Trabajar con aparatos de laboratorio una gua.

Informacin
sobre la medicin del volumen
F I R S T C L A S S B R A N D
Prefacio
La medicin de volmenes es de importancia esencial en los la-
boratorios. Antes que nada, el usuario tiene que aclarar con qu
exactitud han de efectuarse las mediciones individuales. Despus,
partiendo de esta base, puede elegir el tipo de aparato a utilizar en
el caso concreto de medicin.
Mediciones exactas exigen aparatos de medicin exactos y un manejo
correcto. Para un mejor entendimiento de los aparatos volumtricos
utilizados en el laboratorio y su manejo se presenta a continuacin
una explicacin del concepto ms importante de clasificacin, funcin
y uso, tomando como ejemplos aparatos de laboratorio BRAND.
El folleto 'Informacin sobre la medicin de volumen' tiene por
objeto proporcionar al lector una visin general de los aparatos vo-
lumtricos. No substituye de ninguna manera las instrucciones de
manejo de los aparatos Liquid Handling descritos. De todos modos,
es necesario que Ud. lea las instrucciones de manejo suministradas
con cada aparato antes de la puesta en marcha del mismo es para
su propia seguridad y exito.

Si Ud. quiere ms informacin sobre este tema, por favor contc-

tenos.

BRAND GMBH + CO KG
P.O. Box 11 55
97861 Wertheim/Main

Telfono: +49 93 42 808-0

Telefax: +49 9342 808-98000
E-Mail: info@brand.de
Internet: www.brand.de

BRAND GMBH + CO KG Reservados todos los derechos

 Contenido

n Versin general material volumtrico

5

n Fabricacin de material volumtrico en vidrio

6
De la materia prima a los aparatos volumtricos de precisin acabados 6
Codificacin de aparatos volumtricos 8
Aparatos volumtricos y su clasificacin en clases de exactitud 9

n Trabajar con aparatos volmtricos en vidrio

10
Menisco del lquido 10
Tiempos de vertido y de espera 11
Pipetas en general 12
Manejo de pipetas 13
Manejo de matraces aforados 15
Manejo de probetas graduadas 15
Manejo de buretas 16
Manejo de picnmetros 17
Trabajar con auxiliares de pipeteado 18

n Trabajar con aparatos Liquid Handling

21
Dosificar con dosificadores acoplables a frascos 22
Valorar con buretas acoplables a frascos 24
Pipetear con pipetas con cojn de aire 25
Pipetear con pipetas de desplazamiento directo 29
Dosificar con dispensador manual 30

n Sobre la exactitud 32

n El control de los medios de anlisis 33

Procedimiento del control de volumen 34
Software de calibracin 36
Servicio de calibrado 36

n Certificado de conformidad y certificados

37

n Aparatos volumrtricos BLAUBRAND USP

38

n La directiva DVI (Diagnstico In Vitro) 39

n Gestin de la calidad
40

n La limpieza de aparatos de laboratorio 41

n Normas de seguridad
43
 Material volumtrico

Vison general del material volumtrico

Material volumtrico
en vidrio/en plstico
La medicin del volumen de un lquido es parte de la rutina diaria en cada laboratorio.
El material volumtrico en vidrio, como matraces aforados, pipetas aforadas y graduadas, pro-
betas graduadas y buretas, forma por tanto parte del equipo bsico. Se pueden fabricar de
vidrio o de plstico. Un gran nmero de fabricantes ofrecen aparatos volumtricos en calidades
diferentes. Jarras graduadas, vasos, matraces Erlenmeyer, y embudos de goteo no son aparatos
volumtricos. No estn ajustados de forma exacta, la escala solamente sirve como referencia.
Aqu sigue, como ejemplo, una seleccin de aparatos volumtricos de calidad BRAND:

Matraces aforados Pipeta aforada Pipeta graduada Probeta graduada Bureta

Aparatos Liquid Handling

Para responder a las exigencias cada vez ms es-
trictas en las mediciones de volmenes realizadas
en los laboratorios (investigaciones en serie, series
de ensayos), se desarrollan continuamente nuevos
aparatos, por ejemplo para la dosificacin, para
el pipeteado y la valoracin. Los aparatos de los
diferentes fabricantes, concebidos para la misma
aplicacin, son parecidos en trminos del principio
de funcionamiento. Sin embargo, en los detalles
de construccin y en el diseo de los aparatos de
los diferentes fabricantes existen en parte grandes
diferencias. Aqu sigue, como ejemplo, una seleccin
de aparatos Liquid Handling de BRAND:
Dosificador Dosificador Bureta
acoplable a frasco acoplable a frasco acoplable a frasco

Pipetas monocanal Pipetas multicanal Pipeta de desplaza- Dispensador manual, Dispensador manual,
con cojn de aire con cojn de aire miento directo mecnico electrnico

BRAND

5
Material volumtrico en vidrio Fabricacin
Fabricacon de material volumtrico en vidrio
De la materia prima a los aparatos volumtricos de precisin acabados
Las piezas en bruto
Para la fabricacin de pipetas
aforadas y graduadas se utili-
zan vidrio de soda (por ej. vidrio
AR-GLAS), o bien, para la fa-
bricacin de matraces afora-
dos, probetas graduadas y bu-
retas, vidrio borosilicato (por ej.
Vidrio borosilicato 3.3). Estos
tipos de vidrio estn adaptados
a las altas exigencias del labo-
ratorio respecto a la resistencia
qumica y fsica.
La base para la produccin de
aparatos volumtricos de alta
precisin la constituyen las
piezas en bruto de alta calidad
y una exigente comprobacin
estadstica de las caractersti-
cas de calidad requeridas. Por
ejemplo, las tensiones trmicas
existentes en las piezas en
bruto se eliminan mediante un
calentamiento y enfriamiento
controlado de las mismas.
Ajuste
Cada aparato volumtrico de vi-
drio es ajustado individualmen-
te por BRAND, o sea, se co-
loca una determinada y exac-
ta cantidad de agua en el apa-
rato volumtrico y se aplica la
marca de ajuste a la altura del
punto ms bajo del menisco.
En aparatos volumtricos con
escala se realizan dos marcas
de ajuste. Sistemas controla-
dos por ordenador aseguran la
mxima precisin posible sien-
do la fabricacin completamen-
te automtica. Un control esta-
dstico de procesos (SPC) per-
mite la fabricacin de apara-
tos volumtricos con la mnima
desviacin posible del valor no-
minal (exactitud) y con una m-
nima dispersin de los valores
individuales (coeficiente de va-
riacin).
BRAND
6
Esta es una condicin indis-
pensable para obtener la mejor
resistencia mecnica posible
y para garantizar que, con las
cargas trmicas posteriores, el
volumen permanezca constante.
El material volumtrico
BLAUBRAND as como
SILBERBRAND se puede ca-
lentar por lo tanto en la estufa
de secado o de esterilizacin
Probetas graduadas piezas en bruto
Generalmente se diferencia entre ajuste por contenido 'In' y por
vertido 'Ex'.
Ajuste por contenido 'In':
La cantidad de lquido conteni-
da corresponde exactamente al
volumen indicado sobre el apa-
rato. A este tipo de aparatos
volumtricos pertenecen por
ej. las probetas graduadas, los
matraces aforados y las pipetas
capilares hasta 200 l.
Instalacin de ajuste para las pipetas graduadas
hasta 250 C, sin que haya
que temer una variacin de
volumen.
Sin embargo, debe tenerse
siempre en cuenta que en
material de vidrio un calenta-
miento irregular o un cambio
brusco de temperatura pro-
voca tensiones trmicas que
pueden conducir a la rotura.
Ajuste por vertido 'Ex':
La cantidad de lquido vertida
corresponde exactamente al vo-
lumen indicado sobre el aparato.
La cantidad de lquido que per-
manece adherida a la pared de
vidrio, debida a la humectacin,
se tuvo en cuenta al realizar el
ajuste. A este tipo de aparatos
volumtricos pertenecen por ej.
las pipetas graduadas, las pipe-
tas aforadas y las buretas.
Por tanto:
Colocar el material de vidrio
siempre en la estufa de seca-
do o de esterilizacin fra y
calentar despus lentamente.
Tras acabar el tiempo de seca-
do o de esterilizacin, desco-
nectar la estufa de secado o de
esterilizacin y dejar enfriar el
material lentamente. No colo-
car nunca material volumtrico
sobre una placa calefactora.
La temperatura de
referencia
La temperatura de referencia
normalizada, o sea la tempera-
tura a la cual el aparato volu-
mtrico debe contener o verter
el volumen nominal indicado, es
de 20 C.
En el caso de que el ajuste o
la calibracin se realicen a una
temperatura diferente, los valo-
res medidos debern corregirse
correspondientemente.
Nota:
Debido al pequeo coeficien-
te de dilatacin del vidrio, en el
uso prctico la temperatura de
referencia tiene escasa impor-
tancia, pues las desviaciones
de las mediciones causadas
por la dilatacin del volumen de
los aparatos de medicin, por
regla general son inferiores al
lmite de error.

La impresin
Tras el ajuste se realiza la im-
presin del aforo y la rotulacin
en serigrafiado. BRAND utiliza
plantillas extensibles para todas
las pipetas graduadas, buretas,
probetas graduadas y probetas
con tapn. Mediante extensin,
las plantillas coinciden exacta-
mente con las marcas de ajuste
y por tanto tambin los volme-
nes intermedios tienen mxima
precisin.
Con respecto a pipetas, se
aplica en su extremo superior
adicionalmente un anillo de
color llamado 'cdigo de color',
que sirve para una mejor distin-
cin de capacidades de pipeta
fcilmente confundibles. Est
definido en la norma ISO1769
qu color se destina para cada
volumen nominal.
La fusin de la pintura
La fusin de la pintura es el
ltimo paso en el proceso de
convertir el cuerpo en bruto en
un aparato volumtrico.
El proceso de fusin cuida-
dosamente controlado es,
junto a las tintas de calidad
especialmente fabricadas para
este uso, condicin esencial
para una graduacin duradera
sobre el material volumtrico.
Esto significa: calentamiento
y enfriamiento controlados del
material volumtrico graduado.
La temperatura mxima se
encuentra entre 400 C y
550C, segn el tipo de vidrio
usado.
Las tintas de impresin
BRAND utiliza solamente tintas de calidad concebidas especialmente para material volumtrico de
vidrio.
Esmalte azul:
Alto contraste de colores, una
combinacin ptima de resisten-
cia y legibilidad. Para el material
volumtrico BLAUBRAND
(clase A/AS) se emplea pintura
de esmalte azul.
Impresin sobre matraces aforados, aplicada a mquina
Probetas graduadas con impresin, antes de la fusin
Material volumtrico en vidrio Fabricacin
Esmalte blanco:
Para el material volumtrico
SILBERBRAND (clase B) se
emplea pintura de esmalte
blanco.
Colocante marrn por
difusin:
Alta resistencia, por ej. frente
a mtodos de limpieza agresi-
vos. Se difunde en la superficie
y slo puede destruirse por
abrasin del vidrio. Se emplea
para aparatos volumtricos que
se someten a condiciones de
limpieza especialmente agre-
sivas. El colorante marrn por
difusin se utiliza para aparatos
volumtricos BLAUBRAND
ETERNA (clase A/AS) y
tambin para aparatos volum-
tricos SILBERBRAND ETERNA
(clase B).
Aseguramiento de la calidad
En BRAND, el aseguramiento
de la calidad se realiza median-
te controles continuos durante
la produccin y mediante con-
troles estadsticos en la inspec-
cin final. (Para informaciones
detalladas vase pg. 39).
BRAND
7
Material volumtrico en vidrio Fabricacin

Codificacin de aparatos volumtricos

Nmero de lote

Ejemplo:
Pipetas aforadas BLAUBRAND

Distintivo de BRAND para cer-

tificar la conformidad de acuer-
do con la norma de contraste
alemana (Eichordnung)
y la norma DIN 12600
Fabricante
Denominacin de la norma
Marca registrada de BRAND
para aparatos volumtricos
Pas de origen
de clase A/AS

Temperatura de referencia
(20C), tiempo de espera
Volumen nominal
(5s), ajuste (Ex = vertido)

Lmite de error
Clase 'A' significa que el aparato
es de la ms alta calidad.
Unidad de volumen 'S' = vaciado rpido

Las siguientes codificaciones deben aplicarse Adicionalmente, pueden ser impresas so-
en cada aparato volumtrico: bre el aparato las siguientes indicaciones:

n volumen nominal l pas de origen

n smbolo de unidad: ml o cm l lmite de error

n temperatura de referencia: 20 C l marca (aqu BLAUBRAND)

n ajuste: Ex o In l norma, p. ej. ISO 648

n clase: A, AS o B l nmero de lote

n eventualmente tiempo de espera:

por ejemplo Ex + 5 s

n nombre o distintivo del fabricante

BRAND

8
 Material volumtrico en vidrio Fabricacin

Clasificacin en clases de exactitud

La gama de aparatos volumtricos dispone en general de dos clases de exactitud:

Clase A/AS
Segn DIN EN ISO, los aparatos volumtricos de la clase A y Clase A/AS
AS tienen lmites de error idnticos. Por regla general, estos son designa siempre a la mejor
alcanzados slo por aparatos volumtricos de vidrio. La excepcin clase de exactitud
son los matraces aforados de plstico BRAND, fabricados en PFA
S significa: vaciado rpido
o en PMP, y las probetas graduadas de plstico BRAND, fabrica-
(pipetas y buretas)
das en PMP, que corresponden a la clase A y que se han conce-
bido para mximas exigencias. solamente la clase A/AS
En los aparatos volumtricos de la clase AS con ajuste por vertido est marcaje DE-M
'Ex', la adicin de 'S' significa vaciado rpido. Graduacin:
Los aparatos volumtricos de la clase AS se han impuesto de Las divisiones largas de la
forma generalizada. En las pipetas y buretas con orificio amplio de escala abarcan aproximada-
la punta, el peligro de obstruccin es pequeo. El comportamiento mente un 90% del perme-
de vaciado de lquidos diferentes se compensa cumpliendo con tro del tubo, o eventualmen-
los tiempos de espera especificados (vase 'Tiempo de vaciado y te estn aplicadas como
de espera' en la pg. 11). marcas anulares.

