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Protocolo de La Práctica de Laboratorio de Bioquímica
Protocolo de La Práctica de Laboratorio de Bioquímica
2. Descripción de la actividad
Tablas
Ilustraciones
Ilustración 1 Clasificación de carbohidratos. ............................................................................ 35
Ilustración 2 Molécula de glucosa. ........................................................................................... 38
2 INTRODUCCIÓN
1. Que el estudiante sea capaz de comprender e integrar los conceptos teóricos con
la actividad práctica incluyendo una adecuada manipulación de las técnicas de
laboratorio, desde la actividad procedimental hasta la entrega de resultados o informe
final.
3. Que el estudiante realice las a actividades las practicas, teniendo en cuenta las
normas de seguridad y las indicaciones que del docente responsable de la práctica
considere.
4. Que el estudiante adquiera los elementos formativos que incluye: lectura previa de
esta guía, planeación de la actividad, asistencia a las prácticas, resolución de
problemas con la metodología empleada, interpretación de resultados y presentación
de resultados en el informe de laboratorio.
La bioquímica es una rama de la ciencia encargada de descifrar los mecanismos
esenciales de los seres vivos, con una fase teórica y una fase práctica, la primera se
da a través de los distintos referentes bibliográficos y el segundo se apoya en el
desarrollo de la guía de prácticas de laboratorio del curso de bioquímica.
El desarrollo del trabajo práctico se apoya en una serie de pasos que van describiendo
el progreso de una técnica a través de mediciones, cálculos, observaciones cualitativas
y cuantitativas de los procedimientos planteados en la guía. La práctica de laboratorio
integra, en el estudiante la habilidad de trabajar en el laboratorio, utilizando las
técnicas más habituales de un laboratorio bioquímico y aprendiendo a interpretar los
resultados experimentales.
3.1 Portada
La página de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos escritos, en el
entorno de gestión encuentra un manual de normas APA. La portada contiene el
nombre la universidad, la escuela a que pertenece el nombre de los integrantes del
grupo con los datos necesarios para su identificación.
3.2 El Índice General
Presenta toda la información del contenido, incluyendo el índice general, el índice de
tablas, el índice de figuras y el índice de anexos
-Índice General
-Índice de Tablas
-Índice de Figuras
-Índice de Anexos
3.3 Introducción
Describirá las prácticas a desarrollar explicado las principales características de las
técnicas, así como, descripción de objetivos generales y específicos que da lugar al
trabajo experimental. Esta es una sección realizada, redactando las ideas de los
autores o sea ustedes.
3.4 Revisión bibliográfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temáticas propuestas
por la guía del componente práctico. Se toman los principales aspectos teóricos de
acuerdo a la metodología que se platea para desarrollar en la guía. Tenga presenta
que hay que dar los créditos respectivos a los autores consultados y las ideas
resultantes son redactadas por el estudiante.
3.5 Materiales y Métodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las precauciones
a tener, así como describir la información relávate que permita el buen desarrollo de
la práctica.
3.6 Plan de Trabajo
4 INFORME DE LABORATORIO
En la redacción de los informes se deben conjugar los verbos en tiempo pasado. Esta
actividad es grupal.
La estructura de los informes es la siguiente:
4.1 Portada
La página de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos escritos, en el
entorno de gestión se encuentra un manual de normas APA. La portada contiene el
nombre la universidad, la escuela a que pertenece el nombre de los integrantes del
grupo con los datos necesarios para su identificación
4.2 Resumen
Indicar una breve reseña de lo hecho durante la práctica y los objetivos, principales
resultados y las conclusiones del trabajo realizado.
4.3 El Índice General
El contenido, incluyendo el índice general, el índice de tablas, el índice de figuras y el
índice de anexos
-Índice General
-Índice de Tablas
-Índice de Figuras
-Índice de Anexos
4.4 Introducción
Describirá las prácticas a desarrollar explicado las principales características de las
técnicas, así como, descripción de objetivos generales y específicos que da lugar al
trabajo experimental. Esta es una sección realizada, redactando las ideas de los
autores o sea ustedes.
4.5 Revisión bibliográfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temáticas propuestas
por la guía del componente práctico. Se toma los principales aspectos teóricos de
acuerdo a la metodología que de platea para desarrollar en la guía. Tenga presenta
que hay que dar los créditos respectivos a los autores consultados y las ideas
resultantes son redactadas por el estudiante.
