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GESTION LABORATORIOS
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VALIDACIN DE METODOS
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X X
2
S donde i 1 hasta n
i
n 1
ERRORES ALEATORIOS: Este tipo de errores hacen que los resultados individuales difieran significativamente uno del otro, afectando la
reproducibilidad y la repetibilidad de la tcnica analtica.
ERROR SISTEMTICO O SESGO: Es aquel que se produce de igual modo en todas las mediciones que se realizan de una magnitud.
Puede estar originado en un defecto del instrumento, en una particularidad del operador o del proceso de medicin, etc. Los errores
sistemticos desvan los resultados en un mismo sentido.
MATRIZ: Medio en el cual se buscan los analitos o compuestos de inters, ejemplo agua, pasto, concentrado y otros.
VALIDACIN: Confirmacin que se da por la recopilacin y anlisis de la evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos particulares
para el uso especfico propuesto.
VALIDACIN DE UN PROCEDIMIENTO ANALITICO: Procedimiento para establecer por medio de estudios laboratoriales una base de
datos que demuestren cientficamente que un mtodo analtico tiene las caractersticas de desempeo que son adecuadas para cumplir
los requerimientos de las aplicaciones analticas pretendidas.
Implica la demostracin de la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error sistemtico y al azar de un procedimiento, no solo
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CONDICIONES GENERALES:
Validar los mtodos analticos es demostrar experimentalmente que los procedimientos de anlisis realizados emiten resultados
precisos y exactos.
El grado de dificultad de la validacin vara con el tipo de mtodo de ensayo, ya que cada uno tiene objetivos distintos, como se
muestra en la tabla 1.
Para realizar la validacin de los mtodos analticos se determinan nicamente aquellos atributos que sean necesarios para
demostrar la confiabilidad del mtodo, de acuerdo a las normas nacionales e internacionales.
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No existe un procedimiento especfico para llevar a cabo una validacin. Dependiendo de los alcances requeridos de la misma, se
incluirn o no y analizarn a diferentes grados de profundidad los parmetros caractersticos, teniendo en cuenta el tiempo y los
costos.
La validacin debe repetirse con regularidad (para garantizar que las condiciones se mantienen o han mejorado) O por lo menos cada vez
que se cambie alguna variable del mtodo (por ejemplo, equipo o analista).
DESARROLLO:
1. ETAPAS PARA LA VALIDACIN
Planear:
Seleccin del mtodo:
Analito
Matriz (agua superficial, residual)
Equipo disponible
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Intervalo de aplicacin
Interferencias
Protocolo del mtodo: Tener y conocer el mtodo estandarizado, adaptarlo (si aplica) y disponer de una copia de trabajo.
Conocimiento del fundamento fsico y qumico del mtodo y de la tcnica a la cual pertenece ste. Se debe elaborar un
resumen conciso
Definicin del intervalo de aplicacin del mtodo
Alistamiento de reactivos e insumos
Alistamiento de equipos
Documentacin: Crear una carpeta para toda la documentacin generada en el proceso. La carpeta debe estar disponible para su
consulta permanente, diseo de un formato para la captura de los datos, solo si los formatos existentes no se adaptan a los
requerimientos especficos de la metodologa.
Crear plan de validacin
Especificacin de los requisitos a cumplir: Objetivos y alcance
Determinar parmetros caractersticos del mtodo
Hacer:
Ejecutar la actividad analtica.
Recolectar datos observaciones
Verificar:
Comparacin de los resultados con los parmetros caractersticos del mtodo.
Usar datos para el objetivo propuesto.
Anlisis estadstico de los resultados
Actuar:
Confirmacin de la validez
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Exactitud.
Lmite de deteccin del mtodo.
Lmite de cuantificacin del mtodo.
Linealidad en el rango de trabajo
Porcentaje de recuperacin.
Precisin: Repetibilidad y Reproducibilidad
Robustez.
Sensibilidad
Exactitud. Proximidad entre el resultado de una medicin y el valor verdadero del mesurando.
Una cantidad que se refiere a las diferencias entre la media de una serie de resultados o de un resultado individual que se acepta como
verdadero o correcto para la cantidad que se mide
X Valor terico
%Error x100
Valor terico
Lmite de deteccin del mtodo (LOD). La ms pequea cantidad detectable por encima del ruido de un procedimiento y dentro de un
lmite declarado de aceptacin.
El lmite de deteccin del mtodo como la concentracin del analito que proporciona una seal igual a la seal del blanco, y B , ms tres
veces la desviacin estndar del blanco, s B :
LOD y B 3s B
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Los valores por encima del LOD pueden ser atribuidos a la presencia del analito y los valores por debajo del LOD son indicativos de la
ausencia de analito en cantidades detectable.
Lmite de cuantificacin del mtodo (LOQ). Cantidad mas pequea del analito que se determina cuantitativamente y cuya precisin y
exactitud estn establecidas previamente.
