UNIVERSIDAD ANDINA

NESTOR CACERES VELASQUEZ

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

DETERMINACION DE LA PRUEBA DE SUCEPTIBILIDAD

ANTIFUNGICO IN VITRO DEL EXTRACTO DE OREGANO (ORIGANUM
VULGARE), EN DERMATOFITOS (TRICHOPHYTON SP., MICROSPORUM
SP. Y EPIDERMOPHYTON SP.) POR EL MTODO DE MICRODILUCION,
JULIACA 2016.

Bachiller: Sucasaire Quispe, Aracely Yesenia

Bachiller: Gemio Sancho, Julia Yanet
Proyecto de tesis presentado para la obtencin del Ttulo Profesional de:
QUIMICO FARMACEUTICO

JULIACA PERU
2016
 2

INDICE

CAPITULO I........................................................................................................................... 3
PLANTEAMIENTO DE PROBLEMA............................................................................................... 3
A. ENUNCIADO DEL PROBLEMA ............................................................................................. 3
B. DELIMITACIONES DE LA INVESTIGACION ....................................................................... 5
C. JUSTIFICACION DE LA INVESTIGACION .............................................................................. 6
D. OBJETIVOS ......................................................................................................................... 8
CAPITULO II........................................................................................................................ 10
MARCO TEORICO ..................................................................................................................... 10
A. BASES TEORICAS DE LA INVESTIGACION ...................................................................... 10
B. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACION ....................................................................... 33
CAPITULO III ....................................................................................................................... 36
HIPOTESIS Y VARIABLES ........................................................................................................... 36
A. HIPOTESIS GENERAL Y ESPECIFICAS ............................................................................. 36
B. OPERACIONALIZACION DE VARIABLES......................................................................... 38
CAPITULO IV ...................................................................................................................... 39
METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION ................................................................................... 39
A. TIPO DE INVESTIGACION .............................................................................................. 39
B. POBLACION Y MUESTRA .............................................................................................. 39
C. MATERIALES Y METODOS ............................................................................................ 40
D. TECNICAS E INSTRUMENTOS ................................................................................. 47
 CAPITULO I

PLANTEAMIENTO DE PROBLEMA

A. ENUNCIADO DEL PROBLEMA

En los ltimos aos no solo se han incrementado las infecciones micticas

como las dermatofitosis, sino que tambin aument el nmero de cepas

resistentes a los diferentes antifngicos actuales. Esto ha llevado a la bsqueda

e investigacin de nuevos componentes, resurgiendo el uso de productos

naturales. El objetivo de este trabajo es determinar la actividad antifngica del

producto vegetal (extractos, aceites y/u oleorresinas) obtenidos del: Origanum

vulgare (organo) frente a cepas del gnero Trichophyton sp., Microsporum sp.

Y Epidermophyton sp.

Se determinara la actividad antifngica por el mtodo de microdilucion en disco

en medio slido. Se mediran los dimetros de inhibicin del crecimiento y se

analizaran estadsticamente. Se determinara la presencia de diferencia

significativa entre la concentracin del producto antifngico. El producto que

presenta la mayor actividad del Origanum vulgare (aceite), inhibiendo el 100%

del crecimiento de las cepas en sus concentraciones 100% (v/v). La actividad

mostrada por el producto en su concentracin 100% el aceite de organo un

potencial antifngico para dermatofitos.

 1.1. Pregunta general

1.Cmo realizar la determinacion de la prueba de suceptibilidad antifungico in

vitro del extracto de Origanum vulgare (organo) en dermatofitos (Trichophyton

sp., Microsporum sp. y Epidermophyton sp.), por el mtodo de microdilucion,

Juliaca 2016?

1.2. Preguntas especficas

1. Cmo es la recoleccin del Origanum vulgare (organo)?

2. Cules son las caractersticas organolpticas y fisicoqumicas que

presenta el aceite esencial de Origanum vulgare (organo)?

3. Cules son los principios activos mayoritarios que contienes el aceite esencial

del Origanum vulgare (organo) responsables del posible efecto antifungico?

4. Cul es la actividad antifungica in vitro del aceite esencial del Origanum vulgare

(organo) frente a dermatofitos (Trichophyton sp, Microsporum sp. y

Epidermophyton sp)?

5. Qu dermatofitos son suceptibles por el mtodo de microdilucion del extracto

de Origanum vulgare (organo)?

6. Cul es la concentracin minima inhibitoria (CMI) del aceite esencial de

Origanum vulgare (organo) en cepas de dermatofito (Trichophyton sp.,

Microsporum sp. y Epidermophyton sp)

B. DELIMITACIONES DE LA INVESTIGACION

2.1. Espacio Geogrfico

El presente trabajo de investigacin se realizara en la ciudad juliaca. El

Origanum vulgare (organo) se situa en el centro poblado Jalluhuaya Puno.

La clasificacin taxonmica se realizara en el herbarium UNA (Universidad

Nacional del Altiplano) Puno.

As mismo se trabajara el procedimiento de la extraccin del aceite del oregano

(Origanum vulgare) en el laboratorio de ensayos y control de calidad de la

universidad catlica de santa Mara Arequipa, los anlisis organolptico

fisicoqumico en la UNA y microbiolgico (determinacin de la actividad

antifungica, la concentracin inhibitoria de la cepas de dermatofito

(Trichophyton sp., Microsporum sp. y Epidermophyton sp ) se ejecutara en los

laboratorios del Essalud- juliaca.

1.2. Unidad de investigacin.

Unidad vegetal

Hojas de Origanum vulgare (organo)

 Unidad microbiana

Cepas de dermatofitos (Trichophyton sp., Microsporum sp. y Epidermophyton

sp).

Ubicacin temporal

La investigacin se realizara durante los meses de junio, julio y agosto del

presente ao.

C. JUSTIFICACION DE LA INVESTIGACION

Las dermatofitosis son las micosis superficiales ms frecuentes de amplia

distribucin mundial y su frecuencia est relacionada con el dermatofito causal

(algunas de las especies son ms predominantes que otras), el nivel

socioeconmico de la poblacin y la migracin de los individuos. Estas no slo

afectan a pacientes inmunocomprometidos, sino tambin personas sanas,

incluidos los nios de pases en desarrollo que reciben atencin sanitaria y

educacin deficiente, disminuyendo su calidad de vida.

La prevalencia de las diferentes especies de dermatofitos vara segn la regin

geogrfica y climtica, esto se manifiesta en la frecuencia de las distintas

micosis de la piel. En Per afectan al 10% de la poblacin y constituyen 70 a

80% de las infecciones causadas por hongos. Su incidencia solo se estima en

forma parcial debido a que la mayora de los datos publicados generalmente

proceden de la consulta dermatolgica (Lpez-Martnez et al., 2010).

A pesar de los nuevos antifngicos tpicos y sistmicos, algunos de stos

sufren de varios inconvenientes al ser usados clnicamente; entre ellos,

toxicidad, interacciones frmaco-frmaco, la falta de eficacia fungicida, el costo

y la aparicin de cepas resistentes causadas por el uso frecuente de algunos de

ellos. Pudiera parecer que se tiene un gran nmero de antifngicos de uso

clnico pero slo estn disponibles cinco clases de antifngicos (azoles,

polienos, equinocandinas, alilaminas y griseofulvina), lo cual indica que hay un

nmero limitado de frmacos. Esto muestra claramente la necesidad y urgencia

de encontrar nuevas alternativas de componentes antifngicos de uso clnico

(Weitzman y Summerbell, 1995)

El uso de plantas medicinales en el tratamiento de enfermedades de la piel,

incluyendo infecciones micticas, es una prctica muy antigua en muchas

partes del mundo. Segn los informes de la Organizacin Mundial de la Salud

(OMS), aproximadamente el 80% de la poblacin mundial utiliza productos

naturales con fines medicinales (OMS, 2004). Las especies vegetales sintetizan

metabolitos secundarios, como las fitoanticipinas y las fitoalexinas, que se

utilizan para defenderse de la infeccin por agentes fitopatgenos, entre ellos

los hongos.

