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ÍNDICE
Portada……………………………………………………………………………………………………0
Introducción……………………………………………………………………………………………..3
Objetivos………………………………………………………………………………………………….
4
Técnico en Laboratorio
Clínico……………………………………………………………………….5
I.- NORMATIVIDAD EN EL
LABORATORIO…………………………………………………………….7
Reglas y normas de seguridad en el
Laboratorio…………………………………………………8
Para ingresar al
laboratorio………………………………………………………………….8
Para permanecer en el
laboratorio………………………………………………………..8
Para manipular instrumentos y
productos………………………………………………...9
Al concluir la
sesión…………………………………………………………………………..10
Símbolos de riesgo o
peligrosidad………………………………………………………………….11
Tabla de símbolos de riesgo o
peligrosidad……………………………………………..12
Frases R y S………………………………………………………………………………………………
14
Frases “S” de
seguridad……………………………………………………………………..15
Frases “R” de
riesgo…………………………………………………………………………..17
Primeros auxilios en caso de
accidentes……………………………………………………….....19
Cortes y heridas………………………………………………………………………………
19
Quemaduras o
corrosiones………………………………………………………………...19
Salpicaduras en los
ojos……………………………………………………………………..19
Ingestión de productos
químicos………………………………………………………….20
II.- MATERIAL DE
LABORATORIO……………………………………………………………………..21
Clasificación del material de laboratorio…………………………………………………………
22
Utensilios………………………………………………………………………………………..
22
Aparatos……………………………………………………………………………………….2
2
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III.- SOLUCIONES
QUIMICAS………………………………………………………………………….46
Fundamentos
básicos...............................................................................................................47
Soluto –
Solvente……………………………………………………………………………...47
Soluciones liquidas y
gaseosas…………………………………………………………….47
Diferencia de solución y
mezcla…………………………………………………………..47
Clasificación de
sustancias………………………………………………………………………….48
Solución no
saturada………………………………………………………………………..48
Solución saturada……………………………………………………………………………
48
Solución
sobresaturada…………………………………………………………………….48
Medidas de concentración…………………………………………………………………………49
Unidades Físicas de concentración………………………………………………………
49
2
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ANEXOS………………………………………………………………………………………………….
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A) REACTIVOS
QUIMICOS…………………………………………………………………………...55
Reactivos y etiquetas…………………………………………………………………………………
56
Tipos de reactivos (Sólidos, Líquidos, Disoluciones preparadas)
…………………….56
Clasificación de los reactivos………………………………………………………………
56
Etiqueta de los reactivos……………………………………………………………………
57
B) COLORANTES Y
TINCIONES………………………………………………………………………58
Colorantes………………………………………………………………………………………………
59
Concepto……………………………………………………………………………………..59
Composición………………………………………………………………………………….5
9
Función…………………………………………………………………………………………
59
Tinciones…………………………………………………………………………………………………
60
Clasificación…………………………………………………………………………………..6
0
3
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C) MEDIOS DE
CULTIVO…………………………………………………………………….67
Concepto…………………………………………………………………………………….68
Clasificación………………………………………………………………………………….6
9
Agar
Sangre………………………………………………………………………………….70
Bibliografía……………………………………………………………………………………
71
INTRODUCCIÓN
En este presente manual se dan a conocer las normas que se usan en el
laboratorio, los instrumentos de laboratorio básicos que se utilizan en
prácticas, las soluciones más comunes y algunos anexos como lo son los
reactivos, colorantes y medios de cultivo.
