Procesos Biotecnolgicos II

Clase 8: Transferencia de Oxgeno

Hugo Menzella

Mayo de 2013

1
Sobre el trmino Fermentacin
Microbiologa
Se refiere a procesos de conversin
anaerbicos. Ej. produccin de etanol
Biotecnologa
Se refiere a todos los procesos incluidos los
aerbicos

2
 Bioproceso aerbico
Stock de clulas Materias primas

Erlenmeyer Medio de cultivo

Fermentador Esterilizacin
de inoculacin

Fermentador

Aire

Captura

Purificacin Productos 3
 Aireacin y Agitacin
Importancia del mezclado en la
fermentacin

Dispersar burbujas de gas para

asegurar transferencia de gases
Mantener clulas en suspensin
Mantener medio homogeneo
Favorecer la transferencia de calor
4
 Aireacin
Aireacin hace referencia al proceso de
introducir aire para incrementar la concentracin
de oxgeno de los liquidos
Cumple adems la funcin de eliminar gases
txicos (CO2)

5
 Aireacin de un lquido
Puede llevarse a cabo de distintas maneras:

1- Burbujeando aire en el lquido

2- Llevando a cabo un spray del lquido en aire
3- Agitando el para incrementar la superficie de
absorcin
4- Combinacin de las anteriores. Ej. Burbujeo +
agitacin

6
 Oxgeno es el sustrato gaseoso ms importante
Existen mltiples factores que afectan la transferencia
de oxgeno
La eficiencia de la transferencia de oxgeno es
muchas veces el factor limitante de la produccin de
un proceso fermentativo
Los fermentadores y procesos de fermentacin estan
diseados para maximizar la transferencia de oxgeno
Satisfacer la demanda de oxgeno es una de las etapas
ms costosas de los procesos, tanto desde el punto de
vista operativo como de capital

7
Transferencia de masa e intercambio de
gases
Problema: baja solubiliad del oxigeno en agua,
solo ~8 ppm (mg/L), a 20 y 1 atm
Debido a la influencia de sales disueltas que
constituyen el medio de cultivo la solubilidad es
an menor que en agua pura.
La solubilidad de los gases sigue la ley de Henry
en el rango de presiones en el cual operan los
fermentadores.

8
 Ley de Henry
Describe la solubilidad del O2 en un lquido en
relacin a la presin parcial del O2 en el gas en
contacto con la fase lquida
Po
C*
H
C* es la concentracin de saturacin en la
solucin nutriente, Po es la presin parcial de O 2
en la fase gaseosa y H es la cte de Henry,
especfica para para el gas y la fase lquida
Insuflando aire se logra una concentracin de 8
mg O2/L en agua, con oxgeno puro 43 mg O2/L.
9
Etapas de la transferencia de O2 desde la
burbuja a la clula

10
 Etapas de la transferencia de O2 desde la
burbuja a la clula
1 - Difusin dentro de la burbuja hacia la interfase gas-lquido
2 Difusin a travs de la interfase gas-lquido
3 - Difusin a travs de la pelcula lquida en torno a la burbuja
4 Movimiento por difusin en el seno del lquido
5 - Difusin a travs de la pelcula lquida en torno al flculo
celular
6 Entrada al flculo celular
7 - Difusin a travs del flculo celular
8 Difusin a travs de la membrana celular
9 Reaccin de oxidacin

11
Etapas de la transferencia de O2
desde la burbuja a la clula
Etapa 1
Difusin dentro de la burbuja hacia la
interfase gas-lquido
Las molculas de gas se mueven rapidamente y
estan homogeneamente distribuidas

O2

12
Etapas de la transferencia de O2
desde la burbuja a la clula
Etapa 2 - Difusin a travs de la interfase gas-lquido
La resistencia es despreciable.
En sentido contrario el CO2 pasa del lquido a la burbuja

