ANTICUERPOS

ANTICUERPOS
 ANTICUERPOS:
Glucoproteínas formadas por
el organismo como respuesta
al contacto con un antígeno y
que reacciona específicamente
contra él.
 Se les conoce también como
INMUNOGLOBULINAS (Ig)
 La mayoría son γ-globulinas,
pero otras pertenecen a la
fracción α o a la β.
Estructura del Anticuerpo:
 Parte proteica: 4 cadenas
polipeptídicas unidas
entre sí por enlaces
covalentes y puentes
disulfuro en forma de
“Y”:
 2 cadenas “L”: pequeñas.
 2 cadenas “H”: grandes.
 Región bisagra: zona de
unión de los tres brazos
de la “Y”.
Estructura del Anticuerpo:
 Cada cadena presenta varios Dominios
(Regiones de tamaño uniforme):
 Región variable (V):
 En el extremo amino-terminal
 Secuencia de AA muy variable de unas Ig a
otras.
 Solo una región V en la cadena (tanto en las
H como en las L)
 Regiones constantes (C):
 El resto de la cadena.
 Secuencia de AA muy parecida en todas las
Ig.
 Las cadenas L tienen una región C
 Las cadenas H tienen 3 o 4 regiones C.
Estructura del Anticuerpo:

 En la región V hay:
 3 CDR: Regiones Determinantes de
la Complementariedad. Son
hipervariables.
 4 FR: Regiones de armazón o
entramado.

 Las regiones Fc intervienen en la

fijación del complemento o la
unión a tejidos.
Variaciones estructurales de los
Ac
 ISOTIPOS
Variaciones estructurales de los Ac

 ISOTIPOS: Variaciones en las

regiones CONSTANTES de las
cadenas H y L, presentes en todos
los individuos sanos de la especie.
 5 isotipos en las CH:
 Gamma  IgG
 Alfa  IgA
 Mu  IgM
 Delta  IgD
 Epsilon IgE
 2 isotipos en las CL:
 Kappa (κ)
 Lamda (λ)
 Cada isotipo CH tiene dos
versiones: κ y λ
 La variabilidad de las
inmunoglobulinas
tiene una base
genética: Estando en
diferentes
cromosomas los genes
que codifican las
cadenas H, las Lκ y las
Lλ.

Variabilidad de las inmunoglobulinas

Clases de anticuerpos: IgG:
 Monómero
 Dos zonas de unión al
antígeno (dos fragmentos
Fab)
 Cuatro subclases (Ig1, Ig2,
Ig3, Ig4)
 La Ig más abundante en el
plasma (80%).
IgG  Bajo Pm  Difunde bien a
otros líquidos corporales y
atraviesa la barrera
placentaria.
Clases de anticuerpos: IgG:
 Neutraliza toxinas
bacterianas
 Activa el complemento
 Sensibiliza y agrega
microorganismos para
estimular su fagocitosis
(opsonización).
 Activa el complemento.
 Es la Ig más importante en
la respuesta inmunitaria
secundaria (linfocitos B2
de memoria).
 IgG

http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_05.htmIgG
Clases de anticuerpos: IgM
 Elevado Pm (“macroglobulina”)
 Pentámero de Ig
 Los 5 monómeros están unidos por
puentes disulfuro y la “proteína j”
 10 fragmentos fab para unión al Ag
 Confinada al espacio intravascular
 Eficaz en la aglutinación y citolisis
de microorganismos
 Respuesta inmunitaria primaria:
Papel predominante (aparición
temprana)
 Es la más eficiente para fijar el
complemento
Clases de anticuerpos: IgA
Dos subclases:
 IgA1: Monomérica. En plasma
(poco abundante).
 IgA2: Dimérica. Predominante
en secreciones externas (saliva,
lagrimal, nasal, leche materna, líquido
prostático, etc).
 Monomeros unidos por puentes
disulfuro y proteína j
 Tiene otra cadena polipeptídica
denominada COMPONENTE
SECRETOR (sIgA), producida por
las células de las mucosas que la
protege de la proteolisis
enzimática y facilita su
transporte.
Clases de anticuerpos: IgA
 Inhibe la adherencia de
los microorganismos a la
superficie de las células
de las mucosas, por lo
que es una primera línea
de defensa frente a las
infecciones.
 También es importante
en el procesamiento de
los antígenos
alimentarios en el
intestino.
Clases de anticuerpos: IgD

 Monómero
 Poco abundante en
plasma
 Se encuentra en la
superficie de algunos
linfocitos B sanguíneos
Clases de anticuerpos: IgE (reaginas)
 Monómero
 Baja concentración en plasma.
 Se encuentra en la superficie de
los mastocitos y los basófilos
 Es la mediadora de las reacciones
de hipersensibilidad inmediata
(alergias).
 Confiere protección local frente a
ciertos patógenos grandes, como
helmintos: sirve para reclutar
células plasmáticas a través de
una reacción de inflamación
aguda.
 Está aumentada en infecciones
parasitarias.
 RESÚMEN DE LOS DIFERENTES ISOTIPOS DE ANTICUERPOS

IgM IgG IgA IgE IgD

Property
% of Serum
10 75 15 <0.01 <0.5
Ig
Pentam
Structure Monomer Dimer Monomer Monomer
er
Complement
+++ + - - -
Fixation

Transplacent
- + - - -
al Passage

Allergic
- - - + -
Response
Mucosal
- - + - -
Secretion

Opsonization +* +++ - - -
* Opsonization is via Complement
PRODUCCIÓN DE LOS ANTICUERPOS
Por qué utilizar anticuerpos?