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OBJETIVOS
Objetivo General
Objetivos Específicos
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Perfil de egreso
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NORMATIVIDAD EN
EL LABORATORIO
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Use zapatos cerrados, de piso y con suela antiderrapante. Use pantalón largo o
falda mediana de fibra natural. Retírese todos los accesorios personales que
puedan comprender riesgos de accidentes mecánicos, químicos o por fuego,
como son anillos, pulseras, collares y sombreros. Si usa corbata, sujétela con un
pisacorbatas o introduciéndola a la camisa. Evite peinados con copetes; si usa
copete o cabello largo, recójalo y colóquese el protector facial, gorro o
escafandra. Evite usar mangas largas y anchas; en caso de usar manga larga y
ancha, cúbrala y sujétela completamente con las mangas de la bata. Evite el
uso de lentes de contacto; use anteojos. Mantenga las uñas recortadas y
limpias.
Use la bata cerrada durante toda la sesión y el protector facial, los monogogles,
guantes y respirador en su caso. Colóquese la credencial a modo de gafete.
Indique en la credencial su tipo sanguíneo e informe de alergias, padecimientos
crónicos o uso de prótesis.
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laboratorio. El material se debe lavar y secar antes de ser usado. Consulte con el
Profesor y con el Técnico responsable y revise la existencia de los reactivos a
utilizar.
Cuente con el material de uso personal que se enlista abajo para cada sesión
experimental.
Mantenga sólo el material requerido para la sesión sobre la mesa de trabajo. Los
frascos de reactivos deben permanecer en las campanas. Los demás objetos
personales o innecesarios deben guardarse o colocarse lejos del área de trabajo.
No fume en el interior del laboratorio. Todas las fuentes de fuego o calor deben
estar controladas.
No reciba visitas en el interior del laboratorio. Evite las distracciones. Así puede
evitar accidentes.
Fíjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los productos
químicos.
Lávate las manos con jabón después de tocar cualquier producto químico.
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Los ácidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha precaución, ya que
la mayoría son corrosivos y, si caen sobre la piel o la ropa, pueden producir
heridas y quemaduras importantes.
Si tienes que mezclar algún ácido (por ejemplo, ácido sulfúrico) con agua, añade
el ácido sobre el agua, nunca al contrario, pues el ácido «saltaría» y podría
provocarte quemaduras en la cara y los ojos.
Deje limpio y seco el lugar de trabajo. Coloque los bancos junto a las mesas o
invertidos sobre éstas.
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sensibilización en caso
de contacto con la piel.
Clasificación con R43.
En el caso de ser Según sea el potencial
liberado en el medio de peligro, no dejar que
acuático y no acuático alcancen la canalización,
puede producirse en el suelo o el medio
un daño del ecosistema ambiente! Observar las
por cambio del equilibri prescripciones de
N o natural, eliminación de residuos
Peligro inmediatamente o con especiales.
para el posterioridad. Ciertas
medio sustancias o sus
ambiente productos de
transformación pueden
alterar
simultáneamente
diversos
compartimentos.
FRASES”R” y “S”
Las Frases de riesgo y de seguridad, también conocidas como frases R/S, son un
sistema de códigos de riesgo y frases para describir los riesgos de los compuestos
químicos peligrosos. Las frases R/S consisten de frases indicadoras de riesgos
específicos (R) y consejos de seguridad (S). Estas letras son seguidas de un
número, cuya combinación tiene el mismo significado en diferentes idiomas.
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Ejemplo de uso.
Las frases R/S para ácido clorhídrico en forma gaseosa (73%) son:
R: 34-37 S: 26-36-45.
Riesgos
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S26 En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantemente con agua y
acúdase a un médico.
S28 En caso de contacto con la piel, lávese inmediata y abundantemente con ...
(productos a especificar por el fabricante).
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S35 Elimínense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones
posibles.
S40 Para limpiar el suelo y los objetos contaminados por este producto, úsese ... (a
especificar por el fabricante).
S43 En caso de incendio, utilizar ... (los medios de extinción los debe especificar el
fabricante). (Si el agua aumenta el riesgo, se deberá añadir: "No usar nunca agua").
S48 Consérvese húmedo con ... (medio apropiado a especificar por el fabricante).
