UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA Y METALURGIA

Departamento Acadmico de Ingeniera Qumica

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE INGENIERA QUMICA

Laboratorio de Anlisis Instrumental

ASIGNATURA: ANLISIS INSTRUMENTAL

PRCTICA N 02
ELABORACIN DE CURVAS DE CALIBRACIN ESPECTROSCPICA Y SU APLICACIN
ANALTICA

AYACUCHO PER
ELABORACIN DE CURVAS DE CALIBRACIN ESPECTROSCPICA Y SU APLICACIN ANALTICA

I. OBJETIVOS.
Elaborar curvas de calibracin espectroscpica y observar el cumplimiento de la ley de
Beer.
Determinar la cantidad de hierro en una muestra mineral expresado en molaridad y
porcentaje en peso y el contenido de nitrato en muestras de agua, expresado en ppm.
Observar el funcionamiento y los principios de los espectrofotmetros visibles y UV.

II. FUNDAMENTO TERICO.

La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se basa en la relacin
que existe entre la absorcin de luz por parte de un compuesto y su concentracin. Cuando se
hace incidir luz monocromtica (de una sola longitud de onda) sobre un medio homogneo,
una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como consecuencia
de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz
incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo
de absorcin a medir, la muestra puede estar en fase lquida, slida o gaseosa. En las regiones
visibles y ultravioleta del espectro electromagntico, la muestra es generalmente disuelta para
formar una solucin. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorcin, el cual es una
curva que muestra la cantidad de energa radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en
cada longitud de onda del espectro electromagntico, es decir, a una determinada longitud de
onda de la energa radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiacin que es distinta
a la que absorbe otro compuesto (Fig. 1)

El mtodo espectrofotomtrico se rige por dos leyes fundamentales : Ley de Lambert y Ley de
Beer.

1.- Ley de Lambert: Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un medio
homogneo, la disminucin de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor
del medio, lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar aritmticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 2):

Ley de Lambert La siguiente relacin matemtica da cuenta de esta ley:

P / P0 = e kb

Po : Intensidad de la luz incidente , P : Intensidad de la luz transmitida, b : Espesor del medio

absorbente, k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de
onda de la luz incidente, del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del medio.

2.- Ley de Beer : La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye exponencialmente

al aumentar aritmticamente la concentracin de la sustancia absorbente, cuando este haz
pasa a travs de un medio homogneo (Fig. 3).
Transmitancia (T) : Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una muestra y la
energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa radiante incidente como la transmitida
deben ser medidas a la misma longitud de onda.

T = P / P0 = 10-abc

%T = 100 P / P0

Se acostumbra a considerar la transmitida como la razn de la luz transmitida por la muestra y

la luz transmitida por un estndar arbitrario. Este estndar puede ser el liquido (solvente) en
que esta disuelta la muestra, aire, blanco analtico (solucin que contiene todos los
componentes de la solucin problema menos la sustancia problema) u otra sustancia elegida
arbitrariamente. Debido a que la transmitancia de este estndar no es necesariamente 100%,
es necesario especificar el estndar con el cual la muestra es comparada.

Absorbancia(A) : Se define como la cantidad de energa radiante absorbida por una sustancia
pura o en solucin. Matemticamente, corresponde al logaritmo negativo de la transmitancia,
transmitancia expresada como fraccin decimal %T, transmitancia expresada como porcentaje.

A = - log T = 2 log %T

Pero. T = P / P0 = 10-abc

Luego A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc

A=abc

Esta ecuacin indica que la absorbancia es una funcin lineal de la concentracin, donde a es
una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a depender de las
unidades de b y c. Si la concentracin c est expresada en moles por litro y la longitud de la
cubeta b en centmetros, la constante a recibe el nombre de absortividad molar ( ) .

Luego A = b c

Mediciones de transmitancia y absorbancia. Las mediciones de absorbancia o transmitancia se

hacen por comparacin entre la muestra problema y un estndar arbitrario o referencia. Como
la referencia debe poseer un porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada referencia
de 100%., o una absorbancia de cero.

Curva de Calibracin Denominamos espectro de una sustancia a la representacin de

absorbancia (A) en funcin de longitud de onda (),este grfico presenta ondulaciones con
mximos y mnimos. Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la
longitud de onda correspondiente a un mximo, pues el error de medicin es mnimo y la
sensibilidad mxima. Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva
de calibracin; absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud
de onda elegida.
Una vez obtenida la grfica se determina la funcin matemtica que presenta dicha recta a
travs del tratamiento estadstico de regresin de los mnimos cuadrados, la cual relaciona la
absorbancia y la concentracin de un analito. La siguiente ecuacin matemtica corresponde a
dicha funcin:

A = m c + n (Ecuacin 1)

A : Absorbancia n : Intercepto de la recta

m : Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de la muestra y

el espesor b de la cubeta.

