PRACTICA N°5 MOHOS Y LEVADURAS

“Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia”

Universidad Nacional del Callao

Escuela Profesional de Ingeniería Química

Informe de Laboratorio N°5

MOHOS Y LEVADURAS

• Asignatura: Laboratorio de Microbiología

• Grupo: 90 G
• Docente: Herrera Sanchez Sonia Elizabeth
• Integrantes:
❖ Astocondor Silva, Sandro
❖ Ávila Herencia, Fiorela
❖ Benites Tantalean, Brizeth
❖Bravo Sanchez, Crhistian
❖Del Aguila Tunque, Andrea

Bellavista, febrero del 2021

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ÍNDICE

1. INTRODUCCION ................................................................................................................ 3
2. OBJETIVOS ........................................................................................................................ 4
3. MARCO TEÓRICO ............................................................................................................ 5
3.1. Mohos .......................................................................................................................... 5
3.2. Levaduras ................................................................................................................... 7
3.3. Botrytis Cinerea ........................................................................................................ 7
4. EQUIPOS Y MATERIAES ................................................................................................ 9
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ........................................................................... 11
6. RESULTADOS ................................................................................................................. 14
7. DISCUSIÓN....................................................................................................................... 16
8. CONCLUSIONES............................................................................................................. 17
9. RECOMENDACIONES ................................................................................................... 18
10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................... 19
11. ANEXOS ........................................................................................................................ 20

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1. INTRODUCCION

Los hongos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en el

ambiente, pueden encontrarse como flora normal de un alimento, o como
contaminantes en equipos mal sanitizados. Ciertas especies de hongos y
levaduras son útiles en la elaboración de algunos alimentos, sin embargo,
también pueden ser causantes de la descomposición de otros alimentos. Debido
a su crecimiento lento y a su baja competitividad, los hongos y levaduras se
manifiestan en los alimentos donde el crecimiento bacteriano es menos
favorable. Estas condiciones pueden ser bajos niveles de pH, baja humedad, alto
contenido en sales o carbohidratos, baja temperatura de almacenamiento, la
presencia de antibióticos, o la exposición del alimento a la irradiación. Por lo
tanto, pueden ser un problema potencial en alimentos lácteos fermentados,
frutas, bebidas de frutas, especias, oleaginosas, granos, cereales y sus
derivados y alimentos de humedad intermedia como las mermeladas, cajetas,
especias, etc

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2. OBJETIVOS

2.1. OBJETIVOS GENERALES

• Identificar morfológicamente hongos a partir de muestras de
laboratorio
2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Identificar estructuras de los mohos mediante un montaje con azul de
lactofenol.
• Observar las características microscópicas de los mohos y levaduras.

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3. MARCO TEÓRICO

3.1. Mohos
Si un hongo es filamentoso se llama moho y cuando es una célula aislada se
dice levadura. Los filamentos que constituyen el micelio reciben el nombre de
hifas. El elemento tubular que emerge se denomina "hifa". Las hifas pueden estar
separadas en secciones generalmente multinucleadas por medio de septos
perforados, o bien carecer de éstos. ". Las "hifas" pueden introducirse en el
sustrato formando un micelio vegetativo o proyectarse hacia el exterior
constituyendo el micelio aéreo, que es el que define aspecto y morfología de
la colonia, pudiendo ser: algodonoso, plumoso, lanudo, velloso, sedoso,
brillante, mate, arrugado, plegado, plano, acuminado, extendido, desparramado,
circunscrito, membranoso, cerebriforme, pigmentado o no, etc. La pared celular
del micelio de los mohos semeja un extenso sistema tubular por el que avanza
el citoplasma para su dispersión y búsqueda de nutrientes. Los mohos se
reproducen asexualmente en la mayoría de los casos y las estructuras sexuales
sólo aparecen cuando las circunstancias son favorables o se encuentran micelios
de distinta polaridad.

3.1.1. Morfología del Moho

Los mohos son vegetales del reino Myceteae. Carecen de raíces tallos,
hojas y no poseen clorofila. Pertenecen a los eumycetes u hongos
verdaderos. Mediante la observación macroscópica y microscópica se
identifican y clasifican. Tienen aspecto velloso u esponjoso.

3.1.2. Partes del Moho

✓ Micelio (Talo de un hongo): Es el conjunto de hifas que constituye el
talo de un moho. El micelio de un moho parásito crece en el
hospedante, ya sea superficialmente o en el interior del mismo. El
micelio intercelular se alimenta por absorción a través de la
membrana o la pared del hospedante. Si entra dentro de la célula,
entra en contacto con el protoplasma del huésped.

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✓ Hifas: Las hifas son ramificaciones y se clasifican en vegetativas,

cuya misión fundamental es la incorporación de nutrientes y fértiles,
que poseen las estructuras reproductoras en soportes aéreos.