O2 O2

13
CO2
Etapas de la transferencia de O2 desde la
burbuja a la clula

Etapa 3- Difusin a travs de la pelcula lquida en torno a la

burbuja.
El movimiento es lento, es la etapa limitante y depende de:

Temperatura
Concentracin de oxigeno en la burbuja y el liquido
Viscosidad del medio de cultivo

14
Etapas de la transferencia de O2 desde la
burbuja a la clula
Etapa 4 Movimiento por difusin en el seno del lquido
En general es rpida. Depende de:
La eficiencia del mezclado

La viscosidad del medio de cultivo

O2

15
Etapas de la transferencia de O2 desde la
burbuja a la clula
Pasos 5 a 9

5 - Difusin a travs de la pelcula lquida en torno al flculo

celular
6 Entrada al floculo celular
7 - Difusin a travs del flculo celular
8 Difusin a travs de la membra celular
9 reaccin

Los pasos 5 y 7 son lentos. Las clulas aisladas son siempre

preferibles a aquellas que crecen en flculos (Ej.
microorganismos filamentosos) por su facilidad para captar
oxgeno 16
Etapas de la transferencia de O2 desde la
burbuja a la clula
Si el proceso utliliza clulas aisladas en
suspensin y el mezclado del lquido es eficiente:

El paso limitante del proceso de transferencia es

la etapa 3- Difusin a travs de la pelcula
lquida en torno a la burbuja

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 Proceso de transferencia de oxgeno
Paso 3
La ecuacin para la transferencia de oxgeno en la
interfase:
N A k L a (C * CL ) OTR
NA = Transfrencia de masa (mMO2/Lh)
kL = Coeficiente de transferencia (m/h)
a = Superficie de intercambio por unidad de volumen (m-1)
kLa = Coeficiente volumtrico de transferencia de O2 (h-1)
C* = Valor de saturacin para la cc O2de en la interfase (aprox
igual a la solubildad de O2 en fase lquida) (mM/L)
CL = Concentracin de O2 en fase liquida (mM/L)

de aqu en adelante OTR = O2 Transfer Rate (mM O2/Lh) 18

 Parametros que influyen en la capacidad de
transferencia de oxgeno de un sistema de
fermentacin

Diseo del fermentador: Medio de cultivo:

Turbinas Solubilidad del oxgeno
Baffles Viscosiidad
Aireadores Presencia de agentes tensoactivos
Geometra

Organismo: Parametros del proceso:

Morfologa Veloc agitacin(RPM)
Caudal aireacin(VVM)
Presin parcial de O2 (pO2)

19
Influencia de la Temperatura en la OTR

20
 Influencia de la Temperatura en la OTR

>T < Solubilidad de O2

>T >Difusin

10C-40C: predomina >Difusin , aumenta OTR

>40C: predomina < Solubilidad de O2, disminuye OTR

21
Influencia la morfologa y del medio de cultivo en
la OTR
Izquierda: influencia de la viscosiad del medio en la OTR
Derecha: influencia de la efecto la la presencia de componentes del medio en la OTR

22
Influencia de la agitacin y caudal de aireacin en OTR

23
Influencia de la PO2 en la OTR

PO2 puede ser variada de distintas maneras:

1- Aumento de la presin en el tanque
2- Incremento de la concentracin de oxgeno en el gas suministrado

Importante:
Debe realizarse un
exhasutivo anlisis de
costo antes de
implementar el aumento
de presin o uso de
oxgeno puro

24
Influencia del uso de agentes antespumantes

Son moleculas anfipticas

Se ubican en torno a las burbujas y disminuyen
la transferencia de O2
La formacin de espuma aumenta con el caudal
de aire suministrado. Caudales mayores a 1
v/vmin no pueden utilizarse en fermentaciones
de alta densidad de clulas
Cuando es posible se prefiere el uso de
dispositivos mecnicos rompe espuma

25
Contenido de gas del fermentador y
tiempo de residencia de las burbujas
El O2 debe ser suministrado tratando que las burbujas
queden temporalmente retenidas en el seno del lquido
para que el O2 se transfiera a la fase lquida.