4.6 Materiales y Métodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las precauciones
a tener, así como describiendo la información relávate que permita el buen desarrollo
de la práctica.
4.7 Resultados
Presentar la información sobre el desarrollo de las prácticas de forma estructurada,
completa y ordenada de la actividad experimental. Presentando gráficos, tablas,
cálculos y demás notas que describa la ejecución de la práctica.
4.8 Discusión
La discusión contendrá un análisis crítico de los resultados obtenidos de la actividad
práctica y los conceptos teóricos.
4.9 Conclusiones
Derivan de los resultados y la discusión del trabajo.
4.10 Recomendaciones
El trabajo realizado debería mostrar nuevos caminos para otras experiencias
de laboratorio similares. En esta sección se enumerarán claramente las
actividades que podrían realizarse para proyectar la información obtenida en la
investigación.
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita la remisión
a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus características editoriales. Por lo
general y de acuerdo con la normas para trabajos escritos la información básica a
ofrecer es Autor(es)./Año de publicación./Título:/subtítulo./Mención del traductor y/o
editor./Edición./Ciudad y/o país de publicación en caso necesario,/Casa editora.
/Páginas o volúmenes./ (Mención de serie )
Esta información se detalla el final del documento.
4.11 Revisión bibliográfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temáticas propuestas
por la guía del componente práctico. Se toman los principales aspectos teóricos de
acuerdo a la metodología que se platea para desarrollar en la guía. Tenga presenta
que hay que dar los créditos respectivos a los autores consultados y las ideas
resultantes son redactadas por el estudiante.
4.12 Referencias
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita la remisión
a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus características editoriales. Por lo
general y de acuerdo con la normas para trabajos escritos la información básica a
ofrecer es Autor(es)./Año de publicación./Título:/subtítulo./Mención del traductor y/o
editor./Edición./Ciudad y/o país de publicación en caso necesario,/Casa editora.
/Páginas o volúmenes./ (Mención de serie )
Esta información se detalla el final del documento.
4.13 Anexo
En éstos se deben colocar toda aquella información referente a fichas de seguridad,
reactiva y equipos esta otra información que se considere relévate.
Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe portar en todo
momento Bata blanca de Laboratorio.
Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio, igualmente
evitar tocar partes del rostro y llevar las manos a la boca o introducir lapiceros u otros
en boca nariz y oídos.
Cuando se tiene que hacer una reacción química se debe escoger el recipiente
adecuado a la cantidad que se va a usar. Los ensayos se hacen en tubos de ensayo o
en placas de gotas, nunca en vasos, matraces, etc.
No usar recipientes alimenticios para contener productos químicos e igualmente
cualquier recipiente que se utilice para la recepción productos es necesario rotular,
brindando la mayor información sobre la sustancia contenida.
De los materiales de laboratorio No utilice vidrio agrietado, el material de vidrio en
mal estado aumenta el riesgo de accidente. No deben utilizarse para pipetear
jeringuillas provistas de aguja hipodérmica o aspirar con la boca pipetas de vidrio.
Compruebe la temperatura de los materiales antes de cogerlos directamente con las
manos.
En caso de tener que evacuar el laboratorio, cerrar la llave del gas y salir de forma
ordenada siguiendo en todo momento las instrucciones que haya impartido el
Profesor. Localizar al iniciar la sesión de prácticas los diferentes equipos de emergencia
en el correspondiente laboratorio: Duchas y lavaojos, Botiquín, Absorbente para
derrames, Alarma de emergencia, Salida de emergencia y Recipiente para el vidrio
roto.
Se hará la discusión sobre las normas de seguridad antes descriptas y las que
encuentran en el Reglamentación y Normas de Bioseguridad en los Laboratorios de la
UNAD y Otras Disposiciones.
Los aminoácidos se denominan así por tener un grupo amino (-NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH).
Es posible agrupar los aminoácidos en clases principales basadas en las propiedades
de sus grupos R, en especial de su polaridad, o tendencia a interaccionar como el agua
a pH biológico (cerca del pH 7.0). La polaridad de los grupos R varía enormemente
desde totalmente apolar o hidrofóbico (insoluble en agua) hasta altamente polar o
hidrofílico (soluble en agua).
