Actividad enzimática

Johan Nicolás Quintero¹, Dayana Suarez Trujillo2, Duvalier valencia³, Estudiantes

segundo semestre de biología, facultad de ciencias básicas, universidad de la
amazonia, informe.

RESUMEN
Se realizó la práctica de actividad enzimática en el laboratorio de biología de la
universidad de la amazonia; en la cual procedimos hacer dos pruebas que fueron
la hidrolisis de almidón por la amilasa; en ella obtuvimos resultados positivos con
presencia de almidón, que nos dio como resultado un color azul violeta oscuro,
por otro lado si no resultaba positiva se aplicaba la prueba de Fehling, que perite
reconocer la presencia de azúcares reductoras.
En esta práctica se conoció que las enzimas son proteínas globulares que
actúan como catalizadores biológicos, es decir incrementa la velocidad de una
reacción bioquímica; cada enzima cataliza un único tipo de reacción química, o
en el caso de ciertas enzimas, reacciones muy semejantes.
PALABRAS CLAVES: Prueba de Fehling, catalizadores, la hidrolisis de almidón

ABSTRAC:
The practice of enzymatic activity was carried out in the biology laboratory of
the University of Amazonia; in which we proceeded to do two tests that were the
hydrolysis of starch by the amylase; in it we obtained positive results with the
presence of starch, which gave us a dark blue-violet color, on the other hand if it
was not positive, the Fehling test was applied, which allows to recognize the
presence of reducing sugars.
In this practice it was known that enzymes are globular proteins that act as
biological catalysts, that is, they increase the speed of a biochemical reaction;
each enzyme catalyzes a single type of chemical reaction, or in the case of
certain enzymes, very similar reactions.
KEYWORDS: Fehling test, catalysts, the hydrolysis of starch
INTRODUCCION

El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción

catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los
inhibidores. Uno de los principales estudios que se realizan en una enzima es
medir el efecto en la velocidad de la reacción cuando se modifican las
concentraciones del sustrato y se mantienen constantes la concentración de
enzima, el pH, la fuerza iónica del medio, la temperatura, entre otros.( DILIA
GALVAN BORJA,2013)
Por lo tanto las reacciones químicas que se dan en los seres vivos no podrían
tener lugar sin la presencia de los enzimas. Estas macromoléculas, que
generalmente son proteínas, catalizan las reacciones bioquímicas, permitiendo
que los sustratos se conviertan en los productos que necesita la célula. Como
todo catalizador, los enzimas no se consumen en las reacciones que catalizan,
pero a diferencia de otros catalizadores de naturaleza inorgánica, las reacciones
que catalizan son muy específicas: sólo interaccionan con determinados
sustratos, y sólo facilitan el curso de determinadas reacciones.
Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa,
necesaria para descomponer el peróxido de hidrógeno, un compuesto tóxico,
que se produce durante el metabolismo celular (Rodrigo leviman, 2012)
Por lo tanto en la siguiente práctica se identificó la presencia positiva para
almidón en la prueba de Fehling

OBJETIVOS:
Objetivo general: conocer la importancia de las enzimas ya que estas son
macromoléculas que catalizan reacciones bioquímicas, permitiendo que los
sustratos se conviertan en los productos que necesita la célula.

