TEMA 10: RECOMBINACIÓN GENÉTICA
Dr. Pedro F. Mateos
I. OBJETIVOS
La recombinación genética es un
proceso que lleva a la obtención de un
nuevo genotipo a través del
intercambio de material genético entre
secuencias homólogas de DNA de dos
orígenes diferentes. La información
genética de dos genotipos puede ser
agrupada en un nuevo genotipo
mediante recombinación genética. Por
lo tanto la recombinación genética es
otra forma efectiva de aumentar la
variabilidad genética de una población.
Las ventajas de la recombinación
genética son:
(i) Diferentes cepas superproductoras
pueden ser reunidas en una sola cepa,
de forma que el efecto acumulativo de
estas mutaciones puede ser mayor que
el efecto de una sola mutación. Sin
embargo, la esperanza inicial de
obtener un aumento significativo en el
rendimiento por simple recombinación
de dos mutantes de alta producción
sólo ha sido conseguida en unos pocos
casos. En la mayoría de los casos, la
productividad de los recombinantes
generalmente es intermedia entre los
valores de las cepas parentales.
(ii) En el curso del desarrollo de cepas
existe frecuentemente un descenso en
el aumento del rendimiento después de
cada etapa de mutación. Además de los
mutantes que son enriquecidos
selectivamente debido a su aumento en
la productividad, existe un desarrollo
de mutaciones que no se detectan que
impiden un aumento adicional en la
producción de metabolitos a través de
influencias pleiotrópicas. Con cruces
genéticos, estos alelos mutantes
desfavorables pueden ser reemplazados
por alelos de uno de los padres del
cruce.
(iii) Las cepas de alta producción
pueden realmente aumentar el coste de
la fermentación debido al cambio de
las propiedades fisiológicas (mayor
producción de espuma, cambio en los
requerimientos del medio de cultivo,
etc.). Cruzando de nuevo la cepa con la
cepa silvestre pueden obtenerse cepas
de alta producción con propiedades
mejoradas de fermentación.
II. RECOMBINACION GENÉTICA
Como ya hemos dicho, la
recombinación genética es un proceso
que lleva a la obtención de un nuevo
genotipo a través del intercambio de
material genético entre secuencias
homólogas de DNA de dos orígenes
diferentes. Las secuencias homólogas
de DNA tienen la misma secuencia o
casi la misma; por consiguiente, puede
ocurrir apareamiento de bases en una
longitud extensa de las dos moléculas
de DNA. Los cromosomas homólogos
tienen los mismos genes ubicados en el
mismo sitio. Sin embargo, los genes,
aunque similares, pueden no ser
necesariamente idénticos como ocurre
cuando existe una mutación en un gen.
Para que aparezcan nuevos genotipos
como consecuencia de la
recombinación, es esencial que las dos
secuencias homólogas sean
genéticamente diferentes. Tal es el
caso en una célula eucariótica diploide,
que tiene dos juegos de cromosomas,
uno procedente de cada padre. El punto
donde los cromosomas se cruzan se
denomina kiasma y el proceso de
intercambio se llama entrecruzamiento.
48

Recombinación genética en células
diploides
En las células procariotas sólo existe
un único cromosoma. Por lo tanto,
antes de que pueda ocurrir la
recombinación, un cromosoma
homólogo (normalmente una parte de
este) debe primero ser transferido
desde una bacteria donadora a una
bacteria receptora. Debido a que el
cromosoma del donador debe ser
homólogo con el receptor, las bacterias
donadoras y receptoras generalmente
pertenecen a la misma especie o a
especies muy relacionadas.
Recombinación genética en bacterias
La recombinación homóloga ocurre
después de la transferencia es decir,
cuando el fragmento de DNA del
donador está en la célula receptora. Si
no se produce recombinación, el
fragmento de DNA del donador se
perderá, debido a que no puede
replicarse independientemente.
III. RECOMBINACIÓN GENÉTICA
EN BACTERIAS
La recombinación genética en bacterias
tiene lugar cuando se transfieren
fragmentos de DNA homólogo desde
una célula donadora a una célula
receptora por uno de estos tres
procesos:
1.- Transformación: supone que el
DNA donador se encuentra libre en el
medio.
49
 3.- C o n j u g a c i ó n : donde la
transferencia implica un contacto
célula-célula y la presencia de un
plásmido conjugativo en la célula
donadora.