S57 Utilícese un envase de seguridad adecuado para evitar la contaminación del medio
ambiente.
S63 En caso de accidente por inhalación, alejar a la víctima fuera de la zona contaminada
y mantenerla en reposo
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S64 En caso de ingestión, lavar la boca con agua (solamente si la persona está
consciente)
R3 Alto riesgo de explosión por choque, fricción, fuego u otras fuentes de ignición.
R10 Inflamable.
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R53 Puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acuático.
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Lavar la parte del cuerpo afectada con agua y jabón. No importa dejar sangrar,
algo la herida, pues ello contribuye a evitar la infección. Aplicar después agua
oxigenada y cubrir con gasa grasa (linitul), tapar después con gasa esterilizada,
algodón y sujetar con esparadrapo o venda. Si persiste la hemorragia o han
quedado restos de objetos extraños (trozos de vidrio, etc...), se acudirá a un centro
sanitario.
o POR FUEGO U OBJETOS CALIENTES. No lavar la lesión con agua. Tratarla con
disolución acuosa o alcohólica muy diluida de ácido pícrico (al 1 %) o pomada
especial para quemaduras y vendar.
o POR ÁLCALIS, EN LA PIEL. Aplicar agua abundante y aclarar con ácido bórico,
disolución al 2 % o ácido acético al 1 %. Después secar, cubrir la parte afectada
con pomada y vendar.
o POR ÁCIDOS. Inmediatamente después del accidente irrigar los dos ojos con
grandes cantidades de agua templada a ser posible. Mantener los ojos abiertos,
de tal modo que el agua penetre debajo de los párpados. Continuar con la
irrigación por lo menos durante 15 minutos. A continuación lavar los ojos con
disolución de hidrógenocarbonato sódico al 1 % con ayuda de la bañera ocular,
renovando la disolución dos o tres veces, dejando por último en contacto
durante 5 minutos.
o POR ÁLCALIS. Inmediatamente después del accidente irrigar los dos ojos con
grandes cantidades de agua, templada a ser posible. Mantener los ojos abiertos,
de tal modo que el agua penetre debajo de los párpados. Continuar con la
irrigación por lo menos durante 15 minutos. A continuación lavar los ojos con
disolución de ácido bórico al 1 % con ayuda de la bañera ocular, renovando la
disolución dos o tres veces, dejando por último en contacto durante 5 minutos.
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Provocar el vómito introduciendo los dedos en la boca del paciente hasta tocarle
la campanilla. A cada vómito darle abundantes tragos de agua salada templada.
Administrar 15 g de ANTÍDOTO UNIVERSAL en medio vaso de agua templada.
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MATERIAL DE
LABORATORIO
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Madera
Madera
Metal
Metal
Elemento de fabricación
Elemento de fabricación Vidrio
Vidrio
Plástico
Plástico
Porcelana
Porcelana
Esféricos
Esféricos
IO
RATOORRIO
UTENSILIOS
UTENSILIOS
Forma que presentan
Forma que presentan Cilíndricos
Cilíndricos
TALL DDEE LLAABBOORAT
IÓNN DDEELL
Rectangulares
Rectangulares
IF ICAACCIÓ
Sostén
Sostén
CCLLAASSIFIC
INSSTTRRUUMMEENNTA
Uso
Uso específico
específico
De acuerdo a
De acuerdo a su uso
su uso
Recipientes
Recipientes
IN
Aparatos
Aparatos basados
basados en
en
métodos
métodos mecánicos
mecánicos
APARATOS
APARATOS Volumétricos
Volumétricos
Aparatos
Aparatos basados
basados en
en
métodos
métodos
electrométricos
electrométricos
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UTENSILIOS DE
UTENSILIOS DE
LABORATORIO DE
LABORATORIO DE
ACUERDO
ACUERDO AA SU USO
SU USO
De
De sostén
sostén Uso
Uso específico
específico Recipiente
Recipiente Volumétricos
Volumétricos
Son
Son utensilios
utensilios que
que
Son
Son utensilios que
utensilios que permiten realizar
permiten realizar Son utensilios que
Son utensilios que Permiten medir
Permiten medir
permiten sujetar
permiten sujetar algunas operaciones
algunas operaciones permiten
permiten contener
contener volúmenes de
volúmenes de
algunas otras piezas
algunas otras piezas de
de específicas
específicas yy sólo
sólo puede
puede sustancias.