Objetivos específicos:
• Conocer la definición de Catalizador
• Identificar los modelos de acción enzimática
• Identificar la importancia de las enzimas como catalizadores.
• Demostrar por medio de un experimento
METADOLOGIA:
Para realizar la hidrólisis de almidón por la amilasa; se licuo la cebada pre
germinada se puso en tubo de centrifugación y se llevo a centrifugar 2500 rpm
(revoluciones por minuto) durante 5 minutos, de allí se obtuvo el sobrenadante,
es decir, la enzima (amilasa); este quedo en la parte superior del tubo para
centrifugar; y abajo el precipitado o pelet. Se tomaron 6 tubos de ensayo los
cuales se marcaron de la siguiente forma 3 de ellos con la letra A y cada uno se
marco con 0.5%, 1%, 2% respectivamente; los tres restantes se marcaron con
B y también se marcaron con 0.5%, 1%, 2%. En los 6 tubos se pusieron 0.5 Ml
de la enzima (amilasa). Se calentaron únicamente los tubos marcados con la
letra B en el mechero hasta una ligera ebullición. Y los tubos marcados con A se
dejaron a temperatura ambiente (20°c). Después se adiciono en cada tubo de
ensayo (los A y B ) 0.5 mL de la solución de almidón en la solución
correspondiente 0.5, 1 y 2% (la solución de almidón se agito antes de
emplearse). Estos se dejaron en reposo por 10 minutos. Inmediatamente se
marco la placa excavada de cerámica con las indicaciones A 0.5%, A 1% y A
2%; B 0.5%, B 1% y B 2%. Pasados los 10 minutos se puso la sustancia que
estaba en los tubos en la placa escavada de acuerdo a como estaban marcados.
Allí se agregó sobre cada poso una gota de lugol. Se observó el cambio de color.
En las muestras donde el lugol no reacciono, a los tubos de ensayo donde
estaban estas sustancias se les realizo la prueba de fehling. Se adicione en
orden 3 gotas de fehling A y 3 gotas de fehling B, y se flamearon.
Para la actividad enzimática de la sacarosa de la levadura, se maceraron 3g de
levadura en 40 mL agua destilada, este se puso en un tubo de centrifugación y
se llevó a centrifugar a 1500 rpm, durante 5 minutos. De este obtuvo el
sobrenadante (sacarosa) y el precipitado. Se tomaron 4 tubos de ensayo; 2 se
marcaron con A, en uno se grabó 1% y en el otro 5%; los 2 restante se marcaron
con B y se procedió igual que con los A. En los 4 tubos se adicionaron 1 mL de
sacarosa, y se les agrego 1 mL de sacarosa en la concentración
correspondiente. Los tubos A se dejaron reposar por 10 minutos, y los tubos B
por 20 minutos. Pasado el tiempo de reposo se les realizo la prueba de felhing.

MARCO TEORICO:
Todas las células, incluyendo microorganismos y organismos superiores,
producen enzimas. Su acción está estrechamente ligada con las reacciones
metabólicas, y la mayoría de las transformaciones químicas requeridas para
mantener activas a las células tardarían mucho tiempo en efectuarse o
simplemente no procederían si no estuvieran presentes las enzimas.
La enzima es, generalmente, más grande que el sustrato y la combinación de la
enzima y el sustrato depende, normalmente, de fuerzas débiles, tales como
puentes de hidrógeno, fuerzas de vander Waals e interacciones hidrófobicas
para unir la enzima con el sustrato. La pequeña parte de la enzima a la que se
une el sustrato se conoce como el sitio activo de la enzima.
En forma general, cada molécula de enzima es capaz de transformar, en cada
segundo, de 100 a 1000 moléculas de sustrato en producto. El número de estas
moléculas transformadas en producto por molécula de enzima en cada segundo,
se conoce como número de recambio. Algunas enzimas se asocian con
estructuras de carácter no proteico, denominadas cofactores, que son
necesarias para su funcionamiento. Entre ellos encontramos iones metálicos
como el Zn2+ o el Fe2+, y tambiénn moléculas orgánicas que se denominan
coenzimas.

MODELO DE LA ACCIÓN DE LAS ENZIMAS

La forma en que se une la enzima con el sustrato para catalizar las distintas
reacciones ha sido explicada por distintos modelos. Entre ellos mencionaremos
los dos siguientes:

El modelo de la "llave-cerradura": La alta especificidad de las enzimas condujo

a Emil Fisher en 1894 a deducir que ambas moléculas (enzima y sustrato) se
complementan geométricamente, y sus formas moleculares encajan,
exactamente, una con otra. Esto se conoce, comúnmente, como el modelo de "
llave-cerradura", en el que la enzima es una especie de cerradura y el sustrato
una llave que encaja de forma perfecta en la cerradura. Sin embargo, si bien este
modelo explica la especificidad de las enzimas (una enzima para cada sustrato
y para cada reacción en condiciones definidas de temperatura, fuerza iónica y
pH), falla al explicar la estabilización del estado de transición (E-S) que las
enzimas logran.

El modelo del encaje inducido: En 1958 Daniel Koshland sugiere una

modificación al modelo de la llave-cerradura. Postula que las enzimas son
estructuras bastante flexibles y, entonces, el sitio activo puede ser reformado por
la interacción con el sustrato. Como resultado de esto, la estructura proteica que
compone el sitio activo puede ser modificada en su estructura espacial, para
lograr posiciones precisas que permitan a la enzima encajar en el sitio activo y
llevar a cabo su funciónn catalítica.

Post- Laboratorio
1. Represente las formulas químicas en los sustratos y productos estudiados
en los experimentos anteriores.

La fórmula química de Almidón es: (C6H10O5).

La fórmula química de la sacarosa es (C12H22O11)

a).La sacarosa o el azúcar común están presentes en muchos vegetales

con qué objeto es hidrolizada por las células.

