UNIVERSIDAD ANDRES BELLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

BIOL-035

GUÍA Nº 6:
MITOSIS, MEIOSIS Y FECUNDACIÓN
 INTRODUCCIÓN

Tal como enuncia la Teoría Celular “todos los organismos están compuestos de células y
todas las células provienen de una célula preexistente”. La capacidad de reproducirse es
una propiedad fundamental de la célula, la cual está finamente regulada, de modo que la
información genética se conserve y se mantenga un equilibrio y una continuidad
genealógica entre las células preexistentes y las células nuevas.

Objetivo General del laboratorio:

Reconocer las diferentes etapas de la división celular, señalando las características más
relevantes de cada fase.
Reconocer los procesos de gametogénesis, identificando los diferentes tipos celulares
involucrados.
Identificar algunas características del proceso de fecundación.

CICLO CELULAR

Así como los seres superiores cumplen con un ciclo de vida en el que nacen, crecen, se
reproducen y mueren, las células en crecimiento pasan por el llamado Ciclo Celular. Éste
comprende dos etapas fundamentales, la interfase y la división propiamente tal, que ocurre
por los procesos de mitosis o meiosis (Fig. 1).

La interfase es el período más largo del ciclo celular y corresponde al tiempo que toma una
célula entre una división mitótica y la siguiente, o sea que puede entenderse como un
período en el cual la célula se prepara para dividirse. Durante este tiempo, la célula
aumenta lentamente su tamaño y duplica su material genético en una secuencia ordenada de
eventos que pueden subdividirse en tres etapas principales, G1, S y G2.

Después de una división celular, las células hijas resultantes comienzan la interfase de un
nuevo ciclo celular en la etapa G1. Durante esta etapa la célula retoma su actividad
biosintética que durante la mitosis es muy baja, llevándola nuevamente a sus niveles
normales. Luego, la célula puede continuar hacia la fase S o detener la progresión del ciclo
celular en la fase G0.En la etapa G0 la célula entra en reposo y la división celular cesa, el
mejor ejemplo conocido de células que se detienen en esta etapa son las neuronas y las
células del musculo cardiaco. Por el contrario, las células que continúan la progresión por
el ciclo celular pasan a la fase S. Ésta es una etapa de síntesis, en la cual la célula sintetiza
ADN y termina cuando el contenido de ADN se ha duplicado y los cromosomas se han
replicado. La etapa siguiente es G2, en ella la célula se prepara para su división mediante
un período de rápido crecimiento y un punto de control que determina si el ADN necesita
ser reparado por daños desde la última división, por lo que la división no continúa mientras
no se complete la reparación del ADN; si el daño en el ADN es muy extenso, la célula
entra en un proceso de “apoptosis” o muerte celular programada.
Después de esta serie de etapas la célula se encuentra lista para una nueva división,
entrando en la fase M (mitosis).
 FIGURA 1: Ciclo celular completo.

MITOSIS

Durante la mitosis una célula se divide y da origen a dos células hijas diploides
genéticamente iguales entre sí. Lo que ocurre con el material genético es una separación
equitativa de dos conjuntos cromosómicos iguales entre sí y al de la célula original. Esto es
posible gracias a que en la fase S de la interfase el material genético y las proteínas que
constituyen la cromatina han sido duplicados. La mitosis completa de una célula demora
aproximadamente una hora, durante la cual ocurren muchos eventos diferentes, los que se
han agrupado en 4 etapas (Fig. 3):

1. Profase: Dentro del núcleo la cromatina se condensa para formar los

cromosomas. Al principio éstos se ven como filamentos largos y finos, pero al
término de la profase son más cortos y gruesos, ubicándose cerca de la envoltura
nuclear. Los centríolos se han duplicado y se encuentran en polos opuestos de la
célula. Finalmente, la envoltura nuclear se rompe y la profase termina.