Transformación

2.- T r a n s d u c c i ó n : donde la
transferencia del DNA donador está
mediada por un virus. Conjugación

Transducción Células Hfr

50
IV. RECOMBINACION GENETICA
EN HONGOS
Los hongos tienen dos tipos distintos
de procesos de recombinación genética
que pueden ser utilizados en un
programa de mejora de cepas. Son
conocidos como ciclos sexual y
parasexual.
A.- Recombinación sexual
Algunos hongos utilizados
industrialmente (A s p e r g i l l u s ,
Claviceps, Saccharomyces) tienen un
ciclo sexual completo. En estos
organismos la fusión nuclear
(cariogamia) conduce a la mezcla de
núcleos en el organismo diploide.
Después de la formación de diploides
tiene lugar la recombinación durante el
proceso subsecuente de meiosis. Se
produce un nuevo genotipo, bien de la
combinación de los cromosomas
parentales o mediante el
entrecruzamiento de cromosomas
homólogos.
Ciclo de vida de levaduras
B.- Recombinación parasexual
Algunos de los hongos
económicamente útiles como
Penicillium chrysogenum (productor
de penicilina) y C e p h a l o s p o r i u m
acremonium (productor de
cefalosporina) no tienen ciclo sexual.
En la parasexualidad, la fusión de dos
hifas de igual o de diferente polaridad
resulta en un micelio con núcleos de
ambas cepas parentales. Este
heterocarionte es normalmente estable,
con los núcleos mezclados pero no
interaccionan. Sin embargo, en casos
raros (10-7-10-6 en P e n i c i l l i u m
chrysogenum) se produce la fusión
nuclear y se forma un núcleo diploide.
En tales núcleos diploides puede
producirse el entrecruzamiento entre
cromosomas homólogos, lo que origina
la recombinación genética. Para
obtener un recombinante debe
producirse la formación de células
haploides o esporas. La haploidización
espontánea es relativamente rara (10-3)
pero puede ser inducida con p-
fluorofenilalanina.
Recombinación parasexual
51

V. FUSION DE PROTOPLASTOS
Los protoplastos son células de las que
se ha eliminado la pared celular por
tratamiento con enzimas. Para las
bacterias se utiliza la lisozima,
mientras que para hongos se utiliza
quitinasa o celulasas. Los protoplastos
deben ser estabilizados contra la lisis
por resuspensión en un medio que
contenga un estabilizador osmótico
como la sacarosa. La fusión de
protoplastos normalmente es rara
debido a la fuerte carga negativa de la
superficie del protoplasto, pero en
presencia de polietilenglicol (PEG) los
protoplastos se agregan y se produce la
fusión acompañada por intercambio de
DNA. Después de la fusión se permite
la regeneración de la pared celular de
tal manera que en la progenie
regenerada exista un número
significativo de recombinantes.
Fusión de protoplastos
También se puede inducir la fusión
mediante la aplicación de un campo
eléctrico lo que se denomina
electrofusión. Cuando las células son
colocadas en un campo eléctrico con
corriente alterna se desarrollan
orificios pasajeros en la membrana
plasmática, lo que facilita el proceso de
fusión de membranas y la fusión
celular. La velocidad de fusión es de
aproximadamente el 80-90%, más alta
que el 60% obtenido con PEG.
Además de su uso en la fusión de
protoplastos de plantas, la
electrofusión puede ser también
utilizada con protoplastos de levaduras
y hongos. Sin embargo, la fusión de los
pequeños protoplastos bacterianos es
más difícil de conseguir.
La fusión de protoplastos se utiliza con
los siguientes fines:
a.- Recombinación intraespecífica de
cepas que carecen de sistema sexual o
parasexual, o cuya frecuencia de
recombinación es demasiado baja.
b.- Hibridación interespecífica para
obtener organismos completamente
nuevos capaces de sintetizar
metabolitos modificados. El uso de la
fusión de protoplastos para este
objetivo está siendo examinado por
diferentes productores de antibióticos.
Entre los hongos se han intentado
cruces interespecíficos entre varios
obteniéndose recombinantes en el
cruce entre Penicillium cyaneofulvum
X Penicillium citrimum aunque con
una frecuencia muy baja (10-5). La baja
frecuencia de fusión heteroespecífica
puede ser debida a que la falta de
homología del genoma impide que
tenga lugar la recombinación o bien a
la presencia de sistemas de
restricción/modificación que llevan a
la incompatibilidad fisiológica.
52