Por esta razn y otras ya antes mencionadas es factible el estudio in vitro de

extractos de origen vegetal contra agentes micticos causantes de infecciones

en humanos. Este resurgimiento de la terapia a base de plantas constituye una

va alternativa para evitar los efectos adversos de los compuestos sintticos

tanto en el plano mdico como en el econmico, ya que la ventaja de la

medicina natural nos proporciona una sustancia qumica activa que presenta un

equilibrio fisiolgico ms asimilable por el organismo que aquellos obtenidos por

quimiosntesis.

Se ha comprobado la actividad fungicida de productos vegetales (extractos,

aceites y/u oleorresinas) obtenidos de especies del Origanum vulgare (organo)

El efecto antifngico del organo frente a hongos de importancia mdica,

tambin es conocido con anterioridad; Conner y Beuchat (1984) demostraron

que el aceite esencial del organo en una concentracin de 100 ppm, produca

un fuerte efecto inhibitorio frente a levaduras del gnero Candida.

Ms recientemente, Garca-Rodrguez (2005) report un efecto inhibitorio en

extractos etanlicos de gobernadora frente a Trichophyton mentagrophytes y

Candida albicans, donde formulaciones del 15% eran suficientes para inhibir al

100% el crecimiento de estos hongos. En el presente trabajo se estudi el

efecto de productos naturales obtenidos de plantas en agentes causantes de

micosis superficiales.

D. OBJETIVOS

5.1. Objetivo general

Determinar la prueba de suceptibilidad antifungico in vitro del extracto de

Origanum vulgare (organo) en dermatofitos, por el mtodo de microdilucion,

juliaca 2016.
 5.2. Objetivo especifico

1. Especificar la recoleccin del Origanum vulgare (organo)

2. Identificar las caractersticas organolpticas y fisicoqumicas que presenta el

aceite esencial de Origanum vulgare (organo).

3. Determinar los principios activos mayoritarios que contiene el aceite esencial

del oregano, responsables del posible efecto antifungico.

4. Determinar la actividad antifungica in vitro del aceite esencial del oregano frente

a dermatofito (Trichophyton sp., Microsporum sp. y Epidermophyton sp)

5. Determinar qu dermatofito son suceptibles por el mtodo de microdilucion del

extracto de Origanum vulgare (organo)

6. Determinar la concentracin minima inhibitoria (CMI) del aceite esencial del

oregano en cepas de dermatofito (Trichophyton sp., Microsporum sp. y

Epidermophyton sp)
 CAPITULO II

MARCO TEORICO

A. BASES TEORICAS DE LA INVESTIGACION

1. Origanum vulgare (organo)

1.1. descripcion botanica

Reino:

Divisin: angiospermae

Clase: dicotyledones

Orden: tubiflorae

Familia: labiatae

Gnero: origanum

Caractersticas

El organo pertenece al gnero origanum, familia labiatae, agrupa plantas

herbceas, perennes, matosas, originarias de los pases mediterrneos crece

espontneamente en lugares soleados y aridos hasta 2000 m.s.n.m., es

cultivada como planta aromtica y por sus propiedades teraputicas.

Etimologa

El nombre organo proviene del griego: oros (montaa) y ganos (ornamento).

La decoracin, la belleza de las montaas. Una leyenda griega dice que

Afrodita, diosa del amor, fue la primera en cultivar el organo y le dio a esta

planta la fragancia que actualmente posee.

El trmino Organo tambin comprende muchas subespecies (se utiliza el

diminutivo ssp) de Origanum vulgare, entre ellas la muy comn y ampliamente

difundida Origanum Vulgare ssp vulgare y la mucho menos comn Origanum

vulgare ssp viride. Finalmente, hay una subespecie muy interesante, localizada

mayormente en Grecia y Turqua, denominada Origanum vulgare ssp hirtum. Es

esta subespecie conocida como el verdadero organo griego y tiene muy

elevados contenidos de aceites esenciales. El mismo trmino, Organo, es

tambin usado para designar a un arbusto que se da en mesoamrica que se

est usando en forma creciente como un substituto del organo, pero que es

nombrado como organo Lippia graveolens. No es una especie del genero

Origanum y ni siquiera pertenece a la misma familia. (El organo pertenece a la

familia de las Labiadas, como el tomillo, el romero y la albahaca).

En cuanto a la identidad, no existen estndares establecidos para determinar la

identidad de especies pero si existen descripciones guas suministradas por la

American Spice Trade Association: organo son hojas secas de Origanun

vulgare, Origanun spp o Lippia graveolens. Las hojas son de color ligeramente

verdoso y tienen un fuerte aroma alcanforado al ser presionadas, con sabor

amargo.
 Las caractersticas de calidad son medidas por el aceite voltil, la ceniza total y

ceniza cida insoluble y la humedad.

Descripcin de la planta:

Es una planta herbcea, perenne, de la familia de la labiadas, de 30 a 70 cm

De altura, Se usan las hojas y extremidades floridas desecadas. Tiene olor

aromtico, agradable y sabor algo amargo. Segn estudios soviticos recientes,

en la hierba de organo existen habitualmente sustancias curtientes, cido

ascrbico, flavonoides y aceite esencial, en cuya composicin entran fenoles

aromticos (timol, carvacrol), sesquiterpenos, alcoholes libres y geranilcetato.

Tallos: erectos, pilosos, aromticos.

Hojas: ovales, pecioladas, dentadas o enteras.

Flores: rosadas, vioceas o blancas de hasta 7mm., reunidas en

inflorescencias redondeadas terminales. Estambres sobresalientes.

Componentes activos del oregano

Acidos: rosmarinico (planta y hojas) palmtico, esterico, oleico, ursolico,

cafeico, caprico (planta)

Aceite esencial rico en timol, cineol, carvacrol, borneol, beta-bisolobeno,

limoneno, alfa-pineno, beta pineno, mirceno, canfeno, alfa terpineno (planta).

Minerales: potasio, magnesio, manganeso, zinc, cobre, hierro (planta)

Taninos (planta)

Vitaminas: niacina, betacarotenos

 Usos y propiedades

1. Propiedades digestivas:

Antiespasmdico

Carminativo

2. Enfermedades respiratorias

o Expectorante

o Antiinflamatorio

o Antisptico de las vas

El organo reviste particular importancia como condimento en la cocina

En relacin a los usos en medicina es una hierba estimulante, carminativa,

diafortica, tnico, tranquilizante para el sistema nervioso central. Refuerza las

secreciones de las glndulas gstricas y bronquial, incrementa la perstasis del

intestino por lo cual se lo recomienda para la atona del intestino, en la

disminucin del apetito y como medio descongestionante de los resfros.

Tambin se demostr una fuerte influencia de su infusin en la diuresis. Se la

utiliza como grgara en enfermedades de la garganta y para baos en

enfermedades purulentas de la piel. La infusin se la emplea en resfros y

catarros (expectorante), jaquecas nerviosas e irritabilidad. En pomadas y

compresas alivia los dolores reumticos y la tensin.

