Efecto Antibacteriano in vitro del sangre de grado (croton lechleri) frente

a Staphylococcus aureus
1 1 1 1
Arroyo Rojas, Yenny . Cáceres Fassbender, Edmundo . Chacón Torrico, Horacio . Diaz Cáceres, Carlos .
1 1 1 1
Gómez Aliaga, Jesús . Meza Alayo, Antonio . Misa Aversa, Rodrigo . Valerga Martinez, Ximena .
2
Valdivia Paz Soldán, Elfer

RESUMEN
La sangre de grado es un producto natural, obtenida del árbol Croton lechleri, el que ha sido
usado por nativos, para curar sus males, desde épocas prehispánicas, y hasta la actualidad. En
las últimas décadas, con la importancia que empezó a cobrar la medicina y los productos
naturales, este producto se rescató y empezó a comercializar, teniendo supuestamente
actividad cicatrizante, antibacteriana, antiulcerosa y antipalúdica. No obstante estos datos
solían ser empíricos. Es por tal motivo que se han venido realizando estudios para comprobar o
descartar esta creencia acerca de la actividad del Croton lechleri con muy buenos resultados.
Objetivos: Demostrar el efecto antibacteriano del Croton lechleri sobre una cepa de
Staphylococcus aureus, midiendo el halo de inhibición que se produce. Materiales y Métodos:
Se realizó un prueba de inhibición bacteriana por pocillos en un agar de Müller Hinton, y
usando diversas diluciones del Croton lechleri y al centro se colocó una dilución de Megacilina
intramuscular (Clemizol con Penicilina V 1’000,000 UI), como medicamento referente. Se utilizó
Megacilina debido a que está indicado su uso contra Staphylococcus aureus como
medicamento de primera línea. Los resultados fueron analizados al día siguiente realizado el
cultivo, para evitar muerte de la bacteria debido a la vejez del cultivo. Resultados: aún no se
tienen. Conclusiones: Aun falta.

Palabras Clave: Croton lechleri, sangre de grado, Staphylococcus aureus, inhibición por
pocillos, efecto antibacteriano in vitro.

Dragon’s blood (Croton lechleri’s) antibacterial in vitro effect against

Staphylococcus aureus

ABSTRACT
Dragon’s blood is a natural product, obtained from crotón lechleri’s tree, which has been used
by natives to fix their sickness, since prehispanic times, and to actual times. In recent decades,
with the increasing importance of the natural medicine and products, this compound regained
and started being selled, supposedly having scar tissue, antibacterial, antiulcer and antimalarial
activity. Nevertheless this data used to be only empiric. Therefore, investigations have been
made to corroborate or dismissed this believe about croton lechleri’s activity with very good
results. Objectives: Evidence croton lechleri’s antibacterial effect against a Staphylococcus
aureus strain, measuring the produced inhibition halo. Materials and Methods: Bacterial
inhibition test by wells was realize in a Muller Hinton agar, using different cronton lechleri
concentration and in the middle a dilution of intramuscular Megacilin (Clemizol with Penicilin V
1’000,000 IU), been this the reference drug. Megacilin was use because it’s a first line drug
against Staphylococcus aureus. The results were analized the next day to avoid bacterial death
because of crop’s old age. Results: In process. Conclusions: Not yet.

Key Words: Croton lechleri, dragon’s blood, Staphylococcus aureus, wells inhibition test, in
vitro antibacterial effect.

1
Alumnos de la facultad de Medicina de la Universidad Científica del Sur
2
Profesor de la Universidad Científica del Sur (Colaborador del proyecto)

Efecto antibacteriano de la Sangre de Grado in Vitro frente a Staphylococcus aureus 1

