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UNIDAD I
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Perodo de ignorancia
(Antes de 1800)
1.1CONCEPTO
Hace miles de aos cuando el hombre pasa de ser nmada a sedentario, una de sus principales
preocupaciones fue contar con un abastecimiento seguro de alimentos y para lograr ese objetivo
empieza a almacenarlos. Este mtodo con el cual trataba de mantener la existencia constante de
alimentos debi causarle sorpresas y desilusiones por los procesos que siglos ms tarde conocera
con el nombre de putrefaccin y fermentacin. (48)
Los cambios que se producen en la fermentacin de diversos alimentos fueron pasando a formar
parte de costumbres alimenticias de los pueblos antiguos. Como ya en el siglo XVII a.C. los
sumerios producan una cerveza derivada de la cebada y otros cereales, era de esperarse que antes
apareciera otra bebida fermentada a partir de agua y miel. El origen del vino se remota
posiblemente antes del siglo XII a.C., pues ya en el siglo XI antes de nuestra Era el Faran Ramss
III haba mandado plantar grandes viedos sobre Egipto. (48)
Casi a la par de la aparicin de la agricultura, aparece la elaboracin del pan, la cual involucra una
fermentacin por levaduras. De igual modo el yogurt y el queso requieren de la fermentacin de la
leche. De esta manera, durante muchos siglos la humanidad consumi alimentos transformados por
procesos de fermentacin sin llegar a tener idea de los agentes que producan los cambios de color,
Para el ao 1176 los alquimistas Salernus y Albertus Magnus ya hacan destilaciones para la
obtencin del alcohol. A pesar de todo esto, an no tenan idea alguna de los agentes de
transformacin ni de los productos que se originaban. Hoy en da, sabemos que la fermentacin
implica una serie de reacciones xido-reduccin, gracias a las cuales los microorganismos obtienen
su energa en condiciones anaerobias. Los anaerobios facultativos aprovechan la presencia de
oxgeno para oxidar los productos de la fase anaerobia. Pero para llegar a la comprensin de estos
conocimientos tuvieron que pasar siglos. (48)
Fig. 2 Libavius
Fig. 3 Johan Joachim Becher
Un siglo despus el qumico Becher (Fig.3) expresa
tales diferencias como procesos diferentes que
empeoran o mejoran el sustrato. (48)
Fig.4 Helmont
Fig.6 Microscopio
Fig. 7 Sthal
En el siglo XVII, se
desarrollan diferentes teoras que se acercaban a la
realidad como la de Sthal (Fig.7), que quera
explicar la fermentacin como un proceso mecnico
(48)
:
La palabra microbiologa esta formada por tres vocablos, micro, que viene del griego micros,
pequeo; bio, que proviene del griego bios, que significa vida y loga de logos, cuyo
significado se refiere al estudio o tratado. Por lo tanto Microbiologa Industrial es la ciencia que
estudia los microorganismos y sus actividades dedicadas a la transformacin de materias primas
(sustratos) en productos o subproductos de inters industrial con propsitos tiles y bien definidos.
(48)
Mitscherlinch (Fig.8)
y Helmholtz (Fig. 9)
en el siglo XIX
separan al agente
fermentativo del vino
por filtracin y
reconocieron que se
trataba de una
levadura. La
importancia de este
hecho es que por fin
se contaba con un
mtodo, base de la
investigacin y
desarrollo cientfico.
(48)
Fig. 8 Mitscherlinch
Fig. 9 Helmholtz
Fig.10 Luis Pasteur
Los avances cientficos de finales del siglo XIX y principios del XX, permiten en 1928, a un
mdico ingls, el profesor Fleming (Fig.12), observar como la contaminacin por un hongo en un
cultivo de estafilococos detena la multiplicacin de este, segregaba una sustancia no solo capaz de
detener el crecimiento de los estafilococos, sino tambin de un gran nmero de bacterias, este
nuevo producto fue llamado penicilina (Fig. 13) y d principio a la industria de los antibiticos. (48)
No solo los antibiticos y el alcohol se producen por fermentacin. Desde un punto de vista tcnico
se suele definir la fermentacin, como un conjunto de operaciones que permiten cultivar
microorganismos y controlar sus actividades biosintticas, produccin de biomasa, enzimas,
metabolitos y otras molculas orgnicas. (48)
Tambin se puede definir como un proceso metablico en el cual ocurren cambios qumicos en un
sustrato orgnico por la actividad de enzimas secretadas por los microorganismos u otras clulas.
Tales cambios dependen del tipo de organismo relacionado, la clase del sustrato y otros factores
(48)
como el pH, temperatura, suministro de oxgeno, etc.
