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MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

DEFINICION: Es un microscopio óptico modificado que permite contrastar sustancias de diferente grosor o
densidad. Mediante un condensador y un objetivo especial se controla la iluminación de tal manera que vaya en
diferentes rutas a través de las distintas partes de una célula. El resultado es una imagen con diferentes grados
de brillo y oscuridad. Con este método, el material denso aparece brillante, mientras que las partes de la célula
que tienen una densidad cercana al agua (citoplasma) aparecen oscuras Se utiliza para visualizar estructuras
celulares sin necesidad de usar colorantes o matar microorganismos.
Una ventaja de la microscopia de contraste de fases es que las células vivas pueden ser observadas en
detalle sin la necesidad de teñirlas o usar fluoró foros.( es un componente de una molécula que hace que
ésta sea fluorescente)
LO QUE PODEMOS OBSERVAR CON EL MICROSCOPIO:
1el núcleos, la membrana, la estructura cromatina, y el nucléolo.
2 las granulaciones citoplasmáticas, las mitocondrias y la zona del centrosoma
3 el movimiento de las células sanguíneas y el de sus particulares intracelulares

HISTORIA: En el año 1935, el físico holandés Fritz Zernike desarrolló el Microscopio de Contraste de Fase,
con lo cual se le otorgó el Premio Nobel de Física en el año 1953. Su contribución consistió al afirmar que la
imagen vista bajo un microscopio convencional es formada por el objetivo del microscopio, y finalmente se
observa en el ocular. Si la muestra no absorbe la luz, no habrá esencialmente contraste en la imagen visible
(será toda blanca); por ejemplo, la mayoría de las células vivas absorben poca luz (a excepción de las células
rojas de la sangre y los cloroplastos) y por lo tanto, son difíciles de visualizar a través de un microscopio
convencional. Por otro lado, aunque las células absorben poca luz, tienen diversos espesores y diversos índices
de refracción en sus partes, lo que conduce a las diferencias de fase de las ondas de luz que pasan a través de
ellas. La fase de un haz de luz es inobservable a la vista (apenas se ve la intensidad, no la fase). Zernike calculó
la manera de hacer que las diferencias de fase se observaran en la imagen como en la intensidad, logrando así,
visualizar detalles que no eran posibles apreciar en un microscopio convencional. Este tipo de microscopios se
utiliza habitualmente para estudiar células vivas.
¿POR QUE SE LLAMA ASI?
A que se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin
colorear. Es ideal para especímenes delgados, o células aisladas. El microscopio de fase ilumina el espécimen
con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo, en el microscopio de fase el
cono de luz es más estrecho y entra en el campo de visión del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de
anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este
tipo de iluminación provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un espécimen transparente,
haciéndolo visible.
FUNCION Y PARTE DEL MICROSCOPIO:
REBOBINADA AUTOMATICO DE LA CAMARA: enfoca la imagen automáticamente
LENTE DE CAMPO: La lente de un ocular más alejado del ojo del observador

DIAFRAGMA DE CAMPO: limita el tamaño angular del haz. Este permite una buena calidad óptica dentro
del campo y una iluminación uniforme.
ENFOQUE DE RETINA:
ENFOQUE DE TELESCOPIO: es para tener una imagen de alta calidad
SENSOR DE ILUMINACION: iluminación estable y controlada
PROYECTOR DE OCULAR: Constan de una lente de campo de débil convergencia y un ocular o proyector biconvexo
corregido para proyectar a distancias de 50 a 200 centímetros imágenes reales, que pueden recogerse en una pantalla.

 Base o pie: Sirve de sostén para el microscopio, ahí se ensamblan todas las piezas.
 Brazo, estativo o columna: Permite mover al usuario mover el microscopio y además soporta al tubo
óptico, a la platina y el revólver.
 Platina: Es en donde se pone la laminilla con la muestra a observar.
 EXTENCION DEL TUBO: Da sostén al revolver y a los oculares.
 Revólver o portaobjetos: Sostiene a los objetivos; al girar, hace que éstos coincidan con el agujero
central de la platina y la laminilla, además está conectado al tubo óptico.
 Tornillo macrométrico y tornillo micrométrico: Ambos sirven para enfocar la imagen. El macrométrico
te enfoca más rápido la imagen y el micrométrico aumenta la nitidez de la misma.
 Condensador: Concentra la luz que proviene de la fuente luminosa del microscopio.
 Diafragma: Regula la cantidad de luz que pasa por el condensador.
 Objetivos: Establecen la calidad de la imagen.
 Oculares: Es donde el observador podrá ver la muestra que está en la laminilla.
DIFERENCIA:
 La diferencia es que el microscopio de contraste de fases dispone de algo que se llama una placa de
 fotografía. Esta placa se encuentra en la trayectoria de la luz entre el objeto que se está viendo y el ojo
del espectador Además, la microscopia de contraste de fase revela una mayor diferencia de las
estructuras internas y muestra con claridad la cubierta externa

CONTRASTE DE FASE.
Podemos encontrar dos uno positivo y otro negativo
POSITIVO: Cuando los rayos de luz entran, la desviado o la no desviada tienden a cancelarse creando
una interferencia destructiva y hacer que el objetivo aparezca mucho más oscuros a los al rededores
NEGATIVO: Se presenta cuando se retrasa la luz no desviada y se hace un 1/4 de longitud de onda
menor, lo que hace que salga al tiempo con la luz desviada logrando esta manera que salga al mismo
tiempo y se reconvienen para dar brillo creando una interferencia constructiva aumentando de esta forma
el objeto mientras su contorno permanece con menos densidad.
J
En la figura superior se muestra el diseño de los tipos de anillos de fase, el
superior corresponde al positivo y el inferior al negativo, se muestra también el
efecto sobre las ondas luminosas y un ejemplo de cómo se ve la misma muestra
con cada disco de fase. Además, existen discos de fase con distintas
características de absorción y retardo de los rayos luminosos, lo que
indudablemente influye en el contraste de las imágenes
COMO FUNCIONA

El microscopio de contraste de fase permite visualizar vivas sin necesidad de utilizar ningún tipo de tinción sin
la pérdida de elementos estructurales que durante el proceso de fijación y tinción puede perderse y traducirse en
una imagen inalterada de la morfología celular diversas células como el espermatozoide células del tejido
cerebral estructura como cilios y flagelos y procesos biológicos como la división celular han sido mejor
analizados con el advenimiento del microscopio de contraste de fases el método utilizado por este microscopio
se basa en el principio del contraste de fase el cual se explica de la siguiente manera los espécimen tienen
diferentes espesores por consiguiente distintos índices de refracción lo cual hace que ocurran cambios de fase en
el rayo luminoso que los atraviesa estos cambios de fase no son más qué disminución en la velocidad a la que
viajan estas ondas luminosas estas diferencias de fases son imperceptibles para el ojo humano ya que sólo
pueden reconocerse colores y diferentes intensidades ejemplo cuando se forman cuando se observa un elemento
transparente al ojo humano no puede distinguir lo los detalles que lo conforman es aquí donde interviene el
microscopio de contraste de fase. Mediante el uso de artefactos específicos que traducen esta diferencia de fase
en una diferencia de intensidades esto crea una diferencia de contraste en la escala de grises visibles al ojo
humano donde las partes más oscuras corresponden a las de mayor espesor y las partes más claras correspondan
alas de menos densidad

 El microscopio de contraste de fase hace pasar haces de luz paralelos atreves de objetos de
densidades diferentes, un haz atraviesa el más denso y se retrasa más que el otro, mediante el uso
de anillos anulares formando una imagen tridimensional