INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

Profesores:
M en C Aura Hernández Olicón
M en C Elizabeth Jiménez Gutierrez
M en C Hilda Pérez Cervantes
Dr. Luis R. Carreno Durón

Autor: Suarez Gómez Alexis Gabriel

Práctica: Vetificación y evaluación del uso y
funcionamiento de instrumentos de medición columétrica
Grupo: 5QM2
Sección: 4
Equipo: 10

Ciclo escolar 2019

Fecha de entrega
Ciudad de México, 21 de febrero de 2018
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INTRODUCCIÓN
Dado a la necesidad de garantizar que la adición de la cantidad de volumen fuera la medida
a lo largo del tiempo se implementaron instrumentos para garantizarlo, como es el de las
micropipetas las cuales vierte volúmenes desde 1 a 1000 L, que pueden ser de volumen
fijo o volumen cambiable. El líquido se aloja en una punta de plástico desechable. Las
puntas de polipropileno son estables a la mayoría de las diluciones acuosas y de muchos
disolventes orgánicos, excepto el cloroformo. Las puntas no son resistentes a los ácidos
nítrico o sulfúrico concentrados. El volumen de líquido tomado en una punta depende del
ángulo con el que se sujete la pipeta y la profundidad a la que se sumerja al tomar el líquido.
Cada persona consigue una precisión y exactitud algo diferentes al utilizar una misma
micropipeta, es decir, si se somete a una prueba al analista una dia y semanas después se
somete otra vez, tendrá valores distintos de exactitud y precisión, no es constante (Daniel
C. Harris, 2003)
Acorde con las características de esta clase de equipos semiautomatizados han implicado
una revolución tecnológica, en su funcionamiento regido por la maquinaria del aparato asi
como el sistema eyector de puntas, botón control dosificación, etc, con lo que se ha logrado
una mejor regulación y un mayor control del proceso analítico evitando así los errores como
el de toma de muestra, ya que con estos aparatos aumenta la probabilidad de que el
volumen con el que ajustamos la micropipeta es el que tomamos. Pero para ello es
necesario que este bien calibrada la micropipeta, la calibración se refiere a la comparación
contra un estándar o un patrón. Es decir que mediante el método gravimétrico o fotométrico
se compara el volumen real que dosifica la pipeta, contra el estándar internacional. Esto
quiere decir que si la pipeta no pasa la calibración, el movimiento del pistón es ajustable y
podemos llevar la pipeta a volúmenes correctos nuevamente (ISO 8655).

OBJETIVO
Conocer y aplicar el método correcto de utilizar las pipetas de vidrio y las pipetas
semiautomáticas, así como evaluar la eficiencia de dichos instrumentos y otros sistemas de
medición de volúmenes, para determinar la precisión y la exactitud del analista a partir de
un método sencillo de dos pasos y detectar los puntos críticos del proceso y plantear las
posibles soluciones antes de realizar la determinación de un mensurando y garantizar un
resultado analítico confiable.
FUNDAMENTO
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir
pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.
Operación del Equipo. Técnica de pipeteo para líquidos claros:
a. Se presiona el botón superior suavemente hasta el primer tope.
b. Se sumerge la punta, en la solución que se necesita pipetear estando
seguros que la punta este bien colocada y que no haya ningún tipo de residuos entre la
punta y el cuerpo de la pipeta.
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c. Mantenga la pipeta verticalmente mientras toma la solución.

d. Para descartar la solución de la punta presione el botón hasta el segundo
tope.
e. Descarte las puntas utilizando el eyector que traen las pipetas.
Técnica de pipeteo para líquidos con alta viscosidad:
a. Presione el botón superior hasta el segundo tope.
b. Sumerja la punta en la solución (2-3 mm) y suelte el botón despacio. La punta tiene que
estar bien llena.
c. Descarte el líquido de la punta presionando suavemente el botón superior hasta el primer
tope.
Cuidados y Mantenimiento del Equipo
a. Iniciar el día limpiando la parte externa de las pipetas de polvo o suciedad.
b. Use solamente etanol al 70% para la limpieza de la pipeta. Otro tipo de solvente no es
aconsejable.
c. Utilizar las puntas adecuadas a las pipetas y a la cantidad de solución que se va a medir.
d. El pistón y el cilindro pueden ser chequeados dos veces al año si la pipeta es usada
diariamente. El mantenimiento preventivo de la pipeta tiene que ser realizado por personal
especializado de mantenimiento.
PREGUNTA EXTRA
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Número CAS 7778-50-9

