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Protocolo para Histoquimica PDF
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Biopsia renal:
Una biopsia es un procedimiento por el que se extraen clulas o tejidos del cuerpo para
analizarlos con un microscopio. Durante una biopsia renal, se extraen muestras de tejidos con una
aguja especial para determinar la presencia de cncer o de otras clulas anormales, o para
evaluar el funcionamiento del rin.
La Biopsia Renal sigue siendo una herramienta diagnstica de primer orden, de beneficio
no tan slo para la ampliacin de experiencia del nefrlogo sino, sobre todo, para el porvenir del
enfermo. Las situaciones clnicas del sndrome nefrtico e insuficiencia renal aguda son los dos
ms claros exponentes de ello. Conocer la histologa de muchas nefropatas permitir plantear
estrategias de prevencin, diagnstico y tratamiento a fin de controlar el impacto de estas
enfermedades en la progresin a estadios terminales
Una vez obtenida la biopsia renal, esta debe ser inmediatamente fijada en formol baferado,
para que pueda mantener sus propiedades intactas y la biopsia no se malogre o estropee.
Las lminas deben estar tratadas con alguna solucin adherente como es el caso de la
POLIHELILISINA, la cual har que el tejido no se desprenda de la lmina.
Una ves realizado todo este procedimiento se realizan las tinciones especiales q el medico
patlogo pide, para su adecuado diagnostico.
La tincin tricrmica de Masson, al igual que otras tinciones tricrmicas, es una tcnica
de coloracin especial que permite visualizar claramente las fibras de colgeno tipo I que forman
fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; tambin evidencia, aunque en menor
intensidad, las fibras reticulares. Se emplean tres colorantes para diferenciar el ncleo celular, el
citoplasma y las fibras de colgeno.
Fundamento
Primeramente, se tien las secciones con un tinte cido tal como escarlata de Biebrich.
Todos los elementos acidfilos del tejido tales como el citoplasma, el msculo y el colgeno tipo I
se unirn a los tintes cidos. Las secciones entonces se tratan con cido fosfotngstico y/o
fosfomolbdico. Ya que el citoplasma es mucho menos permeable que el colgeno, los cidos
fosfotngsticos y fosfomolbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno pero
no del citoplasma. Los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos tienen numerosos grupos cidos
que probablemente acten como medio de unin entre el colgeno y el azul de la anilina, que es el
tinte del colgeno. Probablemente, el pH de la solucin fosfotngstico/fosfomolbdico tambin
aumente la coloracin y ayude al colgeno en la difusin o el retiro de los colorantes.
Procedimiento
1. Desparafinar en xilol 3 veces por cada 3 min, hidratar la muestra en alcoholes de mayor a
menor grado cada 3 minutos.
6. Teir con solucin de azul de anilina 15 minutos o con solucin de verde luz 5 minutos.
Anlisis de resultados
Optimizacin
Tincin PAS
La tcnica de PAS se utiliza en los preparados para microscopia ptica, permite la tincin
de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas membranas
celulares, clulas caliciformes en la mucosa del intestino, fibras reticulares que estn rodeados por
hidratos de carbono, etc. Entonces en esta tcnica, el cido peryodico oxida a los grupos oxidrilos
(OH) de dos carbonos cercanos, formando de esta manera grupos aldehdos compuestos por
carbono, oxigeno e hidrogeno. As la leucofucsina puede reaccionar con estos y dejar una tincin
rojiza.
Fundamento:
Procedimiento:
Resultados:
Ncleos: azul
Polisacridos, glucgeno, mucopolisacridos neutros, mucoprotenas y glucoprotenas,
glucolpidos, fosfolpidos, membrana basal, colgeno: prpura
Estas tinciones evidencian las fibras de reticulina y material de membrana basal. Las fibras
de reticulina consisten en fibras finas constituidas principalmente por colgeno tipo III, mientras
que las membranas basales contienen en gran parte colgeno tipo IV y laminina junto con
proteoglicanos que son los responsables de la tincin con sales de plata. Evidencia la
desorganizacin arquitectural trabecular y en estudios de mdula sea para poner de manifiesto
mielofibrosis incipiente (fibrosis reticulnica) negativa en fases iniciales para tincin de colgeno.
