Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
DE MXICO
Gua de uso. Para revisar el texto basta con dar un clic en el contenido, sobre el tema de inters. Para
regresar al contenido dar un clic sobre el ttulo o subttulo de la informacin que se est revisando.
1
CONTENIDO
Pgina
Introduccin 7
Generalidades de bacterias 9
Morfologa y estructura 9
Nutricin 10
Quimiohetertrofos 12
Auttrofos 12
Fotoauttrofos 12
Fotohetertrofos 12
Reproduccin 13
Transformacin 14
Conjugacin 14
Transduccin 15
Identificacin bacteriana 16
Medios de cultivo 16
Medios bsicos 18
Medios enriquecidos 19
Medios selectivos, diferenciales y
de enriquecimiento 20
Medios especiales 22
Clasificacin por consistencia 23
Slidos
Semislidos
Lquidos
Clasificacin por composicin 23
Sintticos
No sintticos
2
Tcnicas de inoculacin 24
En placa 26
Estra cruzada
Estra en Z
Estra simple
Siembra masiva
Vaciado en placa
En tubo: medio semislido 27
Siembra en medios lquidos 28
En tubo: medios slidos 29
Morfologa colonial 31
3
Metabolismo 125
Produccin de energa 128
Va de degradacin de las hexosas
Gluclisis 130
Entner-Duodoroff 134
Pentosa fosfato 135
Ciclo de Krebs 139
Fermentacin 142
Lctica 143
Heterolctica 144
Alcohlica 144
Propinica 146
cido mixta (frmica) 147
De metano 148
Butilenglucoltica (acetonica) 148
Respiracin anaerbica con aceptores 149
inorgnicos de hidrgeno
Fijacin de nitrgeno 149
Reduccin de sulfatos 151
Referencias 165
Direcciones electrnicas 168
4
NDICE DE FIGURAS
No. Figura Referencia Pg.
1 Morfologa bacteriana Enciclopedia Encarta, 2002 9
2 Formas de nutricin de bacterias Enciclopedia Encarta, 2002 11
3 Reproduccin bacteriana Enciclopedia Encarta, 2002 13
4 Reproduccin bacteriana: Transformacin Enciclopedia Encarta, 2002 14
5 Reproduccin bacteriana: Conjugacin Enciclopedia Encarta, 2002 15
6 Superficie de placas de agar EMB que ilustra el brillo verde Koneman, 1992 16
producido por miembros de las Enterobacterias que fermentan
vidamente lactosa: Escherichia coli.
7 Placa de agar soya - tripticasa, inoculado con una bacteria que Koneman, 1992 18
produce un pigmento amarillo. La produccin de pigmento es una
importante caracterstica diferencial para identificar bacilos
Gram negativos no fermentadores.
8 Superficie de placas de agar EMB que ilustra cultivo mixto de Koneman, 1992 19
Escherichia coli y Shigella sp.
9 Morfologa colonial en agar sangre. Enciclopedia Encarta, 2002 20
10 Superficie de placas de agra EMB que ilustra el brillo verde Koneman, 1992 21
producido por Escherichia coli.
11 Agar BCYE Koneman,1992 31
12 Streptococcus sp. Museun of History Natural 37
13 Pruebas bioqumicas: Fermentacin de carbohidratos 38
14 Pruebas bioqumicas: Citrato 45
15 Pruebas bioqumicas: Licuefaccin de gelatina 50
16 Micrococcus sp Sullivan, 2002 51
17 Pruebas bioqumicas: Leche con tornasol 57
18 Pruebas bioqumicas: Leche con azul de metileno 61
19 Salmonella sp. Enciclopedia Encarta, 2002 62
20 Pruebas bioqumicas: Oxidacin/fermentacin 66
21 Interpretacin O/F 67
22 Pruebas bioqumicas: Urea 71
23 Salnonella typhi Enciclopedia Encarta, 2002 72
24 Pruebas bioqumicas: Voges - Proskauer 76
25 Escherichia coli Prskznki, 2002 77
26 Pruebas bioqumicas: Rojo de metilo 80
27 Escherichia coli, observese pili 81
28 Pruebas bioqumicas: Reduccin de nitratos 85
29 Pruebas bioqumicas: Fenilalanina desaminasa 91
30 Salmonella typhi University of east Anglia 96
Norwich, 2002
31 Pruebas bioqumicas: SIM 99
32 Salmonella typhi 101
33 Escherichia coli Pfeizer, 2002 101
34 Pruebas bioqumicas: TSI 107
35 Salmonella sp. 107
36 Fundamento: TSI Koneman, 2002 110
37 Pruebas bioqumicas: LIA 114
38 Pruebas bioqumicas: MIO 121
39 Shigella Museum of History Natural, 124
2002
40 Produccin de quesos Black, 1996 144
41 Produccin de vino Black, 1996 145
5
ndice de Tablas
ndice de Esquemas
1 Gluclisis 133
2 Va de Hexosa monofosfato 138
3 Ciclo de Krebs 141
4 Coprocultivo 155
5 Aislamiento de bacterias patgenas de heces 156
6 Aislamiento de Staphylococcus 158
7 Urocultivo 162
8 Exudado faringeo 164
6
Introduccin
7
tema, donde se podr tambin observar diferentes imgenes
de algunas especies bacterianas. En las ilustraciones a color de
los resultados de cada prueba tambin se incluyen medios no
inoculados para una mejor y mayor comparacin para los
lectores.
8
Figura 1. Morfologa bacteriana
1. Morfologa y estructura.
9
!"La membrana plasmtica presenta
invaginaciones, que son los mesosomas, donde
se encuentran enzimas que intervienen en la
sntesis de ATP, y los pigmentos
fotosintticos en el caso de bacterias
fotosintticas. En el citoplasma se encuentran
inclusiones de diversa naturaleza qumica.
2. Nutricin
10
Segn la fuente de carbono que utilizan, los seres vivos se
dividen en auttrofos, cuya principal fuente de carbono es el
CO2, y hetertrofos cuando su fuente de carbono es materia
orgnica.
11
Atendiendo a las anteriores categoras, entre las bacterias
podemos encontrar las siguientes formas, como puede
apreciarse en el esquema:
12
3. Reproduccin
13
!"TRANSFORMACION:
Consiste en el
intercambio gentico
producido cuando una
bacteria es capaz de
captar fragmentos de
ADN, de otra bacteria
que se encuentran
dispersos en el medio
donde vive.
14
Figura 5. Reproduccin bacteriana: Conjugacin
!"
TRANSDUCCIN: En este caso la transferencia
de ADN de una bacteria a otra, se realiza a
travs de un virus bacterifago, que se
comporta como un vector intermediario entre las
dos bacterias. (Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2002. 1993-2001 Microsoft Corporation.)