En herboristera el organo es recomendado por sus propiedades aperitivas,

estomticas, calmantes, etc. Se est utilizando las propiedades antioxidantes

del organo para prolongar la vida ciertos alimentos y estabilizar sus colores y
pigmentos y reducir la rancidez en los alimentos con elevado contenido en

grasas tales como los embutidos.

Posee destacadas cualidades estabilizantes del color y resulta eficaz con

pigmentos sensibles a la oxidacin.

2. ACEITES ESENCIALES

Generalidades

Los aceites esenciales son concentrados aceitosos que se extraen de las hojas,

flores, semillas, corteza, races o frutos de diversas plantas por medio de varios

procesos como por ejemplo, el de arrastre por vapor, extraccin por solvente, o

extraccin con fluidos supercrticos. Generalmente estos aceites se evaporan al

contacto con el aire, por lo que tambin son conocidos como aceites voltiles.

Los aceites esenciales tienen una enorme cantidad de usos y se obtienen tanto

de plantas cultivadas como de plantas silvestres.

En 1998, la Organizacin de las Naciones Unidas para la Agricultura y la

Alimentacin (FAO, por sus siglas en ingls) estim que existen alrededor de

3,000 aceites esenciales conocidos a nivel mundial, de los cuales

aproximadamente el 10 % tienen importancia comercial. La mayora de los

aceites se usan en cosmticos, masajes, aromaterapia, artesanas o en

productos de limpieza; otros son usados como repelentes de insectos tanto

para el hombre como para el ganado y en medicina, se aplican en el tratamiento

de una amplia diversidad de afecciones.

1.2. CLASIFICACION (composicin quimica)

El aceite esencial presenta terpenos fenlicos, cercanos al timol, y carvacrol, de

propiedades anti-infecciosas y que constituye el elemento comn a todas las

variedades de "organo". Adems para el organo lippia graveolens se reporta

que posee cido carioptosidico, naringenina, pinocembrina, _-felandreno,

carvacrol, 1,8-cineol, r-cimeno, metil timol, timol,etc.

El aceite esencial, producido por tricomas glandulares, secretores, posee una

coloracin amarillo limn. El Origanum vulgare ssp vulgare es pobre en

carvacrol y poco usado en destilacin. Los aceites esenciales denominados de

"organo" son obtenidos de distintas especies segn el pas de origen siendo

variable su composicin en cuanto a los componentes y contenidos.

Se obtiene por extraccin por arrastre con vapor de agua, de las plantas frescas

o desecadas cortadas en el momento de la floracin.

Su aceite esencial es usado como medio de enjuague para las curaciones de

los dientes. Tiene conocidas propiedades antioxidantes, asociadas al timol y al

carvacrol, adems las fungicidas, bactericidas y citotxicas.

Como uso externo, la locin es beneficiosa para las vrices y para la gota, el

reumatismo y las articulaciones rgidas. La esencia tiene propiedades

desinfectantes y cicatrizantes frente rqza infecciones drmicas debido a sus

propiedades antinfecciosas, antibacterianas y antispticas. La esencia de

organo entra dentro de la composicin de diversos perfumes, en la fabricacin

de jabones y cosmticos.

Recientemente se ha comprobado que el aceite esencial de organo frena el

crecimiento de le grmenes que se multiplican con el calor (entre ellos

Escherichia coli, Salmonella y listeria) en forma eficaz.

Un estudio reciente sobre hierbas culinarias y medicinales, identific al organo

como la hierba con la ms alta actividad antioxidante, an ms que la vitamina

E.

Algunos compuestos de los aceites esenciales del organo

a. Terpenoides

Los terpenoides son a menudo llamados isoprenoides teniendo en cuenta que

el isopreno es su precursor biolgico. Presentan una gran variedad estructural,

derivan de la fusin repetitiva de unidades ramificadas de cinco carbonos

basadas en la estructura del isopentenilo, son monmeros considerados como

unidades isoprnicas y se clasifican por el nmero de unidades de cinco

carbonos que contienen en mono, sesqui, di, tri, tetraterpenos

Monoterpenos

Monoterpenos (C-10): Los hay como molculas de cadena abierta y con forma

cclica; se dan por ciclacin de GPP mediante la intervencin de las

monoterpeno sintetasas y en este grupo de productos naturales son frecuentes

las excepciones a la regla de unin cabeza-cola (piretrinas).

o Monoterpenos acclicos: linalol, nerol, geraniol.

o Monoterpenos monocclicos: p-mentano, 1,4- Cineol, 1,8-Cineol, Ascaridol.

o Monoterpenoides bicclicos: carano, cis-carano y trans-carano.

Sesquiterpenos: Farnesol, nerolidol.

Sesquiterpenos (C-15): Es un amplio grupo de terpenoides que presenta ms

de 200 estructuras cclicas diferentes; las ciclacin del FPP ocurre por el mismo

mecanismo que la ciclacin del GPP; los cinco carbonos y el doble enlace

adicional permiten un aumento de la flexibilidad de la cadena y la formacin de

un mayor nmero de estructuras esqueletales; muchos de estos sesquiterpenos

tienen funciones de defensa en plantas y algunas sesquiterpeno sintetasas con

capaces de dar lugar a ms de 25 productos diferentes.

1.3. Extraccin de aceites esenciales

La extraccin de los aceites esenciales de las partes vegetales se realiza de

diversas formas, en funcin de la calidad del aceite por extraer y de la

estabilidad de sus constituyentes; ya que en la mayora de los casos stos

tienden a degradarse cuando se someten a altas temperaturas u otro tipo de

tratamiento extremo.

La extraccin de aceites esenciales se realiza fundamentalmente por el mtodo

de extraccin por arrastre de vapor, en la cual la parte de la planta que contiene

al aceite esencial se pone en contacto directo con vapor. El vapor arrastra el

aceite y luego son condensa. El aceite es recolectado en agua, que en la

mayora de los casos por diferencia de densidades se separan. Si el aceite

tiene una densidad muy parecida a la del agua, se puede utilizar una trampa

con un solvente que sea voltil como por ejemplo el hexano, para luego

separarlos por destilacin.

Otro mtodo usado es el de extraccin con solventes, donde la parte de la

planta que contiene el aceite esencial se pone en contacto con un solvente, que

luego deben ser separados por medio de una destilacin.

Antes del proceso de extraccin la planta o la parte de la planta de inters se

Seca parcialmente y se tritura, esto ayuda a incrementar la superficie de

contacto del solvente y agilizar el proceso de destilacin.

En la actualidad existen diferentes tcnicas para la extraccin de aceites

Esenciales; muchas de ellas son utilizadas principalmente a nivel industrial,

pero tienen el inconveniente de emplear solventes orgnicos muchas veces

costosos y txicos.

Rendimiento de extraccin de aceites esenciales

Rendimiento de extraccin se le conoce a la relacin entre el peso del aceite

esencial obtenido por algn mtodo de extraccin y el peso de la hoja o parte

de la planta que contiene dicho aceite, es decir es un porcentaje en peso.

Muchas veces se confunde con el trmino rendimiento que comnmente se

utiliza en agronoma. Tampoco se debe confundir con una relacin entre el

contenido terico de aceite esencial en las plantas y el aceite esencial obtenido

por extraccin.

METODOLOGA

Localizacin

La parte experimental de esta investigacin se llevara a cabo en la Planta

Piloto de Extraccin-Destilacin de la seccin de la Universidad Catolica Santa

Maria. Los anlisis de laboratorio se llevaron a cabo en el Essalud - Juliaca.