3.1.3. Reproducción

Se reproducen por tres medios:

• A partir de un trozo de micelio. No es corriente en la naturaleza, se da en

cultivos industriales.
• Por esporas asexuales. Es la forma de reproducción más frecuente en los
mohos de interés en microbiología de los alimentos.
• Por esporas sexuales. Se producen por la fusión de dos hifas compatibles.

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• Ascosporas: encerradas en el asca, normalmente en número de ocho.

• Zigosporas: protegidas por una fuerte pared.

3.2. Levaduras
Las levaduras son hongos que forman sobre los medios de cultivo colonias
pastosas, constituidas en su mayor parte por células aisladas que suelen
ser esféricas, ovoideas, elipsoideas o alargadas. Unas pocas presentan
hifas. Las dimensiones pueden oscilar de 1 a 9 µm de ancho y 2 a más de
20 µm de longitud según la especie, nutrición, edad y otros factores.
Algunos hongos fitopatógenos forman colonias levaduriformes en cultivos
axénicos y varios patógenos de animales se presentan como levaduras en
los materiales clínicos

3.3. Botrytis Cinerea

Botrytis cinerea es uno de los hongos patógenos más comunes, ya que
tiene la capacidad de infectar más de 200 distintas plantas huéspedes.
Además de ser un patógeno agresivo, B. cinerea es un organismo versátil,
capaz de crecer y reproducirse en tejidos dañados, senescentes y
muertos de la fresa, vegetales, y otras plantas. B. cinerea se reproduce
principalmente por medio de esporas asexuales, o conidios.

De los numerosos patógenos que causan enfermedades en la fruta, el

hongo de moho gris (Botrytis cinerea) es el de mayor extensión e
importancia y en otras regiones del mundo donde se cultiva la fresa. Esta

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enfermedad es conocida como pudrición de la fresa, o moho gris de la

fruta.

Botrytis es uno de los patógenos más difíciles de controlar cuando las

condiciones ambientales favorecen su crecimiento y desarrollo

Fruta infectada, se cubre completamente con Botrytis y se extiende a la

fruta adyacente por contacto directo

Botrytis en un microscopio de magnificación de 400x. Botrytis produce

grandes números de esporas de células simples que se extienden
fácilmente por el aire, las salpicaduras de aire, y por contacto físico

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4. EQUIPOS Y MATERIAES

Contador de Colonias Balanza

Mechero

Placas Petri

Microscopio
Láminas

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Pinzas Agar Sabouraud

Solución Salina Azul de lactofenol

Fresas

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5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

5.1. Preparación en cinta adhesiva

✓ Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de azul de lactofenol.

✓ Luego esterilizar las pinzas sometiendo a fuego.

✓ Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.

✓ Se coloca la cinta adhesiva de manera que a las dos puntas de la pinza
se les adhiere un extremo de la cinta adhesiva, formando un arco.

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✓ Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta con moho,

en este caso de la fresa. Presionando suavemente para recoger hifas y
esporas.

✓ En la placa, se coloca la cinta adhesiva con el moho sobre el colorante,

de manera que este se distribuya uniformemente.

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✓ Por último, se coloca la placa ya preparada en el microscopio, y se

observa en un aumento de 10x y de 40x.

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6. RESULTADOS

MOHO EN LA FRESA CON EL PASAR DE LOS DÍAS

DÍA 1

DÍA 2

DÍA 3

DÍA 4

DÍA 5

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✓ Características de la fresa con moho:

La fruta queda recubierta de un micelio algonodoso y los tejidos se ablandan.
Este hongo causa muchas pérdidas en la postrecolección.

Al llevar la placa con la muestra al microscopio se pudo identificar que el hongo

presente se trataba de Botrytis cinerea. Como podemos ver en la siguiente
imagen, Botrytis en un microscopio de magnificación de 400x, produce grandes
números de esporas de células simples que se extienden fácilmente

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7. DISCUSIÓN

FOTOGRAFÍA OBSERVACIONES

El moho que se ha presentado en la

fresa es Botrytis cinérea, el cual tiene
un aspecto gris y algodonoso.
En la literatura se observa una colonia
circular irregular de color blanca plomiza
y borde filamentoso color blanco, textura
algodonosa. Reverso café blanquecino
y borde blanco cremoso.

FOTOGRAFÍA DE LITERATURA MORFOLOGÍA DE LITERATURA

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8. CONCLUSIONES

• Se logró identificar el moho en nuestra fruta problema, la cual era la

fresa, encontramos así que se trataba de la Botrytis cinérea, esta
presenta una estructura algodonosa y grisáseo. Es también llamado
moho gris.
• Gracias a la afinidad azul de lactofenol por componentes de las
células, se logra apreciar en el microscopio las estructuras fúngicas de
la Botrytis cinérea.
• Microscópicamente el moho presentaba conidios ovalados y están
situados al extremo de los conidios largos muy ramificados estas
estructuras se asemejan mucho a racimos de uva.