2. Metafase: Los cromosomas condensados al máximo se ubican en el centro o

ecuador de la célula gracias a la ayuda del huso mitótico, que es un complejo
conjunto de microtúbulos que se orientan de polo a polo de la célula cerca de los
centríolos. Los microtúbulos se unen a los cromosomas al insertarse en el
cinetocoro de cada centrómero. Durante la metafase cada cromosoma está
compuesto por dos cromátidas, cada una de las cuales posee un cinetocoro (Fig. 2).
 FIGURA 2: Esquema de un cromosoma metafásico.

3. Anafase: La característica principal de esta etapa es el movimiento de los

cromosomas hacia los polos de la célula. Esto ocurre gracias al acortamiento de
los microtúbulos del huso mitótico.

4. Telofase: Sobre los cromosomas que están en los polos de la célula se forma la
envoltura nuclear. La cromatina se descondensa y el núcleo aumenta de tamaño
por hidratación. El núcleo resultante es esférico y en él se puede observar el
nucléolo.

Citodiéresis: En células animales esta etapa ocurre por un estrangulamiento del sector del
citoplasma que se encuentra entre los dos núcleos nuevos gracias a una gran concentración
local de microfilamentos, lo que implica un gasto de energía. En células vegetales existe la
pared celular y esta etapa ocurre por la formación de un tabique entre los dos núcleos
nuevos. El tabique se forma por vesículas del sistema de Golgi y finalmente se forman las
dos membranas plasmáticas a cada lado del tabique, quedando completa la división celular.

FIGURA 3: Esquema general de la mitosis.

MEIOSIS

En todos los ciclos de reproducción sexual la nueva generación de individuos se origina por
la fusión de dos células haploides que provienen de los organismos progenitores. Estas
células son los gametos y se obtienen mediante el proceso de meiosis que ocurre en todos
los organismos de reproducción sexual. La meiosis implica la producción de células
haploides, las que se mantienen como tales hasta el momento de la fecundación, en el que
los gametos se fusionan y el nuevo organismo obtiene un estado diploide. La meiosis
ocurre sólo en las células germinales de las gónadas y da como resultado óvulos o
espermios, (según el sexo del organismo) a través del proceso de gametogénesis.

La meiosis implica una etapa de duplicación del ADN y dos divisiones celulares
sucesivas para formar así cuatro células haploides que contienen la mitad del material
genético original a partir de cada célula que entra en este proceso. Los eventos más
destacados de la meiosis son: duplicación del ADN nuclear, apareamiento de los
cromosomas homólogos, dos divisiones celulares sucesivas y finalmente, la formación de
células hijas haploides.

Durante este proceso hay una activa transcripción y síntesis de proteínas celulares,
produciéndose una gran variabilidad genética que se obtiene gracias a los fenómenos de
“crossing-over” y permutación de los cromosomas, lo que asegura una muy baja
posibilidad de obtener gametos genéticamente iguales. Lo anterior es una ventaja al
momento de adaptarse a un medio dinámico en constante cambio y otorga la individualidad
de los organismos.

Un núcleo diploide contiene dos juegos de cromosomas muy similares entre sí, cada uno
de los cuales proviene de uno de los padres. Estas dos versiones de cada cromosoma son
los llamados cromosomas homólogos. Cuando los cromosomas se duplican por replicación
de ADN, las copias del cromosoma replicado en un principio permanecen fuertemente
asociadas y se llaman cromátidas hermanas.

En una división meiótica (Fig. 6) en que las células que se forman son haploides, cada
célula hija debe contener sólo un miembro de cada cromosoma homólogo, el de origen
materno o el de origen paterno, obteniéndose así sólo la mitad del número original de
cromosomas.

Después de la replicación del ADN, cada par de cromosomas duplicados se empareja con
su homólogo y forman una estructura llamada “bivalente” que posee cuatro cromátidas.
Cuando la primera división celular ocurre, cada célula hija contiene dos copias de uno de
los cromosomas homólogos. En la segunda división celular los cromosomas no se duplican;
sólo se ubican en el centro de la célula en el huso mitótico y las cromátidas hermanas se
dividen como en una mitosis normal.