15
En la naturaleza los microorganismos se encuentran
formando poblaciones mixtas de una gran variedad de tipos
diferentes. Sin embargo, el desarrollo de la microbiologa se
ha conseguido mediante el estudio de especies aisladas,
crecidas en medios desprovistos de cualquier otra forma de
vida contaminante.
1. Medios bsicos
2. Medios enriquecidos
3. Medios selectivos, diferenciales y de
enriquecimiento
4. Medios especiales
17
1. Medios bsicos
La solidificacin se consigue
agregando agar, gelatina, albmina
de suero o de huevo, a los otros
ingredientes.
18
Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio slido que
no se desintegra por los medios fsicos usados en el cultivo
de la mayora de los microorganismos.
2. Medios enriquecidos
19
Ejemplos: 7. Medios inclinados con
1. Agar proteosa suero
2. Agar sangre 8. Agar de Bordet Gengou
3. Agar chocolate 9. Medio de Levinthal
4. Caldo de suero 10.Agar de Mueller-Hinton
5. Agar con suero 11.Agar infusin de
6. Suero de Loeffler con cerebro corazn
sangre 12.Agar sangre
20
Los medios de enriquecimiento son por lo general medios
lquidos enriquecidos, que contienen algunas sustancias
inhibidoras, con lo que se crea un ambiente especialmente
favorable para lmites ms bien estrechos de bacterias.
Ejemplos:
1. Medio de Thayer lactosa, desoxicolato)
Martin 11. Agar sangre con azida
2. Agar con feniletanol 12. Agar con sal y manitol
3. Agar con sangre y bilis 13. Agar de Mc Conkey
al 40% 14. Agar Salmonella -
4. Agar con esculina y bilis Shigella
5. Agar con sangre y 15. Agar con eosina y azul
telurito de metileno (EMB)
6. Medio de Tinsdale 16. Agar de bilis y rojo de
modificado violeta
7. Agar con Lowenstein 17. Agar dextrosa y
Jensen en tubos tripticaseina
inclinados 18. Agar entrico Hektoen
8. Agar con citrato y 19. Agar S-110
desoxicolato 20. Agar tergitol 7
9. Agar de sulfito de 21. Agar verde brillante
bismuto 22. Agar Vogel Jhonson
10.Caldo selenito de sodio 23. Agar Baird-Parker
11. Agar XLD ( xilosa,
21
4. Medios especiales
Ejemplos:
Pruebas bioqumicas
1. Fermentacin de carbohidratos
2. Prueba de citrato
3. Prueba de leche con tornasol
4. Reduccin de leche con azul de metileno
5. Prueba de oxidacin y fermentacin: Hugh-Leifson
(O/F)
6. Prueba de ureasa
7. Prueba de Voges Proskauer
8. Prueba con rojo de metilo
9. Reduccin de nitratos
10. Prueba de fenilalanina
11. Prueba de Sulfuro, indol, movilidad: SIM
12. Agar hierro y triple azcar: TSI
13. Descarboxilacin de la arginina y lisina: LIA
14. Descarboxilacin de la ornitina: MIO
22
Otras clasificaciones de los medios de cultivo son las
siguientes:
De acuerdo a la consistencia
De acuerdo a la composicin
1. Medios sintticos
2. Medio no sinttico
23
El desarrollo o cosecha de microorganismos obtenido en
algn medio se designa como un cultivo. Cuando las
bacterias de un cultivo son todas de la misma especie, se
dice que son cultivos puros; cundo dos o ms especies de
bacterias s desarrollan en un medio como un cultivo mixto.
Si un cultivo contiene accidentalmente ms de una especie
de bacterias se habla de un cultivo contaminado.
24
En el procedimiento de inoculacin el asa de cultivo o aguja
de siembra, debe calentarse al rojo sobre la llama
inmediatamente antes y despus de hacer la transferencia.
La flama destruye cualquier forma de vida sobre la
superficie de la aguja o del asa. Se mantiene la aguja hacia
abajo sobre la flama, para calentar la totalidad de la aguja y
la parte inferior del mango.
25
La inoculacin primaria puede hacerse con un asa, hisopo u
otros dispositivos adecuados.
a) Estra
1 Cruzada
2 En Z
3 Simple (en ngulos rectos)
4 Masiva
b) Vaciado en placa
26
Una tcnica muy comn en medicina consiste en obtener
especies de microorganismos en un aplicador de algodn
(hisopo). Si se utiliza el aplicador infectado para sembrar
directamente en caja petri se obtiene una mezcla compleja
de organismos sin ninguna colonia aislada, lo cual no reporta
ningn beneficio. Para resolver esto existe una tcnica que
permite aislar una colonia pura de un algodn infectado, para
lo cual; debe trazar con el hisopo unas lneas, inoculando una
pequea zona en el borde de una placa. Cubra la caja y queme
el aplicador en el mechero. Esterilice el asa y psela en el
sector inoculado con el algodn para recoger algunas
bacterias, luego inocule con ellos la otra zona en la misma
caja (estra cruzada).
27
Cuando se inocula agar semislido en un tubo para pruebas
de motilidad (aunque no sea la nica prueba que se valora),
es importante que el asa de inoculacin sea retirada a lo
largo del mismo camino que se us para atravesar
inicialmente el medio. Solo se pica el agar con un
movimiento uniforme y recto y para ello se utiliza el asa
recta.
Difusin
28
Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posicin
recta, as el rea de inoculacin queda sumergida en el
medio.
29
Los picos de flauta (planos inclinados) de agar se inoculan
de la siguiente forma: primero se atraviesa todo el fondo
del agar con el asa recta de inoculacin, esto cuando sea
necesario ya que no todos los medios lo requieren,
posteriormente ste se retira con un movimiento en S a
travs del agar que se disemina el inculo. Se utiliza el asa
recta.
30
La interpretacin de los cultivos primarios despus de 24
48 horas de la incubacin requiere de la observacin o
anlisis de la morfologa colonial. La evaluacin debe ser de la
siguiente forma:
2. Determinar la pureza,
coloracin de Gram y
morfologa de las
bacterias en cada tipo
de colonia.
3. Observar cambios en el
Figura 11. Agar BCYE
31
La interpretacin de los cultivos primarios se lleva a cabo
sosteniendo la placa en la mano y observando la superficie
del agar en busca de crecimiento bacteriano.
32
La consistencia y textura de la masa celular tambin son
rasgos distintivos de la morfologa de las colonias. Pueden
tener una consistencia desde seca y frgil a grasienta y
cremosa, o viscosa y pegajosa.
33
Lectura de morfologa colonial
34
La mayor parte de las pruebas usadas para evaluar la
actividad bioqumica o metablica de bacterias (por medio
de la cual puede hacerse una identificacin final de
especie), se lleva a acabo mediante el subcultivo del
aislamiento primario en una serie de medios diferenciales,
cuyos resultados pueden interpretarse despus de uno o
dos das de incubacin.