Luego se mide la absorbancia de la solucin problema y se interpola su valor en la grfica o se

reemplaza en la ecuacin (1), para obtener el valor de concentracin del analito. La
concentracin de la solucin problema debe estar comprendida en el rango de concentracin
que comprende la curva de calibracin. Si la concentracin de la solucin problema es menor
que la concentracin del estndar ms diluido, debe usarse el mtodo de adicin estndar,
que consiste en adicionar un volumen determinado de un estndar concentrado a la solucin
problema, antes de realizar la lectura y que permite que esta lectura este dentro de las
obtenidas para la curva de calibracin. En el caso contrario, si la concentracin del analito es
mayor que la concentracin del estndar ms concentrado la solucin problema deber ser
diluida.

Al hacer la curva de calibracin, se debe emplear la longitud de onda de mxima absorbancia

(max.), para obtener una recta con la mxima pendiente y as tener mayor sensibilidad y
precisin al hacer las mediciones. La medicin de la absorbancia de la solucin problema debe
hacerse a la misma longitud de onda que fue hecha la curva de calibracin.

ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Conceptos previos Radiacin electromagntica: es la propagacin de energa a travs del
espacio sin soporte de materia, es decir, a travs de ondas producidas por la oscilacin o
aceleracin de una carga elctrica (dualidad onda-partcula).

Naturaleza ondulatoria: caracterizada por su frecuencia () o longitud de onda ().

= nmero de ondas que pasan por un punto en la unidad de tiempo. = distancia que hay
ente dos puntos iguales de la onda, mximos, mnimos, etc.

Naturaleza corpuscular, partcula: formada por fotones con energa (E) E = h, donde h es la
constante de Plank. La radiacin electromagntica se puede ordenar en un espectro que se
extiende desde ondas de frecuencias muy elevadas (longitudes de onda pequeas; rayos
gamma) hasta frecuencias muy bajas (longitudes de onda altas; ondas de radio). La luz UV-
visible es slo una pequea parte del espectro electromagntico, visible (780-380nm); UV
(380-200nm).

III. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO

Balanza analtica
Probeta graduada
Bureta graduada
Vasos de precitados de 250 mL
 Varilla de vidrio Espectrofotmetro
Lunas de reloj Reactivos:
Esptula cido Perclrico HClO4 0.1 M
Mortero Sol. de cido sulfosalicilico 0.01 M
Fiolas de 500 mL Sol. Patrn de Fe (III) 0.01 M
Equipos: Agua destilada
Balanza analtica
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. DETERMINACIN DE HIERRO CON CIDO SULFOSALICILICO

Principio:
El hierro (III) forma un complejo coloreado(lila hasta violeta) con cido sulfosaliclico,
cuya absorbancia a 500 nm es til para una determinacin espectrofotomtrica. Para
evita la hidrlisis el complejo la medicin debe realizarse a ph=1.0

a) Para la curva de calibracin:

Diluir 1:1 la solucin patrn con HClO4 0.1 M y medir de esta ltima a fiolas de 50
mL, volmenes de 0.5, 1, 1.5, 2 y 2.5 mL, y rotular.
Agregar 30 ml de cido sulfosaliclico a cada fiola, mezclar bien y enrazar con HClO4
0.1 M.
Homogenizar y dejar en reposo de una hora para desarrollar el color.
Leer las absorbancias a 500 nm de longitud de onda y utilizando un blanco para
calibrar el equipo. El blanco solo debe contener cido sulfosaliclico y HClO4 0.1 M
en la misma proporcin de los patrones.

b) Preparacin de las muestras:

Pesar 0.25 g de muestra pulverizada y disolver con 15 mL de HCl (1:1) y 2 ml de HNO 3
concentrado en un vaso precipitado. Ebullir en forma suave, tapado el vaso con una
luna de reloj, hasta que cese de desprender NO2.
Enfriar, enjuagar la luna de reloj y las paredes del vaso hacia el otro vaso.
Filtrar directamente a una fiola de 100 mL, recuperando la solucin coloreada del vaso,
papel de filtro con destilada. Enrazar con HClO4 0.1 M.
 Medir 2 mL de esta solucin a una fiola de 50 ml, agregar 30 mL de cido
sulfosaliclico, mezclar, enrazar con HClO4 0.1 M homogenizar y medir su
absorbancia igual que de los patrones.