La meiosis se divide en varias etapas, éstas se nombran de la misma forma que las etapas
de la mitosis, pero se les agrega un número I o II según se trate de la primera o segunda
división celular, así, la meiosis se divide en:
 I. Profase I: Ésta es la primera etapa de la meiosis y también es la de mayor duración.
En ella ocurre el proceso de “crossing-over” en el que los cromosomas homólogos
intercambian parte de su ADN por un proceso denominado recombinación
genética. Esto cambia el contenido del ADN de los gametos respecto al del
organismo progenitor y ocurre cuando los cromosomas homólogos se encuentran
muy juntos. Los lugares en los que ocurre recombinación se llaman quiasmas.

La profase está dividida en 5 etapas.

En el Leptoteno cada cromosoma se condensa, permaneciendo unido por sus extremos a la

envoltura nuclear. Los cromosomas ya se han replicado y consisten en dos cromátidas
hermanas que se encuentran muy juntas.

En el Cigoteno los cromosomas homólogos comienzan a aparearse por sus extremos en

puntos muy cercanos a la envoltura nuclear. Luego, como en una especie de cierre, los
cromosomas continúan apareándose para alinearse en toda su extensión, quedado los genes
homólogos enfrentados. Esta estructura se llama complejo sinaptonémico (Fig. 4), donde
los cromosomas homólogos así apareados son un bivalente que en realidad es una tétrada ya
que cada uno de los dos cromosomas está duplicado.

FIGURA 4: Complejo Sinaptonémico.

En el Paquiteno, que puede durar varios días, ocurren las recombinaciones en que se
intercambia el material genético de cada cromosoma con su homólogo.

En el Diploteno los cromosomas homólogos se desaparean, el complejo sinaptonémico se

deshace y los cromosomas homólogos quedan separados, aunque permanecen unidos a
través de los quiasmas. En esta etapa y en toda la profase I, ocurre síntesis de ARN.

En la Diacinesis la síntesis de ARN cesa, los cromosomas se condensan intensamente y se

sueltan de la envoltura nuclear que comienza a desaparecer. Los cromosomas homólogos
siguen unidos a través de los quiasmas (Fig. 5) en los lugares donde ha ocurrido
recombinación.
 FIGURA 5: Quiasmas.

En este punto termina la Profase I y comienzan las etapas de división celular propiamente
tal:

II. Metafase I: En esta etapa desaparecen los quiasmas. Los centríolos se encuentran
duplicados y se mueven hacia los polos de la célula. Se organiza el huso mitótico y
los cromosomas se ubican por pares homólogos en el centro de la célula, de modo
que cada cromosoma de un par homólogo se orienta hacia un polo diferente de la
célula, sin importar si es paterno o materno, lo que genera diferentes distribuciones
posibles de cromosomas, aumentándose la variabilidad genética del proceso.

III. Anafase I: Los cromosomas migran hacia polos opuestos de la célula,

segregándose los cromosomas homólogos en los extremos opuestos de ella, gracias a
la depolimerización y polimerización de los microtúbulos del huso mitótico.

IV. Telofase I: Alrededor de los cromosomas en cada extremo de la célula se

reconstituye la envoltura nuclear. La cromatina se descondensa y casi
simultáneamente, ocurre la división del citoplasma o citodiéresis.

Después de la primera división cada célula resultante tiene la mitad del número de
cromosomas original, pero cada cromosoma se encuentra duplicado y compuesto por
dos cromátidas hermanas. Ahora comienza la segunda división celular, sin que se
produzca una nueva duplicación del ADN.

V. Profase II: La cromatina se condensa nuevamente en cromosomas y la envoltura

nuclear desaparece.

VI. Metafase II: Los cromosomas se ubican en el centro de la célula y el huso mitótico
se une a ellos de modo que cada cromátida hermana se orienta hacia un polo
distinto de la célula.