1. FERMENTACIN DE CARBOHIDRATOS
Composicin:
a) Peptona 10g.
b) Extracto de carne 1g.
c) Cloruro de sodio 5g
d) Agua destilada 1000 ml.
e) Indicador de pH: Rojo de fenol
!"cido: Color amarillo (pH = 6.8)
!"Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4)
!"Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)
35
Fundamento
$"
36
Utilizando un indicador de pH con un determinado hidrato
de carbono puede determinarse si una bacteria ha
degradado el mismo en varios productos terminales,
observando un cambio de color visible en el medio.
Bacteria
Indicador de pH + CHO H2CO2
(aldehdos) gluclisis +
cambio de color
Lquido
Inoculacin
$"
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 24 - 48 horas
37
Resultados
$"
NEGATIVO
MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO
Interpretacin
$"
38
Observaciones
$"
Reporte de resultados
$"
A = cido
K = alcalino
G = gas
39
Aplicaciones
$"
40
Microorganismos no fermentadores de Carbohidratos:
$"
No fermentadores de lactosa:
Enterobacterias patgenas como Salmonella y
Shigella.
No fermentadores de manitol: Staphylococcus
epidermidis.
No fermentadores de salicina: Especies de
Corynebacterium.
No fermentadores de rafinosa: Otras especies
de Aeromonas.
No fermentadores de inositol: Proteus
morganii.
No fermentadores de adonitol: Providencia
stuartii.
No fermentadores de inulina: Streptococcus
del grupo D.
No fermentadores de sacarosa: Otras
especies de Yersinia.
41
2. PRUEBA DE CITRATO
Composicin:
a) Sulfato de magnesio
b) Monofosfato de amonio
c) Fosfato dipotsico
d) Citrato de sodio
e) Cloruro de sodio
f) Agar
g) Agua destilada
h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH= 6)
Alcalino: color azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
Fundamento
$"
42
Normalmente el metabolismo del citrato comprende una
condensacin de acetilo con la coenzima A y oxalacetato
para entrar en el ciclo de Krebs. El desdoblamiento del
citrato comprende un sistema enzimtico sin la intervencin
de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o
citrato desmolasa.
Piruvato + CO2
pH bsico:
pH cido:
43
Consistencia del medio
$"
Inoculacin
$"
Incubacin
$"
Tiempo = 24 - 48 horas
Temperatura = 35 - 37 C
Precauciones
$"
44
Cuando se inocula una serie de tubos de medios de cultivo
diferenciales con un microorganismo desconocido, es
importante sembrar primero el medio citratado para
prevenir el arrastre de protenas o carbohidratos de los
otros medios, aunque se supone se esteriliza el asa en cada
inoculacin.
Resultados
$"
45
Interpretacin
$"
Reporte de resultados
$"
Negativo (-)
Positivo (+)
46
Aplicaciones
$"
Microorganismos positivos
$"
Especies de:
Salmonella
Arizona
Citrobacter
Enterobacter
Klebsiella
Serratia licuefaciens
Pseudomonas cepacia
Microorganismos negativos
$"
Edwarsiella
Yersinia enterocoltica
Escherichia coli
Shigella
Yersinia pseudotuberculosis
Otras especies de Moraxella
Proteus morganii
47
3. PRUEBA DE LICUEFACCIN DE
GELATINA
Composicin:
a) Extracto de carne
b) Peptona
c) Gelatina
d) Agua destilada
Fundamento
$"
48
gelatinasas
Protena + H2O polipptidos
Proteasas
gelatinasas
Polipptidos + H2O aminocidos
Peptidasas individuales
Semislido
Inoculacin
$"
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 18 - 24 horas
Temperatura: 35 - 37 C
Al trmino de la incubacin se coloca el tubo en un
refrigerador o bao de hielo durante dos horas para
determinar si se ha producido o no la digestin de la
gelatina (licuefaccin).
49
Resultados
$"
Interpretacin
$"
50
Reporte de resultados
$"
Positivo (+)
Negativo (-)
Aplicaciones
$"
Microorganismos positivos
$"
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis (lenta)
Serratia liquefaciens
Serratia marcescens
Pseudomonas aeruginosa
Especies de Flavobacteriumm
Microorganismos negativos
$"
Figura 16. Micrococcus
Listeria monocytogenes
51
4. PRUEBA DE LA LECHE CON TORNASOL
Fundamento
$"
1. Fermentacin de lactosa
2. Reduccin del tornasol
3. Formacin de cogulo
4. Peptonizacin (digestin)
5. Formacin de gas
52
1. Fermentacin de lactosa
cido lctico
Glucosa cido pirvico cido butrico
CO2 + H2
53
3. Formacin de cogulo
caseinasa
c. Lctico + casenato de Ca caseingeno (pp)
54
Formacin del cogulo
renina
Casena paracasena (pp)
Ca
4. Peptonizacin (digestin)
55
5. Formacin de gas
Lquido
Inoculacin
$"
Difusin
Condiciones de incubacin
$"
Temperatura: 35 - 37 C
56
Resultados
$" Figura 17. Pruebas bioqumicas de leche con tornasol
Interpretacin
$"
57
Reporte de resultados
$"
Aplicaciones
$"
Sin crecimiento:
Clostridium cochlearium
C. difficile
C. putrefaciens
C. tetanomorphum
Streptococcus equinus
Con crecimiento:
Streptococcus bovis
58
5. PRUEBA DE REDUCCIN DE LA LECHE CON
AZUL DE METILENO
Fundamento
$"
59
Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden
sustituir a los aceptores de electrones naturales en
cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones,
donde actan como reductores del sistema citocromo.
Cuando se agrega el colorante sinttico reducible, azul de
metileno a un medio que contenga organismos
metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato
oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce
reductasa y son utilizados para reducir el colorante.
H
N
N
N(CH3)2 N(CH3)2
(CH3)2N (CH3)2N
S
Lquido
Inoculacin
$"
60
Condiciones de incubacin
$"
Temperatura: 35 - 37 C
Resultados
$"
Interpretacin
$"
61
Reporte de resultados
$"
R = Reduccin
Aplicaciones
$"
$"Microorganismos positivos
Enterococos (Streptococcus del grupo D)
Microorganismos negativos
$"
Especies de Streptococcus que por lo general no son
enterococos.
62
6. PRUEBA DE OXIDACIN FERMENTACIN
Componentes:
a) Peptona
b) Cloruro de sodio
c) Fosfato de potasio
d) Hidratos de carbono (glucosa, lactosa, sacarosa,
maltosa).
e) Agar
f) Agua destilada
g) Indicador de pH: Azul de bromotimol
cido : Color amarillo (pH = 6)
Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado: Verde (pH = 7.1)
Se deben tener dos tubos para esta prueba uno sin sello y
otro con sello de parafina.
