INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS
SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

PROFESORES:
M en C Aura Hernández Olicón
M en C Mónica Rivera Rosas
QBP Cinthya Salimah Martínez Reyes
ALUMNO:
Valdes Ortiz Alvaro A.
PRÁCTICA:
MATERIAL DE CALIBRACIÓN Y MATERIAL PARA CONTROL DE CALIDAD
GRUPO:
5QV2
SECCIÓN:
3
EQUIPO:
2
FECHA DE ENTREGA
17/04/2018
INTRODUCCIÓN
Existen varios métodos para determinar un mesurado de interés. En el argot de la química se
utilizan dos métodos: el método definitivo y el método de referencia .Se considera que el método
definitivo es de difícil accesibilidad, debido a que utiliza metodologías caras en cuanto a equipos
y reactivos y con frecuencia requiere de analistas especializados .Por ello, en la determinación
analítica rutinaria de un mensurado se utilizan metodologías de mayor accesibilidad de reactivos
y equipos, además de ser fáciles de realizar por el analista, sin embargo, antes de ser utilizadas
se deben de comparar con el método de referencia, el cual se considera de bastante exactitud.
En el laboratorio, es de interés evitar desviaciones analíticas al determinar un mensurado; para
asegurar los resultados es necesario verificar el buen funcionamiento de los métodos, realizando
la calibración del método analítico con el uso de especímenes de una sustancia de concentración
conocida, relacionado de forma matemática la lectura analítica con el valor nominal de la
sustancia que se mide .Asimismo, la preparación de los materiales de calibración debe hacerse
con el mayor cuidado posible, ya que la exactitud del calibrador afecta directamente a la exactitud
de los resultados.
Para la realización de una metodología química, se requiere de materiales primarios que son
utilizados para la preparación de estándares a partir de los cuales se pueden preparar soluciones
de concentraciones conocidas llamadas calibradores (estándar de calibración) que contengan
una cantidad conocida del componente que se analiza, los cuales se utilizan en todas las medidas
cuantitativas.

OBJETIVOS

 Realizar una corrida analítica completa para la determinación de un mensurado de interés

controlando el proceso analítico y la calidad de los resultados, a través de comprender la
diferencia entre calibradores y controles.
 Establecer la importancia del uso de los calibradores y controles para validar y vigilar el
proceso analítico.

FUNDAMENTO
Los materiales de control se utilizan para la comparación de métodos, sin embrago, se verán
afectados por la manipulación en el laboratorio incluyendo; estabilidad del material reconstruido,
variación de uno a otro frasco, valores asignados incorrectos, por lo que se debe de controlar el
proceso de reconstrucción siguiendo las instrucciones del producto, utilizando buenas tácticas
de pipeteo, agua o diluyente de excelente calidad, tiempo óptimo de reconstitución y forma de
conservación antes de su empleo y eliminación de contaminación por bacterias.
MÉTODO
Determinación de glucosa sérica por el método de glucosa oxidasa.

INICIO 1

Ajustar a cero
de
Colocar 1 mL de absorbancia
glucosa oxidasa a 10 Realizar las lecturas en
con blanco de
tubos el espectrofotómetro a
glucosa
510 nm
oxidasa

Adicionar 10µL de 50, 100, 200,

Registrar las
los estándares, uno 300, 400 y 700
mg/dL absorbancias
por cada tubo

Adicionar 10 µL de C2 Construir la curva

en un tubo y 10 µL de C3 tipo
en otro tubo, que fueron correspondiente
preparados en el paso 1

Determinar la
Adicionar en un tubo 10 concentración de los
µL de muestra en un controles y la muestra
tubo del paso 1

Homogenizar los FIN

tubos

A 37°C por 10 min.

Incubar los tubos o
A 20°C por 25 min.

1
RESULTADOS
BITÁCORA DE RESULTADOS FECHA: 10 de abril de 2018
Material de calibración y material para control de calidad
Resultados y observaciones
Corrida analítica
Determinación de: Glucosa sérica Método: Glucosa oxidasa
Unidades: mg/dl
Blanco utilizado: Solución de glucosa oxidasa
λ seleccionada: 510 nm

Datos del estándar:

Estándar utilizado: Estándar de glucosa

Concentración
Concentración
Absorbancia del estándar
Estándar del estándar %error
obtenida calculada
(mg/dL)
(mg/dL)
1 25
2 50
3 100
4 200
5 300
6 400
7 700

Datos del suero control:

Conc. del Intervalos Absorbancia
Suero control
suero mg/dL mg/dL obtenida
Normal 96-132
Patológico
240-322
alto

Suero control utilizado: Normal (2) y patológico alto (3).