Clase B
El material volumtrico de la clase B est disponible en vidrio o Clase B
en plstico. Para la clase B, en general se acepta el doble de los normalmente el doble de los
lmites de error que para la clase A/AS. Los aparatos de medicin lmites de error de la clase
de la clase B con ajuste por vertido Ex no tienen tiempos de A/AS
espera especificados.
Graduacin:
Las divisiones largas de la
escala abarcan aproxima-
damente un 20 - 40% del
permetro del tubo.

Decisin a tomar: aparatos volumtricos

de vidrio o de plstico?

No existe un material univer- Con PP se producen pipetas Probeta graduada de PMP,

sal que cumpla con todos los
requerimientos del laboratorio.
Se tiene que elegir entre vidrio
y plstico segn la aplicacin,
el tipo de producto, as como
las propiedades especficas de
estos materiales y el aspecto
econmico.
Las ventajas decisivas del
material volumtrico en pls-
tico son su alta resistencia a la
rotura y su bajo peso.
Los materiales que probaron su
eficiencia son PP, PMP y PFA.
aforadas, pipetas graduadas, clase A
matraces aforados y probetas
graduadas, cuya exactitud co-
rresponde a los lmites de error
de la clase B.
Los materiales PMP y PFA
tambin se utilizan para apara-
tos de medicin cuyos lmites
de error corresponden a los de
la clase A, p. ej. matraces afo-
rados (PMP/PFA) y probetas
graduadas (PMP). Debido a su
alta pureza, el material PFA se
utiliza especialmente para an-
lisis de trazas.

BRAND

9
Material volumtrico en vidrio Menisco del lquido
Trabajar con material volumtrico en vidrio
Menisco de lquido
El trmino 'menisco' se utiliza
para describir la curvatura de la
superficie del lquido.
El menisco adopta forma con-
vexa o cncava. La formacin
de la curvatura resulta de la
relacin de fuerzas entre adhe-
sin y cohesin.
Ajuste el menisco
Un prerequisito para la medicin exacta de volmenes es el ajuste exacto del menisco.
Menisco cncavo en una pipeta
graduada.
En el caso de un menisco cn-
cavo, la lectura del volumen se
realiza a la altura del punto ms
bajo de la superficie del lquido.
El punto ms bajo del menisco
debe tocar el borde superior de
la divisin de la escala.
Lectura del menisco
Para leer el menisco sin error
de paralaje, el aparato volu-
mtrico debe estar en posicin
vertical y los ojos del operador
deben encontrarse a la altura
del menisco. En esta posicin,
el aforo se visualiza como una
lnea.
Colocando un papel oscuro
inmediatamente por debajo del
aforo, o una divisin de la es-
cala detrs del aparato, el me-
nisco se observar ms oscuro
y podr leerse ms fcilmente
contra un fondo claro.
BRAND
10
Si las molculas del lquido
experimentan mayor atraccin
hacia la pared de vidrio (fuerza
de adherencia) que entre si
mismas (fuerza de cohesin),
el menisco adoptar forma
cncava. Es decir: hay un
pequeo aumento en el ngulo
de contacto del lquido con la
pared. Esto ocurre en el caso
Menisco convexo en una pipeta
graduada.
En el caso de un menisco con-
vexo, la lectura del volumen se
realiza a la altura del punto ms
alto de la superficie del lquido.
El punto ms alto del menisco
debe tocar el borde inferior de
la divisin de la escala.
Aforo /
Divisin de
la escala
de las soluciones acuosas, por
ejemplo. Si el dimetro de una
pipeta es adecuadamente pe-
queo, por ej. el de una pipeta
capilar, la fuerza de adherencia
es suficiente no solamente para
elevar el lquido en los puntos
de contacto con la pared, sino
tambin para hacer ascender el
nivel del lquido (efecto capilar).
Figura de menisco en un apa-
rato volumtrico con franja de
Schellbach, como por ej. una
bureta.
La franja de Schellbach es
una estrecha franja azul en el
centro de una franja blanca. Se
aplican en la parte posterior de
buretas para mejor legibilidad.
Debido a la refraccin de la luz,
la franja azul aparece en forma
de dos puntas de flecha a la
altura del menisco. La lectura
se realiza a la altura del punto
de contacto de las dos puntas.
Menisco
Si la fuerza de cohesin entre
las molculas del lquido es
mayor que la fuerza de adhe-
rencia que ejercen las molcu-
las de la pared de vidrio sobre
las molculas del lquido, el
menisco adoptar forma con-
vexa. Esto ocurre en el caso
del mercurio, por ejemplo.
Indicacin importante:
Durante la utilizacin, la tem-
peratura del lquido y del entor-
no es importante. Mientras que
la dilatacin de los aparatos vo-
lumtricos de vidrio es despre-
ciable, la dilatacin de los l-
quidos a distintas temperatu-
ras debe tenerse en cuenta.
Para mantener el error de vo-
lumen lo ms pequeo posible,
los volmenes de todos los l-
quidos interrelacionados deben
medirse a una temperatura ha-
bitual (la que predomine todos
los das). En especial para la
preparacin de soluciones es-
tndar, por ejemplo el pipetea-
do y la valoracin de la mues-
tra deben realizarse a la misma
temperatura. Tambin debern
evitarse grandes diferencias de
temperatura entre el aparato de
medicin y el lquido.
 Material volumtrico en vidrio Tiempos de vertido y de espera

Tiempos de vertido y de espera

En los aparatos volumtricos (ajustados por vertido 'Ex'), el volumen de lquido vertido es siempre
menor que el volumen contenido en el aparato. Esto se debe a que, debido a la humectacin, en la
superficie interior del aparato de medicin queda una pelcula de lquido retenida. El volumen de esta
pelcula de lquido depende del tiempo de vertido, el cual fue tenido en cuenta durante el ajuste del
aparato de medicin.

Errores de volumen posibles:

El volumen vertido por una pipeta o una bureta ser menor cuando su punta est quebrada (menor
tiempo de vertido), o mayor cuando la punta no est limpia, dificultando el vertido del lquido (mayor
tiempo de vertido). El volumen tambin aumenta cuando, despus del pipeteado, el lquido restante
en la punta es soplado equivocadamente. (Manejo correcto de pipetas, vase la pg. 13.)

El tiempo de vertido El tiempo de espera

Como tiempo de vertido se El tiempo de espera comienza Tiempo de espera de la

define al perodo de tiempo ne-
cesario para el descenso libre
del menisco (vertido de agua
por la fuerza de la gravedad),
desde el aforo superior hasta
el aforo inferior de volumen, o
hasta la punta del aparato. En
los aparatos volumtricos de la
clase AS, a esto debe sumarse
el tiempo de espera especifi-
cado.
en el momento en el cual el
menisco permanece quieto a la
altura de la marca de volumen
inferior o bien a la punta de
vertido. En el tiempo de espera
se escurren restos de lquido
de la pared de vidrio.
clase AS:
El tiempo de espera de 5 s
definido para las pipetas afo-
radas y graduadas de la clase
AS es el tiempo que, despus
del aquietamiento aparente
del menisco en la punta de
vertido, deber aguardarse
antes de que la punta pueda
retirarse de la superficie interior
del recipiente de depsito. El
fabricante deber indicar sobre
la pipeta el tiempo de espera
de 5 s (vase la pg. 8).

Ejemplo de tiempos de vertido y de espera

referidos a clases diferentes de pipetas
(pipeta aforada de 25 ml)

Clase A (marcaje DE-M)

25 - 50 s tiempo de vertido (sin tiempo de espera)

Clase AS (marcaje DE-M)

10 - 20 s tiempo de vertido + 5 s tiempo de espera

Clase B

10 - 50 s tiempo de vertido (sin tiempo de espera)

BRAND

11
Material volumtrico en vidrio Manejo

Trabajar con material volumtrico

Pipetas en general
Las pipetas son aparatos volumtricos normalmente ajustados por vertido Ex para la medicin de
volumen del lquido. Estas son medidas volumtricamente en el proceso de fabricacin de forma
individual y se les aplica una o varias marcas de medicin.
Se distinguen generalmente los siguientes tipos de pipetas: pipetas aforadas y pipetas graduadas
(ajustadas por vertido 'Ex'), as como pipetas capilares hasta 200 l (ajustadas por contenido 'In').

Pipetas aforadas Pipetas graduadas

Ajuste: Ajuste:
Clase AS: 'Ex + 5 s' Clase AS: 'Ex + 5 s'
Clase B: 'Ex' Clase B: 'Ex'
Normalmente de mayor La escala permite leer vol-
exactitud de medicin que menes parciales
las pipetas graduadas
Tipos de pipetas graduadas:
Modelos de pipetas afora- tipo 2 volumen nominal
das: arriba, vaciado total
El modelo ms importante tambin para vol-
es la pipeta aforada con menes parciales
1solo aforo (vertido com-
tipo 1 volumen nominal
pleto).
abajo, vaciado par-
Los modelos con 2 aforos cial para todos los
son menos usuales (vertido volmenes
parcial).
tipo 3 volumen nominal
abajo, vaciado total
solamente para el
volumen nominal

pipeta aforada con 1 aforo pipeta graduada tipo 2,

volumen nominal arriba

Pipetas capilares Pipetas capilares

por ej. intraMARK por ej. intraEND
BLAUBRAND BLAUBRAND

ajustadas por contenido 'In' ajustadas por contenido 'In'

una marca de aforo anular sin aforo
volumen limitado por un volumen limitado por ambos
extremo y por el aforo extremos
(Capilares end-to-end)

BRAND

12
 Material volumtrico en vidrio Manejo

Manejo de pipetas

Pipetas ajustadas por vertido 'Ex'

Pipeteado correcto con pipetas aforadas de 1 aforo (ejemplo con volumen nominal de
25 ml) y pipetas graduadas tipo 2, clase AS (ejemplo con volumen parcial de 3 ml).
Dispositivo auxiliar: auxiliar de pipeteado (vase pg. 18)

Llenado Pipeta
aforada,
Tipo 2 Tipo 1 Tipo 3

de 1 aforo Vaciado Vaciado Vaciado

1. Llenar la pipeta utilizando un total, parcial, total,
auxiliar de pipeteado, hasta volumen punto 0 punto 0
sobrepasar la marca del volu- nominal arriba arriba
men deseado aprox. 5 mm. arriba
Ajustar el
2. Limpiar el exterior de la pun- menisco Ajustar el
ta de la pipeta con un pao 2x menisco
2x
de celulosa.
3. Ajustar el menisco. Ajustar el
4. Quitar la gota restante en la menisco
1x
punta.

Vaciado
5. Mantener la pipeta en posi-
cin vertical, colocar la punta
de la pipeta contra la pared
interna de un recipiente de
recogida que se mantiene
inclinado y dejar salir el con-
tenido. No apartar la punta
de la pipeta de la pared!
6. Tan pronto como el menisco
permanezca quieto en la Tipo 1 y tipo 3
punta, empieza el tiempo de
espera de 5 s (solamente en Para la utilizacin de pipetas
pipetas, clase AS). Ajustar el graduadas de tipo 1 3 (punto
menisco cero arriba), el menisco debe:
7. Una vez transcurrido el tiem- 1x
po de espera, llevar la punta 1.) en primer lugar, ajustarse
de la pipeta aprox. 10mm en el punto cero y, a conti-
hacia arriba contra la pared nuacin vaciarse el lquido
del recipiente y desprender hasta un poco por encima
la gota. Al hacerlo, se ver- del volumen parcial desea-
ter un poco ms de lquido do.
residual. 2.) Despus de un tiempo de
espera de 5 s el menisco
debe ajustarse una segun-
Nota: da vez.
La pequea cantidad de
lquido que permanece
dentro de la punta no
debe aadirse a la mues- El trabajo con pipetas gradua-
tra, por ej. por soplado, das de tipo 2 es mucho ms
ni tampoco ingresar al rpido y sencillo. En las pipetas
recipiente: la pipeta ha de tipo 1 y en las hasta ahora
sido ajustada teniendo en habituales de tipo 3, existe
cuenta este volumen de adems el peligro de que,
lquido residual. debido a la necesidad de un
segundo ajuste del menisco,
se vierta lquido en exceso y
la muestra deba prepararse
nuevamente (como tambin
sucede con pipetas aforadas
de dos aforos).

Aspirar Escurrir Ajustar el Vaciar

menisco
BRAND

13
Material volumtrico en vidrio Manejo

Manejo de pipetas

Pipetas ajustadas por contenido 'In'

Pipeteado correcto con pipetas capilares
Dispositivo auxiliar: auxiliar de pipeteado (vase pg. 18)

Pipetas capilares son pipetas con un dimetro interior muy pequeo. La aspiracin del volumen
de lquido se realiza mediante un auxiliar de pipeteado o automticamente por la capilaridad.
Tras el vaciado, tiene que enjuagarse la pipeta capilar varias veces con la solucin de dilucin.

Llenado
Aspirar el volumen de lquido
lo ms exactamente posible
hasta la marca deseada.

Mantener el capilar en po-

sicin horizontal y escurrirlo
cuidadosamente con un
pao de celulosa.

Vaciado
Para vaciar el lquido, soplar
utilizando un auxiliar de
pipeteado y enjuagar 2 a 3 Aspirar Escurrir Vaciar
veces con diluyente (ya que
se trata de un capilar ajusta-
do por contenido In).

Frecuentemente los capila-

res end-to-end se colocan
directamente en la solucin
de dilucin y se lavan por
vibracin.