sustancias. sustancias líquidas
sustancias líquidas
laboratorio.
laboratorio. utilizarse para ello.
utilizarse para ello.
Material
Material Volumétrico
Volumétrico
aforado
aforado
Material
Material Volumétrico
Volumétrico
graduado
graduado
USO
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Aparato de
b) Una camisa de extracción. Esta se
extracción
ensambla al matraz.
SOXHLET
c) Refrigerante de reflujo.
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lavarlos.
Es un utensilio que permite tomar
sustancias químicas con ayuda de
Espátula
este utensilio evitamos que los
reactivos se contaminen.
Manómetro Este utensilio permite medir la presión
abierto de un gas.
Son matraces de vidrio con una
Matraz de capacidad de 250 ml. Se utilizan junto
destilación con los refrigerantes para efectuar
destilaciones.
Es un matraz de vidrio que presenta
un vástago. Están hechos de cristal
grueso para que resista los cambios
Matraz Kitazato
de presión. Se utiliza para efectuar
filtraciones al vacío.
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a) Pipetas graduada: Es un
elemento de vidrio que sirve para dar
volúmenes exactos, con esta pipeta,
se pueden medir distintos volúmenes
de líquido, ya que lleva una escala
graduada.
b) Pipeta volumétrica: Es un
elemento de vidrio, que posee un
único valor de medida, por lo que sólo
puede medir un volumen.
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APARATOS DE LABORATORIO
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diezmilésima de gramo.
Es un aparato basado en métodos
Balanza
mecánicos tiene una sensibilidad de
granataria
una décima de gramo.
ARTEFACTOS MÁS
UTILIZADOS EN EL
LABORATORIO
CLÍNICO
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MECHERO DE BUNSEN
El gas se mezcla con el aire y el conjunto arde en la parte superior del mechero.
La reacción química que ocurre, en el caso de que el combustible sea el
propano (C3H8) y que la combustión sea completa, es la siguiente:
El cono interno está constituído por gas parcialmente quemado, el cual es una
mezcla de monóxido de carbono (CO), hidrógeno (H2), dióxido de carbono (CO2)
y nitrógeno (N2). En el cono exterior esa mezcla de gases arde por completo
gracias al oxígeno del aire circundante. Esta es la parte más caliente de la
llama.
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Al abrir ventana, el gas se mezcla con Oxígeno, y se genera la llama azul que es
la que tiene el mayor potencial calorífico. Por el contrario, al cerrar ventana, la
llama se pone amarilla y grande, siendo una llama que ahúma, con bajo
potencial calorífico, no ideal para trabajos de laboratorio.
El mechero Meker, tiene el tubo quemador más ancho y tiene una malla
montada en su parte superior. Esto produce un cierto número de pequeñas
llamas Bunsen, las zonas exteriores de las cuales se funden para dar una llama
maciza, exenta de la zona central más fría. Con este mechero se obtienen
temperaturas superiores a los 1000 °C.
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EL MICROSCOPIO
Es un instrumento que sirve para ver objetos demasiados pequeños para ser
vistos con claridad por el ojo humano (objetos microscópicos).
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CENTRIFUGA
Hay diversas clases de centrífugas, entre las que se citan las siguientes:
La centrífuga de mesa
La ultracentrífuga
La centrífuga para microhematocrito
La centrífuga de pie
Estos son los de más amplio uso en los laboratorios de salud pública, de
investigación y clínicos, entre otros.