Materia Prima
Se utilizara como materia prima las hojas secas de Origanum vulgare

(organo).

Descripcin del mtodo

Extraccin por arrastre de vapor

Este proceso se realizara para el organo proveniente del centro poblado

Jalluhuaya. Primero se prepararan las hojas secadas, separando las partculas

distintas de las hojas de organo, como tallos o races. Luego, las hojas se

cortaran en pedazos, se colocaran en un extractor con rejillas y se les hira

pasar vapor directo proveniente de una caldera. El vapor de agua conteniendo

el aceite voltil pasara por un condensador, y se depositara en un vaso

florentino conteniendo agua para la mitad de las corridas o bien una trampa de

hexano para la otra mitad de las corridas. De esa forma se obtendra dos

mezclas:

a. Aceite esencial / agua

b. (Aceite esencial + hexano) / agua

Decantacin

Por medio de una decantacin se separ el aceite esencial del agua, y la

solucin hexano-aceite esencial tambin se separ del agua.

Rotaevaporacin

Se utiliz un rotavapor para que, por diferencia de volatilidades, se separara el

aceite del hexano.

Figura 1. Proceso de extraccin de aceite esencial por arrastre de vapor

En la figura anterior se observa el proceso de extraccin y de decantacin. Los

nmeros 1 y 2 corresponden a la caldera, donde se genera el vapor que pasa a

travs de las hojas de organo, las cuales estn contenidas en unas rejillas en

el extractor (nmero 3). Despus el vapor conteniendo el aceite arrastrado, se

condensa en el intercambiador de calor (nmero 4), para depositarse en el vaso

florentino (nmero 5) donde se separarn las fases: aceite/agua o

aceite+hexano/agua, por medio de decantacin. A la mezcla aceite+hexano, se

le hiz otro proceso: rotoevaporacin, donde se separaron las fases por

diferencia de volatilidades.

Caracterizacin fsica

Las propiedades fsicas que se le determinaran al aceite son: densidad, punto

de ebullicin, punto de fusin e ndice de refraccin. Estas se determinaran por

medio de equipo de laboratorio

Caracterizacin qumica

Por medio de un anlisis de cromatografa se determinara la composicin

cualicuantitativa del aceite esencial.

1.4. Aplicaciones y usos de los aceites esenciales

1.4.1. Combatir Infecciones

La capacidad del aceite de organo para combatir infecciones es muy obvia

dado que ha demostrado una muy poderosa efectividad contra la candida

albicans, el hongo Aspergillus, las infecciones vaginales, las infecciones por

estafilococos y ms. Un estudio del mismo Departamento de Agricultura de los

Estados Unidos, incluso inform que el aceite de organo presenta una fuerte

accin contra los grmenes que puede combatir fcilmente la Salmonella y E.

coli.

De manera reveladora, otro importante estudio, esta vez del Departamento de

Fisiologa y Biofsica del Centro Mdico de la Universidad de Georgetown,

tambin verific estos resultados:

1.4.2. Ayuda en la Digestin

El estado general de salud girar en torno a la salud de tu intestino y colon. Sin

una adecuada digestin.

El aceite de organo es conocido por estimular especficamente el flujo de bilis

a los rganos involucrados en la digestin, mejorando, de esta manera, el

proceso digestivo y ayudando a cuidar los sistemas biolgicos que determinan

tu estado general de salud.

1.4.3. Ayuda en la Menstruacin

Los perodos irregulares y dolorosos, junto con los efectos negativos de la

menopausia, se encuentran entre uno de los problemas ms habitualmente

reportados que enfrentan las mujeres hoy en da. Una de las mejores

respuestas es el aceite de organo que, en realidad, puede ayudar en casos de

menstruaciones irregulares, as como a paliar los efectos negativos de la

menopausia.

Para las mujeres se trata de una ventaja sustancial que se aade a la ya larga

lista de usos y efectos positivos del aceite de organo.

1.4.4. Lucha Contra el Envejecimiento

El aceite de organo puede ayudar a relentizar el proceso de deterioro celular y,

como resultado, puede afectar a la velocidad a la que se producen los efectos

negativos del envejecimiento.

La gran cantidad de antioxidantes que se encuentran en el aceite de organo

tambin pueden ayudar a protegernos de los problemas relacionados con la

edad como las enfermedades oculares, la degeneracin muscular y los

numerosos desrdenes del sistema nervioso.

1.4.5. Ayuda en Caso de Alergias

El aceite de organo puede producir un efecto sedante en casos de

hipersensibilidad alrgica que, en ltima instancia, conlleva un verdadero alivio

para las personas con problemas de alergias.

En lugar de medicamentos agresivos, con largas listas de efectos secundarios,

el aceite de organo puede ofrecer una alternativa natural importante para

reducir los efectos drsticos de las reacciones alrgicas.

1.4.6. Prdida de Peso

El aceite de organo tambin ataca la grasa corporal no deseada. Como ha

demostrado un estudio reciente, centrado en las capacidades para quemar

grasa del aceite de organo, el ingrediente activo de dicho aceite, conocido

como carvacrol, puede en realidad modular los genes y reducir la irritacin en el

tejido adiposo blanco.

Cuando se alimentaron ratones con una dieta de engorde sin carvacrol, se

volvieron obesos rpidamente. Contrariamente, los ratones que recibieron una

mnima cantidad de carvacrol, un 0,1 por ciento, ganaron significativamente

menos peso e incluso mostraron niveles ms bajos de colesterol y triglicridos

en la sangre.
1.4.7. Alivia el Malestar

Condiciones dolorosas como la artritis, dolores de espalda o el sndrome del

tnel carpiano pueden causar estragos en tu vida diaria. Sin la respuesta

adecuada, estos dolores se pueden volver incluso ms frecuentes y, adems,

peligrosos. El aceite de organo se puede utilizar por va tpica para que

penetre ms profundamente en la piel y ayude a aliviar el malestar que proviene

de muchas de estas situaciones.

Basta con preparar una mezcla del 50/50 de aceite de organo orgnico y

aceite de oliva orgnico y aplicarla por va tpica en la zona afectada para el

alivio. Los que sufren de dolores musculares, lesiones deportivas y dolores de

espalda tambin puede aprovechar estos beneficios.

1.4.8. Combatir los Resfriados

El aceite de organo puede aadir una proteccin extra a tu sistema inmunitario

si se usa apropiadamente. Si sientes que te ests resfriando pon 3-6 gotas de

aceite en una cpsula vaca y tmatelas 2-3 veces al da antes de las comidas.

Sigue este rgimen durante 5-10 das.

Adems, puedes ayudar a prevenir un resfriado completamente tomando la

dosis recomendada de aceite de organo orgnico: 1 cpsula llena de 3-6

gotas. Recuerda siempre que la calidad del aceite de organo que compres es
importante. El organo orgnico es muy diferente que el aceite de organo

tradicional que puedes encontrar en tu supermercado o farmacia local.

El organo orgnico es una excelente adicin a cualquier botiqun de primeros

auxilios, kit de belleza (diluido con agua) y como ingrediente de bienestar

general.

3. DESCRIPCION DE LAS CEPAS A UTILIZAR

Hongos dermatofitos

Generalidades

La etimologa del termino dermatofito proviene de los trminos griegos derm

(que significa piel) y Phyte (que significa planta). Sin embargo, debido a que los

dermatofitos no estn filogenticamente relacionados con las plantas (como se

crea antiguamente), este trmino puede considerarse como no adecuado en la

actualidad.

