Manejo de Aparatos

1. Botn de inicio
2.Indicador del tiempo en la pantalla.
3.Velocidad de trabajo (rpm).
4.Botn de apertura de tapa.
5.Botn de frenado.
6.Pantalla para el rotor, curva de desaceleracin y programas.
7.Perillas rotatorias de ajuste.

Instrucciones de operacin.
1. Asegurar que el equipo se encuentre ubicado en un lugar firme y se
encuentre debidamente conectado.
2. Verter la muestra que se desea centrifugar en un tubo de ensayo teniendo
cuidado de no rebasar 2/3 partes del volumen total del tubo. El tamao del
tubo de ensayo depender del tamao de la camisa de la centrifuga; es decir,
el tubo de ensayo debe entrar y salir de la camisa con facilidad.
3. Con la ayuda de una balanza de dos platos, equilibrar el peso de dos tubos
de ensaye; el primero de los tubos contendr la muestra y el segundo
contendr nicamente agua de la llave. A partir de este momento ambos
tubos debern ser manipulados con guantes para evitar al mximo la
diferencia de pesos.
4. Una vez que se tienen los tubos con el mismo peso, el equipo colocado
sobre una superficie firme y ste se encuentra debidamente conectado a la
corriente elctrica; se oprime el interruptor principal en posicin de
encendido.
5. Oprimir el botn de apertura de tapa.
6. Introducir ambos tubos a la centrifuga. LOS TUBOS DEBEN SER
INSTALADOS SIMETRICAMENTE UNO ENFRENTE DEL OTRO (figura 5A).

Fig. 5A

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Bioqumica Celular y de los Tejidos I

7. Cerrar la centrfuga.
8. Ajustar el tiempo y la velocidad deseada con las perillas de ajuste.
9. Una vez que se ajustaron los parmetros deseados; se da inicio al proceso
de centrifugado oprimiendo el botn de inicio.
10. El equipo trabajara inmediatamente y de manera automtica mostrando
el progreso del proceso en la pantalla. No es necesario oprimir el botn
frenado para interrumpir el proceso.
Nota. Si los tubos no son equilibrados o son colocados de manera incorrecta;
se rompern durante el proceso y se desajustar el equipo. En este caso ser
necesario oprimir el botn de frenado para interrumpir el proceso
inmediatamente.

Los principales cuidados que se deben considerar al usar este equipo son:
1. Los pesos de los tubos deben equilibrarse antes de encenderla, porque de
lo contrario se corre el riesgo de que se rompan los tubos de vidrio.
2. Los tubos no deben llenarse totalmente para evitar que se derrame el
lquido.
3. La centrfuga debe cerrarse perfectamente antes de encenderla.
4. Al terminar de centrifugar, se debe esperar a que se detenga totalmente
antes de levantar la tapa y retirar los tubos, de lo contrario, se corre el riesgo
de romper el tacmetro o desbalancear la centrfuga.

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 Manejo de Aparatos

Espectrofotmetro
En bioqumica, en determinaciones cualitativas y principalmente en
cuantitativas se ha utilizado la propiedad de las sustancias de absorber o
transmitir algn tipo de luz que se hace incidir en ellas.
Johann Lambert matemtico, fsico, astrnomo y filsofo alemn observ
que exista una relacin entre el rayo incidente y el transmitido a travs de
placas coloreadas de espesor diferentes, anunciando la ley en la que seala
que existe una relacin logartmica entre la intensidad del rayo transmitido y
el espesor de la placa.
Beer aplic la ley de Lambert a soluciones coloreadas, enunciando la
siguiente ley: La absorbancia de los cuerpos coloreados en solucin es
directamente proporcional a la concentracin, adems de serlo a su espesor,
dando como resultado la siguiente expresin:
A = (E) (e) (c)
donde:
A = absorbancia.
E = coeficiente de extincin.
c = concentracin.
e = espesor de la placa.
Por lo tanto al incidir un rayo de luz a travs de una cubeta de vidrio, un
disolvente y la sustancia disuelta, se tendrn que tomar en cuenta las
absorbancias de la cubeta y el disolvente, pero puede eliminarse esto si se
utiliza la misma cubeta y el mismo disolvente, adems de comparar las
absorbancias del problema con el de un patrn.