Fundamento
$"
63
La utilizacin que una bacteria hace de los hidratos de
carbono tiene lugar por alguno de dos procesos: de
fermentacin o de oxidacin. Algunas bacterias son capaces
de metabolizar un carbohidrato solo en condiciones
aerbicas, mientras que otras producen cido tanto
aerbica como anaerbicamente. La diferencia principal
entre el metabolismo fermentativo y oxidativo depende de
los requerimientos de oxgeno atmosfrico y de la
fosforilacin inicial. La fermentacin es un proceso
anaerbico que requiere la fosforilacin inicial de la glucosa
previamente a su degradacin, mientras que la oxidacin, en
ausencia de compuestos inorgnicos como nitrato y sulfato,
es un proceso estrictamente aerbico que comprende la
oxidacin directa de una molcula de glucosa no fosforilada
(inicialmente). La fermentacin produce una acidez ms
elevada que el proceso metablico oxidativo.
64
Son necesarios dos tubos de cada medio de hidratos de
carbono para la prueba. El medio en un tubo se expone al
aire, el otro se cubre con aceite mineral o parafina lquida
estriles. Las bacterias oxidativas producen cidos solo en
el tubo abierto expuesto al oxgeno atmosfrico; los
micoorganismos fermentadores producen cidos en ambos
tubos; y las bacterias no sacarolticas son inertes en este
medio, que permanece con un pH alcalino despus de la
incubacin.
Inoculacin
$"
65
Condiciones de incubacin:
$"
Tiempo: 18 - 24 horas
Temperatura: 35-37 C
Resultados
$"
66
Interpretacin
$"
Amarillo: cido
Burbujas: Gas
Incubacin
Verde: alcalino
Fermentador No
Oxidativo oxidativo
No No
fermentador fermentador
Aplicaciones
$"
67
2. Ayuda a la diferenciacin entre los gneros de la
Familia Micrococcaceae.
Micrococcus oxida glucosa
Staphylococcus fermentan glucosa
Reporte de resultados
$"
68
6. REACCIN DE LA UREASA
Fundamento
$"
69
H2N
C=O + 2 HOH CO2 + H2O + 2 NH3 (XH4)2CO2
H2 N
Urea
Inoculacin
$"
Condiciones de incubacin
$"
Temperatura: 35-37 C
70
Resultados
$"
POSITIVO POSITIVO
Interpretacin
$"
Negativo: Amarillo
Reporte de resultados
$"
Positivo (+)
Negativo (-)
71
Observaciones
$"
Aplicaciones
$"
- Klebsiella (+)
- Escherichia coli (-)
- Proteus (+ rpido)
- Providencia (-)
72
8. REACCIN DE VOGES-PROSKAUER (VP)
Composicin:
a) Polipeptona
b) Dextrosa
c) Fosfato de potasio
d) Agua destilada
Fundamento
$"
73
para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo
bastante como para producir un cambio de color. Por este
motivo muchas de las especies de Enterobacterias son VP
positivas, con pocas excepciones son RM negativas y
viceversa.
O H C H 3
C H 3
O2 OXIDADO
C O
C O
+
KOH
C O
C H O H
Alfa-naftol (catalizador)
C H 2
C H 2
Diacetilo
Acetona
+
N H 2
C N H
N H R
condensacin
Color rojo rosado Ncleo de guanidina
74
Consistencia del medio
$"
Lquido
Inoculacin
$"
Difusin
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 24 - 48 horas
Temperatura: 35-37 C
Reactivos adicionales
$"
75
Precauciones
$"
Resultados
$"
POSITIVO
MEDIO NO NEGATIVO
INOCULADO
Interpretacin
$"
76
Reporte de resultados
$"
Positivo (+)
Negativo (-)
Aplicaciones
$"
Microorganismos positivos
$"
- Klebsiella pneunoniae
- Yersinia enterocolitica
$" Microorganismos
negativos
-Escherichia coli
-K. ozaenae
77
9. REACCIN DE ROJO DE METILO (RM)
Composicin:
e) Polipeptona
f) Dextrosa
g) Fosfato de potasio
h) Agua destilada
i) Indicador: rojo de metilo
PH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo.
cido: rojo (pH = 4.4)
Alcalino: amarillo (pH = 6)
Fundamento
$"
78
La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un
indicador de pH para determinar la concentracin de iones
hidrgeno presentes cuando un organismo fermenta
glucosa. Las bacterias RM positivas producen cidos
estables manteniendo una alta concentracin de iones
hidrgeno hasta alcanzar cierta concentracin y entonces
cesa toda actividad.
Lquido
Inoculacin
$"
Difusin
79
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 48 horas
Temperatura: 35-37 C
Resultados
$"
POSITIVO
80
Interpretacin de rojo de metilo
$"
Reporte de resultados
$"
Positivo (+)
Negativo (-)
Aplicaciones
$"
!"Microorganismos positivos
- Escherichia coli
- Especies de Yersinia
Figura 27.
!"Microorganismos negativos
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Klebsiella
81
10. PRUEBA DE REDUCCIN DE NITRATOS
Fundamento
$"
82
Nitrato en nitrgeno molecular
2 NO3 + 10 e + 12 H+ N2 + 6 H2O
NH2
N N
+ HNO2
SO2H NH2
SO2H NH2
N N
Zn
+ CH2COOH (C6H3NHNH3) OSO3H
Arilhidracina
cido actico
SO2H NH2
83
Consistencia del medio
$"
Lquido
Inoculacin
$"
Condiciones de incubacin
$"
Temperatura 35 - 37 C
Reactivos adicionales
$"
84
Conservacin: Guardar ambos reactivos en el refrigerador
mientras no se usan. Por lo general se mantienen estables
durante tres meses.
Resultados
$"
MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO
NEGATIVO
Interpretacin
$"
85
Precauciones
$"
Reporte de resultados
$"
Positivo (+)
Negativo (-)
Aplicaciones
$"
86
11. PRUEBA DE FENILALANINA DESAMINASA
Composicin:
a) D-L-fenilalanina
b) Extracto de levadura
c) Cloruro de sodio
d) Fosfato de sodio
e) Agar
f) Agua destilada
g) PH inicial = 7.3
Fundamento
$"
87
Este es un proceso en dos etapas:
CH2 CH COOH
- 2H
NH2 + 1/2 O
FLAVOPROTENA
FENILALANINA
CH2 C COOH
O
+ NH2
AMONIACO
CIDO FENILPIRVICO
88
cido fenilpirvico. La reaccin positiva con este reactivo se
debe a la formacin de una hidrazona. El cloruro frrico
acta como agente quelante actuando con el cido
fenilpirvico para formar un color verde.