Polares sin carga Los grupos R de estos aminoácidos son más solubles en agua, que
los aminoácidos apolares, debido a que contienen grupos
funcionales que forman puentes de hidrógeno con el agua.
Los aminoácidos en los que los grupos R tienen una carga neta
positiva significativa a pH 7.0 Lisina, arginina e histidina
Tabla 2 Aminoácidos proteicos con nomenclatura clásica sistema de tres letras y sistema de una sola letra,
impuesto en genética molecular.
Nomenclatura
G Gly Glicina
I Ile Isoleucina Ae
Apolares alifáticos
L Leu Leucina Ae
V Val Valina
F Phe Fenilalanina Ae
Apolares aromáticos
W Trp Triptófano Ae
C Cys Cisteina
Apolares con azufre
M Met Metionina Ae
N Asn Asparagina
T Thr Treonina Ae
R Arg Arginina
H His Histidina Ae
Polar con carga positiva
K Lys Lisina
NaOH Gradilla 2
albúmina Estufa 1
α Naftol
Hipoclorito de sodio
Reactivo de Hopkins-
Cole
Ácido sulfúrico
(H2SO)
Reactivo de Millón
Aminoácidos:
Glicina, tirosina,
triptófano,
fenilalanina y
arginina
Fenol
Albumina de huevo
Procedimiento
Tubos de ensayo en un +
baño de agua hirviente por Baño de agua
con 1.5 mL de ninhidr unos 10 minutos. hirviente por 10
6
Leucina al 1% ina minutos.
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que
se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un
medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptídicos formando un complejo
de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de
proteínas.
con 5 ml
de NaOH 2,5N
Preparar los tubos de 1 ml de
solución
1 + ensayo.
de NaOH 2,5N
Leucina al sulfato cúprico
1% +
Agregue a cada tubo
NaOH 2,5N 3 gotas de solución
con 1.5 de ensayo agregue 1
de sulfato cúprico al
mL de ml de
2 + 1%
Albúmina
NaOH 2,5N de la
1% sulfato cúprico
solución
con 1.5 NaOH 2,5N correspondiente.
mL de
3 +
Tirosina
1% sulfato cúprico Agregue 3 gotas de
solución de sulfato
con 1.5 NaOH 2,5N cúprico al 1% a cada
mL de 5ml de solución
4 + tubo de ensayo.
Glicina respectiva
1% sulfato cúprico
Reactivo de
Millón 1.5 ml de solución respectiva
con 1.5 mL
Retire con cuidado los tubos de ensayo
3 de Leucina +
+ del baño de María y colóquelos en la
1%
gradilla.
sulfato cúprico Baño de agua hirviente por 10
minutos
Hidróxido de Sodio
(NaOH
Agregue 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
con 1.5 mL de + 10% a cada tubo.
3 proteína de
alfa-naftol
trigo 1%.
+ Observar y tomar apuntes de los cambios.
hipoclorito de Sodio
5 ml de solución respectiva
Hidróxido de Sodio
(NaOH
+
con 1.5 mL de
4
Leucina alfa-naftol
hipoclorito de Sodio
Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminoácidos en las diferentes técnicas.
NINHIDRINA
BIURET
XANTOPROTÉICA
COAGULACIÓN
ADAMKIEWICK o HOPKINS
COLE SULFATO DE AMONIO
MILLÓN
(+) Negro o
(-) Incolora gris
(+) Rojo
Otros Cisteína,
Arginina
aminoácidos cistina,
metionina
Tomada:
6.7 PREGUNTAS:
NaOH Gradilla 2
albúmina Estufa 1
Fenol Micropipeta 10 μL
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para
su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos
y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace
peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos. El reactivo de Biuret
lleva sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con
los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad
de color depende de la concentración de proteínas.
Calentar el
hidróxido El precipitado de color tubo hasta
sódico negruzco indica que se ha ebullición.
hidróxido
sódico
con 3 mL de +
5
Glucosa acetato de
plomo
1- Reactivo de Bradford
Azul de coomasie G-250 5 mg
Etanol 2.5 ml
Ácido fosfórico 5 ml
Agua Hasta 50 ml
Mezclar en el orden indicado, disolver con agitación y a continuación filtrar
METODO
µl (alb) 0 10 20 30 40 50 60
Hacer una dilución 1:20 de la leche comercial; a continuación realizar las diferentes
diluciones de acuerdo con la siguiente tabla.