Con respecto al suministro de oxgeno se han llegado a distinguir dos tipos de fermentacin:
Oxidativa: que equivale a la respiracin por la cual la desintegracin del sustrato se acompaa de
oxgeno, que acta como aceptor de hidrgeno. Como ejemplo tenemos la fermentacin ctrica y
glucnica. (40)
Anaerobia: en la cual el oxgeno atmosfrico no forma parte del proceso sino que otras sustancias
como el cido pirvico y los aldehdos funcionan como aceptores de hidrgeno. La produccin de
alcohol por fermentacin as como la de cido lctico son ejemplos de este tipo de proceso. (40)
1.1.1CIENCIASDEAPOYO
Microbiologa general.
Biotecnologa.
Tecnologa de alimentos.
Bioqumica.
Matemticas.
Agronoma.
Qumica.
Fisicoqumica.
Medicina.
Economa.
Taxonoma.
Petroqumica.
Ecologa, entre otras.
1.1.2PERSPECTIVASYAPLICACIONESDELAMICROBIOLOGIAINDUSTRIAL
Muchas sustancias muy valiosas econmicamente, son productos del metabolismo microbiano. Un
ejemplo importante son los antibiticos. En 1975, las cifras del U.S. Tariff Comisin, sobre
produccin y venta de qumicos medicinales, demostraron que en EE.UU. se elaboraron 8.5
millones de kilogramos de antibiticos a granel, es importante mencionar que la cantidad no
incluye los farmacuticos destinados a pacientes (pldoras, cpsulas, tabletas y otros tipos de
presentaciones) y solo en la produccin de penicilina fu de tres millones de kilogramos y dos
millones de tetraciclnas. (40)
Los antibiticos son nicamente uno de los productos de los microorganismos que tienen gran
importancia industrial. Las buenas marchas de las industrias de las bebidas del vino dependen de la
El aislamiento de los nuevos microorganismos del ambiente marino y de otros hbitats naturales
tiene orgen en los descubrimientos de nuevos compuestos biolgicos con aplicaciones teraputicas
como es el caso de la ciclosporina A, que son un grupo de oligopptidos producidos por el hongo
Tolypocladium inflamatum que tienen propiedades antifngicas, antiinflamatorias e
inmunosupresoras. (25)
Las ciclosporinas se producen en una fermentacin sumergida de 15 das a partir de un medio que
contienen (25):
Glucosa 4%
Agua 1%
Sales minerales 95%
Desarrollo de la Bioingeniera
La tecnologa de los cultivos mixtos se aplica a procesos de ciertos microorganismos para funciones
adecuadas desde el nacimiento, pero que todava tenemos que aprender mucho acerca de la
transformacin secuencial de los sustratos sobre los que actan esas poblaciones ptimas. (40)
Los usos industriales de las enzimas se han incrementado mucho por el desarrollo de tecnologa de
las enzimas inmovilizadas. (35)
En esta tcnica la enzima se fija (inmoviliza) en una matriz insoluble; el sustrato se deja pasar sobre
la capa de enzima inmvil, y durante ese tiempo el sustrato es atacado por la enzima. Esta tcnica
presenta perspectivas interesantes como (35):
Estas son solo algunas posibilidades en un futuro no lejano. Sin embargo es relativamente seguro
predecir que todava la potencia de los microorganismos como fbricas qumicas no haya
concluido. (35)
Insecticidas microbianos
La produccin de insecticidas de origen microbiolgico es de considerable inters, el nfasis aqu
no es la produccin de productos qumicos activos contra insecticidas, sino en la utilizacin de
microorganismos que son por si mismos patgenos para los insectos. En tales aplicaciones, los
microorganismos vivos deben ser dispersados en el ambiente. (40)
Antes de que puedan ser utilizadas como insecticidas preparaciones vivas, deben satisfacerse cuatro
requerimientos especficos (40):
Pueden ser utilizados como insecticidas: bacterias, virus, hongos o protozoos. Se producen
comercialmente en fermentacin a gran escala, o sobre insectos hospedadores. Se conocen cerca de
400 hongos que atacan insectos, son relativamente inespecficos en cuanto a su rango de huspedes
pero tambin son menos efectivos que otros agentes. (40)
(40)
Tabla 1. Los hongos que actualmente son estudiados se resumen a continuacin :
Muchos de estos hongos pueden ser cultivados en placas abiertas con medio semislido, como
granos de arroz. (40)
Se han descrito ms de 650 tipos de virus de insectos. Estos virus ofrecen la mejor posibilidad para
uso prctico como insecticidas y varios virus ya han sido comercializados, pero una de las
desventajas para los virus es que la produccin a gran escala debe ser cultivada en insectos vivos,
haciendo difcil el salto de escala. (40)
Biochips
Los biofiltros han sido utilizados para la eliminacin de olores de corrientes de aire que se originan
del tratamiento de las plantas de residuos, establos de animales, molinos de papel y plantas
productoras de tabaco, chocolate y caf. (40)
Los gases fuertemente olorosos que se desprenden, se purifican y humedecen mediante el paso a
travs de lechos que contienen bolas de plstico; los microorganismos que crecen sobre las bolas
son responsables de la eliminacin de la mayor parte del olor. Durante el tiempo que el gas pasa a
travs del lecho, los olores son absorbidos y metabolizados a biomasa y CO2. (40)
Los biofiltros tambin pueden ser utilizados en el futuro para purificar el aire de las instalaciones de
(40)
fermentacin a gran escala.