Fórmula molecular K₂Cr₂O₇
Masa molar 294,2 g /mol
Indicaciones de peligro
H272 Puede agravar un incendio; comburente
H301 Tóxico en caso de ingestión
H312 Nocivo en contacto con la piel
H314 Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves
H317
Puede provocar una reacción alérgica en la piel
H330 Mortal en caso de inhalación
H334 Puede provocar síntomas de alergia o asma o dificultades respiratorias en caso de
inhalación H335 Puede irritar las vías respiratorias
H340 Puede provocar defectos genéticos
H350 Puede provocar cáncer
H360FD Puede perjudicar a la fertilidad. Puede dañar al feto
H372 Provoca daños en los órganos tras exposiciones prolongadas o repetidas
H410 Muy
tóxico para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos
Consejos de prudencia
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Consejos de prudencia - prevención

P202 No manipular la sustancia antes de haber leído y comprendido todas las
instrucciones de seguridad.
P270 No comer, beber ni fumar durante su utilización.
Consejos de prudencia - respuesta
P302+P352 EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua.
P304+P340 EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar a la persona al aire libre y
mantenerla enuna posición que le facilite la respiración.
P305+P351+P338 EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar con agua
cuidadosamente durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto cuando estén
presentes y
pueda hacerse con facilidad. Proseguir con el lavado.
P310 Llamar inmediatamente a un CENTRO DE TOXICOLOGĺA/médico
NOM-008-SCFI-2002 Sistema General de Unidades de Medida
Nota sobre las unidades de dimensión 1 (uno)
La unidad coherente de cualquier magnitud adimensional es el número 1 (uno), cuando
se expresa el valor de dicha magnitud, la unidad 1 (uno) generalmente no se escribe en
forma explícita.
No deben utilizarse prefijos para formar múltiplos o submúltiplos de la unidad, en lugar de
prefijos deben usarse potencias de 10.
Cuando se escribe el resultado de una medición, sea directa o indirecta, deben tomarse
en cuenta las siguientes reglas para
determinar el número de cifras significativas:
1) Todos los dígitos diferentes de cero son significativos.
2) Los ceros situados entre cifras significativas son significativos.
3) Los ceros a la izquierda del primer dígito diferente de cero, no son significativos.
4) Los ceros situados a la derecha son cifras significativas cuando se escribe el signo
decimal.1
5) Si un número no tiene signo decimal y termina con uno o más ceros, dichos ceros
pueden o no ser significativos.
Para expresar que son significativos se recurre a escribir el número en notación científica.
6) Los números escritos en notación científica tienen tantas cifras significativas como
dígitos existan en la cantidad
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asociada al coeficiente de la potencia base diez de la expresión.

1) Redondeo hacia abajo.
Si el dígito siguiente al último lugar retenido es 0, 1, 2, 3 o 4 (seguido o no por otros
dígitos), “consérvese” el valor del dígito situado en el último lugar retenido.
Ejemplos. Redondeo a dos cifras significativas. 1.5496 se redondea a 1.5; 6.20 se
redondea a 6.2
2) Redondeo hacia arriba.
Si el dígito siguiente al último lugar retenido es 5 (seguido de otros dígitos no todos cero)
o 6, 7, 8 o 9 (seguido o no de otros dígitos), “increméntese” el dígito existente en el último
lugar retenido, en una unidad.
Ejemplos. Redondeo a tres cifras significativas. 49.8501 se redondea a 49.9; 27.0864 se
redondea a 27.1
3) Redondeo al valor “par” más próximo.
Cuando el dígito siguiente al último lugar retenido es un 5 y no hay dígitos más allá de ese
número o son solamente ceros, “increméntese” en una unidad el dígito en el último lugar a
ser retenido si es impar, dejando el dígito sin cambio si es par. Esta regla se aplica
también para valores positivos y negativos, considerando el “cero” como dígito par.
Ejemplos. Redondeo a dos cifras significativas. 5.85 se redondea a 5.8; 2.1500 se
redondea a 2.2
RESULTADOS
Bitácora de Resultados
Datos de la micropipeta

Instrumento: Micropipeta Tipo de ajuste: Variable

Marca: BIOHIT PROLINE Volumen de la micropipeta:2 -20 µL
Unidades: µL Número de serie: 10118911
Numero de micropipeta (codificación propia del usuario) 9
Condiciones físicas de la micropipeta:
Fluidez en botón
En volumen medio
En buenas condiciones físicas
Calculo y tratamiento de los datos
Tratamiento fotométrico
Verificación de la precisión
Reactivo utilizado: Dicromato de potasio Longitud de onda seleccionada: 500
nm
Solución con la que se hizo las Agua destilada
diluciones:
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Espectrofotómetro utilizado: Thermo scientific Genesis 20 Equipo 12