INTRODUCCIÓN
La presente investigación se basa en el
posible efecto que tiene la sangre de grado
en las infecciones bacterianas por
Staphylococcus Aureus. Se busca conocer
y corroborar sus efectos mediante un
procedimiento experimental sencillo,
usando diferentes concentraciones para
observar de qué manera y en qué grado
logra inhibir el crecimiento y proliferación
bacteriana.
La justificación de este proyecto de
investigación, es el haber conocido
historias y anécdotas del antiguo y aún
común uso empírico de la "Sangre de
Grado”. Dicha sábila, obtenida del árbol
“Croton Lechleri” se dice, cura heridas,
hinchazones, infecciones y ulceras. En los
últimos años muchas investigaciones
dilucidaron y corroboraron sus muchos
efectos y mecanismos. Con esta
investigación se aporta, aunque de una
manera muy modesta, más conocimiento
acerca de las propiedades curativas de la
“Sangre de Grado”.
La sangre de grado es un producto de la
Amazonía peruana obtenido de la savia de
1
un árbol llamado Croton Lechleri.
Desde la época prehispánica ha sido
utilizada la sangre de grado por los nativos
de la selva peruana como un tratamiento
efectivo para sus males. La eficacia de
dicho compuesto ha sido tal, que hoy en
día es utilizada la sangre de grado en todo
el mundo como una medicina natural
efectiva. Su uso se ha extendido tanto por
la población que ha generado muchas
investigaciones para determinar los
componentes y sus mecanismos, tanto en
los países en vías de desarrollo donde se
utiliza empíricamente como en países más
desarrollados.. Usualmente se le utiliza
como cicatrizante para curar heridas a nivel
tópico aunque últimamente se ha
investigado bastante su acción sobre las
2
úlceras gástricas por Helicobacter pylori.
La Sangre de Grado o también llamada
Sangre de Drago es una resina amarillenta
o rojiza que se extrae de la corteza de un
Efecto antibacteriano de la Sangre de Grado in Vitro frente a Staphylococcus aureus
árbol (Croton Lechleri). Este árbol de gran
tamaño (entre 10 a 20 metros) que crece a
lo largo de los trópicos y las regiones del
Amazonas de América del Sur La usan las
tribus indígenas en nuestro país por vía
oral y tópica como cicatrizante de heridas,
leucorrea, fracturas y también en la
medicina folclórica brasileña, para
enfermedades intestinales y úlceras
gástricas.
3
Los constituyentes químicos de varias
especies del género Croton han sido
estudiados arduamente. Los metabolitos
secundarios característicos son las
proantocianidinas, las cuales constituyen
90 % del peso seco y mucho componentes
polifenólicos como el catechin, epicatechin,
gallocatechin, epigallocatechin y
procianidinas B-1 y B-4. Trabajos en C.
lechleri llevaron al aislamiento del alcaloide
taspina. Se cree que la Taspina y el 3’,4-
O-dimetilcedrucin son los responsables del
efecto cicatrizante de la Sangre de grado,
por sus efectos estimulatorios a nivel
celular.
4
La sangre de grado o drago es utilizada
tradicionalmente para desinfectar heridas y
a combatir heridas dados sus activos
componentes. Así pues en diversas fuentes
se refiere su uso también como antiséptico
vaginal y en daños de la mucosa bucal
como también analgésico, antiinflamatorio y
8
regenerador tisular.
En diversas investigaciones científicas se
ha demostrado el efecto antibacteriano de
la sangre
1,5,6,7,9
de grado por medio de
pruebas in vitro midiendo los halos de
inhibición del crecimiento que se formaban
alrededor del compuesto en caldos de
cultivo.
Se ha llegado a determinar el efecto
bactericida que ejerce la sangre de grado
sobre el Helicobacter Pylori, hecho que
demostró que la aplicación oral de Sangre
de grado tiene un efecto verdadero sobre
las úlceras gástricas producidas por el
Helicobacter Pylori.
Diversos estudios subsiguientes han
dejado de manifiesto que la sangre de
2
grado tiene un efecto inhibitorio
predominante sobre las bacterias gram
9 1
positivas como el Staphylococcus aureus.

