CIENCIAS - QUMICA

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Produccin en continuo de etanol a partir de banano de

rechazo (cscara y pulpa) empleando clulas inmovilizadas
Continuous ethanol production from banana waste (peel and pulp)
using immobilized cells

Zapata Ana Mara y Pelez Carlos *

Resumen. En el trabajo del que da cuenta el presente artculo se estudi la produccin

en continuo de etanol a partir de banano de rechazo utilizando clulas inmovilizadas
en alginato de sodio. Se compararon las fermentaciones en batch con clulas libres e
inmovilizadas (Saccharomyces cerevisiae), utilizando medio estndar de fermentacin
y mosto de banano como sustrato. Las fermentaciones con mosto de banano presen-
taron un incremento del 31% en la produccin de etanol durante las primeras 14
horas de fermentacin, pasando de producir 33.78g/L de alcohol con clulas libres a
44.18g/L con clulas inmovilizadas.

Palabras clave: Banano, Inmovilizacin, Produccin de etanol, Proceso continuo, Sac-

charomyces cerevisiae.

Abstract. In this paper we present results of our study of the continuous produc-
tion of ethanol from banana waste using cells immobilized in sodium alginate. Ex-
periments compared batch fermentation with free and immobilized cells, using fer-
mentation standard medium and banana juice as substrate. The fermentations with
banana juice showed a 25% increase in ethanol production during the first 14 hours
of fermentation, the ethanol production was 33.78 g/L and 44.18 g/L with free and
immobilized cells respectively.

Key words: Banana, Inmobilization, ethanol production, continuos production, Saccha-

romyces cerevisiae.

* Grupo Interdisciplinario de Estudios Moleculares GIEM, Instituto de Qumica-Universidad de Antioquia.

Correo electrnico cpelaez@matematicas.udea.edu.co

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1. INTRODUCCIN

En las ltimas dcadas, la utilizacin de procesos biotecnolgicos para la obtencin

de bienes y servicios se ha convertido en una gran alternativa que ofrece soluciones a
problemas provenientes de la aplicacin de tecnologas tradicionales. En Colombia
se han obtenido avances tecnolgicos y productivos importantes en la aplicacin
de la biotecnologa en cuanto a la produccin de biocombustibles se refiere. En la
actualidad existen 5 plantas de biodisel y 5 plantas para la generacin de bioetanol a
partir de caa de azcar. La produccin de bioetanol se realiza mediante un proceso
fermentativo en el cual se utilizan microorganismos capaces de convertir el azcar en
etanol. Usando levaduras S. cerevisiae para la produccin de etanol en fermentaciones
tradicionales en batch, la productividad est limitada entre 1.8 a 2.3 g/Lh, la cual
es baja y resulta costosa para la produccin de biocombustible. Sin embargo, el uso
de fermentaciones en continuo puede duplicar dicha productividad (Vargas et al.,
2001; Baptista et al., 2006) y ms aun, si se utiliza retencin celular, tal como en el
caso de Brasil, en donde centrifugaciones continuas son usadas para reciclar biomasa
(Baptista et al., 2006).

La estrategias para la retencin celular incluyen la separacin en la corriente de pro-

ducto, seguida de un reciclo al fermentador o inmovilizacin dentro del fermentador.
Esta ltima tcnica ha sido previamente estudiada debido a los beneficios que pre-
senta comparada con los procesos con clulas libres, ya que ayuda a mantener la acti-
vidad enzimtica garantizando una buena actividad celular durante la fermentacin,
de modo que permite tener una reduccin de los tiempos de proceso, entre otras
ventajas (Kourkoutas et al., 2004; Najafpoue et al., 2004; Jianliang et al., 2007).

El banano es una materia prima apta para la obtencin de bioetanol. Presenta un alto
contenido de carbohidratos (aproximadamente 20% de su peso) aptos para procesos
fermentativos encaminados a la produccin de alcohol lo cual constituye una carac-
terstica importante que converge con el hecho de que en el pas se generan cada ao
aproximadamente 800 mil toneladas de banano de rechazo y material lignocelulsico
derivado del proceso (vstago y pseudotallo). Actualmente una tercera parte de la
fruta que no se exporta (rechazo) se destina al consumo interno, otra tercera parte se
emplea como materia prima en la produccin de fertilizantes orgnicos (compost)
para el cultivo de la misma fruta, y una tercera parte contina considerndose como
residuo. Son precisamente estos ltimos dos tercios del residuo los que potencial-
mente se pueden usar en procesos de fermentacin alcohlica (Sierra D. M., 2007;
Augura, 2008).