Soporte con
capilare end-to-end

BRAND

14
 Material volumtrico en vidrio Manejo

Manejo de matraces aforados

Los matraces aforados, clase A Uso de un matraz aforado para la preparacin de una solucin
y B, son aparatos volumtricos patrn:
ajustados por contenido In,
empleados principalmente para 1. Pasar al matraz aforado la cantidad exactamente pesada de
preparar soluciones exactas, sustancia o un concentrado lquido estndar.
como por ej. soluciones patrn
y estndar, y diluciones. 2. Llenar el matraz con agua destilada hasta la mitad aproxima-
Los nuevos mtodos de an- damente y agitar el matraz para facilitar la disolucin o bien el
lisis exigen matraces aforados mezclado.
de pequeo volumen. Los
matraces aforados con forma 3. Adicionar agua destilada hasta llegar casi al aforo.
estndar de esta gama de vo-
lumen (hasta aprox. 50 ml) se 4. Llenar el resto del volumen utilizando un frasco lavador (o una
vuelcan fcilmente debido a la pipeta) hasta que el menisco se ajuste exactamente a la altura
posicin desfavorable del cen- de la marca. Importante: la lectura tiene que efectuarse a la
tro de gravedad y a su relativa- altura de los ojos! La pared de vidrio por encima del aforo no
mente pequea superficie de debe mojarse.
apoyo. Los matraces aforados
con forma trapezoidal propor- 5. A continuacin, tapar el matraz y agitarlo invirtindolo varias
cionan una estabilidad mucho veces para facilitar el mezclado.
mayor. El centro de gravedad
est ms bajo y la superficie
de la base tiene ms del doble
de tamao que en los matraces
aforados con forma estndar
del mismo volumen.

Manejo de probetas graduadas y con tapn

Probetas graduadas
Las probetas graduadas, clase
A y B, son aparatos volum-
tricos ajustados por contenido
In o sea, indican el volumen
contenido de forma exacta.
Manejo:
Llenar con lquido.
Ajustar el menisco al aforo
deseado (realizar la lectura
a la altura de los ojos!).
No se debe mojar la pared
de vidrio por encima del
aforo.
El volumen ledo correspon-
de a la cantidad de lquido
contenida.
Probetas con tapn
Las probetas graduadas con
tapn, al igual que las probetas
graduadas, tienen ajustadas
por contenido In. Adicional-
mente estn provistas con un
tapn esmerilado.
Las probetas graduadas con
tapn pueden utilizarse, de
igual forma que los matraces
aforados, para preparar solu-
ciones estndar y diluciones.
Despus de la medicin de,
p. ej., distintos volmenes
de lquido, estos pueden
mezclarse directamente por
agitacin en una probeta
con tapn.

Nota: Nota:
En el laboratorio, las probetas Al mezclar dos lquidos puede
graduadas se utilizan a menudo producirse una modificacin del
como un aparato de medicin volumen.
ajustados por vertido Ex.
Las mediciones con agua die-
ron como resultado que, debido
a los restos por humectacin,
el volumen vertido se redujo en
aproximadamente el valor del
lmite de error de la probeta
graduada. Condicin necesa-
ria: el lquido debe verterse
lentamente sin interrupcin y,
para el escurrimiento total del
mismo, la probeta debe man-
tenerse inclinada durante 30
segundos adicionales.

BRAND

15
Material volumtrico en vidrio Manejo

Manejo de buretas
Buretas son aparatos volumtricos en vidrio ajustados por vertido Ajuste
'Ex', que sirven para la valoracin en el anlisis de patrn. Clase AS: 'Ex + 30 s'
Clase B: 'Ex'

Nota sobre el tiempo de espera:

Contrariamente a las pipetas, en la aplicacin prctica las buretas
no se utilizan de igual forma que para la calibracin. Tpicamen-
te, durante la valoracin se consume un volumen menor que el
nominal y, cerca del punto de cambio de color, la solucin patrn
se adiciona gota a gota para evitar una sobrevaloracin.
Esta adicin gota a gota requiere un tiempo igual, o incluso
mayor, que el tiempo de espera establecido. De esto se concluye
que en la aplicacin prctica de las buretas clase AS, no es nece-
sario cumplir con el tiempo de espera estipulado de 30 segundos.

Diferentes versiones de buretas:

Manejo
1. Enjuagar la bureta con la solucin patrn a utilizar y alinearla
de manera que el tubo de la bureta quede vertical. Al hacerlo,
tener en cuenta que slo pueden utilizarse soluciones patrn
totalmente homogneas. No debe haber ni turbiedades, ni flo-
culaciones, ni depsitos (control visual).
2. Llenar la bureta hasta sobrepasar ligeramente la marca cero.
Para desairear la llave de bureta, dejar salir el lquido hasta lle-
gar, como mximo, al volumen nominal. Si apesar de ello per-
manece una pequea burbuja de aire en la bureta, mantener la
bureta inclinada y golpear con el dedo ligeramente en el lugar
donde se encuentre la burbuja.
3. Aspirar la solucin patrn sin formacin de burbujas de aire
hasta sobrepasar en aprox. 5 mm la marca cero. No debe mo-
jarse la pared de vidrio por encima de este nivel.
4. Al dejar salir el lquido ajustar exactamente el punto cero. La
lectura debe efectuarse a la altura de los ojos (nivel sin para-
laje). Las buretas de cero automtico se llenan tambin hasta
sobrepasar en aprox. 5 mm el punto cero. Tras la aireacin se
realiza el ajuste automtico del punto cero.
5. Eliminar la gota eventualmente adherida a la punta de salida.
6. Abrir la llave de bureta y aadir lentamente la solucin patrn
a la solucin con el analito (con indicador). Al hacerlo, la llave
de bureta no debe tocar la pared de vidrio. Durante la adicin
gota a gota agitar ligeramente el recipiente de recogida con la
muestra, o colocarlo sobre un agitador magntico.
Para mejor visualizacin del cambio en color, el recipiente de
recogida debera estar colocado sobre una base blanca. La va-
loracin ha finalizado.
7. La lectura del volumen valorado se efecta a la altura de los
ojos. Con el tiempo de la duracin de la valoracin, normal-
mente ya se ha cumplido el tiempo de espera (clase AS: 30 s).
Deber tenrsela en cuenta durante la calibracin del aparato
de medicin.
Bureta Bureta de cero Bureta de cero 8. Una gota eventualmente adherida a la punta de salida de la lla-
con llave lateral automtico automtico ve se escurre tocando la punta con la pared interna del reci-
segn Pellet segn Dr. Schilling piente de recogida para adicionar la gota, ya que forma parte
del volumen valorado.
Antes de proceder a una nueva valoracin, ajustar de nuevo el
punto cero, ya que la valoracin siempre tiene que comenzarse
desde el punto cero.

Para efectuar valoraciones, adems de buretas se necesitan:

matraz aforado, pipetas aforadas, matraz Erlenmeyer.

BRAND

16
 Material volumtrico en vidrio Manejo

Manejo de picnmetros
Los picnmetros sirven principalmente para determinar la densidad de lquidos de una viscosidad
moderada. No se cuentan entre los aparatos volumtricos, no obstante, su ajuste es tipo In, como
p.ej. el de los matraces aforados.

Se distinguen dos tipos de picnmetros:

Manejo
1. Determinar el peso del picnmetro seco sin carga.
2. Llenar el picnmetro con lquido de ensayo sin formacin de
burbujas. Debe llenarse el cuello esmerilado hasta un tercio
aproximadamente.
3. Ajustar la temperatura del picnmetro y del lquido en un bao
mara a 20 C.
4. Ajustar el tapn o bien el termmetro del picnmetro sobre el
cuerpo de acuerdo con la marca e introducirlo cuidadosamen-
te. Al hacerlo, el tubo del capilar se llena y el lquido desplaza-
do se desborda.
5. Limpiar y secar cuidadosamente con un pao de celulosa la su-
perficie del tapn o bien del capilar lateral, as como la superfi-
cie exterior del picnmetro.
ATENCIN:
no se debe extraer con el pao lquido del capilar. Debe coinci-
dir exactamente con la altura del borde superior del capilar.
6. Determinar el peso del picnmetro con carga.
Picnmetro con Picnmetro con
tapn termmetro y capilar
lateral Se calcula la densidad a partir de la masa (peso) y el volumen del
(recomendada para lquido. El volumen est grabado sobre el aparato. Se aplica la
lquidos con presin siguiente ecuacin:
de vapor ms alta)
Densidad () = masa (m) / volumen (V)

Al efectuar la pesada debe tenerse en cuenta el empuje

aerosttico.

Nota:
Cada uno de los picnmetros ajustados tiene un nmero de
aparato, el cual est indicado tambin en todos los componentes.
Slo pueden utilizarse juntos componentes con el mismo nmero.

BRAND

17
Material volumtrico en vidrio Auxiliares de pipeteado

Trabajar con auxiliares de pipeteado

Para trabajar con pipetas es indispensable utilizar auxiliares de
pipeteado. El pipeteado a boca, o bien con tubo de goma y boquilla,
est prohibido. Por lo tanto, es indispensable utilizar un
Se distinguen dos tipos de auxiliares de pipeteado: auxiliar de pipeteado. Este contribuye significativamente
Auxiliares de pipeteado manuales a la reduccin del peligro de infecciones y de lesiones.
Auxiliares de pipeteado a motor

Auxiliares de pipeteado a motor

Auxiliares de pipeteado a motor especialmente son adecuado para
el pipeteado de largas series (por ej. en el cultivo de clulas).

por ej. el accu-jet pro de BRAND

El ajuste variable de la velocidad de giro del motor y un sistema membrana, una proteccin eficaz contra la entrada de lquidos.
especial de vlvulas permiten una alta sensibilidad en el trabajo Para proteger el aparato contra corrosin, los vapores de lquido
con pipetas de 0,1 a 200 ml. se impelen hacia el exterior mediante compensacin de presin
Una vlvula antirretorno incorporada ofrece, junto con un filtro de activa.

Manejo
El pipeteado se controla mediante dos botones grandes:

Aspiracin
Pulsar el botn de pipetea-
do superior para aspirar el
lquido a pipetear.
Cuanto ms se oprime el
botn, ms rpidamente se
llena la pipeta.
Expulsin
La velocidad de expulsin
aumenta continuamente a
medida que se oprime el
botn en el aparato.
A eleccin:
Vaciado libre
o
Vaciado por soplado con
asistencia del motor

Expulsin del lquido: vaciado libre o vaciado por soplado?

Se selecciona el modo de En el campo de la microbiolo-

expulsin segn la aplicacin.
En el laboratorio analtico por
ejemplo se trabaja principal-
mente en el modo 'vaciado
libre' para alcanzar la exacti-
tud de volumen exigida. Para
observar la exactitud indicada
sobre las pipetas, es imprescin-
dible el vaciado libre del medio
teniendo en cuenta los tiempos
de vertido y de espera.
ga, por contra, la exactitud de
volumen tiene menor importan-
cia. En el centro de inters se
encuentra la medicin uniforme
y rpida de soluciones de cul-
tivo etc. Por lo tanto, en este
campo de aplicacin se prefiere
trabajar en el modo 'vaciado
por soplado'.

BRAND

18
 Material volumtrico en vidrio Auxiliares de pipeteado

Auxiliares de pipeteado manuales

Los auxiliares de pipeteado manuales se utilizan sobre todo en los
laboratorios qumicos para pipetear series pequeas.

Por ej. el auxiliar de pipeteado macro de BRAND

Es adecuado para el rango completo de pipetas aforadas y gra- Un filtro de membrana hidrfobo protege el sistema frente a una
duadas de 0,1 a 200 ml. Un sistema especial de vlvulas permite posible entrada de lquido.
ajustar el menisco de forma sensible y exacta.

Manejo

Generar vaco Aspiracin Ajuste del menisco / Soplado

Comprimir la pera de aspiracin.
Desplazar hacia arriba la palan-
ca de pipeteado.
Cuanto ms se desplace hacia
arriba la palanca, tanto ms
rpido se llenar la pipeta.
Expulsin por 'vaciado libre'
Desplazar lentamente la palan-
ca de pipeteado hacia abajo. El
menisco desciende al soltar
la palanca el menisco permane-
ce quieto.
Para vaciar la pipeta, despla-
zar la palanca completamente
hacia abajo.
Para mantener la exactitud de
la clase A, el lquido residual no
debe soplarse!
Frecuentemente, durante el
pipeteado de medios viscosos,
el vaciado libre de las puntas
de las pipetas no permite que
se vacen totalmente. En estos
casos, cuando se utiliza el auxi-
liar de pipeteado macro, soplar
el resto residual ejerciendo
presin sobre la pera de goma.

La pera de goma
Auxiliar de pipeteado estndar clsico para pipetas aforadas y pipetas graduadas.

Manejo Soplado Atencin!

A 1. Colocar la pipeta Para el soplado de medios vis- No conservar la pera de pi-
cosos, debe cerrarse la abertu- peteado en estado de vaco, no
2. Mediante presin sobre 'A'
ra lateral y presionarse la bola aspirar lquido hacia la pera.
comprimir la pera
pequea.
(generar vaco)
3. Mediante presin sobre
'S' aspirar el lquido hasta
sobrepasar ligeramente la
S marca deseada
4. Mediante presin sobre 'E'
dejar salir el lquido hasta la
E marca deseada o bien vaciar
la pipeta

BRAND

19
Material volumtrico en vidrio Auxiliares de pipeteado

Auxiliares de pipeteado manuales para pipetas

de pequeo volumen hasta 1 ml
Para estas pipetas se desarrollaron auxiliares de pipeteado es-
peciales que, entre otros usos, se utilizan en el rea mdica con
pipetas capilares, pipetas mezcladoras de sangre y pipetas para
glucosa en sangre de hasta 1 ml como mximo.
El pipeteado a boca, o bien con tubo de goma y boquilla,
est prohibido. Por lo tanto, es indispensable utilizar un
auxiliar de pipeteado. Este contribuye significativamente
a la reduccin del peligro de infecciones y de lesiones.

Por ej. el auxiliar de pipeteado micro de BRAND

Manejo

Aspiracin / Expulsin Expulsin por vaciado libre Expulsin

Al girar el botn de aireacin,
el lquido se aspira o bien se
expulsa.
Las pipetas ajustadas por
contenido In se limpian me-
diante la repeticin del llenado
y vaciado con la solucin de
dilucin.
Para la expulsin del lquido
de las pipetas ajustadas por
vertido Ex, oprima el botn
de aireacin (eventualmente
observar el tiempo de espera).
Con la tecla grande pueden
expulsarse las pipetas utiliza-
das, sin tocarlas.

Por ej. el auxiliar de pipeteado micro-classic de BRAND

Gracias a su diseo angulado es especialmente adecuado para traba-
jos bajo el microscopio en el laboratorio IVF y en el laboratorio clnico.