Los dermatofitos son hongos patognicos humanos y animales que causan

infecciones cutneas. Estos hongos crecen exclusivamente en el estrato

corneo, uas o pelo y producen enzimas hidroliticas que degradan tejidos

compactos queratinizados. Como muchos hongos los dermatofitos secretan

sustancias con actividad proteoltica conteniendo protenas como nica fuente

de carbono y nitrgeno. Las infecciones producidas por estos hongos se

denominan dermatofitos.
Los dermatofitos son un grupo de hongos filamentosos taxonmicamente

relacionados que tienen la capacidad de producir infecciones en la piel, el pelo y

las uas tanto del ser humano como de los animales.

Los dermatofitos son hongos queratinolticos; es decir, tienen la capacidad de

digerir y utilizar la queratina como sustrato. Las infecciones producidas por

estos hongos se denominan dermatofitosis, aunque comnmente tambin son

llamadas tias, trmino que procede del latn tinea y que significa gusano o

polilla. Esta palabra se usa de forma descriptiva dado el aspecto de serpentina

o anular que presentan las lesiones cutneas con una apariencia de gusano

enterrado en la piel (Fernndez-Torres, 2005). A pesar de que las lesiones se

presentan superficialmente en la mayora de los casos, eventualmente se

pueden dar en tejidos subcutneos no queratinizados, lo que da lugar a los

llamados granulomas o pseudomicetomas. De acuerdo con su hbitat natural,

los dermatofitos pueden dividirse en tres grupos ecolgicos:

geoflicos: comprenden especies que se encuentran en el suelo actuando

como saprobios y que se nutren de la queratina all existente (pelos, escamas y

plumas) y pueden infectar tanto el ser humano como los animales.

zooflicos: comprenden especies que infectan los animales y stos, a su vez,

pueden infectar el ser humano

antropoflicos: comprenden aquellas especies que infectan solamente el ser

humano y que son transmisibles por contacto directo o indirecto (Spiewak et al.,

1998, citado por Fernndez-Torres, 2005).

Tabla 5. Clasificacin de los dermatofitos segn su nicho ecolgico (tomado y

modificado de Fernndez-Torres, 2005).

Antropoflicos Zooflicos Geoflicos

Epidermophyton Microsporum canis Microsporum gypseum

floccosum

Microsporum audouinii Microsporum gallinae Microsporum nanum

Trichophyton rubrum T. mentagrophytes Trichophyton terrestre

Trichophyton schoenleinii

Trichophyton tonsurans

Trichophyton interdigitale

Las caractersticas morfolgicas macroscpicas y microscpicas son criterios

muy aceptados para identificar taxonmicamente una especie, en conjunto con

las tcnicas de biologa molecular. En el caso de los hongos dermatofitos,

existen caracteres tpicos para cada uno, los cuales se resumen en la siguiente

tabla.

Tabla 2. Caractersticas macroscpicas y microscpicas de algunos

dermatofitos (fotos: Daniel Ospina)

Las micosis causadas por dermatofitos a nivel superficial, reciben nombres

clnicos en latn segn se presenten en determinada parte del cuerpo, como por

ejemplo: tinea capitis (cabeza), tinea barbae (barba), tinea cruris (en ingle),

tinea manuum (en manos), tinea unguium (en uas, tambin llamada
onicomicosis), tinea peds (en pies) y tinea corporis (en el resto del cuerpo

incluyendo cara).

A nivel de salud pblica, conocer la epidemiologa de las dermatofitosis es muy

importante para poder controlar estas infecciones. Entre los factores

predisponentes, podemos destacar la ocupacin profesional y determinados

hbitos y costumbres de los individuos. Las caractersticas epidemiolgicas

para cada tipo de dermatofitosis son diferentes.

Tinea capitis afecta principalmente a nios entre tres y siete aos. Se

desconoce la cifra exacta de su incidencia as como los factores que

predisponen al husped a contraer esta infeccin (Williams et al. 1995, citado

por Fernndez-Torres 2005).

Puede ocasionar brotes epidmicos tanto en reas urbanas como en colegios,

mientras que en otros tipos de dermatofitosis, los brotes epidmicos son muy

raros. Tinea corporis afecta tanto a nios como adultos; sin embargo,

prevalece en personas que viven en climas hmedos y clidos. Los factores

que predisponen a contraerla incluyen: el contacto con animales de compaa

(gatos o perros), ganado vacuno o caballos, condiciones de vida insalubres, uso

de gimnasios, determinadas ocupaciones (agricultores y jardineros) e individuos

con diabetes mellitus o infectados con VIH (Weeks et al. 2003, citado por

Fernndez-Torres 2005).

Tinea unguium afecta a un 15-20% de individuos entre cuarenta y sesenta

aos alcanzando una incidencia de hasta el 48% entre la poblacin mayor de

setenta aos (Roseeuw et al. 1999). En nios, esta afeccin es menos

frecuente con un rango de prevalencia mundial entre 0-2.6% (Gupta 1997,

citado por Fernndez-Torres 2005).

Antimictios empleados para el control de hongos dermatofitos

Dentro de la gama de medicamentos comercializados para el manejo y control

de las dermatofitosis, se encuentran productos de uso tpico y oral, clasificados

en familias qumicas (tomado y modificado de Fernndez-Torres, 2005).

Azoles

Caractersticas: Los azoles constituyen un grupo de compuestos sintticos

formados por anillos heteropentacclicos con tomos de nitrgeno unidos, a su

vez, mediante tomos de hidrgeno a otros anillos aromticos. Los azoles

pueden ser imidazoles o triazoles, segn tengan dos o tres atmos de nitrgeno

en su anillo respectivamente.

Mecanismo de accin: Los azoles inhiben la actividad de la enzima 14-a-

desmetilasa bloqueando la desmetilacin de lanosterol a ergosterol,

componente principal de la membrana celular de los hongos. Como

consecuencia de ello, se altera la membrana celular y se acumulan compuestos

no desmetilados que inhiben el crecimiento fngico.

Ejemplos: clotrimazol, ketoconazol, fluconazol, voriconazol, ravuconazol.

Alilaminas

Caractersticas: Son compuestos altamente lipoflicos que alcanzan

concentraciones teraputicas en tejido adiposo, uas y piel, por lo que estn

indicados principalmente en el tratamiento de las dermatomicosis (Elewski

1998, citado por Fernndez-Torres, 2005). Son compuestos con baja toxicidad.

Mecanismo de accin: El mecanismo de accin de las alilaminas consiste en

la inhibicin de la actividad de la enzima escualeno-epoxidasa, impidiendo la

sntesis del lanosterol (actividad fungisttica). Por tanto, la va enzimtica es

bloqueada en un paso anterior al inhibido por los azoles. Como resultado de

ello, el escualeno acumulado en la clula fngica provoca la muerte celular

(actividad fungicida).

Ejemplos: terbinafina, naftifina.

Derivados de morfolina

Caractersticas. Estos compuestos tienen actividad fungisttica y fungicida.

Mecanismo de accin. Actan bloqueando la produccin del ergosterol e

inhibiendo la enzima 14-alfa-reductasa y la 7-delta-8-isomerasa.

Ejemplos: amorolfina

Otros

Griseofulvina

La griseofulvina fue el primer antifngico oral utilizado en el tratamiento de las

dermatofitosis. Es un antibitico natural producido por varias especies de

Penicillium, especialmente P. griseofulvum. Su espectro est restringido a

dermatofitos y carece de actividad frente a otros hongos patgenos. Su accin

es fungisttica al interrumpir la metafase de la divisin celular. Se administra por

va oral en forma de comprimidos.