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Desde el ao 2005 el Grupo GIEM de la Universidad de Antioquia ha venido in-

vestigando sobre la produccin de biocombustibles de segunda generacin (Arenas
et al., 2009). Uno de sus primeros acercamientos fue la construccin de una planta
piloto para la produccin de bioetanol a partir de banano de rechazo, que tiene una
capacidad instalada para producir 5000L/da de etanol al 95%. La planta ha sido
operada en lotes a partir de 500L de jugo de banano y se han obtenido rendimientos
del 8% de alcohol (v/v) usando una cepa comercial de Saccharomyces cerevisiae.

Se plantea la necesidad de evaluar la produccin en continuo de etanol, ya que de

acuerdo con lo reportado en la literatura, esta forma de operacin permite obtener
altos rendimientos y presenta ventajas operativas como la recuperacin celular y la
estabilidad de los procesos (Najafpour et al., 2004; Baptista et al., 2006). Es por ello
que se propone implementar un proceso de produccin en continuo para la produc-
cin de etanol empleando clulas inmovilizadas y mosto a partir de banano.

2. METODOLOGA

Microorganismos. Se utiliz una cepa de Saccharomyces cerevisiae ABG, que fue aislada
y caracterizada en el Laboratorio de Microbiologa del Grupo GIEM. Esta cepa se
aisl de una nica colonia de levaduras adaptadas para crecer en jugo de banano.

2.1 Medio de cultivo para fermentaciones

Como sustrato se utiliz mosto de banano, el cual fue procesado mediante un pro-
ceso de molienda y filtracin con agua caliente (60C) para garantizar una buena
extraccin de los azcares fermentables, los cuales deben estar en una concentracin
entre 16 y 20 Brix en el mosto final.

Las fermentaciones realizadas con mosto de banano fueron comparadas con fermen-
taciones realizadas empleando un medio estndar, el cual contena 100g de sacarosa,
2g de KH2PO4, 3g de (NH4)2SO4, 1g de MgSO4.7H2O, 4g de extracto de leva-
dura, 3.6g de peptona (valores por litro).

2.2 Inmovilizacin celular

Se realiz con una solucin de alginato de sodio al 1.5% y una solucin de CaCl2 al
3% (Agudelo, 2007).

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2.3 Mtodos de anlisis

La biomasa se cuantific por peso seco, los azcares por Brix y el etanol por croma-
tografa gaseosa (Equipo Marca Agilent 6890 con detector FID, columna Carbowax
20M de 50m de longitud y 1 mm de dimetro interno, volumen de inyeccin 1 L,
Split de 1:50. Temperatura del inyector 200 C y flujo de 20 mL/min de H2).

Adicionalmente se determin la viabilidad y vitalidad celular. Se entiende la viabili-

dad como el porcentaje de clulas que se encuentran vivas en un cultivo y la vitalidad
como su capacidad para realizar todas sus funciones, especialmente la produccin de
alcohol. El seguimiento de la viabilidad se realiz por medio de tincin con azul de
metileno y conteo celular en cmara de Newbauer. La vitalidad fue determinada por
la medicin del poder de acidificacin, de acuerdo con el protocolo presentado por
Smart K. (2000), que consiste en la medicin del cambio de pH que la levadura es
capaz de producir de manera espontnea o por la adicin de un carbohidrato meta-
bolizable (sustrato inductor).

3. RESULTADOS Y DISCUSIN

3.1 Mosto de banano

En la siguiente tabla se muestran las principales caractersticas del mosto obtenido a

partir de banano. El rendimiento de la extraccin del mosto de banano fue de 0.96L/
Kg.

Parmetro Expresado como Valores Unidades

Nitrgeno N total 0.52 g/L
Potasio K2O 8.34 g/L
Calcio CaO 7.54 g/L
pH pH 5.64 -
Carbono Orgnico C.O 80.64 g/L
Relacin C/N No aplica 155.0 -
Densidad Densidad 1.05 g/ml
Slidos totales No aplica 163.46 g/L
Azcares Brix 15.5 Brix (g/100ml)

Tabla 1. Caracterizacin del jugo de banano.

Los resultados obtenidos muestran que el jugo de banano tiene un alto contenido de
materia orgnica y azcares, los cuales son considerados componentes principales en

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un sustrato destinado a la produccin de alcohol. Adicionalmente este jugo presenta

un contenido de nutrientes necesarios para el crecimiento y funcionamiento de las
levaduras, como el nitrgeno, el calcio y el potasio.