Manejo

Colocar la pipeta Aspiracin Expulsin

Insertar la pipeta siempre por el
extremo corto, o sea, sujetar la
pipeta por el cdigo de color e
introducirla cuidadosamente en
el adaptador.
BRAND
Girar la rueda de ajuste hacia
atrs hasta que el lquido al-
cance exactamente el aforo
deseado.
Al utilizar pipetas ajustadas
por contenido 'In':
girar la rueda de ajuste hacia
delante hasta que el lquido
haya salido. Enjuagar la pipeta
con solucin de dilucin 3 veces
como mnimo.
Al utilizar pipetas ajustadas
por vertido 'Ex':
para el vaciado libre oprimir el
botn de aireacin hasta que el l-
quido haya salido (eventualmente,
aguardar el tiempo de espera).

20
 Aparatos Liquid Handling

Trabajar con aparatos Liquid Handling

Las exigencias cada vez ms estrictas respecto a la calidad de los resultados de anlisis y el aumento
de las muestras a analizar en los laboratorios requieren aparatos de medicin con los cuales puedan
realizarse lo ms eficientemente posible los trabajos de rutina en la preparacin de las muestras.
Para atender a esta necesidad, los fabricantes de aparatos de laboratorio han desarrollado los aparatos
Liquid Handling. stos son el perfeccionamiento de los aparatos volumtricos en vidrio y plstico y
posibilitan un trabajo racional con un mximo de precisin y confort de manejo.
Los aparatos Liquid Handling de la mayora de los fabricantes funcionan segn un principio similar. Sin
embargo, entre los distintos fabricantes se observan en parte diferencias en los detalles de construccin
y en los materiales utilizados.
Para la explicacin del principio de funcionamiento y uso de aparatos Liquid Handling sigue a conti-
nuacin la descripcin de algunos aparatos de BRAND, que sirven de ejemplo.

Dosificador Dosificador Bureta Pipeta monocanal Pipeta multicanal

acoplable a frasco acoplable a frasco acoplable a frasco con cojn de aire con cojn de aire
Dispensette seripettor Titrette Transferpette S Transferpette S -8/-12
(mecnica) (mecnica)

Pipeta monocanal Pipeta multicanal Pipeta de desplaza-

Dispensador manual Dispensador manual
con cojn de aire con cojn de aire miento directo

Transferpette electronic Transferpette-8/-12 Transferpettor HandyStep HandyStep electronic

electronic (mecnico)
BRAND

21
Aparatos Liquid Handling Dosificacin

Dosificar con dosificadores acoplables a frascos

Qu se entiendo por 'dosificacin'?
Por dosificacin se entiende dosificar una cantidad definida.

Para una dosificacin sencilla, rpida y precisa de reactivos, se utilizan con frecuencia dosificado-
res acoplables a frascos. stos se acoplan directamente o mediante adaptadores a los frascos de
reactivo usuales. Con ello se hace innecesario el trasvase de productos qumicos (sustitucin de las
probetas graduadas) lo que facilita notablemente el trabajo, sobre todo la dosificacin en serie.

Principio comn del funcionamiento

de los dosificadores acoplables a frascos

Al desplazarse el mbolo ha- abajo, se va expulsando el l-

cia arriba, se va aspirando la
cantidad ajustada de lquido
directamente desde el frasco
de reactivo hacia el cilindro
del aparato. Al desplazarse a
continuacin el mbolo hacia
quido mediante un sistema de
vlvulas a travs de la cnula
de dosificacin.
Ya no es necesario ni ajustar
el menisco ni tener en cuenta
tiempos de espera.

Se distinguen dos tipos de dosificadores acoplables a frascos:

dosificadores con mbolo flotante y dosificadores con mbolo
rascador.

Dosificadores acoplables a frascos con mbolo flotante

Este sistema funciona sin junta de mbolo, siendo por tanto muy robusto y de fcil mantenimiento. El
mbolo est integrado en el cilindro de dosificacin sin tener contacto con el mismo. Entre mbolo y
cilindro de dosificacin existe una ranura de slo unas pocas milsimas de milmetro llena con lquido.
Esta pelcula de lquido acta como un lubricante. Por ello se desliza el mbolo con muy poca friccin.

por ej. la Dispensette de BRAND

Campos de aplicacin Materiales

Para dosificar reactivos agre- Dependiendo del modelo, las

sivos, por ej. cidos fuertes piezas que entran en contacto
como H3PO4, H2SO4, solu- con lquidos estn fabricadas
ciones alcalinas como NaOH, de diversos materiales espe-
KOH, soluciones salinas, as cialmente resistentes, como
como un gran nmero de p. ej. cermica, platino-iridio,
disolventes orgnicos: tantalio, ETFE o PFA.
Dispensette III
Para dosificar disolventes
orgnicos, por ej. hidrocarburos
clorados y fluorados, como
triclorotrifluoroetano y dicloro-
metano, o cidos como HCl y
HNO3 concentrados fumantes,
as como cido trifluoroactico
(TFA), tetrahidrofurano (THF) y
perxidos:
Dispensette Organic
No apropiado para la dosifica-
cin de cido fluorhdrico (HF).

BRAND

22
 Aparatos Liquid Handling Dosificacin

Seguridad en primer lugar! Control de los medios de anlisis / Calibracin

Para la seleccin de dosifi-
cadores acoplables a fras-
cos deben comprobarse los
dispositivos de seguridad del
aparato. Por ejemplo, cmo
se reduce el peligro de lesiones
en el caso de que se produzca
una rotura del frasco de vidrio?
Cmo se evita un salpicado
accidental durante la desai-
reacin del aparato? Cmo En las instrucciones de manejo
se reduce el contacto con el
medio durante el cierre de la
cnula de dosificacin?
El usuario tambin debe veri- En el marco del control de los cos exigen una comprobacin
ficar la adecuacin del dosifi- medios de anlisis segn ISO peridica de su exactitud y,
cador respecto al medio a do- 9001 y segn las directivas en caso necesario, un ajuste
sificar. Por regla general, en el BPL, los aparatos volumtri- (vase pgina 33).
captulo 'Funcin y limitaciones
de empleo' de las instrucciones
de manejo existen indicaciones
al respecto. En caso de dudas,
consultar directamente con el
fabricante.
tambin deben existir indicacio-
nes sobre el mantenimiento y
sobre el control de los medios
de anlisis.

Dosificadores acoplables a frascos con mbolo rascador

Adems del 'mbolo flotante', tambin se utiliza el principio de funcionamiento de la 'junta de mbo-
lo que desplaza el lquido'. En estos sistemas se observan frecuentemente fuerzas de accionamiento
ms altas y un desgaste de la junta del mbolo debido al rozamiento.

por ej. el seripettor de BRAND

El sistema completo est construido de tal forma que permita el El sistema completo est construido de tal forma que permita el
intercambio de la unidad de dosificacin completa. Las fuerzas de intercambio de la unidad de dosificacin entera. Las fuerzas de
accionamiento algo altas durante el llenado se minimizan mediante accionamiento algo altas durante el llenado se minimizan mediante
un resorte con accin de levantamiento automtico. un resorte con accin de levantamiento automtico.

Campos de aplicacin y materiales

El campo de aplicacin est en El dosificador seripettor pro es

la rutina diaria para la dosifi-
cacin de soluciones alcalinas,
cidos de baja concentracin,
tampones biolgicos, medios
de cultivo, detergentes biolgi-
cos y disolventes polares.
adecuado para la dosificacin
de cidos, p. ej. HCl concen-
trado, disolventes polares (por
ej. acetona), aceites esen-
ciales y medios sensibles a
la radiacin UV. A diferencia
del dosificador seripettor, en
este aparato se utilizan p. ej.
vlvulas de materiales ms
resistentes.

BRAND

23
Aparatos Liquid Handling Valoracin

Valorar con buretas acoplables a frascos

Qu se entiende por 'valoracin'?
La valoracin es un mtodo de anlisis volumtrico para la determinacin cuantitativa de una sustan-
cia disuelta.

Cmo funciona esto?

En un matraz Erlenmeyer se coloca mediante una pipeta aforada una cantidad definida de una
muestra (lquido con una sustancia disuelta de concentracin desconocida, p. ej. cido actico).
Despus de diluir con agua, se aaden aprox. 3 gotas de una solucin indicadora. A continuacin,
empleando una bureta y con agitacin continua, se adiciona un medio de valoracin adecuado de
concentracin conocida (p. ej. NaOH 0,1 M), hasta que el cambio de color del indicador seale el
punto final de la valoracin.
Mediante el consumo del medio de valoracin y conociendo la ecuacin de la reaccin qumica, es
posible calcular la cantidad de sustancia disuelta en la muestra.

Principio comn del funcionamiento

de las buretas acoplables a frascos Lectura del volumen

Las buretas acoplables a fras-
cos se acoplan directamente al
frasco de reserva. Al despla-
zarse el mbolo hacia arriba, se
va aspirando el lquido desde
el frasco de reactivo hacia el
cilindro del aparato.
Seguidamente, al desplazar-
se el mbolo hacia abajo, se
aade lentamente el lquido a
travs de la cnula de valora-
cin a la solucin con el analito
hasta que se completa la reac-
cin (por ej. cambio en el color
de la solucin).
El volumen valorado se lee di-
rectamente en el display de las
buretas acoplables a frascos:
se evitan errores de lectura del
menisco, no hay que tener en
cuenta tiempos de espera.

por ej. la Titrette de BRAND en los volmenes de 10 ml, 25 ml y 50 ml

Girando la rueda, el mbolo
se mueve y provoca la aspira-
cin o la expulsin del lquido.
El sistema electrnico del apa-
rato reconoce automticamen-
te el sentido de giro, o sea, si la
accin a realizar es llenar o va-
lorar.
El lquido puede aspirarse rpi-
damente, no obstante, puede
dosificarse gota a gota de for-
ma muy lenta y exacta. Durante
la aireacin, una vlvula de pur-
ga permite que el lquido retor-
ne al frasco. De esta manera es
posible eliminar las burbujas de
aire prcticamente sn prdidas
del medio. Para su limpieza, el
aparato puede desmontarse f-
cilmente en el laboratorio.

Campos de aplicacin Materiales

Aplicable en muchos campos La piezas que entran en con-

para soluciones acuosas y
soluciones no acuosas (por ej.
KOH alcohlica) hasta 1 M.
BRAND
tacto con lquidos se fabrican
de materiales especialmente
resistentes, como p. ej. vidrio
borosilicato, PTFE, platino-
iridio o cermica Al2O3.

24
 Aparatos Liquid Handling Pipeteado

Pipetear con pipetas con cojn de aire

Qu se entiende por 'pipeteado'?
El pipeteado es la nica operacin exacta de aspiracin y expulsin de lquidos.
Las pipetas con cojn de aire se emplean para pipetear lquidos acuosos en el rango de microlitros a
mililitros. Funciona segn el principio de cojn de aire (air interface).

Principio comn del funcionamiento Calibracin

vstago de pipeta
Al desplazar hacia arriba y
punta desechable abajo el mbolo en el vstago
de la pipeta, se produce un
vaco parcial o bien una sobre-
cojn de aire presin en el vstago. De esta
Ventaja
Ninguna humectacin del
reactivo aparato, ya que el lquido slo
entra en la punta siendo sta
desechable. Esto garantiza un
trabajo libre de residuos un
manera se aspira el lquido ha-
cia la punta, o bien se expulsa.
El lquido queda separado del
mbolo mediante un cojn de
aire.
factor especialmente impor-
tante en campos en los cuales
debe realizarse el trabajo de
forma estril o libre de conta-
minacin.
En el marco del control de
los medios de anlisis segn
ISO y las directivas BPL se
exige una calibracin (o sea
comprobacin) de la exactitud
de los aparatos volumtricos a
intervalos peridicos y, en caso
necesario, su ajuste (vase
pgina 33).

Pipetas monocanal mecnicas

por ej. la Transferpette S de BRAND

Tanto en el laboratorio de rutina como en la investigacin, la precisin y la funcionalidad deben ser

las caractersticas estndar de las pipetas de mbolo con cojn de aire.

Manejo

Aspirar el reactivo Expulsar el reactivo Expulsar la punta

1. Presionar el pulsador de 1. Apoyar la punta en la pared Presionar hacia abajo el
pipeteado hasta el primer del recipiente y presionar expulsor.
tope. Mantenga el aparato en lentamente el pulsador de
posicin vertical y sumerja la pipeteado con velocidad uni-
punta en el lquido. forme hasta el primer tope y
Gamma Profundidad Tiempo de mantenerlo as.
de ajuste de immer- espera
sin en mm en s 2. Despus presionar hasta el
0,1 l - 1 l 1-2 1 segundo tope para vaciar
> 1 l - 100 l 2-3 1 completamente la punta y
> 100 l - 1000 l 2-4 1 durante este tiempo escurrir
> 1000 l 3-6 3 la punta de la pipeta contra la
2. Soltar lentamente el pulsador pared del recipiente deslizn-
de pipeteado, para aspirar el dola una distancia de aprox.
lquido. 10 mm.
BRAND

25
Aparatos Liquid Handling Pipeteado

Pipetas multicanales mecnicas

Las pipetas multicanales funcionan tambin segn el principio de cojn de aire.

Con ellas se pueden realizar 8 bien 12 pipeteados simultneos.

En el mtodo de microtitulacin se pipetea en placas microtiter de 8 x 12 pocillos (placa microtiter

de 96 pocillos), cuyas distancias estn normadas. Esta tcnica posibilita, por ejemplo, la deter-
minacin de pequesimas cantidades de protenas (de la gama micro) y slo se puede aplicar de
forma racional con pipetas multicanales. Las pipetas multicanales son especialmente adecuadas
para la transferencia racional de muestras y para diluciones en serie y son ideales para el lavado
de placas microtiter.

Campos de aplicacin Tcnicas de anlisis

diagnstico clnico tcnica de inmunofluorescencia (IF)

analtica de alimentos mtodo de prueba de
radioinmunidad (RIA)
Iinmunologa
mtodo inmunoenzimtico
bioqumica
(EIA, ELISA)
cultivo de clulas
dilucin de cultivos de clulas

por ej. las Transferpette S -8/-12 de BRAND

Manejo

Aspirar el reactivo Expulsar el reactivo Expulsar las puntas

1. Presionar el pulsador de
pipeteado hasta el primer
tope, sumergir las puntas
2-3 milmetros en el lquido.
2. Soltar lentamente el pul-
sador de pipeteado, para
aspirar el lquido.
1. Apoyar las puntas en la Presionar hacia abajo el
pared del recipiente y expulsor.
presionar lentamente el
pulsador de pipeteado con
velocidad uniforme hasta el
primer tope y mantenerlo
as.
2. Despus presionar hasta el
segundo tope para vaciar
completamente las puntas
y durante este tiempo
escurrir las puntas de la
pipeta contra la pared del
recipiente deslizndola una
distancia de aprox. 10 mm.