4 5 2
MATERIAL Y METODOS

Los materiales utilizados en la realización

de la investigación fueron: 5 pipetas
estériles de 1 ml, 5 chupones, 10 tubos de 3
13 x 100 estériles tapa rosca, 3
sacabocados estériles, 8 hisopos estériles,
1 micro pipeta de 20-100 ml, 5 tubos con Figura 1
agua destilada estéril,1 bombín y 3 agares
Las diferentes concentraciones 65%, 75%,
Müller Hinton.
85% de Sangre de Grado se obtuvieron
Por otro lado las diversas diluciones de mediante la fórmula:
Sangre de grado fueron: al 95% (pura), al
(vol.1) * (con.1) = (Vol.2) * (Con.2)
85% (0.89 ml. + 0.11 ml. agua destilada), al
75% (0.78 ml. + 0.22 ml. agua destilada) y
Se utilizó como diluyente agua destilada
al 65% (0.68 ml. + 0.32 ml. agua destilada).
estéril para no contaminar la muestra
El procedimiento experimental fue realizado
(figura 2). Mediante la ayuda de una micro
dentro de las instalaciones del laboratorio
pipeta y en condiciones estrictamente
de microbiología de la Universidad
estériles se retiró 30 µl de los tubos de
Científica del Sur bajo la supervisión del
ensayo de las diferentes concentraciones y
profesor Elfer Valdivia Paz Soldán. La cepa
se colocaron en los orificios del agar de
bacteriana utilizada para el experimento fue
Müller Hinton previamente sembrados con
el Staphylococcus aureus, que fue brindada
el Staphylococcus aureus. En el orificio 1
por el departamento de microbiología de la
se colocó Sangre de grado al 95%, en el 2
universidad. Para el desarrollo de esta
al 85%, en el 3 al 75%, en el 4 al 65% y en
investigación se utilizaron 3 agares Müller
el 5to orificio se colocó la Megacilina como
Hinton, en los cuales se realizaron 5
probando. El resultado se observó 1 día
orificios con el sacabocado por cada agar.
después del sembrado.
Cada orificio rotulado con un número
correspondiente 1, 2, 3, 4 y 5 (figura 1). 95% 85% 75% 65%
Luego se procedió a realizar la siembra de
0.89 ml. + 0.11 ml.

0.68 ml. + 0.32 ml.

0.78 ml. + 0.22 ml.

Staphylococcus aureus previamente diluido

agua destilada.
agua destilada

agua destilada

Megacilina

en el caldo BHI para su activación,

Pura

mediante el método estriado con un hisopo

estéril.

A continuación se realizaron las diluciones

de Sangre de Grado a partir de una
muestra al 95% (de cada 100ml, 95ml son
Figura 2
de Sangre de Grado y 5 ml de excipientes).

Efecto antibacteriano de la Sangre de Grado in Vitro frente a Staphylococcus aureus 3

RESULTADOS Placa 3

Placa 1 Placa 2 Placa 3

95% 31 mm 27 mm 21 mm
85% 29 mm 28 mm 26 mm
75% 33 mm 28 mm 24 mm
65% 36 mm 26 mm 24 mm
Megacilina 37 mm 31 mm 39 mm

Placa 1

Buen crecimiento bacteriano con patrón

diferenciado a las dos placas anteriores y
aparición de colonias resistentes.

Fotos

Halos de inhibición bien definidos por buen

crecimiento bacteriano en la placa.

Placa 2

Halos de inhibición no tan bien definidos

por menor crecimiento bacteriano.

Efecto antibacteriano de la Sangre de Grado in Vitro frente a Staphylococcus aureus 4