Procedimiento:
Resultados:
Reticulina: negro.
Ncleos: grisceo.
EN CASOS DE AMILOIDOSIS:
AMILOIDOSIS RENAL:
CLASIFICACIN:
Amiloidosis AL2
Amiloidosis AA
Amiloidosis AF
En este caso se trata de una amiloidosis provocada por el depsito de -2- microglobulina
en pacientes con insuficiencia renal crnica (IRC) sometidos a Dilisis durante muchos aos. No
hay afectacin renal, y sus manifestaciones clnicas pueden ser Sd del tnel carpiano, geodas,
fracturas patolgicas, espondilo-artropata destructiva, artropata perifrica.
Fundamento:
La segunda teora estudiada, nos dice que la molcula de Rojo Congo se intercala entre
protenas adyacentes, las cuales normalmente estaran unidas por puentes de hidrgeno. La
molcula de colorante interrumpira estas uniones, creando nuevas uniones de puente de hidrgeno
entre el colorante y la protena, estabilizndose de esta forma. La distancia aparente entre
protenas adyacentes sera de 4,8 Armstrong
Procedimiento:
Resultados:
Optimizacin.
Amiloide muy claro: aumentar el groso del corte o tiempo de incubacin en el rojo congo
alcohlico.
Procedimiento:
Desparafinar
Hidratar con agua destilada.
Cristal violeta durante 1 hora.
Enjuagar con agua destilada.
Diferenciar en hematoxilina por 1 min.
Secar y realizar el montaje
Resultados:
Amiloide: Rosa
En una biopsia de piel el mdico extrae un trocito o la totalidad de la zona afectada. Este tejido
despus se trata con un producto qumico especial para conservar la muestra y se enva a un
laboratorio, donde un experto lo examina bajo el microscopio para determinar qu es. Una vez se
sepa esto, el mdico podr darte el tratamiento adecuado.
Fundamento:
La segunda teora estudiada, nos dice que la molcula de Rojo Congo se intercala entre
protenas adyacentes, las cuales normalmente estaran unidas por puentes de hidrgeno. La
molcula de colorante interrumpira estas uniones, creando nuevas uniones de puente de hidrgeno
entre el colorante y la protena, estabilizndose de esta forma. La distancia aparente entre
protenas adyacentes sera de 4,8 Armstrong
Procedimiento:
Resultados:
Optimizacin.
Amiloide muy claro: aumentar el groso del corte o tiempo de incubacin en el rojo congo
alcohlico.
Procedimiento:
Desparafinar
Hidratar con agua destilada.
Cristal violeta durante 1 hora.
Enjuagar con agua destilada.
Diferenciar en hematoxilina por 1 min.
Secar y realizar el montaje
Resultados:
Amiloide: Rosa
Fundamento:
El aclarado de bisulfito tras la oxidacin quizs incremente el depsito de plata que luego
es sustituido por oro.
Procedimiento:
Deshidratar en alcoholes, aclarar en xilol y cubrir con resina sinttica o blsamo de Canad.
Resultados
Tincin Giemsa:
Estos organismos adquieren una coloracin diferencial y se ven dentro del citoplasma de la
clula husped. La tcnica de Giemsa est formada por varios colorantes: los tintes neutros
utilizados combinan el azul de metileno como tinte bsico y la eosina como tinte cido, lo que da
una amplia gama de colores. El azul de metileno es un colorante metacromtico, de ah que muchas
estructuras se tian de prpura y no de azul. El pH de la solucin de coloracin es crtico y se debe
ajustar idealmente segn diversos fijadores. La gama del pH debe estar entre 6.4 y 6.9.
Procedimiento
1. Desparafinar e hidratar.
2. Aplicar solucin de trabajo de Giemsa durante 10 minutos.
3. Deshidratar con alcohol absoluto, 3 cambios.
4. Aclarar con xilol, 3 cambios.
Resultados
1. Citoplasma: rosa
2. Ncleos: azul
3. Eritrocitos: rosa - naranja
4. Grnulos de las clulas cebadas: prpura
5. Bacterias: azul
6. Parsitos: azul