BRAND

26
 Aparatos Liquid Handling Pipeteado

Ergonoma y esfuerzos
El trabajo intenso y repetitivo con aparatos mecnicos que no sean lo suficientemente ergonmicos
puede provocar, debido a los esfuerzos continuos necesarios, una serie de problemas musculares, cono-
cidos como RSI (Repetitive Strain Injury). Las reas musculares particularmente expuestas son la nuca,
los hombros, los brazos y el dedo pulgar. Por esta razn, al trabajar en el laboratorio frecuentemente se
producen, entre otras molestias, la tendovaginitis y el sndrome del tnel carpiano. En especial para el
trabajo con micropipetas, el requisito de un manejo sin esfuerzo est entonces en primer plano.

Pipetas electrnicas mono y multicanal

Principio de funcionamiento Ventajas de las pipetas electrnicas

Al accionarse la tecla de y el volumen de aspiracin o La combinacin entre el adicional es la ejecucin de

pipeteado se pone en marcha
el mecanismo de aspiracin o
de vertido (incluso de sobreem-
bolada). El mbolo de la pipeta
se mueve mediante un motor,
de vertido se controla mediante
un microprocesador. Mediante
teclas de mando es posible
introducir diversos programas
de pipeteado.
pipeteado asistido por motor y
un diseo ergonmico permite
realizar un trabajo distendido y
fcil, evitando el esfuerzo conti-
nuo del pulgar durante la reali-
zacin de series largas (peligro
del sndrome RSI). Otra ventaja
programas de pipeteado, como
p. ej. el modo de electroforesis
en gel (con indicacin precisa
del volumen vertido), y el modo
de dispensador, los cuales
no son posibles con pipetas
mecnicas.

por ej. la Transferpette electronic mono

y multicanal de BRAND

Teclas de
programacin

Tecla de pipeteado

Tecla de expulsin
de puntas

El estndar de las pipetas electrnicas mono y multicanal debe in-

cluir un diseo que se adapte a la mano, una distribucin adecua-
da del peso, un software intuitivo y sobre todo una documentacin
tcnica clara y comprensible.

Manejo

Aspirar el reactivo Expulsar el reactivo Expulsar las puntas

Sumergir las puntas en el
reactivo y pulsar una vez la
tecla de pipeteado el volumen
ajustado se aspirar.
Pulsar nuevamente la tecla de pi- Presionar la tecla de expulsion
peteado: el lquido se verter. La de puntas.
sobreembolada continuar au-
tomticamente. Al final escurrir
las puntas de la pipeta contra la
pared del recipiente deslizndola
una distancia de aprox. 10 mm.
BRAND

27
Aparatos Liquid Handling Pipeteado

Programas de pipeteado de la micropipeta Transferpette electronic

Pantalla

Indicacin del
programa
Indicacin de
la capacidad
de la batera
Smbolo de flecha
para 'Aspirar'
Indicacin
del volumen

Programas de pipeteado Funciones adicionales

Pipetear Dependiendo de la calidad y

Programa estndar. Se aspira un volumen determinado previa- del modelo, las pipetas elec-
mente y se vuelve a expulsar. trnicas en conjunto con diver-
sos programas de pipeteado
pueden ofrecer eventualmente
otras funciones adicionales es-
pecficas del aparato.
Con la Transferpette electronic
estos son, p. ej., un programa
Mezcla de muestras para realizar un ajuste sencillo
Programa para mezclar lquidos. Una muestra es aspirada y y rpido del aparato, as como
expulsada repetidas veces y se indica el nmero de ciclos. tambin una funcin de carga
de la batera.

Pipeteado inverso Qu significa 'inverso'?

Programa especialmente adecuado para pipetear lquidos de Orden invertido de los topes.
alta viscosidad, alta presin de vapor o medios espumantes. O sea, con pipetas mecnicas:
Al volumen ajustado se aade adicionalmente el volumen de Para aspirar el reactivo pre-
la sobreembolada. Despus de la expulsin, este volumen sionar hasta el 2 tope y dejar
permanece en la punta para evitar un escurrimiento no definido, que se deslice hacia atrs.
salpicaduras o formacin de espuma o burbujas. Despus, para expulsar el vo-
lumen ajustado, presionar slo
hasta el 1 tope.

Pipetear en electroforesis
Programa para aplicacin de geles en electroforesis. Un volumen
variable de muestra se aspira a una velocidad alta y regulable, y
despus se expulsa muy lentamente. Para su documentacin, la
cantidad exacta de lquido expulsado se indica en la pantalla.

Dosificar
Programa para dosificacin de lquidos. Un volumen aspirado
se vuelve a expulsar parcialmente en etapas parciales.

BRAND

28

Pipetear con pipetas de desplazamiento directo
All donde las pipetas con cojn de aire llegan a sus lmites fsicos, se manifiestan las ventajas de las
pipetas de desplazamiento directo. Son especialmente adecuadas para lquidos de alta y baja visco-
sidad, lquidos espumosos o lquidos de alta presin de vapor.
Principio de funcionamiento
capilar de vidrio Al contrario que en las pipetas
con cojn de aire, el mbolo de
la pipeta de desplazamiento
mbolo de
directo tiene contacto directo
desplazamiento
directo con el lquido a pipetear. El
mbolo deja siempre limpias las
paredes de los capilares/pun-
tas: hasta la ltima gota sale
claramente visible del orificio.
reactivo
Gracias a este principio se ob-
tienen resultados exactamente
reproducibles independiente-
mente de las caractersticas del
lquido.
Por ej. el Transferpettor de BRAND
Campos de aplicacin
Medios de alta viscosidad,
como por ej. soluciones pro-
tenicas muy concentradas,
aceites, resinas y grasas.
Manejo (similar al de pipetas con cojn de aire)
Ajuste del volumen
Ajustar el volumen deseado
girando el pulsador.
Aparatos Liquid Handling Pipeteado
Los capilares o bien las pun-
tas no tienen que echarse tras
cada paso de pipeteado, ya
que la humectacin residual es
mnima y puede despreciarse
normalmente. Sin embargo:
donde no se permita ningn
arrastre, como con medios
infecciosos o radioactivos, se
recomienda utilizar una pipeta
con cojn de aire, para un tra-
bajo con puntas desechables.
Medios de alta presin de
vapor, como por ej. alcoholes,
teres e hidrocarburos.
Aspiracin
Oprimir el mbolo hasta el
tope, sumergir la punta en
el lquido y absorber dejando
que el pulsador de pipeteado
retroceda lentamente.
Ventaja
Mxima precisin y trabajo
rpido. Las puntas o bien ca-
pilares pueden utilizarse varias
veces.
Medios que tiendan a producir
espuma, como por ej. solucio-
nes de tensioactivos.
Expulsin
Colocar el capilar/la punta
tocando la pared del recipiente
y oprimir por 2 vez el pulsador
de pipeteado hasta el tope. Las
pipetas de desplazamiento di-
recto no tienen sobreembolada.
BRAND
29
Aparatos Liquid Handling Dosificacin

Dosificar con dispensadores manuales

Uno de los trabajos ms importantes y ms frecuentes en los laboratorios clnicos, farmacuticos y
biolgicos es la distribucin de lquidos. Tcnicas de trabajo usuales y muy empleadas son la dosifi-
cacin y el pipeteado. Dosificacin es la expulsin repetitiva de cantidades idnticas de lquido.
Tiene una gran ventaja sobre el pipeteado: se puede lograr un ahorro significativo de tiempo, ya que
no es necesario realizar la aspiracin repetidas veces. Como la tcnica de dosificacin es muy utiliza-
da, juegan un papel importante la ergonoma y, con ella, el diseo de los aparatos.
Trabajos de dosificacin se efectan en el laboratorio raras veces con sistemas completamente
automticos con los cuales no son necesarios manejos manuales. Normalmente se utilizan para estos
trabajos de rutina dispensadores manuales.

Se distinguen dos tipos de dispensadores manuales

Dispensadores manuales completamente mecnicos
Dispensadores manuales electrnicos a motor

Principio de funcionamiento

En los dispensadores manua-
les mecnicos el volumen se
ajusta mediante una cremallera
que se mueve gradualmente,
en combinacin con puntas
de dosificacin. Por tanto,
estos aparatos slo permiten
un nmero determinado de
pasos de dosificacin clara-
mente definidos. No es posible
ajustar volmenes intermedios.
La ventaja principal de estos
aparatos est en su robustez,
su desventaja es que su uso
resulta a menudo fatigante.
El principio de funcionamiento
del dispensador manual es el
probado sistema de desplaza-
miento directo.
Medios crticos, como por ej.
soluciones de alta presin de
vapor, de alta viscosidad o
medios espumosos no repre-
sentan ningn problema para el
dispensador manual. Segn los
rangos de volumen necesarios,
el dispensador manual puede
utilizarse con puntas PD de
diferentes tamaos.

Dispensadores manuales mecnicos

por ej. el HandyStep de BRAND
El dispensador manual simplifica el pipeteado en serie mediante
la expulsin en etapas de un lquido antes aspirado. Dependiendo
del tamao de las puntas del dosificador correspondiente, con
un solo llenado pueden realizarse hasta 49 etapas de pipeteado,
variables entre 2 l y 5 ml. Estos datos resultan de la combinacin
de la posicin ajustada del mando deslizante (1-5) con el tipo de
punta utilizado.
Las puntas de dosificacin de BRAND estn disponibles en
10 capacidades diferentes, sin esterilizar o esterilizadas. Se pue-
den utilizar tambin puntas compatibles de otros fabricantes

Ejemplo de las diversas posibilidades de combinacin

con puntas PD diferentes de BRAND
Pasos y gamas de volumen
Tip size (ml)
Setting

Steps

0.1 0.5 1 1.25 2.5 5 10 12.5 25 50

1 2 10 20 25 50 100 200 250 500 1000 49

1.5 3 15 30 37.5 75 150 300 375 750 1500 32
2 4 20 40 50 100 200 400 500 1000 2000 24
2.5 5 25 50 62.5 125 250 500 625 1250 2500 19
3 6 30 60 75 150 300 600 750 1500 3000 15
3.5 7 35 70 87.5 175 350 700 875 1750 3500 13
4 8 40 80 100 200 400 800 1000 2000 4000 11
4.5 9 45 90 112.5 225 450 900 1125 2250 4500 10
5 10 50 100 125 250 500 1000 1250 2500 5000 9

Volume (l)

BRAND

30
 Aparatos Liquid Handling Dosificacin

Ergonoma y diseo
Los trabajos repetitivos de forma intensiva con aparatos manuales pueden ocasionar un sin nmero
de distintas molestias musculares. Se pone en riesgo especialmente la musculatura a nivel de la nuca,
los hombros, los brazos y pulgares. Especialmente para dispensadores manuales es muy importante
la exigencia de un manejo economizando esfuerzo, ya que estos aparatos se emplean casi exclusiva-
mente para dosificaciones en serie. Sobre todo al realizar largas series en la misma posicin, juegan un
papel decisivo la ergonoma y el diseo de los aparatos.

Dispensadores manuales electrnicos accionados por motor

Principio de funcionamiento

Al accionar una tecla, se pone
en marcha el mecanismo de
aspiracin o bien expulsin.
El mbolo de las puntas se
desplazamiento con ayuda de
un motor, la expulsin del volu-
men y el nmero de pasos son
controlados por un micro-pro-
cesador. Esta combinacin de
ergonoma y diseo permite un
trabajo relajado. El mbolo deja
siempre limpias las paredes
interiores de las puntas, por
lo que se obtienen resultados
exactamente reproducibles
independientemente de las
influencias de un cojn de aire.
Las puntas de desplazamiento
directo permiten la dosificacin
de lquidos de alta densidad,
lquidos muy voltiles o de alta
presin de vapor y lquidos que
tiendan a producir espuma.

por ej. el HandyStep electronic de BRAND

Las puntas PD de BRAND es-
tn provistas de un cdigo de
capacidad incoporado en su
mbolo. Una vez colocada la
punta, la capacidad identificada
de la misma aparece autom-
ticamente en la pantalla. Esto
evita errores y permite que el
volumen a dosificar y el progra-
ma de trabajo deseado puedan
seleccionarse sencillamente. El
ajuste del aparato se conserva
al colocar una nueva punta de
la misma capacidad.

Contrariamente a los dispensadores manuales mecnicos, con los

cuales por razones constructivas slo pueden dosificarse volme-
nes parciales de nmeros enteros, con los dispensadores manua-
les electrnicos es posible dosificar tambin volmenes parciales,
como por ej. 1,01 ml.

Modos de trabajo seleccionables:

Dosificacin
Modo estndar Dosificacin automtica Pipeteado

Una vez aspirado el lquido,
ste se dosifica repetidas
veces en volmenes parciales
ajustados por el usuario.
El aparato calcula el valor me-
dio de los intervalos entre tres
pasos de dosificacin y sigue
trabajando automticamente en
este ritmo.
Se trabaja de igual manera
como con una pipeta de des-
plazamiento directo.
Un volumen antes definido
se aspira y se expulsa.

BRAND

31
Exactitud

Exactitud
Qu significan en la medicin de volumen lmite de error,
exactitud, coeficiente de variacin y precisin?

Representacin grfica de precisin y exactitud

La diana representa el rango de volumen alrededor del valor nominal que est en el centro.
Los puntos negros son los valores obtenidos de diferentes medidas de un volumen definido.