Ajuste del espectrofotómetro con: Agua destilada
Método de pipeteo: sencillo

Tabla 1 Datos de absorbancia Obtenidos por el método fotométrico

No A No A No A
1 0.270 5 0.251 9 0.247
2 0.257 6 0.286 10 0.258
3 0.281 7 0.231 Estándar 0.251
4 0.237 8 0.219
Formula y cálculos de la media y del coeficiente de variación:
Daniel 1-5. Alexis 6-10

∑ni=1 Xi 0.286 + 0.231 + 0.219 + 0.247 + 0.258

̅=
X = = 0.2482
N 5
S 0.02585
%CV= X̅ *100= 0.2482
*100= 10.14%
Absorbancia promedio: 0.2482 Desviación estándar: 0.02585 %CV: 10.14%
¿Qué representa el coeficiente de variación?: El grado de precisión
Hay imprecisión: si

Verificación de la exactitud
Reactivo con el que se realizó el estándar relativo: Dicromato de potasio
Material de vidrio utilizado para el estándar relativo: Matraz volumétrico
Volumen preparado: 500 mL Longitud de onda seleccionada: 500 nm
Absorbencia del estándar relativo: 0.251
Volumen nominal de la micropipeta: 10 µL
Fórmula para calcular el volumen de la micropipeta:
Volumen que mide la micropipeta en µL= (A promedio x VNP)/A del estándar relativo
Volumen que mide la micropipeta en µL= (0.2482x 10)/0.251 = 9.88
Volumen que mide la micropipeta: 9.88µL

Verificación de la exactitud
Formula y cálculos para calcular el % error:
% de error= [(valor observado- valor real)/valor real]x100
% de error= [(9.88-10)/10]x100
% error calculado: -1.2%

Volumen
Volumen de la Vol que mide la
seleccionado % Error
micropipeta (µL) micropipeta (µL)
(VNP) (µL)
2-20 µL 10 µL 9.88 µL -1.2%
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Observaciones y puntos críticos observados en el procedimiento:

Pipeteo del agua destilada con la pipeta graduada
Pipeteo del dicromato de potasio
Homogenización
Acciones correctivas:
Medir las alícuotas a la altura de los ojos para evitar paralaje
Verificar que se está tomando todo el volumen seleccionado con la micropipeta, evitar
la formación de burbujas de aire al tomar la muestra
Datos obtenidos por el método gravimétrico:
Instrumento: Balanza analítica Tipo de ajuste: Variable
Marca: DORDLAB Número de serie: 181127223
Unidades: g Decimales: 4 Sensibilidad: 0.0001G
Codificación propia del usuario:
Condiciones físicas de la balanza:
Optimas
Calibración del instrumento: NA Recipiente utilizado: Tapa de plástico
Método de pesas utilizado: NA Peso del recipiente (w1): NA
Temperatura de control: 22°C Método de pipeteo: Sencillo
Datos Obtenidos:
Tabla 2 Datos Obtenidos por el método gravimétrico
No g No g No g
1 0.0095 5 0.0097 9 0.0375
2 0.0097 6 0.0090 10 0.0467
3 0.0096 7 0.0180
4 0.0097 8 0.0275
Obtener el peso en gramos restando los acumulados No 2- No1, No 3- No2, No4-
No3, No5-No4
Alexis1-5. Daniel6-10
Media de los datos obtenidos: 0.00964g
Desviación estándar: 0.0000894 coeficiente de variación: 0.92%
% de error: -3.3% Factor Z: 1.0040 mL/g
Formula y cálculos para obtener el volumen real de la micropipeta:
V= *Z
V= 0.00964g*1.004mL/g
Volumen real de la micropipeta: 0.00967 µL
Observaciones y puntos riticos identificados en el procedimiento:
Deposito completo de la alícuota
Acciones correctivas:
Verificar que la gota se deposite totalmente y dentro del recipiente
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Micropipeta Método fotométrico Método gravimétrico

Volumen de la 2 -20 µL 2 -20 µL
micropipeta (µL)
Volumen seleccionado 10 µL 10 µL
(VNP) (µL)
Volumen que mide la 9.88µL 9.67 µL
micropipeta (µL)
% Error -1.2% -3.3%
Método primario para la determinación de volumen y verificación de los
instrumentos: Gravimétrico
Verificación de la micropipeta: la micropipeta se encuentra calibrada
Observaciones generales:
Debe mejorarse la toma de alícuotas con pipeta graduada
Recomendaciones para el uso de la micropipeta:
Se debe verificar el volumen tomado sea el correcto y que este a su vez se deposite
completamente en el recipiente.
La toma de las alícuotas se debe realizar a la altura de los ojos para evitar paralaje.