Con el objetivo de establecer las ventajas del proceso de fermentacin utilizando

clulas inmovilizadas y jugo de banano como sustrato, se realizaron fermentaciones
batch con clulas libres. Como lo ilustra la Figura 1, se obtuvieron aproximadamen-
te 6 g/L ms de etanol en las fermentaciones realizadas con mosto de banano. El
rendimiento YP/S (getanol/gsustrato) fue de 0.3 para medio estndar y 0.48 para el jugo
de banano, y las productividades 1.96 y 2.41g/Lh, respectivamente. Los valores de
productividad reportados para glucosa en lote estn entre 1.8 y 2.5 g/Lh (Jianliang
et al., 2007). El rendimiento de etanol fue de 0.040 L/Kg de banano. Hammond et
al. (1996) reportaron un rendimiento de 0.081 L/Kg de banano en fermentaciones
batch, mientras que en los experimentos realizados en el Laboratorio GIEM se han
alcanzado rendimientos de 0.064 L/Kg de banano (Arenas et al., 2009).

(a) (b)

Figura 1. Cinticas de fermentacin batch de clulas libres. (a) Medio de cultivo estndar. (b)
Jugo de banano. Biomasa, etanol, sustrato.

En la Figura 2 se observa el seguimiento de la viabilidad y vitalidad celular para las

fermentaciones en batch con clulas libres. Durante las primeras horas del proceso
se presenta una pequea disminucin de la viabilidad en ambos cultivos, y poste-
riormente sta se mantiene a lo largo de toda la fermentacin. Por otra parte, las
levaduras se mantienen vitales durante la fermentacin. Los resultados encontrados

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muestran que el jugo de banano no afecta de manera significativa la vitalidad ni la

viabilidad de las clulas, y ambos sustratos presentan el mismo comportamiento. Las
diferencias encontradas se presentan en la velocidad a la cual decrecen los parme-
tros, lo cual puede observarse en la pendiente de las grficas.

3
100

2,8
Viabilidad (%celulas vivas)

98

Vitalidad (GAP)
2,6
96

2,4
94

Medio estndar 2,2 Medio estandar

92
Jugo de banano Jugo de banano

90 2
0 5 10 0 5 10 15
Tiempo (h) Tiempo (h)

Figura 2. Viabilidad y vitalidad de levaduras durante las fermentaciones batch.

3.2 Fermentaciones en batch alimentado con clulas inmovilizadas

Con el objetivo de estudiar el efecto en el tiempo de la fermentacin sobre las c-

lulas inmovilizadas, se realizaron experimentos en batch con cambio de medio de
cultivo cada 24 horas. Estas fermentaciones fueron realizadas con medio estndar de
fermentacin y jugo de banano, para observar las diferencias entre los dos sustratos
y los efectos que stas poda tener sobre la vitalidad de las clulas inmovilizadas. Los
resultados en las primeras horas fueron comparados con los obtenidos para clulas
libres. Como se esperaba, la inmovilizacin tuvo un efecto positivo en la velocidad y
produccin de alcohol. Durante las primeras 14 horas las fermentaciones con medio
estndar (Figura 3) pasaron de una produccin de 27.47 g/L con una productividad
de 1.96 g/L h a producir 36.18 g/L con una productividad de 2.48g/L h. En las
fermentaciones con jugo de banano (Figura 4), se present un incremento del 25%
en la produccin de alcohol, pasando de 33.78g/L con clulas libres a 44.18g/L con
clulas inmovilizadas. Este incremento en la productividad por efecto de la inmovi-
lizacin ha sido reportado por varios autores que argumentan que el soporte de in-
movilizacin puede actuar como un catalizador en el proceso produccin de alcohol
(Jianling, 2007; Najafpour, 2007; Swain, 2007).

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Figura 3. Cinticas de fermentacin en batchalimentado utilizando clulas inmovilizadas con

medio estndar. Producto (etanol), Sustrato.

160 60
140 50
120
Sustrato (g/L)

100 40
80 30
60 20
40
20 10
0 0
0 12 24 36 48 60 72

Tiempo

Figura 4. Cinticas de fermentacin en batch-alimentado utilizando clulas inmovilizadas con

jugo de banano. Producto (etanol), Sustrato.

En las fermentaciones con jugo de banano no se obtuvieron los resultados esperados.

Si bien en las primeras 14 horas del proceso el consumo de sustrato y la produccin
de alcohol llegaron a valores ptimos, la estabilidad de las esferas se vio afectada el

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segundo da de fermentacin, observndose fisuras en la superficie y deformaciones

de la misma (Fotografa 1). La prdida de estabilidad ocasion una prdida de vitali-
dad que se vio reflejada en la baja velocidad de consumo de sustrato y en la reduccin
de la produccin de alcohol. En la Fotografa 1 se muestran las esferas de clulas
inmovilizadas en alginato antes y despus de las fermentaciones con jugo de banano.