 Ciclopirox olamina

Pertenece a la familia de las hidroxipiridonas. Ciclopirox olamina es un

antifngico sinttico dotado de un buen poder de penetracin en la dermis.

Acta inhibiendo la absorcin de iones de potasio, fosfatos y aminocidos. Est

indicada en el tratamiento de las dermatofitosis de piel y uas, pitiriasis

versicolor y candidiasis vaginal (Gupta et al. 2004, citado por Fernndez-Torres,

2005). Se comercializa como crema, solucin, gel y laca de uas al 8%.

B. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACION

1. A NIVEL NACIONAL

Autor: Marav Inga, Gisella Giovanna. (2012), realizo la investigacin titulada:

Efecto antibacteriano y antifngico del aceite esencial de: menta piperita

(menta), origanum vulgare (organo) y cymbopogon citratus (hierba luisa) sobre

streptococcus mutans atcc 25175, lactobacillus acidophilus atcc 10746 y

cndida albicans atcc 90028, donde el objetivo de la presente investigacin

fue determinar el efecto antibacteriano y antifngico in vitro del aceite esencial

de: Menta piperita (Menta), Origanum vulgare (Organo) y Cymbopogon citratus

(Hierba Luisa) mediante el mtodo de difusin en agar con disco, sobre

Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus acidophilus ATCC 10746 y

Cndida albicans ATCC 90028. Los aceites esenciales de dichas plantas se

obtuvieron por el mtodo de arrastre por vapor de agua. Para realizar el anlisis

microbiolgico, se utiliz el aceite esencial de Menta al 50 y 100%, Organo al

 50 y 100% y Hierba Luisa al 50% y 90%, asimismo, para obtener

concentraciones al 50% y 90%, stas se diluyeron en agua destilada y DMSO

(dimetilsulfxido). Estos aceites esenciales, fueron comparados con Nistatina

como control positivo (para los hongos) y Gluconato de Clorhexidina al 0.12%

(para las bacterias) y como controles negativos se utiliz: H2O destilada y

DMSO. Al realizar las pruebas de sensibilidad in vitro se obtuvieron los

siguientes resultados: De los tres aceites esenciales, al el que tuvo mayor

efecto sobre Streptococcus mutans fue el Organo, frente a Lactobacillus

acidophilus y Candida albicans fue la Hierba Luisa. El aceite esencial de

Organo y Hierba Luisa tienen mayor efectividad antibacteriana y antifngica

que los controles positivos: Clorhexidina al 0.12% y Nistatina, a excepcin de la

Menta piperita (Menta) al 50% que su accin fue menor que los controles

positivos.

2. A NIVEL INTERNACIONAL

Autor: Lupe Maritsa Chamba Pascal, (2015), realizo la investigacin titulada

Efecto antifngico del aceite esencial del origanum vulgare (organo) y

cymbopogon citratus (hierba luisa), sobre cepas de cndida albicans en

comparacin con la nistatina estudio invitro, En bsqueda de tratamientos

alternativos a base de plantas medicinales contra infecciones micticas

provocadas por Cndida albicans en cavidad oral, estudio que propone como

objetivo principal evaluar la actividad antifngica de los aceites esenciales de

Organo y Hierba Luisa sobre cepas de C. albicans tomando como

medicamento control a la nistatina y as establecer su capacidad inhibitoria

procedimiento: los aceites esenciales se obtuvo mediante tcnica de arrastre a

vapor de agua en diferentes consentraciones. Se llev a cabo la activacin de la

cepa micolgica y la preparacin del inculo con una turbidez de 0,5 en la

escala Mc Farland, la siembra se realiz en 19 cajas Petri con el medio de

cultivo Dextrosa Sabouraund a una temperatura de 37C para luego proceder a

la colocacin de discos estriles impregnados de las diferentes concentraciones

de aceites esenciales (25%.50%,75%,100%) nistatina control positivo y tween

80 control negativo. Se incubo el material durante 72 horas para la posterior

medicin de los halos de inhibicin mediante una regla pie de rey. Concluyendo

que existieron discrepancias significativas por grupo de estudio segn la prueba

de Kruswal.
 CAPITULO III

HIPOTESIS Y VARIABLES

A. HIPOTESIS GENERAL Y ESPECFICAS

1.1. Hiptesis General

Determinar la prueba de suceptibilidad antifungico in vitro del extracto de

Origanum vulgare (organo) en dermatofitos, por el mtodo de microdilucion,

juliaca 2016.

1.2. Hiptesis especifica

1. El Origanum vulgare (organo) se recolectara del centro poblado

jalluhuaya se hara secar y se seleccionara la hojas para conservarlas

en papel craft.

2. El aceite esencial de Origanum vulgare (organo) presentara

caractersticas organolpticas y fisicoqumicas.

3. En la determinacin de los principios activos mayoritarios que

contiene el aceitte esencial del oregano, se obtendr el responsables

del posible efecto antifungico.

4. El aceite esencial de oregano tendra actividad antifungica frente a

dermatofitos (Trichophyton sp., Microsporum sp. y Epidermophyton

sp)
5. El aceite esencial de origanum vulvare (oregano) demostrara la

suceptibilidad de los dermatofitos (Trichophyton sp., Microsporum sp.

y Epidermophyton sp) por el mtodo de microdilucion.

6. Determinar la concentracin minima inhibitoria (CMI) del aceite

esencial del oregano en cepas de dermatofito (Trichophyton sp.,

Microsporum sp. y Epidermophyton sp)

 B. OPERACIONALIZACION DE VARIABLES

Variables Dimensiones Indicadores Instrumentos

1.1 Recoleccin 1.1.1 lugar Centro poblado jalluhuaya
VARIABLE 1.1.2 secado Temperatura ambiente.
INDEPENDIENTE 1.1.3 seleccin Hojas jvenes
1. Aceite esencial de 1.1.4 conservacin Papel craft
Origanum vulgare
(Organo) 1.2 caracterstica 12.1 aspecto Lquido, translucido
s organolpticas 1.2.2 color
1.2.3 olor
1.2.4 sabor
1.3 caracteristica 1.3.1 fisicas Solubilidad
s fisicoqumicas Densidad
1.3.2 quimicas Ph
1.4 principios
activos 1.4.1 cualitativa Metabolitos secundarios
1.4.2 cuantitativas Metabolitos secundarios por
%

1.5 dilucion 1.5.1

concentracin

VARIABLE 2.1 mtodos Halo de inhibicin

DEPENDIENTE modificados en para dermatofito
2. actividad pozos de agar (Trichophyton sp.,
antifungica frente Microsporum sp. y
a dermatofito Epidermophyton sp)
(Trichophyton
sp., Microsporum 2.2 mtodo de
Crecimiento fngico
sp. y dilucin en caldo
de la cepa
Epidermophyton (CMI)
sp)
 CAPITULO IV

METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION

A. TIPO DE INVESTIGACION

La investigacin ser de tipo experimental descriptivo y transversal.

A. POBLACION Y MUESTRA

1. POBLACION

Microorganismos:

Dermatofitos (Trichophyton sp., Microsporum sp. y Epidermophyton sp)

2. MUESTRA

La muestra de este estudio ser no probabilstica por que no corresponden a un

criterio aleatorio de seleccin.

B. CRITERIOS DE INCLUSION Y EXCLUSION

Criterio de inclusin

De la planta

Se utilizara las hojas de Origanum vulgare (organo) Libre de agentes que

pueden alterar la muestra.