Tabla 16 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0
hasta
Leche diluida A B C
V. leche (µl) 20 25 30
Finalmente añadir 3 ml del reactivo de Bradford a todos los tubos; tanto a las
diluciones que contienen la albúmina como a las que contienen la leche diluida. Agitar
los tubos y a continuación proceder a la lectura de la absorbancia a 595 nm en el
colorimetro.
RESULTADOS
1- Elaboración de la recta patrón. Para ello representar en el papel milimetrado
adjunto la absorbancia de cada uno de los tubos que contenían albúmina bovina frente
a la cantidad de proteínas correspondiente. Si se dispone de una calculadora con
capacidad para hacer rectas de regresión, compruebe el coeficiente de correlación de
la recta obtenida. En cualquier caso determine la pendiente de la recta.
2- Para las tres diluciones del problema, interpolar la absorbancia obtenidas sobre la
recta representada para saber la cantidad de proteínas presentes en cada una de ellas.
Alternativamente, haga el cálculo mediante la pendiente de la recta.
7.5 PREGUNTAS:
Referente teórico.
En los animales los carbohidratos son esenciales desde el punto de vista energético,
ya que muchos órganos y células del cuerpo humano, como el cerebro y los glóbulos
rojos, obtienen su energía principalmente de la glucosa. Pero sus funciones no se
restringen a ser únicamente fuente de energía, sino que también pueden desarrollar
funciones estructurales, de reconocimiento celular y adhesión. Estructuralmente, un
hidrato de carbono típico es una cadena hidrocarbonada con varios grupos alcohol y
un carbono más oxidado, en forma de grupo carbonilo. Este grupo oxidado puede
situarse en el extremo de la cadena (aldehído), o adyacente, en posición 2 (cetonas)
NaO +Cal
H or
+R
Reacción
-Sulfato cúprico.
-Citrato de sodio.
-Carbonato anhidro de sodio
Acetato cúprico
Rotación óptica
almidón Estufa 1
Probeta 100 ml
Balón aforado de 25 ml
Agitador de vidrio
Balanza analítica
con 3 ml de
reactivo de
1 Glucosa al
Benedict Preparar los tubos de Agregue a cada tubo
1%
ensayo. de ensayo 2
con 3 mL de
reactivo de ml de reactivo de
2 sacarosa al
Benedict Benedict
1%
con 3 mL Agregue a cada tubo de +
reactivo de
3 de almidón ensayo 2
Benedict Baño de agua hirviente
al 1%
ml de reactivo de Benedict. por
con 3 mL
10 minutos.
de jugo de reactivo de
4
cebolla al Benedict Tubos de ensayo en un
1% baño de agua hirviente por
unos 10 minutos.
con 3 mL de
reactivo de
5 Fructosa al
Benedict
1%
Agite cada tubo de ensayo
con 3 mL reactivo de Observar y tomar apuntes
6
de agua Benedict de los cambios. Positiva 3 ml de solución
aparece un precipitado respectiva
rojizo, verde o amarillo.
Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión Cu2+ de
color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo
carboxilo.
10 minutos.
con 3 mL de Reactivo Fehling A
6 Observar y tomar apuntes de los
Lactosa al 1% Reactivo Fehling B cambios.
3 ml de solución respectiva
reactivo de Molisch
con 3 mLde de
1 + Preparar los tubos de ensayo. reactivo de Molisch
Glucosa al 1%
H2SO4 +
NaOH al 5%
con 3 mL de solución
1 + Preparar los tubos de ensayo. dos gotas de solución de
Glucosa al 1%
AgNO3 al 5% α-naftol
con 3 ml de solución
1 lugol
Glucosa al 1%
Preparar los tubos de Agregar 5 gotas de lugol
con 3 mL de solución ensayo.