(A) (B)
Fotografa 1. Esferas de clulas de levaduras inmovilizadas en alginato de sodio antes (A) y des-
pus (B) de fermentaciones en batch alimentado.

La vitalidad de las clulas disminuy considerablemente durante todo el tiempo

de las fermentaciones en batch-alimentado en los procesos llevados a cabo con
jugo de banano. En los procesos realizados con medio estndar, la vitalidad de las
clulas se mantuvo prcticamente constante despus de una leve disminucin en
las primeras 12 horas. En la Figura 5 se puede ver la disminucin de la vitalidad
de las levaduras.

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Figura 5. Variacin de la vitalidad de clulas inmovilizadas durante las fermentaciones

en batch-alimentado.

Para las fermentaciones con medio estndar, los efectos fueron menos pronunciados.
Las esferas presentaron daos leves y la reduccin en la produccin de alcohol slo
fue significativa el cuarto da de fermentacin (Figura 3). Los resultados con jugo de
banano no indican que el sustrato no sea apto para produccin de etanol. Como pue-
de observarse en la figura 2, el jugo de banano no afect la viabilidad ni la vitalidad
de las levaduras en los procesos en batch con clulas libres, sin embargo no se puede
descartar la presencia de sustancias o efectos secundarios que puedan afectar las c-
lulas inmovilizadas, esto sumado a los efectos fsicos mencionados anteriormente.

3.3 Fermentaciones en continuo con clulas inmovilizadas

Las fermentaciones en continuo se realizaron en el reactor piloto de 2L, con un cau-

dal de operacin de 7,0 ml/min, y un tiempo de residencia de 4 horas. En las Figura
6 y 7 se presentan las cinticas del proceso continuo para la produccin de alcohol
por clulas inmovilizadas utilizando medio estndar y jugo de banano. Durante las
primeras 14 horas de operacin el sistema present un comportamiento similar al
obtenido en el proceso en batch. Sin embargo, con el transcurso del tiempo se hicie-
ron evidentes las consecuencias de la prdida de estabilidad en las esferas de clulas
inmovilizadas y se present una disminucin en la produccin de alcohol. Estos
efectos fueron ms pronunciados en los experimentos con jugo de banano.

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El comportamiento de las cinticas de las fermentaciones en continuo con medio

estndar y mosto de banano fue significativamente diferente. Pasadas 45 horas de
operacin la produccin de etanol con jugo de banano empez a disminuir al tiem-
po que se increment la concentracin de sustrato, lo que podra explicarse por la
prdida tanto de vitalidad como de viabilidad de las levaduras.

Figura 6. Proceso continuo para la produccin de etanol con clulas inmovilizadas utilizando
medio estndar. Producto (etanol), Sustrato.

Figura 7. Proceso continuo para la produccin de etanol con clulas inmovilizadas utilizando
jugo de banano. Producto (etanol), Sustrato.

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Los resultados permiten concluir que si bien el proceso de inmovilizacin en alginato

de sodio es muy eficiente en cuanto a la retencin de clulas, a la difusin del sustrato
y al incremento de productividad, los efectos negativos sobre la estabilidad de las
esferas a lo largo del tiempo hacen que no sea viable el escalamiento del proceso de
produccin de alcohol con clulas inmovilizadas en alginato de sodio usando como
sustrato mosto de banano.

4. CONCLUSIONES

El jugo de banano presenta un alto potencial de uso como sustrato en los procesos
fermentativos para la produccin de alcohol. Con este sustrato se lograron altos ren-
dimientos y una conversin del 90% con respecto a los valores tericos reportados,
lo que lo convierte en un sustrato promisorio para las fermentaciones alcohlicas.

No se obtuvieron resultados positivos en el proceso de produccin de etanol en con-

tinuo con clulas inmovilizadas en alginato de sodio y utilizando jugo de banano
como sustrato de fermentacin. Cada uno de los procesos por separado arroj bue-
nos resultados, permitiendo concluir que el jugo de banano es un sustrato promi-
sorio para la produccin de etanol, y que los procesos de inmovilizacin permiten
incrementar la productividad de etanol. Sin embargo en el caso de la inmovilizacin
se requiere considerar otro tipo de sustratos.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen a Colciencias y a la Universidad de Antioquia la financiacin

del presente trabajo.

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Fecha de Fecha de
Referencia
recepcin aprobacin
Zapata Ana Mara y Pelez Carlos.
Produccin en continuo de etanol a partir de banano de rechazo Da/mes/ao Da/mes/ao
(cascara y pulpa) empleando clulas inmovilizadas. 14/05/2010 24/05/2010
Revista Tumbaga (2010), 5, 49-60

Revista Tumbaga 2010 | 5 | 49-60 60