ESTUFA DE LABORATORIO
Especificaciones técnicas
Tiene una capacidad para 20 crisoles, aunque también hay modelos que
pueden contener hasta 168 crisoles. Está recubierto por múltiples capas de
asbesto que impide que el calor llegue al exterior del instrumento y altere el
experimento o dañe al operario. El horno funciona mediante resistencias
eléctricas ubicadas en la parte inferior y los laterales de las paredes internas del
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AUTOCLAVE
El hecho de contener fluido a alta presión implica que las autoclaves deben ser
de manufactura sólida, usualmente en metal, y que se procure construirlas
totalmente herméticas.
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ESPECTROFOTÓMETRO
2. Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa está presente
en la muestra. La concentración es proporcional a la absorbancia, según la Ley
Beer-Lambert: a mayor cantidad de moléculas presentes en la muestra, mayor
será la cantidad de energía absorbida por sus electrones.
Abs = K C L
Abs: absorbancia
C: concentración
Abs / K L = C
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%T = - Log Abs.
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SOLUCIONES
QUÍMICAS
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FUNDAMENTOS BÁSICOS
Las soluciones químicas más comunes son las líquidas, es decir, aquellas en
que el soluto es un sólido agregado al disolvente líquido (agua en la mayoría de
los casos). También hay soluciones gaseosas (gases disueltos en gases) y de
gases en líquidos, como oxígeno disuelto en agua. Un ejemplo de soluciones de
sólidos en sólidos son las aleaciones.
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CLASIFICACIÓN DE SUSTANCIAS
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MEDIDAS DE CONCENTRACIÓN
a) Tanto por ciento peso/peso %P/P = (cantidad de gramos de soluto) / (100 gramos
de solución)
Se refiere al volumen
Porcentaje volumen de soluto por cada 100
a volumen (% V/V) unidades de volumen
de la solución.
Indica el número de
Porcentaje peso a gramos de soluto que
volumen (% P/V) hay en cada 100 ml de
solución.
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Ejercicio:
Resolvamos:
V1 = 1 litro
C1 = 37%
C2 = 4%
V2 = ¿?
V1 • C1 = V 2 • C2
a) Fracción molar
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Se define como la
relación entre los moles
de un componente (ya
Fracción molar
sea solvente o soluto) de
(Xi)
la solución y los moles
totales presentes en la
solución.
Es el número de moles
de soluto contenido en
un litro de solución. Una
Molaridad (M) solución 4 molar (4 M) es
aquella que contiene
cuatro moles de soluto
por litro de solución.
En la molalidad
relacionamos la
molaridad del soluto con
el que estamos
trabajando con la masa
del disolvente (en kg)
que utilizamos.
Molalidad
La definición de
molalidad es la siguiente:
Es la cantidad de
equivalentes químicos de
Normalidad
soluto por cada litro de
N = n eq/V
solución.
SOLUBILIDAD
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Algunos líquidos, tales como agua y alcohol, pueden ser disueltos en cualquier
proporción en otro solvente. Sin embargo, el azúcar tiene un límite de
solubilidad ya que al agregar cierta cantidad adicional en una solución está
dejará de solubilizarse, llamándose a esta solución saturada.
CONCEPTO
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UNIDADES DE MEDIDA
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ANEXOS
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REACTIVOS
QUÍMICOS
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REACTIVOS Y ETIQUETAS
TIPOS DE REACTIVOS
Reactivos sólidos
Reactivos líquidos
Disoluciones preparadas
Hay reactivos que tienen características y usos específicos como los reactivos
de calidad patrón primario, que se emplean en las técnicas volumétricas,
o los patrones de referencia.
Etiqueta para un
reactivo sólido
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Etiqueta para un
reactivo líquido
COLORANTES Y
TINCIONES
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COLORANTES
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células, tejidos,
fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes
naturales, los cuales son extraídos de plantas o animales, y colorantes
artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el
laboratorio.