Datos de las muestras:
Conc. Obtenida de la muestra Conc.
Real de la
Muestra Ecuación Factor muestra
Absorbancia
problema Curva tipo de la recta mg/dL mg/dL
mg/dL mg/dL
M2

Características de la muestra: se observó que el suero presentaba una coloración

muy amarillenta y presentaba pequeños sólidos en la superficie.

Factor utilizado:

2
y = 0.0028x + 0.1239
ABSORBANCIA A 500 nm

1.8
1.6
R = 0.9857
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 100 200 300 400 500 600 700
CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA (mg/dL)

Figura 1. Curva tipo para la determinación de la concentración de glucosa sérica

por el método de glucosa oxidasa en un intervalo de concentraciones de 25 a 700
mg/dL.
 1.4

ABSORBANCIA A 500 nm
y = 0.0035x + 0.0253
1.2
R = 0.9997
1

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 50 100 150 200 250 300 350 400
CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA (mg/dL)

Figura 2. Curva tipo para la determinación de la concentración de glucosa sérica

por el método de glucosa oxidasa en un intervalo de concentraciones de 25 a 400
mg/dL.

2
y = 0.0027x + 0.1576
ABSORBANCIA A 500 nm

1.8
1.6
R = 0.9837
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 100 200 300 400 500 600 700
CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA (mg/dL)

Figura 3. Curva tipo para la determinación de la concentración de glucosa sérica

por el método de glucosa oxidasa en un intervalo de concentraciones de 50 a 700
mg/dL.
 1.4

ABSORBANCIA A 500 nm
y = 0.0035x + 0.0218
1.2
R = 0.9996
1

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 50 100 150 200 250 300 350 400
CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA (mg/dL)

Figura 4. Curva tipo para la determinación de la concentración de glucosa sérica

por el método de glucosa oxidasa en un intervalo de concentraciones de 50 a 400
mg/dL.

500.00
y = 0.9342x + 5.8599
CALCULADA (mg/dL)
CONCENTRACIÓN

R = 0.9996
400.00

300.00

200.00

100.00

0.00
0 100 200 300 400 500 600 700

CONCENTRACIÓN (mg/dL)

Figura 5. Verificación de la linealidad.

DISCUSIÓN
La mejor curva tipo obtenida fue la que va de 50 a 400 mg/dL, lo cual coincide con las
indicaciones de linealidad que proporciona el fabricante de la glucosa oxidasa. Una vez
construyendo la gráfica de concentración por concentración calculada, se puede notar
que la curva no es lineal, por lo tanto no sigue a la ley de Bouger-Beer. Esto a su vez no
permite conocer con exactitud la concentración de los controles ni de la muestra, es por
esto que los controles no están dentro de los intervalos indicados por el fabricante y por
lo tanto el resultado no se valida.
Los porcientos de error nos indican que existe un error de tipo sistemático, este puede
deberse a que el analista no tomo las alícuotas de forma correcta o bien que las celdas
donde se tomaron las lecturas, se encontraran con residuos de sales o contaminantes
que pudieran interferir en las lecturas. También se debe tomar en cuenta que el reactivo
se encontraba caduco, lo cual limitaría la actividad de la enzima glucosa oxidasa, y así
proporcionar datos no confiables.
CONCLUSIONES
 La curva tipo se debe repetir ya que no sigue la ley de Bouger-Beer.
 No se puede reportar el resultado, ya que los controles no se encuentran dentro
del intervalo y por lo tanto no se valida el resultado.
PREGUNTAS EXTRA
Fundamento del método de la glucosa oxidasa
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El peróxido
de hidrógeno (H2O2), producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de
oxígeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD):

GOD
β-D-Glucosa + O2 + H2O → Ácido glucónico + H2O2

POD
H2O2 + Fenol + Ampirona → Quinona + H2O

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente

en la muestra ensayada.
Valores de referencia de glucosa sérica en México

Metas del tratamiento Bueno Regular Malo

Glucemia en ayunas (mg/dl) <110 110-140 >140

Glucemia postprandial de 2 h. <140 <200 >240

(mg/dl)

REFERENCIAS
 Arderiu Fuentes X., Lacambra Castiñeiras M. J., Compaño Queralto M. J.,
Bioquímica clínica y patología molecular, Vol. I., Ed. Reverte, ed. 2 a, Barcelona,
1998.
 NOM-015-SSA2-1994
 http://www.spinreact.com.mx/public/_pdf/1001190.pdf
 http://www.cenam.mx/materiales/defyusos.aspx#Usos_de_los_materiales_de_ref
erencia