VII. Anafase II: Cada cromátida hermana migra hacia un polo distinto de la célula.
VIII. Telofase II: Alrededor de los cromosomas en cada polo de la célula se
reconstituye la envoltura nuclear, se descondensan los cromosomas y ocurre la
división del citoplasma.

Cada célula resultante después de la segunda división meiótica es haploide, ya que

tiene sólo la mitad de los cromosomas originales de la especie y cada cromosoma tiene
sólo una cromátida.

FIGURA 6: La meiosis.
GAMETOGÉNESIS

La gametogénesis es el proceso por el cual se lleva a cabo la producción de gametos

masculinos (espermatozoides) o gametos femeninos (óvulos) y ocurre en las glándulas
sexuales o gónadas tanto en machos como en hembras una vez que estos han alcanzado la
maduración sexual.
El proceso de producción de gametos femeninos se denomina ovogénesis y el proceso de
producción de gametos masculinos se denomina espermatogénesis.
La ovogénesis ocurre en los ovarios y la espermatogénesis ocurre en los testículos,
específicamente en los túbulos seminíferos. Ambos procesos se inician a partir de células
germinales diploides. Tras dos divisiones sucesivas; meiosis I y meiosis II (explicadas con
anterioridad) se producen cuatro células con la mitad del material genético, entre las cuales
encontramos el óvulo y el espermatozoide (Fig. 7).

FIGURA 7: Esquema del proceso de Ovogénesis y Espermatogénesis

FECUNDACIÓN

En el proceso de fecundación (Fig. 8) los gametos haploides se fusionan para dar origen
a un nuevo organismo diploide. Cuando esto ocurre, el óvulo se activa para comenzar el
desarrollo del nuevo individuo y los núcleos de ambos gametos se fusionan para formar el
genoma del nuevo organismo.

FIGURA 8: Esquema del proceso de fertilización.

La fecundación es un proceso casi exclusivamente especie-específico, lo que quiere decir

que los espermios y óvulos de cada especie se reconocen entre sí a través de moléculas
especiales de adhesión, lo que impide que espermios de una especie fertilicen óvulos de
una especie diferente. Un ejemplo de excepción a este enunciado es el caso de la mula, la
cual resulta del cruce entre una yegua y un burro (organismos de distinta especie).

Aunque muchos espermios ataquen a un mismo óvulo (Fig. 9), un óvulo sólo puede ser
fecundado por un espermio. La poliespermia se encuentra bloqueada gracias a una
despolarización rápida de la membrana del óvulo, el cambio de las cargas a través de la
membrana impide que un segundo espermio pueda fusionarse. Esto es importante, porque
si más de un espermio inyecta su núcleo en un óvulo se forma más de un huso mitótico y la
segregación de los cromosomas durante la división celular es anormal, resultando en
embriones alterados o no viables.

FIGURA 9: Microfotografía electrónica de un óvulo rodeado de espermios.

La fertilización comienza cuando la cabeza de un espermio contacta la cubierta
gelatinosa de un óvulo. Esto gatilla en el espermio la llamada reacción del acrosoma, en la
que el contenido de la vesícula del acrosoma se libera al medio externo. Este proceso
consiste en enzimas hidrolíticas que ayudan a penetrar a través de la capa vitelina para llegar
a la membrana plasmática. Cuando las dos membranas plasmáticas entran en contacto se
fusionan, y así se produce la entrada del núcleo del espermio hacia el interior del óvulo.
Una vez fertilizado el óvulo pasa a llamarse cigoto.

Una vez que los dos pro-núcleos se encuentran en el interior del óvulo, deben migrar para
encontrarse y poder fusionarse. Este movimiento se realiza por medio del citoesqueleto. Los
cromosomas se juntan cuando las envolturas nucleares desaparecen en preparación a la
primera división celular, dando término al proceso de fecundación y comenzando el
desarrollo embrionario.