Mala exactitud: Buena exactitud: Mala exactitud: Buena exactitud:

Los resultados estn lejos
del centro.
Mala reproducibilidad:
Los resultados estn muy
dispersos.
Resultado:
Estos aparatos volumtricos
son de mala calidad.
Los resultados estn en trmi-
no medio repartidos regular-
mente alrededor del centro.
Mala reproducibilidad:
No hay grandes errores, pero
los resultados estn muy
dispersos.
Resultado:
Todas las desviaciones tienen
la 'misma' probabilidad. Los
aparatos cuyos valores so-
brepasan los lmites de error
deben separarse.
A pesar de que todos los resul-
tados estn muy juntos entre
s, la meta (valor nominal) no
se ha alcanzado.
Buena reproducibilidad:
Todos los resultados estn muy
juntos entre s.
Resultado:
Produccin mal orientada,
con desviacin sistemtica.
Los aparatos cuyos valores
sobrepasan los lmites de error
deben separarse.
Todos los resultados estn muy
prximos al centro, o sea muy
cerca del valor nominal.
Buena reproducibilidad:
Todos los resultados estn muy
juntos entre s.
Resultado:
La fabricacin est perfecta-
mente orientada mediante un
control de calidad a lo largo
del proceso de fabricacin.
Mnima desviacin sistemti-
ca y estrecha dispersin. El
lmite de error permitido no se
alcanza. No es necesaria una
clasificacin.

Estn permitidos diferentes trminos para la descripcin de la exactitud:

para material volumtrico en vidrio se utiliza el trmino "reproducibilidad",
mientras que se han establecido para aparatos Liquid Handling los trmi-
nos estadsticos "exactitud [%]" y "coeficiente de variacin [%]".

Limite de error Volumen parcial

El lmite de error (LE) fijado en las normas correspondientes
indica la desviacin mxima admisible del aparato con respecto al
valor nominal.
Exactitud (E)
La exactitud ( E ) indica hasta qu punto los valores medidos se
acercan al valor nominal, quiere decir la desviacin
_ sistemtica.
Exactitud es la diferencia entre valor medio ( V ) y valor nominal
(Vnominal ), referida al valor nominal en %.
Coeficiente de variacin (CV)
El coeficiente de variacin (CV) indica, hasta qu punto los valores
medidos individuales se acercan el uno con respecto al otro, quie-
re decir la desviacin aleatoria. El coeficiente de variacin est
definido como desviacin estndar en %, referida al valor medio.
E y CV estn por lo general referidos al volumen nominal (VN ).
Estos valores indicados en % deben convertirse para el control de
volmenes parciales (VP ). En cambio, no se realizar la conversin
para los volmenes parciales si E y CV se indican en unidades de
volumen (por ej. ml).
Lmite de error de E y CV
Como buena aproximacin, es posible calcular el lmite de error
(LE) del aparato, por ej. para el volumen nominal (VN ), a partir
de los valores de exactitud y coeficiente de variacin.
Reproducibilidad
Si se indica la dispersin de los
_ resultados de medicin individua-
les alrededor del valor medio V en unidades de volumen, se utiliza
el trmino reproducibilidad.

1 2 3 4 5
V -Vnominal s 100 VN E% + 2CV%
LE Vreal - Vnominal E[%]= 100 CV[%]= E P[%]= E N% LE VN
Vnominal V VP 100 %
(de forma analga para CVP [%] )

BRAND

32
 Control de medios de anlisis

El control de los medios de anlisis

Qu se entiende por 'medios de anlisis'?
Medios de anlisis son todos los sistemas de medida utilizados para la comprobacin de caractersti-
cas aseguradas de productos.

En cada laboratorio analtico debe ser evidente la exactitud de los medios de anlisis utilizados para
alcanzar resultados de anlisis fiables. Esta exigencia es vlida sobre todo para los laboratorios que
trabajen segn las directivas BPL, que estn acreditados segn DIN EN ISO/IEC 17025, o certifi-
cados segn DIN EN ISO 9001. Estas directivas exigen la existencia de instrucciones escritas que
describen el procedimiento detallado del control del los medios de anlisis.
Para todos los medios de anlisis tambin se deben indicar los lmites de error, o bien la exactitud y
el coeficiente de variacin y se debe determinar el procedimiento en caso de que se sobrepasen los
valores lmite.

Cundo y con qu fre- Cul es el procedimiento de Es necesario comprobar

cuencia se debe efectuar el comprobacin segn el cual tambin aparatos volumtri-
control? se efecta el control? Gastos del control? cos marcaje DE-M?

En el marco del control de los
medios de anlisis se exigen
el conocimiento y la docu-
mentacin de la exactitud e
incertidumbre de medicin de
todos los sistemas de medida
antes de autorizar su empleo.
Adems se deben someter a
controles peridicos en interva-
los definidos (vase DIN
ISO 10012)
El motivo:
Pueden producirse variaciones
en la exactitud de medicin
de material volumtrico por
ej. debido a la utilizacin de
productos qumicos agresivos
y segn los procedimientos y
la frecuencia de la limpieza.
Como la exactitud de medicin
exigida depende de manera
considerable de las condiciones
de aplicacin, el usuario mismo
debe determinar los intervalos
de control. Los intervalos de
control tpicos para apara-
tos Liquid Handling y para el
material volumtrico de plstico
son de 3 - 12 meses, y para el
material volumtrico de vidrio,
de 1 - 3 aos.
El control del material volum-
trico se efecta gravimtrica-
mente, en el caso de los apara-
tos Liquid Handling segn ISO
8655, y en el caso del material
volumtrico en vidrio segn
ISO 4787.
Durante la ejecucin deben ob-
servarse varios factores de in-
fluencia.
Por este motivo, BRAND pone
a disposicin instrucciones de
calibrado para todos los apara-
tos volumtricos, que describen
explcitamente el procedimien-
to de control. Adems BRAND
ofrece un software que reali-
za todos los clculos necesa-
rios, los almacena en una base
de datos e imprime los resulta-
dos en un informe de verifica-
cin segn sea deseado.
Trminos tcnicos
Calibracin
El control de los medios de
anlisis no debe convertirse en
la tarea principal en el labo-
ratorio analtico, sino debe de
limitarse a un gasto razonable.
Esto significa: manejo sencillo
y, con ello, realizacin rpida y
econmica.
Las instrucciones de calibra-
do y el software EASYCAL
especialmente desarrollado
para este fin, en combinacin
con aparatos volumtricos con
certificado individual o de lote,
son adecuados para lograr una
disminucin considerable en los
gastos del control.
Ajuste
Al igual que todos los medios
de anlisis, tambin los apara-
tos volumtricos marcaje DE-M
segn la norma DIN 12600
estn sometidos al control de
los medios de anlisis.
La norma no determina inequ-
vocamente si es obligatorio o
no efectuar el ensayo prelimi-
nar en estos aparatos. Es res-
ponsabilidad del usuario decidir
cmo proceder.
Sin embargo, por seguridad,
es recomendable realizar el en-
sayo preliminar en una mustra
aleatoria representativa. ste
documenta, al mismo tiempo,
para controles futuros el estado
inicial. Una alternativa son, en
el mejor de los casos, aparatos
volumtricos con certificado del
fabricante.

Se entiende por 'calibracin' la Se entiende por 'ajuste' la Por regla general y dependien-
determinacin del volumen real. correccin de la desviacin del do del fabricante, en los apara-
valor medido respecto al valor tos Liquid Handling el ajuste se
Para que la calibracin pue-
verdadero. realiza haciendo girar un tornillo
da realizarse de forma rpida
de ajuste. Despus del ajuste
y sencilla y evitarse fuentes
debe realizarse una nueva
de errores, BRAND pone a
calibracin de control. Este
disposicin sin coste adicional
procedimiento debe repetirse
instrucciones de calibrado de-
las veces necesarias hasta que
talladas para todos los aparatos
el volumen se encuentre dentro
volumtricos.
de los lmites de error.

BRAND

33
Control de medios de anlisis

Procedimiento del control de volumen

Por ej. la micropipeta Transferpette Tipo Variable, 20 - 200l

Recomendamos una calibracin de la Transferpette cada 3-12 meses, como descrito a continuacin.
En funcin de la frecuencia de uso y de los medios utilizados, el usuario tambin puede establecer
otros intervalos de control.

A Preparacin: C Control gravimtrico:

1. Averiguar el tipo de aparato y el volumen nominal. 1. Determinar la temperatura del agua de ensayo.
2. Leer el nmero de serie. 2. Colocar una nueva punta de pipeta.
3. En caso de suciedades, desmontar eventualmente el aparato 3. Acondicionar la pipeta: aspirar el lquido de ensayo cinco
y limpiarlo (vase instrucciones de manejo). veces y expulsarlo. Este procedimiento aumenta la exactitud
4. Efectuar un control de daos (carcasa, punta del vstago del control.
de la pipeta, expulsor, mbolo, junta) y, en caso de daos, 4. Enjuagar previamente la nueva punta de pipeta una vez.
proporcionarse los recambios correspondientes. 5. Colocar el recipiente de pesar sobre la balanza y tararla.
5. Depositar la Transferpette con sus accesorios por lo menos 6. Retirar el recipiente de pesar de la balanza.
2 horas en la sala de ensayos sin embalaje para atemperar. 7. Expulsar la muestra en el recipiente de pesar. Al hacerlo,
vaciar completamente la punta de pipeta mediante sobre-
embolada.
8. Colocar el recipiente de pesar sobre la balanza; apuntar el
B Comprobacin de funcin: valor obtenido de la pesada.
1. Colocar una nueva punta de pipeta. 9. Volver a tarar la balanza.
2. Enjuagar previamente la punta de pipeta una vez con el lqui- 10. Repetir los puntos 2 - 9 diez veces y apuntar en el protocolo
do de ensayo (agua destilada/desionizada). de ensayo los valores obtenidos de las pesadas del 100 %,
3. Mantener el aparato con la punta de pipeta llena en posicin 50 % y 10 % del volumen nominal.
vertical y observar aprox. 10 s para comprobar si se forma
Valores del control gravimtrico Los valores de las pesadas
una gota en la punta de la punta de pipeta. Al hacerlo, vigilar a 21,5C (Z = 1,0032)
de que la punta no se caliente, por ej. por el efecto del sol o obtenidos del control gravi-
similares. Despus expulsar el lquido de ensayo. Vol. controlado: (l) 200,0000 mtrico son slo la masa del
En volmenes pequeos inferiores a aprox. 50 l no se Valor verdadero: (mg) 199,3620 volumen pipeteado. Para ob-
forma una gota ni siquiera en caso de falta de hermeticidad x1 200,2000 tener el volumen real se debe
(tensin superficial). x2 199,6000 efectuar un clculo corrector
x3 199,4900 tomando en consideracin la
Un consejo: Dejar salir una gota pequea de la punta llena,
x4 199,7000 temperatura (vase abajo).
de modo que abajo se forme un pequeo cojn de aire (bur-
x5 199,7000 Las instrucciones detalladas
buja de aire). Si la burbuja de aire desciende, existe falta de
x6 199,2900 de calibracin para todos
estanqueidad.
x7 199,3500
los aparatos volumtricos de
x8 199,4100
BRAND pueden descargarse
del sitio web www.brand.de.
x9 199,2000
x10 199,1900

1. Clculo del volumen medio: 2. Clculo de la exactitud:

El clculo se realiza mediante multiplicacin del promedio de los Extracto de la tabla 'Factor Z para
_ aparatos de Liquid Handling' V - Vnominal
valores de las pesadas ( x ) por el factor Z (l/mg), que lleva en E [%] = 100
consideracin la densidad del agua, la temperatura de control Temperatura Factor Z
Vnominal
y la presin atmosfrica. Z es igual a 1,0032 l/mg, referido a C ml/g
21,5C, 1013 mbar (hPa). 18 1,00245 200,1514 - 200
E [%] = 100
18,5 1,00255 200

V = x Z 19 1,00264
19,5 1,00274
E [%] = 0,076
x + x2 + x3 +... + x10 20 1,00284
V= 1 Z
n 20,5 1,00294
21 1,00305
200,2 +199,6 +199,49 + ... + 199,19 21,5 1,00316
V=
1,0032
10 22 1,00327

22,5 1,00338
V = 199,513 1,0032 23 1,00350
23,5 1,00362
24 1,00374
V = 200,1514
24,5 1,00386
25 1,00399
25,5 1,00412
26 1,00425
BRAND

34
 Control de medios de anlisis

3. Para poder calcular el coeficiente de variacin, calcular primero la desviacin estndar

(x1 - x )2 + (x2 - x )2 + (x3 - x )2 + ... + (x10 - x )2

s=Z

n-1

(200,2 - 199,51)2 + (199,6 - 199,51)2 + (199,49 - 199,51)2 + ... + (199,19 - 199,51)2

s
= 1,0032
9

0,8393
s = 1,0032

9

s = 0,306

4. Se obtiene luego el coeficiente de variacin a partir del siguiente clculo:

s 100
CV [%] =
V

0,306 100
CV [%] =
200,1514

CV [%] = 0,153

Qu hacer en caso de que los valores de un aparato

Para el ejemplo calculado se obtiene el resultado siguiente: controlado se siten fuera de los lmites de error?

Evaluacin del control
gravimtrico:
Vol. controlado: (l) 200,0000
Vol. medio: (l) 200,1514
E [%] 0,076
CV [%] 0,153
E [%] nominal* 0,600
CV [%] nominal* 0,200
* lmites de error de las
instrucciones de manejo
El aparato est en orden!
Si los valores calculados de
exactitud (E [%]) y el coefi-
ciente de variacin (CV [%])
son menores que los lmites de
error o iguales a stos, enton-
ces el aparato est en orden.
1. Comprobar que todos los Si estas medidas no ofrecen el
Nota:
puntos del SOP se han resultado deseado, por favor
En caso de un control de seguido correctamente. contacte al fabricante para
volmenes parciales, deben poder aclarar el procedimiento
convertirse los valores 2. Tener en cuenta las notas
a seguir.
indicados para E N [%] y CV N 'Qu hacer en caso de
[%] referidos al volumen avera?' de las instrucciones
nominal VN . de manejo.
Para un volumen parcial de 3. Ajustar el aparato segn las
20 l se aplica: indicaciones de las instruc-
ciones de manejo.
VN
E 20 l [%] = R N [%]
V20 l
200 l
E 20 l [%] = 0,5%
20 l
E 20 l [%] = 5%
El clculo de CV20 l se
efecta de forma anloga.