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9. RECOMENDACIONES

• Deberá usarse siempre un mandil blanco y limpio.

• Antes de comenzar cualquier trabajo, el alumno deberá lavarse las manos
usando agua y jabón, luego secarse con una toalla limpia.
• Los libros y cuadernos de notas, nunca deben colocarse sobre la mesa
de trabajo.
• La superficie de la mesa deber ser cuidadosamente desinfectada antes y
después del trabajo.
• Antes de dejar el laboratorio se deberá ubicar cada cosa en su lugar y las
mesas convenientemente limpias.
• Terminado el trabajo deberá lavarse las manos con jabón desinfectante y
alcohol.

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10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

✓ Pacasa-Quisbert, F., Loza-Murguia, M. G., Bonifacio-Flores, A., Vino-

Nina, L., & Serrano-Canaviri, T. (2017). Comunidad de hongos
filamentosos en suelos del Agroecosistema de K’iphak’iphani,
Comunidad Choquenaira-Viacha. Journal of the Selva Andina Research
Society, 8(1), 2-25. https://doi.org/10.36610/j.jsars.2017.080100002

✓ Benson Harold, 1979. Microbiological applications, a laboratory manual

in general microbiology. Third edition. Wm, C. Brown Company
Publisher.

✓ Susana Sanz, 2011. Prácticas de microbiología (2da edición).

Universidad de La Rioja

✓ https://ucanr.edu/blogs/fresamora/blogfiles/37849.pdf

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11. ANEXOS

CUESTIONARIO:
1) Dibujar las estructuras de reproducción del moho

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2) Anota el nombre del moho identificado:

El moho identificado es nuestra fruta (Fresa) fue Botrytis Cinerea

3) Anotar la composición y utilidad de los medios de cultivo: Saboraud,

agar de papa y dextrosa y agar rosa de bengala

AGAR SABOURAUD
Composición

FÓRMULA (en gramos por litro)

Peptona 5.00

Tripteína 5.00

Glucosa 40.00

Cloranfenicol 0.05

Agar 15.00

pH (final) 5.6 ± 0.2

Utilidad
El agar Sabouraud es un medio de cultivo que por sus características
funciona como medio de enriquecimiento para hongos y que, en caso de
contener cloranfenicol u otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo
para los mismos. El medio contiene peptonas y una elevada concentración
de glucosa que favorece el crecimiento de los hongos sobre las bacterias.
Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos, aunque
también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias filamentosas tales
como Nocardia.

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AGAR DE PAPA DEXTROSA

Composición

Gramos Ingredientes

~1000 Agua destilada

4 Patatas
(infusión de sólidos)

20 Dextrosa

15 Agar en polvo

Utilidad
El agar de patata y dextrosa es el medio más utilizado para el crecimiento de
hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o materia vegetal muerta
en descomposición.
El agar de patata y dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o
ácidos para inhibir el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado
para realizar el recuento colonial. También puede ser utilizado para promover
el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica. La infusión de
patata promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el
agar es adicionado como agente solidificante

AGAR ROSA DE BENGALA

Composición

FÓRMULA (en gramos por litro)

Agar bacteriológico 15

Peptona bacteriológica 5

Cloranfenicol 0,1

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Dextrosa 10

Sulfato magnésico 0,5

Fosfato potásico 1

Rosa bengala 0.05

Utilidad
Es un medio neutral selectivo recomendado para la enumeración de hongos
y levaduras en alimentos, agua y materiales ambientales. Se recomienda
para alimentos frescos proteicos con flora compuesta principalmente de
bacterias Gram-negativas en forma de vara. También es apropiado cuando
se requieren tiempos y temperaturas de incubación mayores, alrededor de
35 °C. La dextrosa es el carbohidrato fermentable como fuente de carbono y
energía. El rosa de bengala es un agente selectivo que inhibe el crecimiento
de bacterias y limita el tamaño y la altura de los hongos con crecimiento
rápido, lo que permite el desarrollo y la detección de otras levaduras de
crecimiento más lento: los hongos aparecen de color rosado. El agar
bacteriológico es el agente solidificante.

4) ¿Por qué es necesario realizar la técnica de micro cultivo para

identificar mohos?
Cuando se siembra al hongo en un micro cultivo se induce y favorece la
producción de conidias, estructuras morfológicas claves para poder dar
nombre y apellido al hongo patógeno, porque en cada microorganismo es
diferente esta esporulación, aunque posean características similares entre
géneros y especies.

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