N NHR
O + RNH NH2
Hidracina
Inoculacin
$"
89
Condiciones de incubacin
$"
Temperatura 35 - 37 C
Reactivos adicionales
$"
Aplicaciones
$"
90
Resultados
$"
NEGATIVO
MEDIO NO POSITIVO
INOCULADO
NEGATIVO
Interpretacin
$"
Reporte de resultados
$"
Positivo (+)
Negativo (-)
91
12. PRUEBA DE SULFURO INDOL MOVILIDAD
(SIM)
Composicin:
a) Extracto de carne
b) Peptona
c) Hierro peptonizado (indicador de SH2)
d) Tiosulfato de sodio (indicador de SH2)
e) Agar
f) Agua destilada
g) pH = 7.3
Fundamento
$"
92
1. Prueba de cido sulfhdrico
Primera etapa:
Segunda etapa:
93
Bacteria (medio cido) + tiosulfato de sodio gas SH2
94
nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo
de enzimas vinculadas con la produccin del indol. El
principal intermediario en la degradacin del triptfano es
el cido indolpirvico.
95
COOH
NH 2 T rip to fa n a s a
N H 2O
H D e s a m in a c i n
L - T r ip t f a n o
+ + N H 3
H 3 C COOH
N
H
In d o l c id o P ir v ic o A m o n ia c o
3. Movilidad
1. SIM
2. MIO
Inoculacin
$"
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 24 - 48 horas
Temperatura 35 - 37 C
97
Reactivos adicionales
$"
Prueba de indol
Reactivo de Kovacs
Reporte de resultados
$"
98
Resultados
$"
INDOL
NEGATIVO
INDOL
POSITIVO
MEDIO SIN
INOCULAR
H2S
H2S NEGATIVO
GAS POSITIVO
Interpretacin
$"
1. cido sulfhdrico
99
2. Indol
3. Movilidad
100
Aplicaciones
$"
101
12. AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO: TSI
Composicin:
f) Extracto de carne
g) Extracto de levadura
h) Peptona
i) Proteasa
j) Lactosa
k) Dextrosa
l) Sulfato ferroso
m) Cloruro de sodio
n) Tiosulfato de sodio
o) Agar
p) Agua destilada
q) Indicador: Rojo de fenol
!"cido: amarillo
!"Alcalino: rojo
!"Medio no inoculado: naranja rojizo (pH =7.4)
102
Fundamento
$"
103
Por otra parte la lactosa (disacrido) ser primero degradada
a sus monosacridos correspondientes (glucosa y galactosa).
Beta-galactosidasa
Lactosa glucosa + galactosa
Ciclo de Krebs
Glucosa o galactosa CO2 + H2O + energa anaerbico
104
productos finales cidos. El cido en el medio hace virar el
amarillo del indicador de pH, rojo de fenol. Entonces, luego de
6 horas de incubacin, la zona de la estra y el fondo del tubo
inoculado con un fermentador de glucosa tendrn un color
amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el
fondo permanecer rojo (indicando que no hay variacin del
pH) o se alcalinizar (lo que puede visualizarse por un color
rojo algo ms intenso que del medio original), demostrando
que la bacteria no es miembro de la familia
Enterobacteriaceae.
105
El metabolismo proteico se produce en la superficie de la
zona inclinada donde el oxgeno es abundante. Los productos
de la degradacin de la peptona (como el amoniaco) son
alcalinos y provocan el viraje del indicador rojo de fenol a su
color rojo original. Un TSI inoculado con una bacteria que no
fermenta la lactosa al cabo de 18-24 horas de incubacin
presentar la zona inclinada roja y el fondo del agar
permanecer amarillo debido al metabolismo anaerobio de la
glucosa durante la primera etapa. Esta reaccin se denomina
alcalina sobre cido (K/A).
Inoculacin
$"
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 18 - 24 horas
Temperatura: 35 - 37 C
106
Resultados
$"
107
$" Interpretacin
1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradacin aerbica de
glucosa.
Amarillo en capa profunda: cido; degradacin anaerbica
de la glucosa.
2. Amarillo en pico: cido
Amarillo en capa profunda: cido
3. Rojo en pico de flauta: alcalino
Sin cambio de color en capa profunda: alcalina.
4. Produccin de H2S: precipitado negro
5. Produccin de gases: Produccin de burbujas,
descomposicin del medio, ligera muesca del medio sobre
el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo,
dejando un espacio libre.
Observaciones
$"
108
Reporte de resultados
$"
Reacciones de TSI
$"
109
Pico de flauta cido / profundidad cida (A/A). Glucosa y
lactosa fermentadas. Caracterstico de coliformes que
fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-
Enterobacter.
No fermentador
No fermentacin O2 Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina
pH = 7.4 Aminas Pptidos
No fermentador de lactosa
Dextrosa O2 Pico de flauta cido/profundidad cida
Aminas Pptidos
cidos mixtos Reaccin inicial
Dextrosa
Aminas Pptidos O2 Pico de flauta alcalino/profundidad cida
cidos mixtos Reaccin retardada
Aplicaciones
$"
110
Especie Superficie Fondo Gas H2S
bacteriana inclinada
Enterobacter A K ++ -
Hafnia K A + -
Klebsiella A A ++ -
E. coli A A + -
Shigella K A - -
Salmonella K A - +
typhi
S. paratyphi K A + -
S. K A + -
choleraesuis
Otras K A + +++
Salmonellas
Citrobacter K A + +++
Edwarsiella K A + +++
Serratia K A - -
Proteus K A + +++
vulgaris
P. mirabilis K A + +++
P. morganii K A - -
P. rettgeri K A - -
Providencia K A +o- -
Tabla 4. Aplicaciones de la Pruba con TSI
111
13. Agar lisina hierro: LIA
Composicin:
a) Peptona
b) Extracto de carne
c) Piridoxal
d) L-lisina
e) Citrato de amonio
f) Tiosulfato de sodio
g) Glucosa
h) Agua destilada
i) Agar
j) Indicador de pH: Prpura de bromocresol
!"cido: color amarillo (pH = 5.2)
!"Alcalino: color prpura (pH = 6.8)
!"Medio no inoculado: color prpura intenso
brillante (pH = 6.0)
Fundamento
$"
112
La descarboxilacin es el proceso mediante el cual las
bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especficas
son capaces de atacar a los aminocidos en su grupo
carboxilo dando una amina o una diamina y anhdrido
carbnico. La descomposicin de los aminocidos se produce
anaerbicamente. El proceso de descarboxilacin es
irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima comn, el
fosfato de piridoxal.