BRAND

35
Control de medios de anlisis

Software de calibracin
El control de los medios de anlisis segn BPL e DIN EN ISO 9001 a veces no es tan sencillo. Adems de
que uno se puede equivocar fcilmente con las complejas frmulas, tambin la documentacin de los resul-
tados puede presentar a veces dificultades. Para facilitarle a usted este trabajo a menudo laborioso y difcil,
algunos fabricantes de aparatos de laboratorio han desarrollado un software de calibracin especial.

por ej. EASYCAL, el software de calibracin de BRAND

EASYCAL realiza los cl- Una versin de demostra-
culos para usted y emite la cin del software est a
documentacin necesaria su disposicin en Internet
automticamente. Para ello, (www.brand.de) a ser descar-
Ud. necesita slo una balanza gada (download) o puede ser
analtica, un ordenador, una im- solicitada gratuitamente en
presora (opcional) y el software CD-ROM.
EASYCAL.
Control del aparato sin
importar el fabricante.
Datos bsicos de muchos
aparatos ya depositados.
Control segn las normas
ISO 4787, ISO 8655 y
otras.

Control de los medios de anlisis facilitado

El software de calibracin sadas e importacin automtica

EASYCAL facilita el control
de los medios de anlisis segn
las directivas BPL as como
las normas EN ISO 9001 para
aparatos Liquid Handling y
aparatos volumtricos en vidrio
y en plstico. El software de
fcil manejo se puede manipu-
lar de forma intuitiva. Una vez
determinado el tipo de aparato
a controlar aparato Liquid
Handling o aparato volumtrico
en vidrio o plstico se intro-
ducen en la pantalla 'Anotacin
de los valores medidos' paso a
paso los datos necesarios.
Para la introduccin de los va-
lores obtenidos de las pesadas
se puede elegir entre dos op-
ciones: introduccin manual de
los valores obtenidos de las pe-
de los datos. A continuacin
se realiza la evaluacin auto-
mtica. Una vez introducidos
los valores lmite, EASYCAL
realiza todos los clculos auto-
mticamente. Mediante un clic
en un botn se puede imprimir
un informe claro.
Todos los resultados se alma-
cenan en una base de datos.
El historial de los controles
administra y pone a disposicin
los datos almacenados de apa-
ratos ya controlados facilitando
as el control de los medios de
anlisis. Los intervalos de con-
trol determinados en funcin de
las instrucciones de calibrado
(SOPs) pueden definirse indivi-
dualmente.

Servicio de calibrado
de aparatos de Liquid Handling
BRAND ofrece un servicio completo, incluyendo la calibracin y,
en caso necesario, tambin la reparacin y el ajuste de medios de
medicin, a las personas para las cuales la calibracin significa
una inversin de tiempo demasiado grande.
Informe de verificacin impreso

BRAND

36

Declaracin de conformidad y certificados
Se diferencia entre:
declaracin de conformidad
certificados de calidad (certificados de control del fabricante)
certificados de calibrado (oficina de contraste alemana, DAkkS)
Declaracin de conformidad
Reglamento de medicin y calibracin y
identificacin DE-M
Para los aparatos volumtricos utilizados para mediciones en
reas reguladas por leyes, p. ej. en reas mdicas y farmacu-
ticas (fabricacin y control de medicamentos), el reglamento
alemn de medicin y calibracin de diciembre 2014 exige una
declaracin de conformidad en vez de calibrado. Esto se aplica
tambin en el caso de accesorios relevantes de la tcnica de me-
dicin (por ej. puntas de pipeta para pipetas de mbolo aspirante).
Quin certifica la conformidad?
Marcaje DE-M quiere decir: concordancia de un aparato con la
norma de homologacin para el sector regulado por la ley segn
del Reglamento Alemn de Medicin y Calibracin. El proceso
detallado de la certificacin de identificacin DE-M est descrito
en el Reglamento Alemn de Medicin y Calibracin de deciembre
2014.
Con la identificacin DE-M, el fabricante declara que el aparato
respectivo cumple con los requisitos del Reglamento Alemn de
Medicin y Calibracin y de las normas pertinentes. Normalmente
la identificacin DE-M est impresa directamente sobre los apara-
tos y, en el caso de los productos desechables complementarios,
sobre el embalaje.
Smbolo de
conformidad
Marcaje DE-M:
Todos los aparatos volumtricos BLAUBRAND estn identifica-
dos con DE-M. Con este smbolo, el fabricante BRAND certifica
la conformidad de los aparatos con el Reglamento Alemn de
Medicin y Calibracin. Normalmente la identificacin DE-M est
impresa directamente sobre los aparatos.
En cada lote y en cada certificado individual, BRAND enumera todos
los medios de control utilizados.
Certificados de calidad
El control y la garanta de calidad realizados de acuerdo con la
norma DIN EN ISO 9001 constituyen la base para la expedicin
de certificados de calibrado del fabricante como por ejemplo los
certificados de calidad. Estos certificados de control del fabricante
estn disponibles como certificado de lote o certificado individual.
Todos los resultados de control se documentan y se archivan
durante 7 aos como mnimo. De esta manera, si se conoce el
nmero de lote o bien el nmero de serie, se tiene acceso, en
cada momento, a los resultados individuales obtenidos a partir de
medidas efectuadas en la fabricacin.
Declaracin de conformidad y certificados
Certificados de calibrado
Certificado de calibrado oficial
Este certificado de calibrado se expide por la oficina de contraste
alemana y se reconoce en Alemania y muchos otros pases. El
aparato de medicin y el certificado de calibrado estn provistos
de un nmero de serie individual y del ao de expedicin para
identificacin.
Certificado de calibrado DAkkS (servicio alemn de calibrado)
El servicio alemn de calibrado (Deutscher Kalibrierdienst, DKD)
fue fundado en el ao 1977 como institucin comn del estado y
de la economa. Representa el eslabn de unin entre los medios
de medicin de los laboratorios de la industria, la investigacin,
los institutos de control y los organismos oficiales, con los patro-
nes nacionales del Physikalisch-Technische Bundesanstalt PTB
(Instituto Federal de Fsica y Metrologa).
A partir de 2010 la acreditacin DKD s transferida sucesiva-
mente a base legal a la acreditacin DAkkS (Deutsche Akkreditie-
rungsstelle GmbH).
El certificado de calibrado DAkkS con el smbolo de calibrado
DAkkS documenta, como certificado oficial de alto nivel, la traza-
bilidad de los valores medidos a patrones nacionales e internacio-
nales, y con esto tambin a las unidades del sistema internacional
SI, tal cual lo exigen las normas DIN EN ISO 9001 e ISO/IEC
17025 para el control de los medios de anlisis.
Una diferencia determinante entre los servicios de calibrado en f-
brica y en los laboratorios de calibrado DAkkS, radica en la indica-
cin fiable de la incertidumbre de medicin respectiva informada
por DAkkS, por la cual responde el laboratorio.
El certificado de calibrado DAkkS se aplica cuando se exigen
calibraciones de un laboratorio acreditado, cuando se requieren
calibraciones de muy alta calidad, cuando se requieren patrones
de referencia, as como la calibracin de aparatos de referencia.
El DAkkS es miembro de International Laboratory Accreditation
Cooperation (ILAC). Gracias a un convenio multilateral, muchos
pases se han comprometido a reconocer el certificado de calibra-
do DAkkS.
Certificado de lote Certificado individual
Todos los aparatos de medi- El aparato de medicin y el
cin y certificados de un lote certificado estn provistos
de fabricacin estn provistos adems del nmero de lote de
del mismo nmero de lote. El un nmero de serie individual.
certificado indica, para este El certificado indica el volumen
lote, el valor medio, la des- medido, la incertidumbre de
viacin estndar y la fecha de medicin y la fecha de expe-
expedicin. dicin.
BRAND
37
Aparatos volumtricos BLAUBRAND USP
Las empresas que fabrican productos farmacuticos para el mercado americano y que, por consigui-
ente, sern auditadas por las autoridades de EE.UU., por ej. la FDA (Food and Drug Administration),
estn obligadas a cumplir con los requisitos de la USP (United States Pharmacopoeia).
La USP actual, en el captulo 31, describe que para los aparatos volumtricos de vidrio con lmites de
error de la clase A, deben cumplirse las normas ASTM. Estos lmites de errores para matraces afo-
rados, pipetas aforadas y buretas estn listados en tablas. Para pipetas de medicin hasta el tamao
de 10 ml inclusive, los lmites de error se expresan en textos.

Lmite de error
Los aparatos volumtricos de
vidrio BRAND se fabrican de
acuerdo con las normas DIN
EN ISO actuales. Dado que los
requisitos de fabricacin estab-
lecidos en las normas DIN EN
ISO difieren de los de las nor-
mas ASTM, los aparatos de me-
dicin individuales resultan con
lmites de errores diferentes.
En los certificados USP ad-
juntos, BRAND certifica que
los aparatos de medicin USP
suministrados cumplen con los
lmites de errores de la clase A
correspondientes a las normas
ASTM.

Marcaje DE-M Certificado de lote USP

Todo el material volumtrico
BLAUBRAND est marcaje
DE-M en serie. Con el distintivo
DE-M certifica BRAND como
fabricante la conformidad de
los aparatos con la norma de
contraste alemana. El distintivo
DE-M est impreso directamen-
te sobre los aparatos de acuerdo
con la norma DIN 12600.
En cada lote y en cada certifica-
do individual, BRAND enumera
todos los medios de control
utilizados.
El certificado indica el valor
medio y la desviacin estndar
del lote, as como la fecha de
expedicin (nmero de lote: ao
de fabricacin/lote).
Certificado individual USP
El certificado indica el volumen
medido, la incertidumbre de me-
dicin y la fecha de expedicin
(nmero de serie individual: ao
de fabricacin/lote/nmero de
orden del aparato).

BRAND

38

Directiva IVD
Importancia y efectos
Directiva IVD de la UE
La directiva de la UE en cuanto
a productos sanitarios para
diagnstico in vitro (directiva
IVD) se public el 7 de di-
ciembre de 1998 en el boletn
oficial de la Unin Europea y,
con esto, ha entrado en vigor.
Es posible su aplicacin desde
el 7 de junio del 2000.
Qu se entiende por 'pro-
ducto sanitario para diag-
nstico in vitro (IVD)'?
Se entiende por 'producto
sanitario para diagnstico in
vitro' cualquier producto sani-
tario utilizado en un examen in
vitro de muestras procedentes
del cuerpo humano, incluidas
donaciones de sangre y tejidos.
A estos productos pertenecen:
reactivos, sustancias o disposi-
tivos de calibrado, sustancias o
dispositivos de control, equi-
pos, instrumentos, aparatos,
sistemas, o tambin recipientes
para muestras, si es que estn
destinados especficamente
por el fabricante para muestras
medicinales.
Los 'productos sanitarios para
diagnstico in vitro' sirven prin-
cipalmente para proporcionar
informacin
relativa a un estado fisiolgi-
co o patolgico
relativa a una anomala
congnita
para supervisar medidas
teraputicas.
Directiva DIV (Diagnstico In Vitro)
Qu se entiende por
'producto sanitario'?
Se entiende por 'producto
sanitario' cualquier instru-
mento, aparato, dispositivo,
material u otro artculo, incluido
el software, destinado por el
fabricante para a ser utilizado
en el ser humano
con fines de diagnstico,
prevencin, seguimiento,
tratamiento, alivio o com-
pensacin de una enferme-
dad, lesin o discapacidad
con fines de investigacin,
sustitucin o modificacin
de la anatoma o de un
proceso fisiolgico
con fines de regulacin de la
concepcin.
No pertenecen a estos produc-
tos agentes farmacolgicos o
inmunolgicos reglamentados
por la ley sobre medicamentos.
Marcado CE
Con el smbolo CE sobre un
producto certifica el fabrican-
te que este producto cumple
con las exigencias fijadas en
las directivas de la UE para
productos de este tipo y que,
en caso necesario, ste ha
sido sometido a los controles
exigidos. El fabricante marca
el producto con este smbolo
y elabora adicionalmente un
certificado de conformidad
verificando la concordancia del
producto con las directivas y
normas mencionadas.
Los productos sanitarios
suministrados por BRAND
pertenecen todos a la gama
de productos sanitarios para
diagnstico in vitro (IVD). Entre
ellos se encuentran:
cmaras de recuento para
clulas sanguneas
cubrecmaras para cmaras
de recuento
micropipetas desechables
capilares para micro-
hematocrito
cera de sellado para
hematocrito
vasos para analizadores
vasos para orina
recipientes para muestras
de heces
crioviales
puntas de pipeta
puntas PD
micropipetas Transferpette
dispensador manual
HandyStep
BRAND
39
Gestin de la calidad

Gestin de la calidad
La gestin de la calidad es imprescindible y debera, en el caso ideal, empezar con la etapa de
planificacin de un producto y acompaar su desarrollo hasta la produccin en serie, garantizando
al usuario la mayor seguridad posible al trabajar con aparatos de laboratorio as como la fiabilidad de
sus anlisis.

Gestin de la calidad en BRAND

Gestin de calidad utilizando como modelo aparatos Liquid Handling
y material volumtrico BLAUBRAND

La gestin de calidad BRAND
empieza ya con la etapa de
planificacin de un producto y
acompaa su desarrollo hasta
que el mismo est listo para la
produccin en serie.
El control constante a lo
largo de todo el proceso de
fabricacin tiene el objetivo de
fabricar material volumtrico
con una desviacin lo ms pe-
quea posible del valor nominal
(exactitud) y con una dispersin
mnima de los valores individua-
les (coeficiente de variacin).
Para finalizar, el resultado de
esta 'gestin estadstica de la
fabricacin (SPC)' se controla
por una toma de muestras du-
rante el control final segn
la norma DIN ISO 3951.
El proceso del sistema de
gestin de calidad realizado en
la empresa BRAND y certifi-
cado segn la norma DIN EN
ISO 9001 es una combinacin
del control de la capacidad de
la produccin y de la toma de
muestras. El nivel de calidad
lmite aceptable (NCA) es
de 0,4 como mnimo. Esto
significa que los valores lmite
establecidos se observan con
una seguridad estadstica del
99,6% como mnimo.
Todos los medios de anlisis
utilizados en el control de
calidad se controlan regular-
mente y estn ajustados a los
patrones nacionales del PTB
(Instituto Federal de Fsica y
Metrologa). Este sistema de
gestin de calidad realizado de
acuerdo con la norma DIN EN
ISO 9001 constituye tambin
la base para la emisin de
certificados de calibrado del
fabricante como por ejemplo
los certificados de calidad.
Todos los resultados de control
estn documentados y archi-
vados durante 7 aos como
mnimo. De esta manera, si
se conoce el nmero de lote
o bien el nmero de serie, se
tiene acceso en cada momen-
to del punto de fabricacin al
rendimiento individual.
Por este motivo BRAND es fa-
bricante de material volumtrico
marcaje DE-M. El control y la
garanta de calidad as como la
calidad de sus productos son
supervisados por la oficina de
contraste alemana.
De esta forma quedan satisfe-
chas las exigencias requeridas
para el control de los medios
de anlisis, para la trazabili-
dad del mismo a los patrones
nacionales as como para la
cualificacin del personal.