Criterios de exclusin

De la planta

No se incluir partes areas de la plata que estuvieran daadas y/o

malogradas, marchitas u hojas secas.

 C. MATERIALES Y METODOS

1. MATERIALES

1.1. Muestra botnica

Se utilizara hojas de origanum vulgare (oregano)

1.2. Muestra biolgica

Aceites esencial de origanum vulgare (oregano)

1.3. Material microbiano

Los microorganismos evaluados sern dermatofitos (Trichophyton sp,

Microsporum sp. y Epidermophyton sp)

1.4. Material de laboratorio

Insumos de bioseguridad

o Mascarilla

o Gorro

o Guantes quirrgicos

o Guardapolvo

Equipos

o Autoclave

o Estufa

o Balanza analtica

o Incubadora

o Cabina de sembrado
 o Equipo de destilacin

o Mechero bunsen

o Micropipeta

Material de vidrio

o Tubos de ensayo

o Tubos de ensayo con tapa

o Probeta

o Pipetas

o Matraz

o Fiola

o Vaso de precipitado

o Placa Petri

o Picnmetro

o Pera de decantacin

o Bagueta

Medios y reactivos

o Agar Sabouraud

Otros materiales

o Asa de kholle

o Gradillas

o Puntillas desechables estriles

o Pizetas
 o Pinzas

o Papel kraft

o Algodn

o Pabilo

o Gasa esteril

1.5. Materiales de escritorio

o Papel bond A4

o Lapicero

o Lpiz

o Cmara fotogrfica

o Computadora

o Reglas milimetradas

o Marcadores

o Calculadora

o Cuadernillo

2. METODOS

2.1. OBTENCION DE LA MUESTRA

Los productos vegetales se obtendrn en su forma concentrada y extrados por

metodologas diversas.
Los principios activos de las especies vegetales se encuentran en los aceites

esenciales, por lo tanto para identificarlos procedemos a seleccionar una

tcnica adecuada de extraccin y la materia prima que se utilizar.

Se Utilizara organo fresco entero, organo fresco molido, hojas de organo

fresco, hojas de organo fresco molido, organo seco molido. Se utiliz un

equipo de arrastre de vapor a presin reducida, para obtener las primeras

muestras que posteriormente debieron ser elaboradas mediante un rotavapor

para eliminar lo mximo posible el agua que aun contiene el aceite de su

primera fase de extraccin. El rotavapor se controla de manera que la

temperatura no sobrepase los 40C y se trabaja en estas condiciones durante

15 minutos. En estas condiciones se observ que tomando 150 gramos de

muestra se obtienen entre 0,3-0,5 ml de aceite esencial. En el caso del organo

seco molido se procesaron 250 gramos para obtener 0,8 ml de aceite esencial.

Tambin se utiliz la tcnica de extraccin con solvente. Para ello se utiliz el

metanol (50% v/v) y etanol (50% V/V) En este caso se utilizaron 250 gramos de

organo seco molido en un litro de solvente y se dej macerar durante 3 das

bajo refrigeracin (20C). El tiempo de maceracin se determin utilizando

espectroscopia UV-VIS.

Productos vegetales.

Se les realizaron diluciones 1:2 (v/v) a partir del concentrado con dimetilsufxido

(DMSO) al 100%, debido a que los productos slo mostraron ser solubles en
esta concentracin de DMSO. Las concentraciones finales para los ensayos

sern de: 100, 50, 25, 12.5 y 6.25 % (v/v), respectivamente.

2.2. EXTRACCION DEL ACEITE ESENCIAL

METODO: extraccin por arrastre de vapor de agua.

2.3. RENDIMIENTO DE CAEITE ESENCIAL DE ORIGANUM VULGARE

(OREGANO)

Se determinara por el mtodo de gravometria volumtrico mediante el mtodo

de arrastre con vapor de agua.

Aplicando la siguiente formula

%RAE= Vol. AE (ml) x 100

P muestra (g)

2.4. ANLISIS ORGANOLECTICO DE ACEITE ESENCIAL DE ORIGANUM

VULGARE (OREGANO)

Esta ser sometido a pruebas basadas en la percepcin sensorial

Aspecto

Color

Olor

Sabor

2.5. ANLISIS FSICOQUIMICO DEL ACEITES ESENCIAL DE ORIGANUM

VULGARE (OREGANO)
Se determinara la.

Solubilidad

Densidad

Ph

2.6. DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DEL ACEITE ESENCIAL DEL

ORIGANUM VULGARE (OREGANO)

METODO: modificado de pozos en agar

PROCEDIMIENTO

Recoleccin de la cepas

Se trabajara con las cepas: Trichophyton, Microsporum y Epidermophyton, que

fueron aisladas e identificadas en el laboratorio central del Hospital Nacional

Carlos Alberto Seguin Escobedo. Arequipa.

Las cepas proporcionadas en viales se reactivaron en medio Agar Sabouraud

dejndose incubar a una temperatura de 30C por 14 das. Una vez reactivadas

y puras se tomaron de 2 a 4 placas crecidas para hacer una suspensin de

conidias, se rasp la superficie de la colonia con un aplicador y se suspendi en

agua estril, se pas a un tubo estril y se dej reposar, se tom el

sobrenadante y se pas a un tubo nuevo.

Preparacin del inoculo

Control positivo
 Preparacin del medio para las pruebas sensibilidad

Inoculacin de placas

Aplicacin de aceite esencial a diferentes concentraciones

Incubacin

lectura

Evaluacin de actividad inhibitoria

El mtodo usado fue difusin en disco en agar (Nweze et al., 2010) con

modificaciones mnimas. El cul consisti en humedecer un hisopo estril en el

inculo ajustado, se estri en cuatro direcciones la superficie de toda la placa

con medio sabuoraud (en lugar de agar Mueller-Hinton), se dej entreabierta en

condiciones estriles por 5 min para permitir que el medio absorbiera el

excedente del inculo. En cada placa se colocaron cinco discos de papel filtro

de 7 mm de dimetro, a cada disco se le agregaron 15 L de las 5

concentraciones de cada producto, respectivamente, en orden decreciente. Se

dejaron reposar y se incubaron a 30C por 7 das. Como control positivo se

utiliz terbinafina a 1 g/mL, concentracin que permite observar el efecto

antifngico sin que el dimetro de inhibicin se empalme con el resto; como

control negativo se utiliz DMSO al 100%. Se us el mismo mtodo de

inoculacin con hisopo utilizando el mismo inoculo usado para los productos

vegetales. Las placas de los controles y de los productos se hicieron el mismo

da y todo se realiz por duplicado. Se compar la actividad antifngica de los

 productos vegetales con los controles, midiendo el dimetro de inhibicin y

sometiendo los valores al anlisis estadstico.

D. TECNICAS E INSTRUMENTOS

INSTRUMENTOS DE MEDICION

Fichas de recoleccin de datos y fichas de reportes de resultados.