ACTIVIDADES PRÁCTICAS

A) Observación microscópica del proceso de fecundación in vitro de molusco

(Choromytilus chorus)

Los moluscos son organismos invertebrados que se caracterizan por presentar una concha
dura en la que el carbonato cálcico es el componente principal. La clase Bivalva,
comprende quizás las formas más populares como lo son las ostras, los mejillones
(choritos), las almejas, las arcas o pepitonas y las vieiras o pectínidos. Todas se caracterizan
por tener el cuerpo comprimido por dos valvas unidas dorsalmente por medio de un gozne o
ligamento, un pie muscular característico y una cavidad que encierran los órganos,
agrupados en una masa visceral rodeada por un manto, el cual secreta la concha calcárea
externa.

Dentro de los bivalvos existen especies que desarrollaron diversas especializaciones,

permitiéndoles vivir en distintos ambientes, ya sea en forma libre o fija a sustratos duros por
una estructura llamada biso (Fig. 10).

FIGURA 10: Esquema de la morfología externa e interna de un bivalvo tipo.

ACTIVIDAD PRÁCTICA N° 1:

Con el objeto de obtener especímenes de chorito adecuados para nuestro trabajo práctico,
se escogieron ejemplares vivos y se mantuvieron en un acuario con agua de mar filtrada,
suministrando una adecuada oxigenación del medio con una bomba de aire.

Una forma de detectar el sexo de los choros es mediante el color de las gónadas (amarillas
en los machos y rojizas en las hembras), ya que estos animales no presentan dimorfismo
sexual externo.

En los choritos las gónadas están compuestas por conductos ciliados ramificados desde
donde se abren numerosos sacos o folículos, se encuentran rodeando el intestino y están
muy próximas, siendo a veces muy difícil separarlas. Cuando las gónadas o el tejido
gonadal han alcanzado la plena madurez, son fáciles de ver y ocupan gran parte del cuerpo
blando del animal. Los gonoductos que transportan los gametos hasta la cavidad corporal
se desarrollan, aumentan de tamaño y se pueden observar a simple vista.

Una vez identificadas las gónadas se toma una muestra de gametos masculinos de los
ejemplares con gónadas amarillas, presionado suavemente sobre la gónada hasta poder
aspirar con una pipeta Pasteur la solución líquida que se libera. Este procedimiento permite
obtener espermatozoides maduros, los que deben ser depositados en un vaso de
precipitados pequeño. Repitiendo el mismo procedimiento con los ejemplares de gónadas
rojas o café oscuras (hembras), se obtienen óvulos maduros, los que al igual que en el caso
anterior, deben ser depositados en un vaso precipitado pequeño para su posterior
observación al microscopio.

Ya obtenidos los gametos se deben adicionar a cada vaso precipitado 2 ml de agua de mar
filtrada, con el objetivo de resuspender las células y evitar que se deshidraten.
En un tercer vaso precipitado se adicionará 1 ml de cada una de las soluciones de gametos
(óvulos y espermatozoides). Con una pipeta pasteur resuspenda suavemente con el objetivo
de que los gametos femeninos y masculinos entren en contacto. Utilizando esta
metodología hemos realizado una fecundación in vitro.

Realice preparaciones frescas de la solución de gametos femeninos, masculinos y de la

fecundación in vitro adicionando una gota de cada muestra sobre un porta objetos limpio y
seco. Cubra con un cubreobjetos y observe las preparaciones al microscopio con los
objetivos 4X, 10X y 40X.

Realice un dibujo esquemático de los gametos femeninos, masculinos y del proceso de

fecundación vistos con el objetivo 40X. Cada dibujo debe ser realizado dentro de un
círculo de 8cm de diámetro, indicando a un costado de éste, título de muestra; tipo de
muestra (temporal o permanente); tinción; aumento objetivo; aumento total y
observaciones. Anote los nombres de las estructuras identificadas en su observación.
B) Observación microscópica de preparaciones permanentes de tejidos vegetales
en distintas etapas de la mitosis.