Los componentes de un espectrofotmetro son:

-Fuente de luz. Proporciona energa radiante en forma de luz visible o no
visible. Por ejemplo: lmparas de filamento de tungsteno (para longitudes de
onda del espectro visible y el ultravioleta prximo), lmparas de Hidrgeno y
Deuterio (para regin ultravioleta entre 220-360 nm)y lmparas de carburo
de silicio y xido de zirconio para radiaciones IR (Infrarrojo).
-Rendija de entrada. Reduce la luz difusa y evita que la luz dispersa entre en
el sistema de seleccin de longitud de onda.

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Bioqumica Celular y de los Tejidos I

-Monocromador (Selector de radiaciones). Difractan el haz de luz. Por

ejemplo: prismas que permiten el paso de luz (vidrio para el espectro visible y
cuarzo para el espectro UV), redes de difraccin (son un gran nmero de
lneas paralelas situadas a distancias iguales entre s y son hendiduras sobre
un vidrio o una superficie metlica).
-Rendija de salida. Tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese la
cubeta de la muestra, que provocara desviaciones a la Ley de Beer.
-Cubeta. Es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin.
Pueden ser de distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares,
redondas). Suelen estar fabricadas en vidrio, cuarzo o en plstico.
-Detector. Puede ser de dos tipos: fotoclulas o clulas fotovoltaicas
fototubos multiplicadores.
--Medidor. Sistemas de lectura de la energa elctrica que recoge el detector
y que puede ser lectura directa (se utiliza una clula fotovoltaica) o puede ser
amplificadores de seal como en el caso del fototubo multiplicador.

Fig. 6.1 Esquema simplificado de la trayectoria ptica de un

espectrofotmetro.

El espectro de absorcin en el ultravioleta y el infrarrojo tienen un inters

extraordinario para la determinacin de la estructura de cuerpos orgnicos.

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 Manejo de Aparatos

Instrucciones y Operacin de espectrofotmetro ThermoSpectronic 20D:

1. Encienda el aparato girando la perilla de control de encendido/apagado 15
minutos antes de utilizarlo.
2. Seleccione la longitud de onda a la cual se van a determinar las
absorbancias, la cual aparecer en la pantalla.
3. Ajuste la aguja en cero de la escala de transmitancia por medio de la perilla
de control de encendido/apagado; cuidando de no apagar el equipo.
Asegrese que el equipo se encuentre en modo transmitancia.
4. Levante la tapa del compartimiento para la muestra y coloque la celda
(seca) que contenga nicamente el blanco, que incluye todos los reactivos
menos la sustancia problema).
5. Tape el compartimento donde coloc el blanco y ajuste a 100 la
transmitancia con la perilla de control de 100% de transmitancia o cero de
absorbancia.
6. Retire del portamuestras la celda que contiene el blanco e
inmediatamente coloque la celda que contiene la muestra que desea leer.
7. Cierre la tapa y oprima el botn de modo para elegir el modo absorbancia .
8. Registre el valor de absorbancia de su muestra.

Fig. 6.2 Espectrofotmetro ThermoSpectronic 20D

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Bioqumica Celular y de los Tejidos I

Instrucciones y Operacin de espectrofotmetro ThermoScientificGenesys

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El espectrofotmetro ThermoScientificGenesys 20 es un instrumento fcil

de usar que ejecuta mediciones de absorbancia, %transmitancia y
concentracin dentro del rango de longitud de onda de 325 a 1100
nanmetros. Sus componentes son:

1. Interruptor de
Encendido/Apagado.

2. Pantalla digital.

3. Tapa del compartimiento

de muestras.