Organizacin, Recursos y Financiamiento

3.5.1 ORGANIZACIN

Investigadores : SUCASAIRE QUISPE, ARACELY YESENIA

GEMIO SANCHO, JULIA YANET

 3.5.2. FUENTES DE FINANCIAMIENTO

Autofinanciamiento

3.6. Cronograma

N
ACTIVIDADES

AGO
MAY
ABR

NOV
OCT
JUN

SET
JUL
1 Revisin bibliografica

2 Formulacin de
proyecto
3 Presentacin del
proyecto
4 Aprobacin de proyecto

5 Trabajo de campo

6 Formulacin del
borrador de tesis
7 Aprobacin del borrador
de tesis
8 Sustentacin de tesis
 3.5.3 Recursos materiales y servicios

RECURSOS MATERIALES Precio Total S/

unitario
Nro. Cantidad Tipo Descripcin
S/
01 1 Millar Papel bond A4 75 gr. 22.00 22.00
02 1 Unidad Cartucho 58.00 58.00
03 6 Unidades Lapiceros 0.70 4.20
04 1 Unidad Corrector 3.00 3.00
05 1 Unidad Resaltador 3.00 3.00
06 1 Unidad Archivador 5.50 5.50
07 1 Unidad USB 8GB 29.0 29.0
08 6 Unidades Files 0.70 4.20
SERVICIOS 70.90
01 30 Horas Asesora 30 600.00
02 100 Unidades Fotocopias 0.10 10.00
03 30 Horas Internet 0.80 24.00
04 100 Unidades Impresin 0.20 20.00
05 3 Unidades Anillado 3.00 9.00
06 4 Unidades Empastado 8.00 32.00
07 20 Horas Movilidad 13.00 360.00
08 30 Unidades Refrigerio 7.00 210.00
09 3 Unidad Refrig. para jurados 25.00 75.00
10 1 Unidad Derechos de grado 1000.00 1000.00
3,310.90
IMPREVISTOS ( 20 % DEL TOTAL) 662.18
TOTAL 3,973.08
 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Referencias Bibliograficas

Aligiannis N., Kalputzakis B., Mitaku S., Chinou I. B. (2001) Composition and
antimicrobial activity of the essential oils of two origanum species. J. Agric.
Food Chem. 49 (9); August 2001, pp. 41684170.

ArcilaLozano C.C., LoarcaPia G., LeconaUribe S., Gonzlez E., (2004). El

organo: propiedades, composicin y actividad biolgica de sus componentes.
Archivos Latinoamericanos de Nutricin 54 (1); March 2004, pp. 100111.

Prez, M.E., (2010). Actividad antifngica in vitro de extractos de plantas del

sureste de Coahuila en diferentes solventes contra Rhizoctonia solani Kuhn.
Tesis de nivel Licenciatura. Divisin de Agronoma, Departamento
Parasitologa. Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro, Buenavista,
Saltillo, Coahuila, Mxico. p. 74.

Clemente, J.A., (2010). Actividad antifungica in vitro de extractos vegetales del

Semidesierto de Coahuila obtenidos en solventesorgnicos contra Phytophthora
cinnamomi Rands. Tesis de nivel Licenciatura. Divisin de Agronoma,
Departamento Parasitologa. Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro,
Buenavista, Saltillo, Coahuila, Mexico. p. 62.

Conner D.E., Beuchat L.R. (2006). Effects of essential oils from plants on
growth of food spoilage yeasts. J Food Sci. 49 (2); 2006, pp. 429-424.

Dayan, F.E., Tellez, M.R. (1999) Phytotoxicity of tarbush (Flourensia cernua

D.C.) leaf extracts. Allelopathy Journal. 6; 1999, pp. 1-12.
Vargas-Arispuro I., Reyes-Bez R., Rivera-Castaeda G., Martnez-Tellez M.A.,
Rivero-Espejel I. (2005). Antifungal lignans from the creosote Bush (Larrea
tridentata). Ind Crop Prod. 22: pp.101-107.

Moreno-Limn S., Gonzlez-Sols L.N., Salcedo-Martnez S.M., Crdenas-Avila

M.L., Perales-Ramrez A. (2011). Efecto antifngico de extractos de
gobernadora (Larrea tridentata l.) sobre la inhibicin in vitro de Aspergillus
flavus y Penicillium sp. Polibotnica. 32; August 2011, pp. 193-205.

Martins S., Amorim E.L.C., Tadeu J.S., Sobrinho P., et al. (2013). Antibacterial
activity of crude methanolic extract and fractions obtained from Larrea tridentata
leaves. Ind Crop Prod. 41; January 2013, pp. 306-311.

Verstegui M.A. (1995). Anlisis del efecto antifngico de 20 extractos de

plantas. Tesis de nivel Maestra con especialidad en Microbiologa. Universidad
Autnoma de Nuevo Len, Mxico. p. 43.

Garca-Rodrguez R. (2005). Extraccin etanlica de la gobernadora (Larrea

tridentata) y su accin biolgica en los dermatofitos (Trichophyton
mentagrophytes y Candida albicans). Premios de investigacin 2007, Secretara
de Salud Pblica, Gobierno del Estado de Sonora.

Nweze E.I., Mukherjee P.K., Ghannoum. (2010). Agar-Based Disk Diffusion

Assay for Susceptibility Testing of Dermatophytes. J Clin Microbiol. 48 (10);
July 2010, pp. 3750-3752.

Garca-Camarillo, E. A., Quezada-Viay, Y., Moreno-Lara, J., Snchez-

Hernndez, G., Moreno-Martnez, E. y Prez-Reyes, M. C. J. (2006) Actividad
Antifngica de Aceites Esenciales de Canela (Cinnamomum zeylanicum Blume)
y Organo (Origanum vulgare L.) y su Efecto sobre la Produccin de Aflatoxinas
en Nuez Pecanera [Carya illinoensis (F.A. Wangenh) K. Koch. Revista
Mexicana de Fitopatologa. 24 (1); January-June 2006, pp. 8-12,

Rasooli I., Razzaghi M. (2004). Inhibitory effects of Thyme oils on growth and
aflatoxin production by Aspergillus parasiticus. Food Control 15 (1); September
2004, pp. 479483. Ao 2, No. 9 Julio-Agosto 2014

Dunford N.T., Silva-Vazquez R. (2005). Effect of water stress on plant growth

and thymol and carvacrol concentrations in Mexican oregano grown under
controlled conditions. J Appl Hort. 7 (1); 2005, pp. 2022.

Ahmad N., Alam M.K., Shehbaz A., Khan A., Mannan A., Rashid H.S., Bisht D.,
Owais M. (2005). Antimicrobial activity of clove oil and its potential in the
treatment of vaginal candidiasis. J Drug Target. 13 (10); December 2005, pp.
55556.

Guerrero E., Solis S., Hernndez F.D., Flores A., Sandoval V., Jasso D. (2007).
Actividad biolgica in vitro de extractos de Flourensia cernua D.C. en
patgenos de postcosecha: Alternaria alternata (Fr.:Fr.), Keissl., Colletotrichum
gloeosporioides (Penz.) Penz. y Sacc. y Penicillium digitatum. Revista Mexicana
de Fitopatologa. 25(1); January-June 2007, pp. 48-53.

Pinto E., Vale S.L., Cavaleiro C. y Salgueiro L. (2009). Antifungal activity of the
clove essential oil from Syzygium aromaticum on Candida, Aspergillus and
dermatophyte species. J Med Microbiol. 58 (Pt 11); November 2009, pp. 1454-
1462.
Soto-Domnguez A., Garca-Garza R., Ramrez-Casas Y., Morn-Martnez J. y
Serrano-Gallardo L.B. (2012). El extracto acuoso de organo (Lippia
graveolens HBK) del norte de Mxico tiene actividad antioxidante sin mostrar un
efecto txico in vitro e in vivo. Int. J. Morphol. 30(3); September 2012, pp. 937-
944.

Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). (2010). Reference method

for antifungal disk diffusion susceptibility testing of non dermatophyte
filamentous fungi; approved guideline. CLSI document M51-A. USA: Clinical
Laboratory Standards Institute