Tabla1. Registro de los parámetros estadísticos cálculos tanto del método fotométrico y
gravimétrico.
Método fotométrico Método gravimétrico
Analista No. VN CV<2 Vol. %E CV Volmid %E Calibrad
micropipet P % que <5 e (μL) o
a (μL) mid %
e
(μL)
Alberto 3 30 3.9 28 -6.9 7.1 35 7.18 Si
8
Carlos 3 30 1 29 -3.3 7.2 37 23.3 No
5 3
Daniel 9 10 4.5 9.3 -6.3 6.5 10.3 3.26 No
6
Alexis 9 10 3.45 9.8 -1.2 0.9 9.67 -3.3 No
2
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Christia 6 30 12.17 29 - 2.1 29 -3.3 No

n 3.33 1
Daniel 2 17 30 7.0 21.7 9.4 26. 21.7 9.4 No
2
Gabriel 17 30 12.8 12.8 -57 2.8 12.8 28.6 No
Diana 36 30 1.57 27.8 10 9.6 27.42 8.6 No
8
Sharon 33 30 1.98 26.8 9.5 8.6 26.32 8.4 No
3
Iris 33 30 6.20 - 7.8 24.73 - No
5.89 3 17.5
6
Antonio 33 30 3.05 29.1 -
2.94
Luisa 6 30 3.80 28.9 3.68 5.3 27.9 7.33 No
6
Yolanda 1 20 7.15 18.4 - 5.1 21.8 9.05 No
7.63 6
Abril 1 20 2.77 19.5 - 11. 21.3 6.35 No
2.11 6

DISCUSIÓN
Haciendo como referencia general a los datos obtenidos experimentalmente de manera
individual con la serie de 5 mediciones gravimétricas y fotométricas, cabe mencionar que el
uso de 5 representaciones no son estadísticamente significativas, dado a que para una
media se necesita 7 como mínimo y una desviación estándar 20 como óptimos, sin embargo
el número de representaciones usadas fueron bajas por lo que se aumenta el grado de
incertidumbre y no es posible realizar un análisis más confiable sobre la verificación y
evaluación del uso y funcionamiento de las micropipetas. Con respecto a mis valores cabe
mencionar que con respecto al método fotométrico con respecto al porciento de correlación
de varianzas se obtuvo un valor de 3.45 mayor al 2% por lo que no se usa adecuadamente
la micropipeta, esto se debió a que no se tomaron las muestras en esta etapa al nivel de
los ojos produciendo ese margen de dispersión del método, con respecto al porciento de
error se obtuvieron valores menores al 5% negativos, a pesar de haber entrado el valor en
el promedio había mucha impresición, lo cual significa que al tomar el volumen de la
muestra en realidad se estaba tomando menos al deseado,
Comparando los valores entre Daniel y Alexis quienes usaron la pipeta número 9, a pesar
de trabajar con la misma pipeta e tienen distinto valores en los parámetros estadísticos
cercanos en la medición del volumen que mide, y de la dispersión de los datos, por lo que
cabe mencionar que no hay reproducibilidad entre analista como mencionado anteriormente
por Daniel C. Harris quien menciona que cada persona consigue una precisión y exactitud
algo diferentes al utilizar una misma micropipeta.
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Con respeto a los valores con un coeficiente de dispersión de 12.17 como

fue el de Christian, cabe mencionar que dicho valor dilucida que la calibración de la
micropipeta no fue la adecuada. Sharon, Diana y Carlos de acuerdo a la tabla 1 podemos
mencionar que dichos analistas usan adecuadamente la pipeta y esta funciona de manera
correcta.
CONCLUSIONES

 La micropipeta se encuentra calibrada y el analista es preciso, tomando en

consideración el CV y el % de error del método gravimétrico (de referencia).
 Las alícuotas se deben tomar a la altura de los ojos para evitar paralaje.
 Para tomar alícuotas con micropipeta se debe meter únicamente un poco la punta
(en la superficie) e ir bajando poco a poco con forme va bajando el líquido, para
evitar que se queden pequeñas gotas en la punta y esto nos produzca variación.
REFERENCIAS.
 NORMA Oficial Mexicana NOM-008-SCFI-2002, Sistema General de Unidades de Medida.
 CIFRAS SIGNIFICATIVAS. (año NA). Disponible en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Cifrassignificativas_34597.pdf (07/03/19)
 Daniel C. Harris. Análisis químico cuantitativo. REVERTE,S.A. México.pp. 33-35.