“Año de la Diversificación Productiva y del

Fortalecimiento de la Educación”

ALUMNO : HUAMAN CHUQUIHUANGA TELIO

TEMA : ESPECTROFOTOMETRIA

FACULTAD : ING. AGROINDUSTRIAL

CICLO : VI

CURSO : METODO DE ANALISIS PARA LA AGROINDUSTRIA

PROFESOR : ING.JUAN QUISPE NEYRA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA - CHULUCANAS

INTRODUCCIÓN

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas

para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión,
sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomolecular, etc.) y estado de agregación (sólido, líquido,
gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son
relativamente sencillos.

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de

energía interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos
organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La
Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de
los cuáles tiene una energía:

Efotón = h-v = h-c/X ,

Donde c es la velocidad de la luz, v es su frecuencia, X su longitud de onda y

h= 6.6 10-34 J -s es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia
química absorbe luz de longitud de onda X, esto significa que las moléculas de
esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.

Objetivo general:

Conocer y aplicar los fundamentos de la ESPECTROFOTOMETRÍA para la

determinación de concentraciones en soluciones.

Objetivos particulares:

a. Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables

involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.

b. Seleccionar la longitud de onda apropiada para DETERMINACIÓN de

absorbancia.

c. Construir una curva patrón de la solución de YODO-YODURADO (serie tipo)

a diferentes concentraciones.

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La espectrofotometría:

Es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un

sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis
óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El
espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la
radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia

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Principios:

En la espectrofotometría es aprovechada la absorción de radiación

electromagnética en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra
absorbe parte de la radiación incidente en este espectro y promueve la
transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor
energía radiante. En esta técnica es medida la cantidad de luz absorbida como
una función de la longitud de onda utilizada.

La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de

la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química.

La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro

electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nivel del mar y en el de la luz
visible de 380 a 780 nivel del mar por lo que es de gran utilidad para
caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro.

 Ley de Beer:

La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo

depende de la concentración en la solución.

Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar disuelta y en otro
vaso tenemos la misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azúcar
en solución. El detector es una celda fotoeléctrica, y la solución de azúcar es la
que se mide en su concentración.

Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer

vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si
repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas
electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y moléculas y
son absorbidos por estos.

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 Ley de Lambert:

En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto

depende de la distancia recorrida por la luz.

Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos que
ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentración de azúcar,
pero, el segundo tiene un diámetro mayor que el otro.

Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer

vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si
repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas
electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y moléculas y
son absorbidos por estos; de la misma forma que se explicó en la ley de Beer.

 Ley de Bouguer-Beer-Lambert:

Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida

como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación de las
citadas anteriormente.

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 Absorción de las radiaciones:

Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones, por las leyes

mencionadas anteriormente, hay una pérdida que se expresa con la ecuación:

It/Io=T-kdc''
Dónde:

 It: Es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la

celda fotoeléctrica (llamada radiación o intensidad transmitida).
 Io: Es la que intensidad con la que sale al atravesar la celda (radiación
intensidad incidente) y la relación entre ambas.
 T: Es la Transmitancia.
 En el exponente, el signo negativo: Se debe a que la energía radiante
decrece a medida que el recorrido aumenta.
 K: Es la capacidad de la muestra para la captación del haz del campo
electromagnético,
 D: Es la longitud de la cubeta de espectrofotometría que recorre la
radiación.
 C: Es la concentración del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.

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La ecuación simplificada de la ley de Beer-Lambert:

A= ε.d.c

 C: Comprende a la mínima ecuación que relaciona la concentración.

 A: Absorbencia de la muestra
 D: Espesor recorrido por la radiación.
 ε: Factor de calibración

El factor de calibración relaciona la concentración y la absorbancia de los

estándares.

La absorción (o absorbancia) es igual a A, la que es el logaritmo reciproco de la

Transmitancia:

A= log 1/T

Lo que es igual a:

A= -log T

Las ecuaciones mencionadas de las leyes son válidas solo y solo sì:

 La radiación incidente es monocromática.