Estos compuestos están constituidos por la unión de dos monosacáridos. Por

ejemplo: la sacarosa (azúcar común – azúcar de caña) está formada por una
glucosa y una fructosa (monosacáridos de seis carbonos que posee una función
cetona en el carbono 2), de fórmula C12H22O11. El disacárido sacarosa es la
principal forma en que los azucares se transportan a través del floema (vasos
conductores de savia en los vegetales), desde las hojas hasta los sitios de la
planta donde son requeridos. Es soluble en agua y ligeramente soluble en
alcohol y éter.
Cristaliza en forma de agujas largas y delgadas siendo dextrógira. Por hidrólisis
(separación por medio de agua ya que se necesita una molécula de agua para
que queden completos ambos monosacáridos) rinde una mezcla de glucosa y
fructosa, que resulta levógira, por lo que esta mezcla se conoce como "azúcar
invertido".

Resultados
Tabla 1: hidrolisis de almidón por la catalasa.
Muestra % almidon Cambios pres. almidon
0.5 Color amarillo (negativa)
Tubo A sin 1.0 Color amarillo (negativa)
calentar 2.0 Color amarillo (negativa)
0.5 Color amarillo (negativa)
Tubo B 1.0 Color amarillo (negativa)
calentado 2.0 Color amarillo (negativa)
Tabla 2: prueba de fehling
Muestra Fehling Cambios pres. almidon
A y B

Tubo A 3 gotas 3 gotas Presenta

sin calentar color
amarillo

B A
Tubo B 3 gotas 3 gotas Presenta
(positiva) (negativa)
calentado color rojo
Color Rojo Color
Amarillo

Tabla 3: Prueba de invertasa

Tiempo
Muestra % (min) Cambios
sacarosa
0 color fue más fuerte y una mayor
especidad
Tubo A 1.0 10 color fue más fuerte y una mayor
especidad
20 color fue más fuerte y una mayor
especidad
0 color y una especidad más clara
Tubo B 5.0 10 color y una especidad más clara
20 color y una especidad más clara

Discusión
Realizar la práctica permitió observar y comprobar la actividad realizada por las
enzimas. Dentro del laboratorio se permitió identificar los cambios y la obtención
de algunas enzimas donde se procedió a hacer pruebas para la presencia del
almidón por la catalasa habiendo realizado todo el proceso con estas, se agrego
a cada uno una gota de lugol; se observó que el lugol no dio positivo en las
muestras de los tubos A y B, dio como resultado negativo lo que lleva a decir que
la enzima de amilasa actuó, haciendo un desdoblamiento del sustrato.
Posteriormente al obtener prueba negativa para almidón, se procedió a realizar
la prueba de fehling.” El reactivo de fehling permite reconocer azucares
reductores (glucosa, fructosa y maltosa) formando un precipitado rojo de óxido
cuproso.” Dando a concluir que efectivamente la enzima actuó.
Toda reacción o proceso químico a nivel celular involucra sustratos y enzimas.
Los sustratos son las moléculas sobre las cuales actúan las enzimas. Una
enzima representa un tipo de proteína (catalizador biológico) encargado de
acelerar las reacciones bioquímicas en una vía metabólica particular. Las
enzimas no sufren cambios durante las reacciones, ni cambian la naturaleza de
la reacción ni su resultado. (http://www.saludmed.com/).
Este mismo procedimiento se realizó con la levadura pero en este caso ni las
pruebas con el almidón ni con el fehling, permitió identificar cambio de reducción
y presencia de sacarosa solo se tornó a un color amarillo. En la segunda parte
después de realizar la prueba de felhing a las muestras de sacarosa con la
enzima de sacarosa; los resultados fueron, en la concentración de sacarosa de
5% el resultado fue un color y una especidad más clara, con respecto a las
muestras de concentración del 1%, en estas el color fue más fuerte y una mayor
especidad. Pero las muestras que duraron en reposo más tiempo fueron
relativamente más oscuras. Esto se da debido a que entre menos concentración
de sacarosa, más rápido actuara esta enzima.

Bibliografía

DILIA GALVAN BORJA,(2013).identificación enzimática. Recuperado el 14 de

abril de 2018 de:
https://www.academia.edu/9180412/Informe_de_actividad_enzimatica
Rodrigo leviman, (2012).actividad enzimática. Recuperado el 14 de abril de 2018
de:
https://www.academia.edu/13037480/Informe_Cientifico_Actividad_Enzimatica
Kimball, John. (1986). Biología. Editorial: Addison - Wesley Iberoamericana, S.
A. Cuarta Edición