BRAND

40
 Limpieza

La limplieza de aparatos de laboratorio

Limpieza a mano y a mquina
Los aparatos de laboratorio en vidrio y en plstico pueden limpiarse a mano por inmersin en bao, o
a mquina en la lavadora del laboratorio. Los aparatos de laboratorio deben limpiarse inmediatamen-
te tras su utilizacin, a baja temperatura, con corto tiempo de actuacin y con baja alcalinidad. Los
aparatos de laboratorio que hayan estado en contacto con sustancias infecciosas se desinfectan en
primer lugar, luego se limpian y por ltimo se esterilizan en autoclave. Slo as pueden evitarse in-
crustaciones de suciedad y daos al aparato por residuos qumicos que a la larga quedan adheridos.
Nota:
Los aparatos de laboratorio utilizados se deben desinfectar antes de limpiarlos en caso de que exista
el peligro de heridas durante la limpieza.

Procedimiento de frotado Procedimiento por

y fregado inmersin en bao Bao de ultrasonidos

Es conocido generalmente En el procedimiento por inmer- En el bao de ultrasonidos se

el procedimiento de frotado
y fregado con un pao o una
esponja empapados en la solu-
cin de limpieza. Los aparatos
de laboratorio no se deben
limpiar nunca con medios de-
tergentes o esponjas abrasivas,
ya que se daara la superficie.
sin en bao se colocan los pueden limpiar los aparatos en
aparatos de laboratorio en la so- vidrio y tambien los aparatos en
lucin de limpieza normalmente plstico. Se debe evitar de to-
a temperatura ambiente durante das formas el contacto directo
20 a 30 minutos. con las membranas vibratorias.
A continuacin se enjuagan con
agua de la red y despus con
agua destilada. Debe elevarse
la temperatura del bao y pro-
longarse el tiempo de actuacin
slo en caso de gran suciedad!

Limpieza a mquina

La limpieza de aparatos de la-

boratorio en la lavadora es ms
cuidadosa con el material que
la limpieza por inmersin. Los
aparatos slo entran en contac-
to con la solucin detergente
durante las relativamente cor-
tas fases de enjuague, cuando
sta es bombeada a travs de
toberas o inyectores.
Para evitar que los aparatos
de laboratorio ligeros sean
agitados y daados por el
chorro de limpieza, deberan
asegurarse con redes.
Los aparatos de laboratorio
estn ms protegidos contra
rayaduras si los cestillos de
alambre de la lavadora estn sus superficies principalmente
recubiertos de plstico.
Aparatos de laboratorio Limpieza en la analtica
en vidrio de trazas
En el caso de aparatos en vi- Para minimizar las trazas de
drio deben evitarse tiempos de metales, los aparatos de labo-
actuacin prolongados a tem- ratorio se sumergen en HCl 1N
peraturas superiores a 70 C o en HNO3 1N a temperatura
en medios alcalinos, pues esto ambiente durante no ms de
puede conducir en material vo- 6 horas. (Los aparatos de
lumtrico a variaciones de volu- laboratorio de vidrio se hierven
men por desgaste de vidrio y a a menudo en HNO3 1N durante
la destruccin de la graduacin. 1 hora.)
Finalmente se enjuagan con
agua destilada. Para minimizar
Aparatos de laboratorio las contaminaciones orgnicas,
en plstico los aparatos de laboratorio se
pueden limpiar previamente con
Los aparatos en plstico, con soluciones alcalinas o disolven-
tes, como por ej. el alcohol.
lisas y no humectables se pue-
den limpiar en general sin es-
fuerzo con baja alcalinidad.
Los aparatos de laboratorio en
poliestireno y en policarbona-
to, especialmente los tubos de
centrfuga, slo deben limpiarse
a mano con un detergente neu-
tro. Tiempos de actuacin pro-
longados incluso con detergen-
tes ligeramente alcalinos afec-
tan la solidez. Se debe compro-
bar en cada caso la resisten-
cia qumica del plstico corres-
pondiente.
BRAND

41
Limpieza

Limpieza cuidadosa
Para proteger los aparatos de laboratorio, stos deben limpiarse , 50

inmediatamente tras su utilizacin, a baja temperatura, con corto

tiempo de actuacin y con baja alcalinidad. Especialmente en 40

material volumtrico de vidrio deben evitarse tiempos de actuacin ,

prdida de peso (mg/100 cm)

capa ataquada (m)
30

prolongados a temperaturas superiores a 70 C en medios alca-

linos. En caso contrario, esto conduce a variaciones de volumen 20

por desgaste del vidrio y a la destruccin de la graduacin.

,

10

Informacin 0 6 8 10 12 14
temperatura (C) pH

Mientras que una solucin de aprox. 1,4 m, o sea 10 veces Ataque a Boro 3.3 por efecto de bases Ataque a Boro 3.3 por efecto de bases
hidrxido sdico 1N slo le ms. Por lo tanto, evitar tem- en funcin de la temperatura, calculada en funcin del pH a 100 C.
desde las prdidas de peso. Conc. Tiempo de ataque: 3h.
quita una capa de aprox. peraturas de limpieza superio- (NaOH) = 1 mol/l
0,14 m a Boro 3.3 (vidrio res a 70 C y usar detergentes tiempo de ataque: 1h.
borosilicato 3.3) en una hora a ligeramente alcalinos. (Diagramas del folleto 'Technische Glser' ('Vidrios tcnicos') de SCHOTT AG, Mainz)
70 C, a 100 C ya se elimina

Desinfeccin y esterilizacin
La desinfeccin La esterilizacin por vapor Notas para la esterilizacin

Los aparatos que han esta-
do en contacto con material in-
feccioso o organismos genti-
camente modificados, se de-
ben desinfectar, antes de volver
a utilizarlos/eliminarlos, lo que
significa: llevarlos a tal estado
que no presenten ningn ries-
go. Para eso, tratar por ejem-
plo los aparatos con desinfec-
tantes. En caso necesario, y si
el material es adecuado, a con-
tinuacin pueden esterilizarse
los aparatos por vapor (en au-
toclave).
Por esterilizacin por vapor (es-
terilizacin en autoclave) se en-
tiende la eliminacin o la inacti-
vacin irreversible de todos los
microorganismos capaces de
reproducirse por la actuacin
de vapor saturado a 121 C
(2bar), segn DIN EN 285.
La realizacin correcta de la
esterilizacin hasta alcanzar la
seguridad biolgica es respon-
sabilidad de la persona encar-
gada de la higiene.
Una esterilizacin por vapor eficaz est garantizada slo con
vapor saturado que tiene libre acceso a los puntos contamina-
dos.
Para evitar sobrepresin los recipientes siempre deben estar
abiertos.
Los aparatos sucios que se vuelven a utilizar deben limpiarse a
fondo antes de esterilizarlos por vapor. De otro modo, los res-
tos de suciedad se incrustan durante la esterilizacin por vapor.
Los microorganismos no se pueden eliminarse eficazmente, ya
que estn protegidos por la suciedad, y, por efecto de las altas
temperaturas, los productos qumicos adheridos pueden daar
las superficies mismas.
No todos los plsticos son resistentes a la esterilizacin por va-
por. El policarbonato, por ej., pierde su resistencia; por lo tanto
los tubos de centrfuga de policarbonato no se deben esterilizar
por vapor.
Al esterilizar por vapor (en autoclave) los aparatos de plstico
en particular no deben soportar cargas (por ej., no se deben
apilar). Para evitar deformaciones en, por ej., vasos, frascos y
probetas graduadas, autoclavar en posicin vertical.

Resistencia trmica

Todo el material volumtrico reutilizable BLAUBRAND y

SILBERBRAND se puede calentar en la estufa de secado o du-
rante la esterilizacin hasta 250 C, sin que haya que temer una
variacin de volumen. Debe tenerse siempre en cuenta que en
material de vidrio un calentamiento irregular o un cambio brusco
de temperatura provoca tensiones trmicas que pueden conducir
a la rotura. Por tanto
Colocar el material de vidrio siempre en la estufa de secado o
de esterilizacin fra y calentar despus.
Tras acabar el tiempo de secado o de esterilizacin, dejar
enfriar el material lentamente en la estufa desconectada.
No colocar nunca material volumtrico sobre una placa calefac-
tora.
En el caso de material en plstico se debe observar especial-
mente la temp. mx. de uso.

BRAND

42
 Normas de seguridad

Normas de seguridad
Sobre la manipulacin de sustancias peligrosas
La manipulacin de sustancias peligrosas, como productos qumicos, materiales infecciosos, txicos
o radioactivos como tambin con organismos modificados genticamente exige una alta responsabi-
lidad de todos los implicados, para proteger a las personas y el medio ambiente. Deben observarse
escrupulosamente las prescripciones correspondientes: por ej. las 'Prescripciones para Laboratorios'
de las asociaciones profesionales y las normas de los institutos encargados de la proteccin del me-
dio ambiente, de la proteccin contra radiaciones y de la eliminacin de residuos. Igualmente deben
observarse las reglas de la tcnica reconocidas en general, como por ej. las normas DIN o ISO.

Algunas normas de seguridad importantes

Antes de utilizar aparatos de
laboratorio el usuario debe
comprobar que sean ade-
cuados y que funcionen co-
rrectamente.
Sostener las pipetas cer-
ca del extremo de la boca
de aspiracin e introducirlas
cuidadosamente en el adap-
tador del auxiliar de pipetea-
do hasta que queden segu-
ras y firmemente ajustadas.
No forzarlas. La rotura del
vidrio puede provocar lesio-
nes!
Notas sobre aplicaciones
Al trabajar con vidrio se deben tener en cuenta las limitaciones
de este material frente a cambios de temperatura o a esfuerzos
mecnicos, y se han de tomar estrictas medidas de precaucin:
Antes de volver a utilizar un
aparato debe comprobarse
que no existan daos. Esto
es especialmente importan-
te en aparatos que se em-
pleen bajo presin o bajo va-
co (por ej. desecadores, ki-
tasatos, etc.).
Los aparatos de laboratorio
daados representan un pe-
ligro que se debe considerar
debidamente (por ej. heridas
incisas, quemaduras, ries-
go de infeccin). En caso de
que no sea econmicamen-
te rentable o bien sea impo-
sible una reparacin confor-
me a las reglas, estos apa-
ratos tienen que ser elimina-
dos adecuadamente.
Los aparatos de laborato-
rio enviados para su repa-
racin deben estar esterili-
zados previamente sin dejar
ningn residuo, y en su caso
deben haber sido limpiados
correctamente. Aparatos
con contaminacin radioacti-
va deben estar descontami-
nados de acuerdo con las tizada la seguridad en el tra-
normas de proteccin contra
radiacin! El material volu-
mtrico en vidrio, como ma-
traces aforados, probetas,
graduadas, etc., no debe
ser reparado en caso de es-
tar daado. Por la accin del
calor pueden permanecer
tensiones en el vidrio (muy
elevado riesgo de rotura!), o
bien pueden originarse va-
riaciones permanentes del
volumen.
Tampoco est permitido re-
cortar las probetas daa-
das. En este caso se acorta
la distancia entre la divisin
superior y el pico, definida
por la norma DIN. El peligro
de derramar productos qu-
micos al llenarlas en exceso
se ampla y no queda garan-
bajo.
Los residuos deben elimi-
narse de acuerdo con las
normas de eliminacin de
residuos. Esto tambin es
vlido para artculos des-
echables usados. No debe
originarse en el proceso nin-
gn peligro para las perso-
nas ni para el medio am-
biente.
Los aparatos de laboratorio
deben eliminarse de acuerdo
con los materiales utilizados,
respetando las prescripcio-
nes vigentes y en condicio-
nes limpias. Observar que
los vidrios de materiales de
laboratorio no se reciclen.

Los aparatos volumtricos, No someter nunca los apa-

como por ej. probetas gra-
duadas y matraces aforados,
no deben calentarse sobre
placas calefactoras.
Las reacciones exotrmicas,
como diluir cido sulfrico o
disolver hidrxidos alcalinos
slidos, siempre deben rea-
lizarse bajo agitacin y refri-
geracin, por ej. en un ma-
traz Erlenmeyer, pero nunca
en una probeta graduada o
un matraz aforado.
ratos de vidrio a cambios
bruscos de temperatura. Por
lo tanto, no retirarlos de la
estufa de secado estando
todava calientes, ni colocar-
los calientes sobre una su-
perficie fra o hmeda.
Para aplicaciones bajo pre-
sin slo deben utilizarse
aparatos de vidrio previstos
especialmente para esta fi-
nalidad; los kitasatos y de-
secadores, por ejemplo, slo
deben evacuarse tras com-
probar su buen estado.

BRAND

43
Apuntes:
 Indice de marcas
accu-jet, BLAUBRAND, BRAND,
Dispensette, EASYCAL, HandyStep S,
seripettor, Titrette, Transferpette,
as como los smbolos ilustrados como
logos de palabra e imagen son marcas
de la empresa BRAND GMBH + CO KG,
Alemania.

Las marcas, los trminos registrados, los sm-

bolos o las representaciones de otras empre-
sas utilizadas en esta publicacin se incluyen
solamente a ttulo de referencia y sin preten-
sin de uso. Otras marcas mencionadas son
propiedad del correspondiente fabricante.
9946 39 Printed in Germany 21/0215

BRAND GMBH + CO KG P.O. Box 11 55 97861 Wertheim Germany

Tel.: +49 9342 808-0 Fax: +49 9342 808-98000 E-Mail: info@brand.de Internet: www.brand.de