Temperatura: 35 37 C
Tiempo: 18 24 horas
113
Resultados
$"
K/K
K/K
H2S
H2S
K/A
K/A
GAS
GAS
MEDIO H2S K/K
MEDIO
NO INOCULADO H2S K/K
NO INOCULADO
Interpretacin
$"
114
Aplicaciones
$"
115
13. Movilidad, indol y ornitina: MIO
Medio de cultivo
$"
Composicin:
a) Extracto de levadura
b) Peptona
c) L-ornitina
d) Dextrosa
e) Agar
f) Agua
g) Indicador de pH: prpura de bromocresol
!"cido: color amarillo (pH = 5.2)
!"Alcalino: color prpura (pH = 6.8)
!"Medio no inoculado: color prpura intenso
brillante (pH = 6.0)
Fundamento
$"
1. Descarboxilacin de ornitina
2. Produccin de indol
3. Movilidad
116
1. Descarboxilacin de ornitina
117
Diversas enzimas intracelulares que intervienen en ste
proceso reciben el nombre de triptofanasas, lo que implica el
sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin
del indol. El principal intermediario en la degradacin del
triptfano es el cido indolprvico.
118
3. Movilidad
3. SIM
4. MIO
Inoculacin
$"
119
Condiciones de incubacin
$"
Tiempo: 24 48 horas
Temperatura: 35 37 C
Reactivos adicionales
$"
Prueba de indol
Reactivo de Kovacs
120
Resultados
$"
INDOL INDOL
NEGATIVO POSITIVO
MEDIO NO
INOCULADO
Interpretacin
$"
1. Ornitina descarboxilasa
121
2. Indol
3. Movilidad
122
Reporte de resultados
$"
Aplicaciones
$"
Especies de Enterobacter
Proteus mirabilis
Proteus morganii
Yersinia enterocolitica
Especies de Klebsiella
Enterobacter aglomerans
Proteus vulgaris
Proteus rettgeri
Yersinia pestis
Yersinia pseudotuberculosis
123
Bacterias Produccin Movilidad Produccin
de indol de H2S
Salmonella - + +o-
typhi
Otras - + +o-
Salmonellas
E. coli + +o- -
Klebsiella +o- - -
Enterobacter - + -
Citrobacter - + +
Shigella +o- +o- -
Tabla 7. Aplicaciones de la Prueba bioqumica MIO
124
El metabolismo se define como una serie de reacciones
qumicas que se llevan acabo en el microorganismo de tipo
fisiolgico para que se adapte al medio.
125
Catabolismo: Degradacin o rompimiento de molculas
grandes (glcidos, lpidos y protenas), se degradan para
producir molculas ms sencillas.
126
Quimiorgantrofos. Quimiotrfos que necesitan
molculas orgnicas complejas como dadores
electrnicos, tales como glucosa.
Quimiolittrofos. Organismos que pueden emplear
dadores electrnicos inorgnicos sencillos, tales
como el hidrgeno, sulfuro de hidrgeno, amoniaco
o azufre.
127
Muchas bacterias simbiontes se encuentran, en condiciones
normales, en los tejidos humanos, incluso en el tubo digestivo
y la piel, donde pueden resultar indispensables para los
procesos fisiolgicos. Este tipo de relacin recibe el nombre
de mutualismo. En el comensalismo, las bacterias simbiontes
obtienen los nutrientes de sus huspedes vivos causndoles
un dao considerable. Los parsitos, el tercer tipo, pueden
provocar la destruccin de las plantas o de los animales en
los que viven.
PRODUCCIN DE ENERGA
128
diversos. Algunos de ellos usan donantes de electrones
inorgnicos y varios aceptores de electrones (oxgeno,
nitratos, sulfatos) para proporcionar energa destinada a
formar sus propios constituyentes orgnicos a partir del
CO2.
Rutas catablicas:
- Gluclisis
- Pentosa fosfato
- Entner-Duodoroff
129
I. Gluclisis
130
Aunque las etapas intermedias implicadas son muchas y
complejas, una visin simplificada podra describir el proceso
como:
131
otras 30 molculas de ATP. En resumen, se pueden
producir un total de 36 molculas de ATP mediante el
metabolismo completo de molcula de glucosa bajo
condiciones aerobias, pero slo dos molculas de ATP
bajo condiciones anaerobias.
5. Por ltimo, una de las molculas intermediarias de tres
tomos de carbono, el gliceraldehdo-3-fosfato puede
en una reaccin lateral, convertirse en 2,3-
difosfoglicerato.
132
GLUCLISIS
2 fosfoenolpiruvato
2 ADP
Glucosa
2 ATP
ATP ADP 2 piruvato
H2O
2 2-fosfoglicerato
Glucosa-6-fosfato
2 3-fosfoglicerato
Fructosa-6-fosfato
2 ADP 2 ATP
ATP ADP
Fructosa-1,6-bifosfato 2 1,3-bifosfoglicerato
2 NAD
2 NADH
2 PO4
Esquema 1. Gluclisis
133
II. Ruta de Entner-Duodoroff
134
III. Hexosa monofosfato (ruta de pentosas- fosfato)
135
En un ciclo que permite la oxidacin completa de los
carbohidratos no parece operar en su forma completa en
sistemas microbianos anaerobios.
136
3. Es la va que proporciona pentosas fosfato para la
sntesis de ribosa y desoxirribosa necesarias para la
biosntesis de cidos nucleicos en general; adems para
la sntesis de histidina cuyo precursor es el
fosforribosil pirofosfato, derivado de la pentosa.
4. Es la va de degradacin de la ribosa y la desoxirribosa,
procedentes tanto de la digestin de cidos nucleicos
como del recambio metablico de nucletidos.
5. Es la ruta que conecta el metabolismo de las hexosas
con el de otros azcares, tales como arabinosa, y
xilosa, componentes estructurales de glucoprotenas y
paredes celulares de vegetales, as como principales
fuentes carbonadas de muchas bacterias. Por otro lado
la sntesis de ribulosa-5-fosfato, intermediario de la
va de las pentosas, es fundamental en las plantas
verdes para llevar acabo el ciclo de Calvin.
6. Es la fuente de un importante azcar de cuatro
carbonos, la eritrosa-4-fosfato, precursor para la
biosntesis de los compuestos aromticos en bacterias
y plantas.
137
VA HEXOSA FOSFATO
GL UC OL I S I S
Glucosa
Sedoheptulosa -7-P
Fructosa -5-P
Eritrosa -4-P
Glucosa-6-fosfato Xilusa -5-P
N ADP
N ADPH
5-P-gluconato
N ADP N ADPH
CO2
-3-P
Gliceraldehdo -3-P
Ribulosa-5-P
Fructosa -5-P
Ribosa -5-p
Gliceraaldehdo
138
CICLO DE KREBS
139
escalonadas son oxidados hasta anhdrido carbnico; los
tomos de hidrgeno que se liberan en los pasos que suponen
una deshidrogenacin entran a formar parte de la cadena
respiratoria productora de ATP (fosforilacin oxidativa).