 Las especies actúan independientemente unas de otras durante la
absorción.
 La absorción ocurre en un volumen de sección trasversal uniforme

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Tipos:

 La espectrofotometría de Absorción de infrarrojos:

‡ - Absorción de uv-visible:

 Resonancia magnética nuclear (RMN)

 Fluorescencia
 Emisión atómica
 Absorción atómica de masas
 Fluorescencia de Rayos X

- Espectroscopia UV y Visible:

Estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV-Visible de moléculas

orgánicas e inorgánicas.

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La región UV del espectro electromagnético se encuentra entre 0.6 y 380 nm:

- UV lejano: 0.6 – 190 nm

- UV cercano: 190 – 380 nm

- UV visible: 380 – 780 nm

UV “cercano o de cuarzo”: Región en la que el aire y el cuarzo son

transparentes).

UV “lejano o de vacío”: El UV lejano requiere técnicas especiales, ya que el

aire que se encuentra en el trayecto óptico absorbe intensamente en esta
región, no es útil desde un punto de vista práctico.

La región visible: A la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380
y 780 nm.

La absorción de la radiación UV o Visible por moléculas, generalmente se

produce por la excitación de los electrones de enlace.

Aplicaciones:

 Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún

compuesto utilizando las fórmulas ya mencionadas.
 Para la determinación de estructuras moleculares.
 La identificación de unidades estructurales específicas ya que estas
tienen distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías).
 Determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base.

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Instrumentos para la medida de absorción de luz

Los instrumentos para realizar medidas de absorción de luz por parte de las
especies químicas, constan básicamente de los siguientes componentes:

1. La fuente de luz que emite la radiación, que posteriormente interactúa

con la muestra. Si irradia luz en un intervalo amplio de longitudes de
onda, recibe el nombre de fuente continúa. Si irradia luz sólo en ciertas
longitudes de onda específicas, recibe el nombre de fuente de líneas.

2. Un sistema que permite separar bandas de luz estrechas, ya sea antes o

después de la interacción de la luz con la muestra o sistema
monocromador, constituido por lentes, espejos, redes de difracción,
prismas de refracción, rendijas etc.

3. Un compartimento para colocar la muestra en celdas o

cubetas adecuadas, dependiendo de la región del espectro utilizada.

4. Un sistema para la detección de la radiación que ha atravesado la

muestra o sistema detector, cuyas características dependen de la zona
del espectro utilizada. Si la señal lumínica es transformada en señal
eléctrica el sistema recibe el nombre de transductor.

5. Sistemas para la amplificación, transformación y comparación de la

señal eléctrica para un registro posterior de ella.

6. Sistemas de registro de la señal mediante movimiento de agujas o

señales digitales o registro gráfico o mediante sistemas computarizados.

Actualmente los sistemas correspondientes a la fuente, monocromador, celda y

detector son llamados módulos característicos ya que su diseño, materiales
ópticos y sus características dependen de la región del espectro que se esté
utilizando. Los sistemas de amplificación, transformación, comparación de la

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señal y registro se llaman módulos procesadores y presentan características
comunes sin importar la zona del espectro utilizado.

Generalmente los sistemas que miden relaciones de intensidad de luz reciben

el nombre de fotómetros, los cuales son instrumentos sencillos, generalmente
no poseen un sistema monocromador, sino que utilizan filtros para separar la
radiación proveniente de la fuente y generalmente se conocen como fotómetro
de filtros.

Los espectrofotómetros poseen los componentes de los fotómetros y sistema

monocromador con prisma, red o interferómetro, para seleccionar un intervalo
de longitudes de onda más estrecho, así como sistemas de detección muy
sensibles o con especificaciones más elevadas.

Los espectrógrafos poseen sistema monocromador y como detector película

fotográfica y los espectroscopios utilizan como detector el ojo humano.

Componentes:

 Fuentes luminosas:

Todos los cuerpos emiten radiación electromagnética a causa de la agitación

térmica de sus moléculas; esta radiación se denomina radiación térmica, que

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consiste en una mezcla de diferentes longitudes de onda. A 300ºC la más
intensa de estas ondas tiene una longitud de onda de 5000 x10 -9 m, o 5000nm,
que corresponden a la región del infrarrojo.

A 800ºC un cuerpo emite suficiente energía radiante para ser auto-luminoso y

aparece como ¨caliente al rojo¨. Sin embargo, la mayor parte de la energía
emitida es transportada, con mucha diferencia, por las ondas infrarrojas.