DISCUSIÓN
Se analizaron los resultados de las 3
placas petri pasadas 23 horas, y se pudo
observar un gran halo de inhibición sobre
todo en el caso de la megacilina, lo que
demuestra que esta era una cepa sensible.
En la tercera placa petri, se empezó a
formar un cierto tipo de resistencia frente a
la sangre de grado, esto se pudo
comprobar, al ver cierto crecimiento dentro
del halo de inhibición, aunque no se puede
hablar de resultados concluyentes, dada
que esta proliferación fue mínima.
También pudimos observar que la
megacilina siempre tuvo un mayor halo de
inhibición a las diversas concentraciones
de sangre de grado, pero dentro de estas
concentraciones no se obtuvieron
resultados abismales.
CONCLUSIÓN
Muchas cosas se pueden concluir con los
interesantes resultados del presente trabajo
de investigación. El punto más importante
ha sido la corroboración del efecto
antibacteriano sobre el Staphylococcus
aureus de la sangre de grado a diferentes
concentraciones. Esto, realizado mediante
adecuadas técnicas de asepsia y una
correcta metodología científica.
Siendo la sangre de grado un agente anti-
estafilocócico lo convierte automáticamente
en una terapia alternativa y natural a
diferentes males (cutáneos
preferentemente) producidos por
Staphylococcus aureus como el impétigo,
la foliculitis, forúnculos, carbunco e
infecciones a heridas. Aún no hay estudios
sobre la absorción de la sangre de grado ni
su toxicidad a nivel sistémica por lo cual no
se puede afirmar ni negar todavía un
empleo para infecciones sistémicas. El
parecido del diámetro del halo de inhibición
en el uso de Megacilina y sangre de grado
demuestra su gran poder inhibitorio y
alienta a pensar que su uso como
antibiótico tópico puede ser muy útil.
Efecto antibacteriano de la Sangre de Grado in Vitro frente a Staphylococcus aureus
También podemos concluir, que podemos
usar la sangre de grado no solo con el
objetivo de lograr una cicatrización de los
tejidos, sino también con objeto de evitar
infecciones oportunistas por
Staphylococcus aureus, al tener esta
acción contra este microorganismo.
Al analizar los halos de inhibición en los
resultados no se observó ningún patrón
decreciente al ir disminuyendo la sangre de
grado lo que nos dejaría dos posibles
conclusiones: 1) El patrón decreciente
existiría si se hubiera utilizado una cantidad
mayor de placas Petri para evitar errores
experimentales o 2) El efecto
antibacteriano de la sangre de grado es tan
potente que hasta el 65% de dilución no
disminuye su poder y para poder ver este
patrón decreciente habría que realizar
nuevas pruebas con concentraciones aún
más bajas.
Por último se remarca en esta investigación
las interesantes y muy útiles propiedades
que posee esta sábila utilizada sabiamente
por los antiguos habitantes de la selva
peruana durante muchos siglos antes de la
conquista. El efecto anti Helicobacter pylori
ha sido demostrada muchas veces, ahora
ha sido demostrado de manera rotunda su
poder antiestafilocócico. Entonces se
puede decir, desde el humilde punto de
vista académico de la presente
investigación que esta sábila evaluada es
capaz de ser empleada en multitudes de
infecciones tanto del tracto del tubo
digestivo y a nivel cutáneo.
Para finalizar, definiremos como vemos
luego del trabajo de investigación a la
Sangre de grado y sus perspectivas a
futuro: un medicamente que por un precio
barato, una farmacocinética poco tóxica (al
parecer) puede ofrecer grandes beneficios
sanitarios a los pacientes y beneficios
económicos a nuestro país por tener una
de las mayores reservas de Croton lechleri
en caso se extienda más de lo que ya está.
Es un patrimonio de la amazonia peruana
que no se debe desperdiciar.
5
REFERENCIAS
1. Tamariz Ortiz J; Capcha Mendoza R;
Palomino Cadenas E; Aguilar Olano J.
Actividad antibacteriana de la sangre
de Grado (Croton lechleri) frente al
Helicobacter pylori.
Rev Med Hered 2003; 14(2):81-88.
9. Huapaya Yaya J; Flórez Flores M;
Larrea Castro H.
Control microbiológico y evaluación de
la actividad antibacteriana in Vitro de
croton lechleri “Sangre de grado”.
Horizonte Médico 2003; 3(1-2)

2. Sandoval M; Ayala S; Oré R; Arroyo J.

Inducción de la formación de moco
gástrico por sangre de grado.
Anales de la Facultad de Medicina
2002; 64(4):251-256

3. Milanowsky DJ; Winter RE; Elvin-Lewis

MP; Lewis WH.
Geographic distribution of the alkaloid
chemotypes of Croton lechleri.
J. Nat. Prod., 2002, 65 (6):814–819.

4. De Marino S; Gala F; et al.

Identification of minor secondary
metabolites from the latex of Croton
lechleri (Muell-Arg) and evaluation of
their antioxidant activity.
Molecules 2008 Jun 1;13(6):1219-29.

5. León K, Santiago J.
Propiedades antimicrobianas de
películas de quitosano-alcohol
polivinílico embebidas en extracto de
sangre de grado.
Rev. Soc. Quím. Perú; 73(3):158-165

6. Gueorguieva MP; Chumacero MM.

Pasta terapéutica anti-A. Producto (2da
parte).
Odontol. Sanmarquina 2006; 9(2)

7. Gálvez Calla LH; Mendoza Rojas A.

Capacidad bactericida de pastas
experimentales Anti-A: Estudio in Vitro.
Odontología Sanmarquina. Odontol.
Sanmarquina 2001; 1(7)

8. Sangre de drago, la savia que cura.

[Citado 2009 set 20]. Disponible en:
http://www.alimentacion-
sana.com.ar/informaciones/novedades/
drago.htm

Efecto antibacteriano de la Sangre de Grado in Vitro frente a Staphylococcus aureus 6