Oxidacin completa
140
rutas de biosntesis de aminocidos, piridinas, tetrapirroles
y lpidos. Comprende la fase aerbica de la oxidacin de la
glucosa y es donde se obtiene un mayor rendimiento de
energa.
CoA
oxalacetato
citrato
NADH
NAD
malato
isocitrato
NAD
H2O CO2
NADH
fumarato
Alf a-cetoglutarato
FADH2 NAD CO2
FAD NADH
CoA
FERMENTACIONES
142
1. Fermentacin lctica
Streptococcus lactis
$"
S. faecalis
$"
S. salivarius
$"
S. pyogenes
$"
S. cremoris
$"
S. thermophilus
$"
S. diacetilactis
$"
Lactobacillus lactis
$"
L. acidophilus
$"
L. bulgaricus
$"
L. casei
$"
L. plantarum
$"
L. inulinus
$"
143
Fermentacin heterolctica convierte solamente cada
molcula de glucosa en lactato y producen adems
cantidades considerables de etanol, acetato y CO2.
Leuconostoc mesenteroides
$"
Leuconostoc cirovorum
$"
Lactobacillus brevis
$"
Lactobacillus viridescens
$"
2. Fermentacin alcohlica
144
El etanol es uno de los productos ms extendidos entre los
microorganismos resultantes de la fermentacin de los
azcares. Los principales productores de etanol son las
levaduras (Saccharomyces cerevisiae); el alcohol aparece
tambin como producto secundario de la fermentacin de las
hexosas y de las pentosas en diversas bacterias anaerobias y
aerobias facultativas.
145
3. Fermentacin propinica
Gnero Propionibacterium
$"
Clostridium propionicum
$"
Selenomonas ruminantium
$"
146
La liberacin de una molcula de CO2 se lleva a cabo con
ayuda de una transcarboxilasa que contiene biotina que lo
transfiere nuevamente a piruvato.
147
5. Fermentacin de metano: CO2 como aceptor de
hidrgeno
148
El cido butirico, butanol, acetona, isopropanol, y otros
cidos orgnicos son productos tpicos de la fermentacin de
los hidratos de carbono que llevan acabo los productores
anaerobios de esporas (Clostridium). Durante la
fermentacin se forman cantidades variables de cidos,
alcoholes, acetona y gas. Como sustratos se utilizan la
glucosa y algunos polisacridos, cidos orgnicos y alcoholes.
FIJACIN DE NITRGENO
149
En cierta forma el sulfato y el nitrato actan como
transportadores de oxgeno el hidrgeno procedente del
sustrato los reduce. La capacidad de transferir electrones al
sulfato o al nitrato permite a las bacterias oxidar el
sustrato incluso en ausencia de oxgeno molecular y de esta
forma obtener ms energa que por simple fermentacin.
Reduccin de nitratos
NH2OH NH3
HIDROXILAMINA AMONIACO
NO3 NO2 NO
XIDO DE
NITRATO NITRITO NITRGENO
N2O N2
XIDO NITRGENO
NITRSO
150
REDUCCIN DE SULFATOS
151
El metabolismo de los desulfatizantes es oxidativo. Obtienen
la energa por fosforilacin oxidativa.
Desulfovibrio desulfuricans
$"
D. vulgaris
$"
Desulfotomaculum nigrificans
$"
D. orientis
$"
D. ruminis
$"
152
ENTEROBACTERIAS
153
Es muy importante recordar que las muestras de cualquier
tipo que se envan al laboratorio para investigar la presencia
de estas bacterias, deben ser colectadas en condiciones
aspticas transportadas y procesadas con la mayor rapidez,
a fin de evitar alteraciones de muestras y prdida de
viabilidad de las bacterias que se buscan, o crecimiento
excesivo de grmenes banales que pudieran entorpecer el
estudio.
BACTE RIA O XIDASA INDO L VP RM CITRATO SH2 U REA MOVILID G E LATI LIS INA ARGIN I
AD NA DESC. NA
DESC.
E. Coli - + - + - - - - - - -
Shigella - + - + - - - - - - +
Edwardsiella - + - + - + - - - + -
Salmonella - - - + - + - - - + +
Arizona -- - - + + + - + + + +
C itr obacter - - - + + + - - - - -
Klebsiella - + + - + - + - - + -
Enter obacter - - + - + - - + + + -
Serratia - - + + + - - + + + -
Pr oteus - + - + + + + + + - -
vulgar is
Pr ovidencia - + - + + - - - - - -
154
COPROCULTIVO
En cualquier caso, es importante contar con procedimientos
de laboratorio bien controlados que permitan detectar la
presencia de agentes patgenos o bien dar alguna
informacin sobre alteraciones en el equilibrio de la forma
normal.
El esquema que se propone en ste atlas para aislamiento e
identificacin de enterobacterias patgenas figura entre
numerosas variantes de trabajo utilizadas por diferentes
autores. Se considera que este esquema es uno de los ms
usuales y que puede dar resultados consistentes y
satisfactorios.
COPROCULTIVO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO PARA ENRIQUECIMIENTO PARA IDENTIFIC ACIN
Agar entrico Hektoen Base de caldo tetrationato Agar de hierro y triple azcar
Agar de eosina y azul de metileno Caldo de selenito y cistina Caldo rojo de fenol y carbohidratos
Agar ENDO Medio urea
Agar XLD Medio SIM
Agar Salmonella Shi gella Agar hierro y lisina
Agar verde brillante Medio MIO
Agar citrato de Simons
AISLAMIENTO ENRIQUECIMIENTO
Esquema 4. Coprocultivo
155
Aislamiento de bacterias patgenas en
heces
Materia fecal
Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Colonia negra = Salmonella Sulfito de XLD, VB
Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y
Shigella
156
FAMILIA MICROCOCACEAE
Racimos + + + +
irregulares
Ttradas + - - -
Cpsula - + - -
Movilidad - - + -
Crecimiento G- + - - -
furazolidona
Fermentacin - + - +
de glucosa
Oxidasa + - No -
desarrolla
Resistencia de R R R S
lisostafina
Glicina de - - - +
pptido-glicana
cidos - - - +
teicoicos en
pared celular
157
ESTAFILOCOCOS
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO PARA IDENTIFICACIN
Agar S-110 Medio CTA
Agar sal y manitol Caldo rojo de fenol
Agar de Vogel Johnson Caldo SF
158
PRUEBA S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
159
ESTREPTOCOCOS
160
Especie Susceptibilidad Susceptibilidad Hidrlisis Hidrlisis Crecimiento Crecimiento CAMP Fenmeno
bacitracina optoquina hiprato esculina en bilis en NaCl satelitismo
6.5%
Estreptococos
beta-
hemolticos
Grupo A S R + - - - - -
Grupo B R R - + - + + -
Enterococos R R + - + + - -
No
enterococos R R - - + - - -
S. viridans R R - - - - - +
S. R R - - - - -
pneumoniae
Tabla 11. Caractersticas bioqumicas de Streptococcus
161
UROCULTIVO
El urocultivo debe hacerse cuando hay signos o sntomas de
infeccin urinaria, insuficiencia renal o hipertensin.