LOC y b 10sb
Linealidad en el rango de trabajo. La linealidad es la capacidad del mtodo analtico para producir resultados directamente
proporcionales a la concentracin o cantidad de analito en un rango de aceptacin definido.
Para estimar la bondad con que se ajustan los puntos experimentales a una recta, se calcula el coeficiente de correlacin momento-punto,
r. El valor de r viene dado por
r n2
t
1 r2
El valor de t calculado se compara con el valor tabulado al nivel de significacin deseado, utilizando un contraste t de dos colas y ( n 2)
grados de libertad. La hiptesis nula en este caso es que no existe correlacin entre x e y . Si el valor calculado de t es mayor que el
valor tabulado, se concluye que existe una correlacin significativa.
Se busca una recta que minimice las desviaciones entre los puntos experimentales y los calculados por la lnea. Ya que estas
desviaciones sern positivas y negativas (conocidas como los residuos en y ), se intenta minimizar la suma de los cuadrados de los
residuos, debido a que estos cuadrados sern todos positivos. La recta de regresin se calcula basndose en este principio: como
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resultado se encuentra que la lnea debe pasar por el centro de gravedad de estos puntos x, y .
La recta de los mnimos cuadrados viene dada por:
Los errores aleatorios en los valores de la pendiente y ordenada en el origen, se calculan de la siguiente manera:
(y i y i ) 2
sy/ x i
n2
n ( x x ) i
2
i
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Los limites de confianza de la pendiente viene dados por b t ( n 2 ) sb , similarmente para la ordenada en el origen a t ( n 2 ) s a , donde el valor
de t se obtiene para un nivel de confianza del 95% y ( n 2) grados de libertad.
La seal del instrumento derivada del material de ensayo tambin est sujeta a errores aleatorios. Como resultado, la determinacin del
error global en la concentracin correspondiente se puede calcular con la siguiente frmula:
sy/ x 1 1 ( y y) 2
s xo 2 0
b m n b ( xi x ) 2
i
En esta ecuacin el valor de y 0 es el valor experimental de y a partir de la cual se determina el valor de xo, sxo es la desviacin estndar
estimada de x 0 , m es el numero de lecturas.
Los limites de confianza de la pendiente viene dados por x0 t ( n 2) s xo , con ( n 2) grados de libertad.
Porcentaje de recuperacin. Es la capacidad que tiene un mtodo analtico para determinar cuantitativamente la cantidad conocida de
analito adicionada a la matriz. Este porcentaje puede dar ideas de las interferencias que posee una matriz determinada.
C x C M
%R *100
CA
Donde: Cx = Concentracin promedio de las determinaciones.
Cm =concentracin de la muestra.
C A =Concentracin Real Adicionada.
Precisin. Grado de aproximacin entre resultados de prueba independientes obtenidos bajo condiciones estipuladas.
Una medicin de la reproducibilidad de las mediciones en una serie de datos, esto es, de la dispersin de la serie con respecto a su valor
central.
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S
%CV x100
X
Asociado a Error aleatorio: Se puede mejorar, causas no atribuibles
Mtodo
Analista
Laboratorio
El limite de (r). El valor diferencia absoluta entre dos resultados de ensayo, en condiciones de repetibilidad dentro del 95% de
probabilidad.
El lmite de (R). El valor diferencia absoluta entre dos resultados de ensayo, en condiciones de reproducibilidad dentro del 95% de
probabilidad.
Robustez. Se define como el grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos para las mismas muestras bajo variaciones o
modificaciones del mtodo.
La robustez de un procedimiento analtico es una medida de su capacidad para permanecer sin ser afectado por variaciones pequeas,
pero deliberadas en los parmetros del mtodo y suministra una indicacin de su confiabilidad durante el uso normal.
Todos estos estudios se realizan cuando se hagan cambios en el mtodo para mejorar su eficiencia, evaluar costos o cuando se
presenten variaciones en las condiciones ambientales.
Sensibilidad. Medida del factor de respuesta del instrumento como una funcin de la concentracin
Como valor se puede reportar el promedio para las curvas obtenidas en los ensayos de estandarizacin y en la medicin de muestras,
indicando su desviacin estndar.
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Se debe verificar si en el laboratorio se cumple el rango y tipo de linealidad que reporta la literatura del mtodo.
3. INFORME DE VALIDACIN.
El analista encargado de la validacin presenta un informe que contenga los siguientes tem en el caso que aplique:
El analista encargado de la validacin registrara los datos primarios en el formato Protocolo de validacin
Resultados y conclusiones. Se indica la aceptacin o no de la validacin del mtodo y los ajustes que sea necesarios.
Bibliografa.
Nota: el informe debe tener la fecha de realizacin y la firma de analista encargado de la validacin.