A > T residencia de burbuja > transferencia de O2 hasta el

punto en que la concentracin de O2 de la burbuja es muy
baja.

T residencia de Burbuja depende del tamao y de la

geometra del fermentador (a > h > Tr)

26
Porque es importante determinar KLa
para un sistema de fermentacin?
Es un parmetro confiable que permite determinar la
maxima OTR de un fermentador, una de sus
caracteristicas ms importantes (la otra es la capacidad
de disipar el calor generado)

Puedo determinar que fermentador es adecuado para

escalar un proceso (scaling up)

Si debo desarrollar un nuevo proceso y adaptarlo a un

fermentador de gran escala preexistente, permite
conocer las las limitaciones que voy a tener en planta y
limitar el alcance de la etapa I+D (scaling down)
27
Mtodos para determinar KLa

1. Mtodo de oxidacin de sulfito (mtodo de Cooper)

2. Gassing out esttico

3. Gassing out dinmico

28
 Mtodos para determinar KLa

1. Mtodo de oxidacin de sulfito

Mide la velocidad de conversin de una solucin 0.5 M de
sulfito de sodio a sulfato en presencia de cobre como
catalizador

Cu++ or Co ++
Na2SO3 + 1/2 O2 Na2SO4

La velocidad de oxidacin del sulfito es proporcional a la

transferencia de oxgeno

Desventajas i) lento
ii) no considera reologa delmedio 29
Mtodos para determinar KLa

Mtodo de Gassing out esttico

Utilizando la tcnica de gassing out se mide con una sonda

polarogrfica el incremento en O 2 disuelto de un medio de
cultivo del cual se ha eliminado el O 2

30
 Mtodos para determinar KLa
Se elimina todo el O2 del medio por burbujeo de N2, luego se
administra aire y se grafca:
Y

Concentracin
de O2 disuelto

Tiempo
La OTR a tiempo X es igual a la pendiente de la tangente a la curva
31
Mtodos para determinar KLa

Ventajas del Mtodos de Gassing out esttico

Rpido ~15 mins

Puede utilizar medio de cultivo

Desventajas

En escala industrial se requieren grandes cantidades de N2 para

eliminar todo el oxigeno
Mide la transferencia de O2 n un unico punto del fermentador

El tiempo de respuesta del electrdo introduce errores

32
 Mtodos para determinar KLa
Mtodo de Gassing out dinmico
Mide los niveles de O2 en cultivos que estan creciendo en el
fermentador

Se suspende la aireacin y el consumo de los

microorganismos reduce el nivel de O2

El incremento BC de O2 observado in el oxgeno disuelto es la

diferencia entre el OTR y el consumo de los microorganismos
(OUR)

33
Mtodos para determinar KLa
Mtodo de Gassing out dinmico para la dereminacin de Kla

La aireacin se suspende en el punto A y se reinicia en B

X A C

Concentracin Pendiente AB da RX
de O2 disuelto
(Velocidad de respiracin)

Pte BC da dC/dt

Tiempo 34
 Mtodo de Gassing out dinmico
Expresado como ecuacin:

dC/dt = Kla (Csat - CL) - QO2.X

QO2 = veloc respiracin (mmoles of O2 g-1 biomass h-1),
X = Biomasa

Se suspende la aireacin, se mide O2 disuelto

dC/dt = - QO2.X ... La pte AB permite determinar QO2.X

Se reinicia la aireacin y se mide O2 disuelto ,

dC/dt = KLa (Csat - CL) - QO2.X

(pte BC) (tabulada) (Observada) (pte AB)
35
 Mtodo de Gassing out dinmico

Ventajas
Puede determinar KLa durante una fermentacin real

Rpido

Desventajas
Puede trabajar en un rango limitado de concentraciones de
O2, el nivel no puede caer por debajo de la Ccrit
Dificil de aplicar en fermentaciones con alta demanda de
O2 (como la de nuestro TP!)
Mide OTR en un solo punto del fermentador, adonde se
aloja la sonda.
36
 Niveles crticos de O2 disuelto
Para maximizar la produccin de biomasa se debe satisfacer la
demanda de O2 de las clulas en cultivo manteniendo el nivel
por encimaa de la Ccrit