Inocuidad y especificidad

Tres tipos de métodos para obtener anticuerpos

 Inmunoglobulinas policlonales elaboradas por el cuerpo humano y
posteriormente purificadas

 Inmunoglobulinas policlonales elaboradas por ratones y

purificadas

 Inmunoglobulinas monoclonales obtenidas por Ingeniería

genética.
 UTILIDADES DE LOS ANTICUERPOS

 Sustitutivo:
 Inmunodeficiencias Primarias
 Inmunodeficiencias Secundarias

 Anti-inflamatorio / inmunomodulador:
 Enfermedades autoinmunes
 Enfermedades inflamatorias

 Preparaciones de gammaglobulinas para administración como

antivenenos

 Gammaglobulinas hiperinmunes: hepatitis B, varicela, rabia,

tétanos, botulismo, CMV…
 Indicaciones clínicas de los anticuerpos
1. Inmunodeficiencias primarias
2. Prevención de infecciones bacterianas e
hipogammaglobulinemia
3. Prevención de aneurismas coronarios
4. prevención de infecciones, pneumonitis
5. Prevención de infecciones bacterianas
en niños con HIV Determinación del grupo
6. Púrpura Trombocitopénica Idiopática Sanguíneo del donador
Demanda de gammaglobulina
Obtención de gammaglobulina
Inmunoglobulinas policlonales elaboradas por el cuerpo humano purificadas

 Fraccionamiento de plasma para

obtención de albúmina (Cohn-Oncley:
precipitación con etanol frío)
IV. A system for the separation into fractions of the protein
and lipoprotein components of biological tissues and
fluids. J Am Chem Soc 1946; 68:459-475

 Obtención de albúmina a escala

industrial
 Proceso que generó otras
fracciones: inmunoglobulinas,
factores de coagulación, otras
proteínas (1α-AT).
• Descongelación de plasma: algunas proteínas (F-
VIII) insoluble crioprecipitan
• Fracción II / II+III (concentrado de IgG)
• Albúmina fracción V.
Producción de
hemoderivados
El desarrollo de esta técnica valió el premio Nóbel a dos investigadores, Cesar Milstein y George Kohler (La técnica es de 1975, el Nóbel en 1984).Trabajaban intentando conocer los genes de los anticu

Anticuerpos monoclonales

premio Nóbel a Cesar Milstein y George Kohler (La técnica es de 1975, el Nóbel en 1984).
 Anticuerpos monoclonales:

 Anticuerpos de un tipo específico (todos

iguales). Se producen:
 En el linfocito B (una célula
productora de Ig se divide
continuamente, dando lugar a un
clon celular)
 In vitro: fusionando células del mieloma
múltiple con linfocitos B expuestos a un
antígeno (hibridomas).
Medio HAT.

Utiliza la vía de síntesis de nucleótidos. Hay dos maneras de sintetizar

nucleótidos, por la vía de salvación o la vía de novo. La de salvación
necesita dos enzimas, y la de novo solo una.

Los mielomas son deficientes en alguna de las enzimas de la vía de

salvación y la aminopterina contenida en el medio HAT, bloquea la vía de
novo, las células de mieloma morirán, pero el híbrido conserva la enzima
de la vía de salvación para la síntesis de nucleótidos del linfocito B.
Así, solo sobrevive el hibridoma.
•La mayoría se generan en ratón, y al utilizarlos en otras especies pueden provocar rechazo.
•Dificultad técnica de reproducir hibridomas humanos.
•En terapia pueden tener efectos secundarios por crossreactividad.
•Pueden pasarse virus de otras especies.
Han intentado humanizar los anticuerpos de ratón por ingeniería genética

Anticuerpos monoclonales:
Problemas:

o La mayoría se generan en ratón, y al utilizarlos en

otras especies pueden provocar rechazo.

o Dificultad técnica de reproducir hibridomas

humanos.

o En terapia pueden tener efectos secundarios por

reactividad cruzada.

o Pueden pasarse virus de otras especies.

o Han intentado humanizar los anticuerpos de ratón

por ingeniería genética
INMUNODIAGNÓSTICO
Ventajas de los anticuerpos en las técnicas de inmunología.

La interacción antígeno-anticuerpo es específica, pudiendo

determinar la presencia del antígeno que buscamos en una mezcla
de cosas, sin necesidad de purificar.

Nos permiten realizar técnicas muy específicas.

Hay que conocer el mayor o menor grado de especificidad, que

depende de pureza de la muestra y del anticuerpo que utilicemos.
Otros factores de diseño son los costos.

La selección de reactivos es importante. Podemos determinar

muchas veces el anticuerpo y el antígeno. Hay que conocer el
grado de afinidad entre ellos.
TÉCNICAS DE INMUNODIAGNÓSTICO
 COMPLETE EL SIGUIENTE CUADRO SINÓPTICO

MÉTODO MOLÉCULA SISTEMAS DE CUALITATIVA/ EJEMPLOS

QUE DETECTA DETECCION CUANTITATIV
A