2 lugol
sacarosa al 1%
con 3 mL de solución
3 lugol Agregar 5 gotas de lugol
almidón al 1%
con 3 mL de solución
4 lugol
jugo de cebolla al 1% Observar y tomar apuntes
de los cambios.
con 3 mL de solución
5 de almidón de papa al lugol
1%
3 ml de solución respectiva
8.8 PREGUNTAS
Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la prueba Molish.
Los lípidos (del griego lypos, grasa) son biomoléculas orgánicas formadas básicamente
por
C, H y O, aunque este último elemento se encuentra en proporciones mucho más
bajas que los dos primeros. Además, pueden contener P, N y S. Constituyen un grupo
de sustancias muy heterogéneas con características químicas diversas, pero con
algunas propiedades físicas comunes, que podrían resumirse en estas dos:
_ Son mayoritariamente insolubles en agua.
_ Son solubles en disolventes orgánicos, tales como éter, cloroformo, alcanos (ej:
hexano), benceno, acetona y alcoholes.
Céridos
Complejos Fosfolípidos
Glucolípidos
Esteroides
Prostaglandinas
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.
Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos.
Reactivos Materiales Cantidad
Aceite de girasol Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15
NaOH Estufa 1
Probeta 100 ml
Balón aforado de 25 ml
Agitador de vidrio
Balanza analítica
+
Observar y tomar apuntes de los Agite los tubos
cambios.
+
Dejar en reposo.
SAPONIFICACIÓN
Muchos lípidos, como por ejemplo: los ácidos grasos, reaccionan con bases fuertes,
NaOH o KOH, dando sales sódicas o potásicas que reciben el nombre de jabones.
Esta reacción se denomina de saponificación. Son saponificables los ácidos grasos o
los lípidos que poseen ácidos grasos en su estructura.
Agitar.
10 minutos.
con 3 mL de
2 Aceite Tinta roja Agregar 3mL de aceite vegetal.
vegetal
Colaborativo
El Grupos entrega el informe de laboratorios con :
La portada, introducción desde donde plantea los objetivos, muestra resultado, concluye y
reporta la bibliografía en normas APA.
Contesta cuestionarios
Resolución de los ejercicios
Entrega informe a tiempo
Aporta información adicional.
Incluye gráficos y fotografías
Elabora las conclusiones con “dificultades y propuestas de mejora”.
3. Lineamientos generales del trabajo colaborativo para el desarrollo del
componente práctico
Planeación
de Leer la guía del componente práctico, asistir a la fecha programada
actividades por la universidad en cada centro. Establecer el grupo de trabajo
para el para el componente práctico. Participar en la construcción del
desarrollo documento a entregar como informe de la actividad.
del trabajo
colaborativo
Roles a
desarrollar
por el Los integrantes del grupo realizan el desarrollo de las prácticas,
estudiante toman los datos y participan en la construcción del documento
dentro del final.
grupo
colaborativo
Roles y
responsabilid
ades para la Los estudiantes del grupo colaborativo entregan un producto final
producción llamado informe de laboratorio. Para este propósito es necesario la
de participación de sus integrantes, tanto en el trabajo del laboratorio
entregables como en el análisis de la información posterior a esta actividad.
por los
estudiantes
Uso de
Para referenciar los documentos debe hacer uso de la Norma APA.
referencias
En el acuerdo 029 del 13 de diciembre de 2013, artículo 99, se
considera como faltas que atentan contra el orden académico, entre
otras, las siguientes: literal e) “El plagiar, es decir, presentar como
de su propia autoría la totalidad o parte de una obra, trabajo,
documento o invención realizado por otra persona. Implica también
Políticas de
el uso de citas o referencias faltas, o proponer citad donde no haya
plagio
coincidencia entre ella y la referencia” y liberal f) “El reproducir, o
copiar con fines de lucro, materiales educativos o resultados de
productos de investigación, que cuentan con derechos intelectuales
reservados para la Universidad.
Las sanciones académicas a las que se enfrentará el estudiante son
las siguientes:
a) En los casos de fraude académico demostrado en el trabajo
académico o evaluación respectiva, la calificación que se
impondrá será de cero punto cero (0.0) sin perjuicio de la
sanción disciplinaria correspondiente.
b) En los casos relacionados con plagio demostrado en el trabajo
académico cualquiera sea su naturaleza, la calificación que se
impondrá será de cero punto cero (0.0), sin perjuicio de la
sanción disciplinaria correspondiente