4. Teclado.

5. Impresora interna
opcional.

6. Puerta del
compartimiento de la
lmpara.

Fig. 7.1. Esquema simplificado de los componentes de un espectrofotmetro

ThermoScientificGenesys 20.

Usando el espectrmetro ThermoScientificGenesys 20, usted puede

ejecutar mediciones de absorbancia y transmitancia, y determinar
concentraciones usando un estndar conocido o un factor de conversin. Sin
importar que tipo de medicin desee ejecutar, usted sigue pasos similares:
1. Seleccione el modo (A, %T, C) y la longitud de onda
2.Mida el blanco

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 Manejo de Aparatos

3. Introduzca el valor del estndar o el factor (modo concentracin

nicamente)
4.Mida las muestras
Usted puede cambiar tambin los valores prefijados para el instrumento y la
impresora accediendo la funcin de utilidades SETUP.

Instrucciones de operacin para realizar mediciones de absorbancias y % de

transmitancias:
1. Oprima A/T/C para seleccionar el modo absorbancia o %transmitancia. El
modo elegido aparece en pantalla.
2. Oprima nm para seleccionar la longitud de onda. Nota: Mantener apretada
la tecla har que la longitud de onda cambie ms rpido.
3. Inserte su blanco en el portaceldas y cierre la puerta del compartimiento
de muestras. Nota: Ubique la celda de forma que la luz (indicada por la flecha
en la figura 7A) pase a travs de las paredes claras.

Fig.7A. Posicin correcta de la celda.

4. Oprima 0 ABS/100%T para llevar el blanco a 0A o 100%T.
5. Remueva el blanco e inserte la muestra en el portaceldas. La medicin de
la muestra aparece en pantalla (figura 7B).

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Bioqumica Celular y de los Tejidos I

Fig.7B. Retiro de celda.

Los principales cuidados y precauciones a considerar al usar el

espectrofotmetro son las siguientes:
1. El espectrofotmetro se debe encender unos 15 minutos antes de
utilizarlo, para evitar fluctuacin en las lecturas.
2. La celda se coloca en el espectrofotmetro haciendo coincidir la marca con
la del aparato y sin llenar ms de 2/3 partes de su capacidad total.
3. No debe tocarse con los dedos la parte inferior de las celdas y stas deben
limpiarse con un pauelo tipo kleenex, antes de realizar la lectura.
4. Debe revisarse peridicamente el funcionamiento adecuado del
espectrofotmetro con la prueba de calibracin con el rojo de cresol.

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 Manejo de Aparatos

Cuestionario
1. Defina los trminos de masa y peso.

2. Qu es y cmo se utilizan los trminos de precisin y exactitud?

3. Mencione 3 experimentos en los que para realizarlos se utilice

principalmente el potencimetro.

4. Explique la ley de Lambert y Beer.

5. Si usted tiene que centrifugar a 3000 g y cuenta con una centrifuga

cuyo rotor tiene un dimetro de 20 cm, cuntas rpm tiene que aplicar?

Referencias
1. Aguilar-Santelises L, Corona-Ortega MT, Garca-del Valle A, Rangel-Corona
R, Cruz-Milln M. Antologa para los laboratorios de Bioqumica Celular y
de los Tejidos I y Laboratorio Integral de Biologa I. 2a ed. Mxico: FES
Zaragoza, UNAM; 2007.
2. Crouch D, Holler F, Skoog D. Principios de anlisis instrumental. 6a
ed.Mxico: CengageLearning Editores S.A.; 2008.
3. Daz A, Brcena A, Reyes F. Espectrofometra: Espectros de absorcin y
cuantificacin colorimtrica de biomolculas. [on line] Disponible en:
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf
4. Olsen E. Mtodos pticos de anlisis. Barcelona: Editorial Revert, S.A.;
1990.

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