A 3000ºC, que es aproximadamente la temperatura del filamento de una

lámpara de incandescencia, la energía radiante contiene suficientes longitudes
de onda ¨visibles¨, entre 400 y 700 nm, para que el cuerpo aparezca ¨caliente al
blanco¨.

En las lámparas modernas, el filamento es una bobina de hilo fino de

wolframio. Para reducir la evaporación del filamento se introduce un gas inerte
como el argón. El tamaño de las lámparas de incandescencia varía desde las
que no son mayores que un grano de trigo hasta las utilizadas para iluminar
campos de aterrizaje, que tienen una potencia de entrada de 5000 W.

Una de las fuentes luminosas más brillante es el arco de carbono. Dos varillas
de carbono, generalmente entre 10 y 20 cm de largas, y de un centímetro de
ancho se conectan a una fuente de corriente continua de 110 ó 220 V. Se unen
momentáneamente y a continuación se separan unos milímetros. Un intenso
bombardeo de electrones de la varilla positiva origina en su extremo un cráter
extremadamente caliente, cuya temperatura de unos 4000ºC es la fuente
luminosa. Las fuentes luminosas de arco de carbono se utilizan en casi todos
los proyectores de cine y en grandes reflectores y farolas de alumbrado.

Algunas fuentes de luz utilizan una descarga en arco (tubos de descarga):

Sobre un gas, generalmente H2, D2, Ar o Xe, o un vapor metálico de mercurio o
sodio, contenido en una ampolla hermética que contiene dos electrodos
conectados a una fuente de energía, se aplica una descarga eléctrica intensa,
que ioniza o excita las partículas, produciéndose como resultado emisión de
luz. La luz azulada de las lámparas de arco de mercurio y la brillante amarillo

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anaranjada de las luces de vapor de sodio son habitúales en las carreteras e
iluminaciones al aire libre.

Una variante importante de la lámpara de mercurio es la

lámpara fluorescente. Esta consta de un tubo de vidrio que contienen argón y
una gota de mercurio. Los electrodos son de wolframio. Cuando se produce
una descarga eléctrica en la mezcla de mercurio y argón, solo se emite una
pequeña cantidad de luz visible por parte de los átomos de mercurio y argón,
hay sin embargo una cantidad considerable de luz ultravioleta (luz con una
longitud de onda más corta que el violeta visible) Esta luz ultravioleta es
absorbida por una delgada capa del material, llamada luminóforo, que es el
recubrimiento blanco de la pared interior del tubo de cristal. El luminóforo tiene

La propiedad de la fluorescencia, lo que significa que emite luz visible cuando

es iluminado con luz de longitud de onda más corta. Pueden conseguirse
lámparas fluorescentes de cualquier color dependiendo de la naturaleza del
luminóforo.

Una fuente luminosa especial de creciente importancia en los últimos 20 años

es al láser, sigla de light amplified stimulated radiation, que puede producir un
haz muy estrecho de radiación enormemente intensa. Se han utilizado láseres
de alta intensidad para cortar, hacer y fundir materiales de alto punto de fusión,
e inducir más efectos importantes en física, química, biología e ingeniería. Otra
característica de la luz láser, igualmente importante, consiste en que es mucho
más monocromática, o de una sola frecuencia, que cualquier otra fuente de luz.

 Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtiéndola en un

haz de rayos paralelos.

 Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda.

 Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provo

ca eldesplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo

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una corrienteeléctrica que es proporcional a la intensidad de la luz
recibida.

 Registrador: Mide la señal del detector, la compara y genera una

medida en una escala determinada.

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CONCLUSIÓN

• Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un

método analítico indirecto porque se basa en la medición de la
absorbancia o Transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la
actualidad para la identificación de un analito en una muestra problema.

• La espectrofotometría es el método más usado, debido a que es

sencillo, específico y sensible.

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Bibliografía

• Http:\\ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Spectrophotometry

• en.wikipedia.org/wiki/Spectrophotometry

• faculty.uca.edu/~march/bio1/scimethod/spectro.htm

• http://www.satia-jasco.com.ar/l4.html

• http://www.advmex.com/espectrofotometro_uv.htm

• http://www.cienytec.com/lab1espectro.htm

• www.cas-instrumental.com.ar/aa6vario.htm

• www.chm.davidson.edu/ChemistryApplets/
spectrophotometry/Spectrophotometry.html

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