EVALUACION DE MICROORGANISMOS DE UN ESTABLECIMIENTO PBLICO

1. INTRODUCCION
La palabra microorganismo proviene del griego, formada por mikro que significa
pequeo, ms la raz organon que quiere decir rgano, herramienta o instrumento, y el
sufijo ismo que significa actividad o sistema. Se entiende por microorganismo a todos
aquellos organismos, formas de vida o seres vivos unicelulares, en su mayora, aunque
en algunos casos se trate de organismos centicos compuestos por clulas multinucleadas,
o incluso multicelulares, muy pequeos, que solo pueden ser divisados por medio de un
microscopio; La ciencia que estudia estos fenmenos microscpicos es la microbiologa.
Entre estos microorganismos estn las bacterias, los virus, los mohos y las levaduras.
2. OBJETIVOS
Determinar el grado de contaminacin del agar nutriente al estar expuesto al
medio ambiente

3. MARCO TEORICO
LOS MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGA
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de
10.000 medios de cultivo diferentes. El agar es un elemento solidificante muy empleado
para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del
agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene
efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante, pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuacin.

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS.

DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de
contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas.
En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otra sustancia inductora del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer
de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan
lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de
infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura.
CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente
a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros
tienen la capacidad de licuarla.
PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas
 parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera
de las citadas condiciones.
pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de
los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un
pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe
olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus
procesos metablicos normales.
ESTERILIDAD DEL MEDIO
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave
(que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)
Estos microorganismos, tambin llamados microbios, vale acotar; pueden causar el dao
o deterioro de muchos alimentos, y as causar enfermedades al ser consumidos debido a
su contaminacin, estos son los microorganismos patgenos, los cuales, si no se les
combate a tiempo la persona, animal o planta infectada puede padecer enfermedades que
pueden generar complicaciones, poniendo as en riesgo su vida o tambin contagiar a las
personas que tengan contacto con los mismos. Aunque pueden encontrarse algunos
microorganismos patgenos que no producen tal deterioro en los alimentos, y por
consiguiente es importante agregar que existen algunos microorganismos que suelen ser
de provecho y beneficio, hasta ser utilizados en el procesamiento de los alimentos con el
fin de extender su durabilidad o de cambiar las propiedades de estos; un comn caso de
esto es la fermentacin que se realiza para la elaboracin de los quesos o el yogur. Y
finalmente podemos decir que los microbios poseen diferentes tamaos y formas.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS GENERALES. Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los
dems.
MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades
que un determinado tipo de microorganismos posee.

LA EVOLUCIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el
momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los primeros
microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la
utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexin en su
evolucin.
MEDIOS DE CULTIVOS COMUNES
Agar nutritivo: El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente
como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy til porque permanece solido
incluso a relativas altas temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este
agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias
 pequeas. En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece
como una sustancia espesa, con colonias difcilmente observables.
Agar MacConkey: Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la
recuperacin de entero bacterias y bacilos Gram negativos entricos
relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de
bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la
nica fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias
fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los
fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitacin de las sales
biliares por la gran cantidad de cidos formados, lo que se observa fcilmente en
el medio por la aparicin de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias
que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes.
Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est
recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los
microorganismos de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la
invasin de los cultivos por Proteus. La presencia de lactosa en su composicin
le confiere el carcter de medio diferencial, aunque la interpretacin sea diferente
al anterior medio por la incorporacin de otro indicador: el azul de bromo timol.
Las colonias lactosa positivas aparecern de color amarillo y las lactosas
negativas lo harn con un color verdoso, blanco o azulado.

4. MATERIALES
Placa Petri
Agar nutriente
Balanza analtica
Mecheros
Papel Graf
Pabilo
Alcohol
Hipoclorito
Papel toalla
Auto clave
Campana extractora
Agua destilada
Plumn tinto indeleble
Papel aluminio
Matraz
Probeta

5. PROCEDIMIENTO
Primero procedimos a limpiar y descontaminar las placas Petri con hipoclorito y
la mesa con alcohol y papel toalla
Despus de desinfectar los materiales procedimos a pesar el agar nutriente segn
los clculos realizados para cada placa
Despus medimos 270 ml de agua destilada, para luego vertirla en un matraz
junto con el agar nutriente y homogenizarla por un tiempo hasta que quede
completamente disuelta, luego procedimos a cubrir las placas con papel Graf y a
amarrarlos con pabilo.
 Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estril dentro de
ellas y en un ambiente asptico (por ejemplo, en la proximidad de la llama de un
mechero Bunsen).
Luego de que el agar este disuelta por completo, procedimos a poner todo en la
campana extractora, las placas y el agar nutriente durante 30 minutos en el auto
clave.
Despus de pasado los 30 minutos vertimos el contenido del agar nutriente sobre
las placas, estando el agar a una temperatura de 37C para luego ponerlo a
gelidificar por (24 horas) hasta que el contenido se vuela gelatinoso.
Despus de que haya pasado las 24 horas se ve que la placa esta gelatinizada,
despus procedimos a destapar la placa Petri en un lugar donde hay bastante
contaminacin ambiental ya sea en lugar pblico o en un establecimiento donde
haya contaminacin.
Se deja la placa expuesta por 30 minutos al aire libre, luego se deja la placa en la
estufa durante 48 horas para ver si la placa obtuvo carga microbiana o no.
Despus de que haya transcurrido ese tiempo se puede ver la carga bacteriana
que tiene la placa.

6. OSERVACIONES
Es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operacin para evitar que el
agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas.
Al distribuir el agar en las placas se debe hacer con mucho cuidado
En esta ocasin se puedo ver que la carga microbiana no era mucha, ya que el
establecimiento no presentaba mucha contaminacin, y en la placa se pudo verificar la
cantidad de contaminacin que tena en este caso (una clnica veterinaria).

7. CALCULOS
AGAR NUTRIENTE:
18 placas x 15 ml = 270 ml de agua destilada
28 gr 1000 ml de AD
X 270 ml de AD
X = 7.56 gr de agar nutriente

8. CONCLUSIONES
En conclusin, se pudo ver que diferentes placas tenan diferente carga bacteriana, otros
tenan mucha carga como otros casi nada.
Eso se debe a que el grado de contaminacin de distintos lugares y establecimientos
donde fue llevada la placa Petri vara segn el dnde estn.

9. RESULTADOS

En la placa se puede ver

que no hay mucha
carga bacteriana
 10. RECOMENDACIONES
Para que la practica salga bien se tiene que esterilizar todos los materiales a utilizar, de lo
contrario la prctica no saldr bien.
Es recomendable que al exponer la placa sea en un lugar donde haya comida ya sea en un
restaurante o en un establecimiento donde haya presencia de alimentos.
Para que a si tenga una mayor carga bacteriana al estar expuesto.

11. BIBLIOGRAFIA
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-
laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf.

12. ANEXOS

Agar nutriente en la placas