Llevndolo a cabo siempre en personas en que se sospecha
infeccin sistmica o que presenten fiebre de origen
desconocido.
Orina
AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIN
Esquema 7. Urocultivo
162
HEMOCULTIVO
163
EXUDADO FARINGEO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO
Agar sangre Agar S-110
Agar eosina y azul de metileno Medio de transporte Stuart
Agar sal y manitol Agar BIGGY
Tincin de Gram
Hemoltico grupo A
Disco de bacitracina
Streptococcus
Agar sangre Neumococos Disco de optoquina
Solubilidad de bilis
164
B I B L I O G R A F A
165
Davis D, Dulbecco R, Eisen N. H, Ginsberg S. H, 1990, Tratado de
microbiologa. Tercera edicin, Salvat, Espaa, pp 156-185.
166
Ingraham J. L y C. A. Ingraham, 2000, Introduction to
microbiology, Segunda edicin, Brooks/cole, USA, pp 804.
167
Rose H. A, 1977, Microbiologa qumica, Alambra. Espaa, pp 280-
390.
DIRECCIONES ELECTRONICAS
Beyong, 2001.
http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html
Carruana L. B, 2002.
http://members.tripod.com/~LouCaru/index-7.html
168
EM Science, 2002. http://www.emscience.com,
EM Science, 2002.
http://www.emscience.com/literature/951053_Microbiology_Microbiology_Detection%5Eo
f%5EStaphylococci%5EPage1.asp
EM Science, 2002.
http://www.emscience.com/literature/prodgroups.asp?category=Microbiology
EM Science, 2002.
http://www.emscience.com/literature/951053_Sand.jpg
Guentzel M. N, 2002.
http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch026.htm
Merck, 2002.
http://www.merck.de/english/services/labor/l_uba/emibio/news/yersinia.html
169
Microbiology, 2002.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html
Microbiology, 2002.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
Microbiology, 2002.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/02aseptictrans.html
Microbiology, 2002.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/06anaerobicjar.html
Microbiology, 2002.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/mediaprep.html
Pfeizer, 2002
http://www.pfizer.com/rd/microbes/salmonella.html
170
University of east Anglia Norwich, 2002
http://www.uea.ac.uk/menu/study_and_research/grad/pgprospectus_200
2/schools/institute_of_food_research.html
http://biblioweb.dgsca.unam.mx/libros/microbios/
http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/courseware/i
nfect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html
http://catalog.cmsp.com/datav3/it010019.htm
http://project.bio.iastate.edu/Courses/MIPM302/302new/6_3GPpositive.html
http://ruv.itesm.mx, 2002
http://www.abc.net.au/science/news/default.htm
http://www.bact.wisc.edu/Bact303/Bacteriology
171
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/bactcell.htm
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/mscope.htm
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/metab.htm
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/growth.htm
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gm-enterics.htm
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/endospores.htmhttp:
//adl.cas.psu.edu/bacti.htm
http://www.ce.berkeley.edu/~nelson/ce210a/Salmonella/Salmonella%20Webpage.htm
http://www.holingerag.ch/labor/labor.html
http://www.isis.rivm.nl/inf_bul/bul1302/ voedselinfectie.html
http://www.kenteliv.kent.edu/microbiology/microbiology%20slides.htm
http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm
http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html
http://www.microscience.com/STM.htm
http://www.microbiologyonline.org.uk/about.html
http://www.mol.biol.ethz.ch/glockshuber/picturegallery/picturegallery.html
http://www.pasteur.fr/recherche/unites/scme/portfolio/bacteries/shigel1.htm
172
http://www.quimica.matrix.com.br/images/ salmonella_foto.jpg
http://www.qualicon.com/baxgen.htm
http://www.ruv.mx/especiales/citela/documentos/programa/Carta(main)_files/modul
http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm
http://www.saudetotal.com/microbiologia/labmicro.htm#1.Isolamento
http://www.saudetotal.com/microbiologia/I. isolamento
http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/
cameron/60_347.htm
http://www.uvp5.univparis5.fr/UV_MED/AC/Intro.asp?NSuj=68&Intro=68-1
http://www.santuarios.com/Editores/arboles.htm
http://www.santuarios.com/Editores/que-es.htm
http://biomedicas.unam.mx/htm/bmyt/mao/mao.htm
http://www.monografias.com/trabajos7/rumen/rumen.shtml
htt://www.monografias.com/trabajos/bactevet/bactevet.shtml#arriba
http://www.monografias.com/trabajos/bactevet/bactevet.shtml
http://www. vdh.state.va.us/spanish/strepf.htm
173
http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch021.htm
http://www.medmayor.cl/apuntes/farmacologia/farmacologiaIV.htm
http://www.vdh.state.va.us/spanish/shigf.htm
http://www.seimc.es/control/revi_Bacte/Rshigella.htm
http://www.vdh.state.va.us/spanish/botulismf.htm
http://www.jic.bbsre.ar.uk/science/molmicro/kpneu.html
http://www.delpaciente.com/htm/0273.htm
http://viarural.com.ar/viarural.com.ar/biomarketprincipal/calend
ariossanitarios/bovinos/infecciosas/clostridium/defaul.html
http://www.monografias.com/trabajos/bacterias/bacterias.shtm#arriba
http://www.hcg.udg.mx/pages/nuevo/servicio/coloyrecto/ligas.htm
http://www.facmed.unam.mx/bmnd/plm/productos/586.htm
http://www.udh.state.va.us/spanish/ecolif.htm
http://www.monografias.com/trabajos/bacilosgram/bacilosgram.shtm/
http://escuela.med.pue.cl/paginas/publicaciones/AnatomiaPatolog
iaca/02Respiratorio/2neumonia.html
http://www.medconce.cl/revista/1997/1997num2/clinica.htm
http://www.vdh.state.va.us/spanish/typhoidf.htm
174
http://www.vdh.state.va.us/spanish/salmf.htm
http://www.run.itesm.mx/especiales/citela/documentos/program
a/Casta(main)-files/modul-.htm
http://www.uea.ac.uk/menu/study_and_research/grad/pgprospe
ctus_2002/schools/institute_of_research.html
http://www.quimica.matrix.com.br/images/salmonella_foto.jpg
175