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olivo de cera, es un árbol que se adapta fácilmente y crece de manera espontánea cerca
de los ríos, quebradas, en zonas erosionadas, pendientes abruptas, orillas de senderos y
caminos y en periferias de los bosques. En algunos sitios alcanza alturas hasta de doce
metros, además de Colombia, crece en Costa Rica, Venezuela, Ecuador, Perú y Bolivia.
Un fluido supercrítico es una sustancia que se encuentra por encima de su temperatura crítica y
su presión crítica (punto crítico) como se observa en la figura 4-4. En estas condiciones no son
gases, ni líquidos, pero poseen propiedades de ambos que los hacen muy interesantes en
procesos de extracción y en cromatografía. Las propiedades físicas como la viscosidad, la
difusividad y la densidad, son las que más interesan a la hora de llevar a cabo algunas de sus
aplicaciones y éstas se pueden controlar modificando las condiciones de presión y temperatura
Actividad antioxidante: No es posible hacer una medida directa, pero la mayoría de los métodos
se basan en el uso de sistemas generadores de radicales, los cuales son métodos de inhibición
donde se emplea una especie generadora de radicales libres y una sustancia detectora de estas
especies. Su efecto se analiza por métodos espectrofotométricos UV-Vis. Entre los métodos se
encuentran: Método ABTS+ : Consiste en generar el radical ABTS a partir del ácido 2,2’-azino-
bis-(3- etilbenzotiazolin)-6-sulfónico, donde el radical catiónico obtenido es un compuesto
Capítulo 4. Marco Teórico 17 estable, de color verde- azulado y con un espectro de absorción
máximo a 734 nm (UVvis). La ventaja del radical es su estabilidad cuando se encuentra en
refrigeración y lejos de la luz. Estos factores permiten almacenar una solución de trabajo por
aproximadamente seis meses. Además este absorbe en la región cercana al infrarrojo (645, 734
y 815 nm), evitando interferencias con las antocianinas (Kuskoski, et al., 2004; Okezie 2002,
citados por Cerón y Lopez, 2013). El método permite expresar los resultados de acuerdo a la
capacidad del antioxidante para donar un hidrógeno y estabilizar al radical ABTS° + . La
decoloración que la solución de ABTS° + experimenta en la reacción, se compara con la
decoloración hecha por un antioxidante patrón derivado de la vitamina E conocido como Trolox
(6-Hidroxi2,5,7,8-tetrametilcroman-2-ácido carboxílico), mediante una curva de calibración. Por
esta razón el resultado se expresa como capacidad antioxidante en equivalentes trolox ó TEAC
(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity) (Okezie 2002, citado por Jimenez y Villareal, 2008).
Método del DPPH* : Consiste en determinar la capacidad de captura del radical libre DPPH* por
parte de los compuestos antioxidantes (Samaniego, 2006). El procedimiento seguido para
determinar la actividad antioxidante se basa en el método descrito por Brand-Williams et al.,
(1995) y descrito por Malacrida y Neuza (2012), el cual consiste en la medición a 517 nm de la
reducción del radical estable 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH.). La absorbancia característica
de este radical que posee un color violeta intenso, disminuye en presencia de un antioxidante.
Por lo tanto, es posible cuantificar la capacidad captadora de radicales libres que poseen
determinados compuestos mediante la determinación del grado de decoloración que provocan
a una solución de DPPH (Figura 4-5).
Las hojas y tallos de Morella pubescens, se recolectaron en zona rural del municipio de
San Pablo, norte del departamento de Nariño (Colombia). La identificación taxonómica
de las muestras se llevó a cabo en el Herbario de la Universidad de Nariño de acuerdo
con el trabajo de Parra [5].
Análisis
Rendimiento
Densidad relativa del aceite esencial a 20°C:
Determinación del Índice de Acidez
Determinación de la solubilidad en etanol
Determinación del Índice de Refracción
Determinación Rotación óptica
Análisis cromatográfico
Existen algunos métodos que miden la capacidad para secuestrar los radicales formados en los
procesos de peroxidación lipídica. Uno de ellos consiste en medir la concentración de
antioxidante requerido para secuestrar el 50% de los radicales en un tiempo determinado. Los
radicales comúnmente utilizados son el 2,2-difenil-1- picrilhidracilo (DPPH• ) y ácido 2,2’-azino-
bis-(3- etiltiazolinabencenosulfónico- 6) (ABTS+• ).
este método permite medir la inhibición del antioxidante causada por el radical piróxilo que
induce oxidaciones; por lo tanto, a medida que la molécula fluorescente (fluoresceína) es
atacada y dañada por los radicales, se va perdiendo su fluorescencia. La función de los
antioxidantes es la de proteger las moléculas que tienen tendencia a oxidarse, y cuanto más
capacidad antioxidante tiene un compuesto o alimento mayor es la capacidad de mantener la
emisión de luz por parte de la molécula fluorescente. El grado de protección frente a la oxidación
se cuantifica con un medidor de fluorescencia y se reporta en términos de "equivalentes de
Trolox" (TE) (Ou, et al., 2002; Huang et al., 2005).
Catión-radical ABTS+•
El efecto protector de los AE y de las sustancias de referencia se determina, entre otros, por el
método descrito por Re R. et al. (1999), el cual se fundamenta en la capacidad que tienen
algunos compuestos para atrapar radicales, i.e. ABTS+. . La técnica se usa ampliamente para
muestras biológicas, alimentos, compuestos puros o extractos de plantas de naturaleza hidrófila
o lipofílica (Kuskoski, et al., 2005; Re et al. 1999)