enlapantalladelacom
mputadoraseseleccionaaelicono
70
FarmacologaI.GuindePrcticas.
para iniciar el programa AcqKnowledge, el cual registra los datos provenientes del
Polgrafo.
5.Alcomenzarelprogramaseabrelaventanaqueseilustraenseguida.
MP100,yposteriormentelaopcinSetupChannelsquenosabrirunaventanaemergente.
71
FarmacologaI.GuindePrcticas.
8.Paralacalibracindecadacanalseseleccionaprimeroelcanal
botn
yseoprimeel
conelcualaparecerlasiguienteventanaemergente.
9.EnlascasillasScalevaluesecolocan0(cero)y2(dos)yenUnitssecolocag(gramos)
comosemuestraacontinuacin.
72
FarmacologaI.GuindePrcticas.
10.ConelvalorScalevalue=0,seoprimeelbotn
yelprogramaautomticamente
calcularaelvalorInputvoltscorrespondientea0g(cero).ConelvalorScalevalue=2,se
colocaunapesade2gramossobreeltransductoryseoprimeelbotn
,elprograma
Esteprocedimientoserepiteconcadacanalqueseutilizar.
posteriormentelaopcinSetupAcquisition.
12.AlseleccionarlaopcinSetupAcquisitionseabrirlasiguientepantallaemergente.
73
FarmacologaI.GuindePrcticas.
13.EnlapantallaemergenteSetupAcquisition,seseleccionarlasopcionesRecordand
SaveoncetoDiskacquisition.PosteriormenteseseleccionarAcquisitionSampleRate
en 0.5 1.0 samples /second, y en Total lengh se seleccionar el mximo en horas,
comosemuestraacontinuacin.
14.ElPolgrafoyaestcalibradoysepuedeseguirconelmontajedeltejido.
B.Montajedeltejido.
1.AntesdemontareltejidoseseleccionaenelsoftwareAcqKnowledgeseseleccionaen
elmenlaopcinMP100,yposteriormentelaopcinShowInputValues.
74
FarmacologaI.GuindePrcticas.
2.Alseleccionarnosabrirunaventanaemergentequenosmuestralosvaloresquese
registranenelPolgrafo.
75
FarmacologaI.GuindePrcticas.
3.Serealizaladiseccindeltejidoautilizardeacuerdoaloreportadoenlaliteratura.En
casodeleonotrqueadecobayooaortaderataeltejidosecortarenanillosparasu
montaje.
4.ParaaortaytraqueeltejidoessujetadopormediodeganchosdealambreNicromel
comosemuestraenlafigura.
Hilo
Anillos de
Nicromel
Tejido
Paraleoneltejidoesmontadodeacuerdoalasiguientefigura,insertandoeltejidoen
losganchos:
Hilo
Anillos de
Nicromel
Tejido
5.Losganchosjuntoconeltejidosoncolocadosdentrodelacmaraderganoaislado
previamente llena con KHS y con burbujeo constante de gas carbgeno, como se
muestraacontinuacin.
76
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Transductor
Medio KHS
Gas carbgeno
Cmara
6. Se le da una tensin a cada tejido de cada cmara, por medio del tensor del
transductordeacuerdoconelsiguientecuadro.
Tejido
Tensin
Aortaderata
4.0gramos
Traqueadecobayo
1.5gramos
leonderata
1.0gramos
7.SeoprimeelbotnStartparacomenzarelregistrodelexperimento.
77
FarmacologaI.GuindePrcticas.
8.AloprimirelbotnStart,comenzarelregistrocomosemuestraacontinuacin.
BOTN
NOMBREDELBOTN
EFECTO
ScopeMode
(muestratodoslos
canalesjuntos)
ChartMode
(muestracadacanal
porseparado)
78
FarmacologaI.GuindePrcticas.
Show/HideJournal
(Muestra/ocultala
ventanade
anotacionesenlaparte
inferior)
Show/HideMarkers
(Muestra/ocultala
barrademarcadores
deevento.Para
agregarunmarcadorse
oprimelateclaF9)
Show/HideGrid
(Muestra/ocultala
rejilla)
SetScreenVerticalAxis
Oprimir
(Cambialavisualizacin
sobreeleje
delejeY.Se
Y
recomiendaunScale
Setting=1g)
SetScreenHorizontal
Axis
Oprimir
sobreeleje (Cambialavisualizacin
X
delejeX.Se
recomiendaunScale=
15minutes)
79
FarmacologaI.GuindePrcticas.
C.Estimulacindeltejidoparaelexperimento.
Tejido
Sustanciapara
estimulacin
Concentracin
Aortaderata
Norepinefrina
1x106M
Traquedecobayo
Acetilcolina
3x105M
leonderata
Carbacol
1X104M
2.Elcronogramadeestimulacinylavadodelostejidosserealizarcomosigue.
Tiempocorrido
(min)
0
Inicio(OprimirelbotnStart)
15
LavadoconKHS
30
Estimulacin1yLavadoconKHS
40
LavadoconKHS
50
Estimulacin2yLavadoconKHS
60
LavadoconKHS
70
LavadoconKHS
80
Iniciodelasevaluaciones
Actividad
3.Enelminuto80,sepuedeiniciarlaevaluacindelassustanciasdeacuerdoalo
reportadoenlaliteraturayalosobjetivosestablecidos.
80
FarmacologaI.GuindePrcticas.
III.BIBLIOGRAFA
Estrada S, et al. (1999). Nitric oxide/cGMP mediates the spasmolytic action of 3,4'
dihydroxy5,5'imethoxybibenzylfromScaphyglottislivida.PlantaMedica.65(2):109
114.
HsiehG,etal.(2003).YC1potentiatesthenitricoxide/cyclicGMPpathwayincorpus
cavernosumandfacilitatespenileerectioninrats.EuropeanJournalofPharmacology.
458:83189.
SnchezMendozaM,etal.(2007).Mechanismsofrelaxantactionofacrudehexane
extract of Gnaphalium liebmannii in guinea pig tracheal smooth muscle. Journal of
Ethnopharmacology.111:142147.
81