COMPOSICIÓN
FUNCIÓN
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TINCIONES
Tinción simple cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo
colorante (azul de lactofenol o tinta china);
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Desecación
Calor seco
Microondas
Óxido crómico
Ácido acético
Acetona
Dicromato de
potasio
Químicos
Formaldehído
Glutaraldehído
Reductores Etanol
Metanol
Paraldehído
Entre los procesos de fijación físicos se tienen los siguientes: desecación, calor
seco, calor húmedo, ultrasonido y microondas, mientras que los procesos de
fijación químicos se pueden clasificar como oxidantes y reductores, de acuerdo
con sus propiedades químicas. Entre los agentes químicos oxidantes se
encuentran: óxido crómico, ácido acético, ácido pícrico, acetona, dicromato de
potasio. Los agentes químicos reductores son: formaldehído, glutaraldehído,
etanol, metanol, paraldehído, etcétera.
Los métodos químicos ofrecen mejores resultados para la fijación, ya que son
líquidos con potencial alto de difusión intracelular y detienen procesos
enzimáticos que provocan autolisis.
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Tinción de Gram
Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en
día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo
económico, sencillo y eficaz que resulta.
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No todas las bacterias se pueden teñir por esta técnica, ya que carecen de
pared celular (micoplasma) o su pared celular tiene una composición química
diferente (micobacterias, que cuentan con una gran cantidad de ácidos
micólicos).
Las muestras útiles para su uso son líquidos estériles, biopsias para cultivo,
abscesos, hisopados, crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo. Las
bacterias Gram positivas se observan de color azul obscuro a morado, mientras
que las Gram negativas se observan de color rosa a rojo.
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Tinción de Wright
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Las muestras útiles para su uso son el frotis de sangre periférica y frotis de
médula ósea. Los diferentes colores que se observan en la célula provocan el
llamado efecto Romanowsky, que tiñe de púrpura a los núcleos y gránulos
neutrofílicos y de color rosa al citoplasma. Los ácidos nucleicos se tiñen de azul,
permitiendo así distinguir a los parásitos en el interior de los eritrocitos. Esta
tinción es utilizada en la búsqueda de Plasmodium spp. (En México,
principalmente, Plasmodium vivax), Leihsmania spp., (principalmente
Leishmania mexicana), Trypanosoma cruzii, y en la búsqueda intencionada de
filarias. En micología esta tinción es de gran ayuda en la búsqueda de
Histoplasma capsulatum (hongo dimórfico) en extendidos de médula ósea.
Tinción de Ziehl-Neelsen
Esta tinción permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son
capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son.
La sensibilidad de esta tinción para identificar bacilos ácido-alcohol resistentes
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Las muestras clínicas útiles para su uso son múltiples, como el líquido
cefalorraquídeo, líquido pleural, líquido sinovial, líquido pericárdico, biopsias
para cultivo, abscesos, aspirados, crecimiento de colonias aisladas en medios
de cultivo, expectoraciones, aspirados endotraqueales y lavados
bronquioalveolares.
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MEDIOS DE
CULTIVO
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MEDIOS DE CULTIVO
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en
pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor
ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).
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Líquidos
Semisólidos
Sólidos
Agar Sangre
El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con fuente
proteica (digeridos trípticos, digeridos proteicos de soja) el cual tiene un agregado
de 5 % de sangre ovina, (también puede usarse sangre humana, para cultivos en
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una placa de Agar) con una pequeña cantidad de hidratos de carbono naturales y
cloruro sódico.
El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver
la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de
virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina
el tipo de hemólisis que posee:
BIBLIOGRAFÍA
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69
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vgnextoid=087ed5068aa78110VgnVCM1000000705350aRCRD&vgnextchannel
=8c195dcba9263110VgnVCM100000dc0ca8c0RCRD
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http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
70