ACTIVIDAD PRÁCTICA N°2:

Aplicando sus conocimientos de microscopía observe una preparación de células vegetales

de Allium cepa (L.) con el objetivo 100X e identifique en la muestra las distintas etapas de
la mitosis. Para la observación con el objetivo 100X recuerde utilizar el aceite de
inmersión.

Realice un dibujo esquemático que incorpore todas las etapas de la mitosis que ha
identificado. El dibujo debe ser realizado dentro de un círculo de 8cm de diámetro,
indicando a un costado de éste, título de muestra; tipo de muestra (temporal o permanente);
tinción; aumento objetivo; aumento total y observaciones. Anote los nombres de las
estructuras identificadas en su observación.

C) Observación microscópica de una preparación permanente de tejidos en

meiosis.

ACTIVIDAD PRÁCTICA N°3:

Aplicando sus conocimientos de microscopía observe con el objetivo 10X la preparación

de gametogénesis femenina y masculina en tejido ovárico y testicular de Rattus norvegicus
(Berkenhout)

Realice un dibujo esquemático que incorpore al menos tres células en distina etapa de
maduración durante la gametogénesis femenina y masculina. Cada dibujo debe ser
realizado dentro de un círculo de 8cm de diámetro, indicando a un costado de éste, título de
muestra; tipo de muestra (temporal o permanente); tinción; aumento objetivo; aumento
total y observaciones. Anote los nombres de las estructuras identificadas en su observación.

D) Observación microscópica de preparaciones permanentes de gametos

masculinos.

ACTIVIDAD PRÁCTICA Nº4:

Haciendo uso del objetivo 100X observe detalladamente la morfología de las células
espermatozoides de Bos taurus (Linnaeus) y Rattus norvegicus (Berkenhout). Para la
observación con el objetivo 100X recuerde utilizar el aceite de inmersión

Realice un dibujo que represente la muestra de espermatozoides de Bos taurus (Linnaeus)

y otro dibujo que represente los espermatozoides de Rattus norvegicus (Berkenhout).
Ambos dibujos deben ser realizados dentro de un círculo de 8cm de diámetro, indicando a
un costado de éste, título de muestra; tipo de muestra (temporal o permanente); tinción;
aumento objetivo; aumento total y observaciones. Anote los nombres de las estructuras
identificadas en su observación.
BIBLIOGRAFÍA

Biología Celular y Molecular. De Robertis y de Robertis.

11 ed., 2da impresión, 1998, Ed. El Ateneo, Bs. Aires.

Elementos de Biología Celular y Genética. Parte 3. Transmisión de la Información y

Reproducción. Varios Autores.1ª ed., 1985, Departamento de Biología Celular y Genética,
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Molecular Biology of the Cell. Alberts, Bray, Lewis, Raff Roberts & Watson. 3th ed., 1994,
Garland Publishing Inc., New York & London.

Zoología de los Invertebrados. Barnes, R., 2ª edición, 1969, Ed. Interamericana, México.

Histología humana. Stevens, Alan. 3ª edición, 2006.

Histología [recurso electrónico]: Texto y atlas color con biología celular y molecular.
Ross, Michael H. 5a. ed.; 2007.

Embriología Humana y Biología del Desarrollo. Bruce M. Carlson. . 3a edición, 2005.

 Materiales Laboratorio. Mitosis, Meiosis y Fecundación

Materiales por grupo (3 alumnos por grupo)

2 unidades de erizo negro o chorito maltón.
3 microscopios.
Preparaciones histológicas (1 de cada una):
Mitosis (catafilo de cebolla),
Corte de testículos,
Corte de ovario,
Muestra de espermatozoides de toro y rata.
1 Tijera.
1 pinza.
2 gotarios.
1 porta objeto escavado.
Cubre objetos
2 vasos pp. 50 ml
Lápiz rotulador

Por curso:
Agua de mar filtrada.
Televisor con microscopio.
3 Aceite de inmersión.
3 Solución limpiadora.
Papel óptico.