V. DATOS, CALCULOS Y RESUTADOS.

5.1 DETERMINACION DE HIERRO CON ACIDO SULFOSALICILICO

a) Reactivos a preparar
Solucin patrn de hierro (III) 0.01M en HClO4 0.1 M
Solucin 0.1 M HClO4
Solucin 0.01M de cido sulfosalicilico en HClO4 0.1 M
CALCULOS:
Para preparar la solucin de 100 mL de Fe+3 = FeCl3.6H2O de 0.01 M

Datos de FeCl3.6H2O
PM = 270.30 g/mol 0.2703g--------------->100%
%C = 99 %
X = m ----------------->99%
Vsol = 100 ml = 0.1 L
M=0.01 mol/L 0,2703 99
=
100
=
=
= 0.2676 ( )
= 0.01 270.30 0.1

= 0.2703

Para preparar la solucin de 500 mL de HClO4 0.1 M

Datos de HClO4 concentrado

= 1.68 g/ml
PM = 100.47 g/mol
%C = 71 %
PM Vsol M
=
Para preparar%
la solucin de 500 mL de C6H3(OH)(COOH).SO3.2H2O de 0.01 M
100.47g/mol 0.5L 0.1/
=
0.71 1.680/
= 4.21

Para preparar la solucin de 500 mL de C6H3(OH)(COOH).SO3.2H2O de 0.01 M

 Datos de C6H3(OH)(COOH).SO3.2H2O
PM = 254.22 g/mol
%C = 99.5 %
Vsol = 500 ml = 0.5 L
M=0.01 mol/L

= 0.01 254.22 0.5

= 1.2711

1.2711 g--------------->100%

x = m ----------------->99.5%

1.2711 99.5
=
100
= = 1.2647

DATO 1: para determinacin de hierro con cido sulfosaliclico.

Procedimiento para la curva patrn.

CLCULOS DE ENSAYO N1: Concentracin final de la solucin patrn en cada una de las
fiolas:
 . = .

Fiola 1 : Vo = 1 mL

Co = 0.01 mol/L

Vf = 50 mL

Cf = x

. 10.01
=
= 50
=

Fiola 2 : Vo = 2 mL

Co = 0.01 mol/L

Vf = 50 mL

Cf = x

. 20.01
=
= 50
=

Fiola 3 : Vo = 3 mL

Co = 0.01 mol/L

Vf = 50 mL

Cf = x

. 30.01
=
= 50
=

Fiola 4 : Vo = 4 mL

Co = 0.01 mol/L

Vf = 50 mL

Cf = x
 . 40.01
=
= 50
=

Fiola 5 : Vo = 5 mL

Co = 0.01 mol/L

Vf = 50 mL

Cf = x

. 50.01
=
= 50
=

Tabla N 1

Volumen inicial de Concentracin final de Absorbancia a

Fiola
solucin. Patrn (mL) solucin. Patrn (mol/L) = 500 nm
1 1 2*10^-4 0.305

2 2 4*10^-4 0.600

3 3 6*10^-4 0.870

4 4 8*10^-4 1.157

5 5 1*10^-3 1.439

CURVA DE CONCENTRACIN
1.6
1.4 y = 1412.5x + 0.0267
1.2 R = 0.9999
ABSORBANCIA

1
0.8
Series1
0.6
Linear (Series1)
0.4
0.2
0
0 0.0005 0.001 0.0015
CONCENTRACIN

Determinacin de hierro en la muestra 6 en M y %(P) de la grafica

Ecuacin De La Recta Ajustada
Y = 1412.5x + 0.0267
Dnde: Y= A = Absorbancia
X = Cf = concentracin (M)

Reemplazando A6 = 1.148 en la ecuacin:

0.0267
=
1412.15
1.148 + 0.0267
=
1412.15
= 7.9384 104 /
Concentracin en 2 mL
=
Concentracin inicial (CO; M)

50 7.9384 104 /
=
Vf=50mL 2
Cf=7.9384 104 / = . /
Vo=2mL

Porcentaje en peso %(p) de Fe.

= % = 100

= . / 55.85 0.1

= .

Hallando el % P del Fe

0.1108
% = 100
0.2606

% = . %

VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

CONCLUSIONES:
Se calcul la cantidad de hierro en la muestra expresado en molaridad y porcentaje en
peso.
El porcentaje de contenido de hierro en la muestra del mineral dio como resultado
45.52% en peso.
Se realiz las curvas de calibracin espectroscpica observando el cumplimiento de la
Ley de Beer.
Se logr observar el funcionamiento y principios de los espectrofotmetros visibles y
UV.

RECOMENDACIONES:
En cada prueba de espectrofotmetro se debe limpiar las cubetas empleadas.
Para leer la absorbancia del hierro las muestras se deben dejar en reposo durante
varias horas aproximadamente 1 1/2 horas.

VII. BIBLIOGRAFA.
Skoog, D. A. 1996. Fundamentos de Qumica Analtica 4a ed. Ed. Revert.
Qumica Analtica Cuantitativa, Day and Underwood.
Qumica Analtica, Skoog and West.
Anlisis Instrumental, Douglas R. Skoog and Donald M. West.