Si la concentracin cae por debajo de Ccrit se altera el

metabolismo con el consecuente impacto en la productividad

Importante: el consumo de puede controlarse regulando la

velocidad de administracin de los sustratos oxidables, este es
el fundamento de las denominadas fermentaciones en batch
alimentado

37
Estequiometra de la respiracin

Consideramos el uso de glucosa como fuente de carbono y energa;

C6H12O6 + 6O2 = 6H2O + 6CO2 PM glucosa =180

PM O2= 32

Para oxidar 180 g de glucosa se requiren 192 g de O2.

Si la velocidad de captacin de O2 de la biomasa (OUR) supera la

OTR se consume rapidamente todo el O2 y habr alteraciones
metabolicas

Pero puedo administrar la glucosa a una velocidad tal que el fermentador

pueda suministrar el O2 necesario para oxidarla. Esta es la razn mas
importante para establecer procesos en batch alimentado
38
Ccrit O2 para algunos microorganismos

Organism o Temperatura Concentracin crtica

oC de O2
(mmoles dm -3)

Azotobacter sp. 30 0.018

E. coli 37 0.008

Saccharomyces sp. 30 0.004

Penicillium chrysogenum 24 0.022

Ccrit es la cc de O2 por debajo de la cual la velocidad de respiracion comienza a

disminuir, se relaciona con Km de oxidasas de cadena respiratoria
39
Concentracin de O2 vs Velocidad de respiracin (Veloc Cto)

El efecto de la concentracin de O2 disuelto en la velocidad de

respiracin la cual puede relacionarse directamente con la velocidad
de crecimiento puede describirse con una ec de Michaelis Menten

Veloc respiracin (QO2) = QO2 max . conc O2 / ( Ks + conc

O2 )

Vel cto especifico = max. C/ (Ks + C) donde C = conc O2

QO2 = mmoles O2 consumidos por gramo de peso seco de

biomasa

40
Effecto de la concentracin de O2 disuelto en el QO2 de un
microorganimo

QO2

Ccritical

concentracin de O2 disuelto
El consumos especifico de O2 se incrementa al aumentar la concentracin
de O2 disuelto hasta un cierto valor denominado Ccrit 41
Factores que afectan la demanda de oxgeno

Velocidad de respiracin determinada por la afinidad de

oxidasas
Tipo de respiracin (aerbica vs anaerbica)
Tipo de sustrato (glucosa vs metano)
Otros factores ambientales (pH, temp etc.)
Relacion superficie/ volumen
Tamao (bacteria v clula animal)
Presencia de hifas, clogs, etc.
Naturaleza de la superficie (presencia de capsula, etc)

42
Para recordar: balance entre demanda y
suministro de O2 al disear un bioproceso
El diseo de un proceso de fermentacin debe ser tal que
en todo momento el OUR sea menor al OTR

OUR = QO2.X
QO2 = O2 Veloc de captacion especfica, X = Biomasa

OTR = KLa(Csat - CL )

Adems la concentracin de O2 disuelto debe ser > Ccrit

en todo momento.

43
 Para recordar: balance entre demanda y
suministro de O2 al disear un bioproceso

La fermentacin tiene un OTR mximo dictado por los

factores descriptos anteriormente, por lo tanto si es
superada la OTR mxima debe reducirse la demanda
del bioproceso mediante:

Control de la concentracin de biomasa

Control de la QO2
Combinaciones de ambas

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