Sustancias saborizantes
Los microorganismos producen sustancias con inherentes propiedades saborizantes que tiene gran
importancia en la fabricacin de alimentos y bebidas. Intensos estudios sobre el uso de los
microorganismos en la produccin de alimentos y en la gentica y bioqumica de la produccin del
aroma muestran que entre varias bebidas alcohlicas han sido identificadas 400 sustancias
diferentes; de stas, 118 eran steres, 80 cidos alifticos y aromticos, 41 compuestos carbonilo y
38 alcoholes alifticos y aromticos. Adems se pueden producir por fermentacin un conjunto de
agentes saborizantes especficos; son producidos en procesos separados de fermentacin y luego ser
utilizados como suplementos para aumentar el sabor de los alimentos preparados. (40)
Muchos de los usos en los que se pueden utilizar hongos se pueden considerar tradicionales (por
ejemplo, la fabricacin de cerveza y vino) tales tecnologas han existido desde la antigedad, sin
embargo, la biotecnologa fngica moderna est teniendo un marcado impacto en los llamados
procesos tradicionales. Nuestra capacidad de utilizar hongos en biotecnologa se ha extendido de
modo espectacular en los ltimos aos; esto ha resultado de la aplicacin de los nuevos
conocimientos sobre gentica molecular de hongos. (40)
Los anlogos sintticos de la Fumagilina han sido recientemente evaluados para el tratamiento de
cnceres; la Fumagilina, es un metabolito antibacteriano producido por Aspergillus fumigatus, los
anlogos sintticos de este compuesto pueden inhibir un conjunto de tumores, sin causar efectos
secundarios. (40)
Una de las mejoras mdicas proporcionadas por el uso de productos fngicos es la Mevinolina; este
compuesto se utiliza para disminuir los niveles de colesterol en sangre; originalmente fue producido
en caldos de fermentacin de Aspergillus terreus, pero recientemente ha sido sintetizado. (40)
Es posible que las levaduras tambin alteren nuestros hbitos alimenticios en el futuro.
El Kfir, una bebida fermentada espumosa poco corriente que es originaria de los Balcanes, ser
hacia lo que tienda el yogur en el futuro. El kfir se produce aadiendo una mezcla especial de
bacterias y levaduras a la leche; algunas de las bacterias son iguales a las que se utilizan en la
fermentacin normal del yogurt, mientras que otras especies producen una goma viscosa que une a
los microorganismos formando una gelatina grumosa, esto permite separar los grumos de kfir de la
leche despus de la fermentacin. (3)
El Koumiss, una bebida de leche espumosa puede ser fermentada para producir bebidas de
diferentes grados de alcohol. El primer da del proceso es dulce, mientras que despus de tres das
Sin duda seremos testigos de ms aplicaciones no esperadas e inusuales de los hongos en el futuro,
lo que nos permitir, resolver los problemas que existen y los que an no se conocen con los cuales
tendr que enfrentarse la humanidad en el futuro. (40)
En 1973, genes ajenos a E. coli le fueron incorporados y se demostr que era posible expresar
informacin gentica sinttica y/o diferente del organismo receptor, naciendo as la Ingeniera
Gentica y los productos recombinantes. (40)
Algunas de las recomendaciones y conclusiones de las industrias que se mantienen operando con
xito, en las actuales condiciones de globalizacin mundial y crisis econmica interna son (40):
1.1.3.1CARACTERSTICASDELOSMICROORGANISMOSDEINTERSINDUSTRIAL
Aquellos microorganismos que en el medio de seleccin; d resultado positivo del metabolito que
se busca, halo claro cidos orgnicos y aminocidos, etc., se deben separar de los dems
microorganismos presentes transfiriendo cada cepa, por aislamiento por estra cruzada a una placa
con medio de cultivo adecuado al tipo de microorganismo. (25)
Es importante remarcar que deben ser aisladas todas las cepas que hayan dado positivo el resultado
de seleccin primaria, sin importar si el tamao del halo fue pequeo; ello no representa por fuerza
que es un mal productor, ya que la seleccin de los mejores productores se realiza en medio lquido,
que son condiciones ms cercanas a las que se habrn de tener para la produccin. Lo anterior es
debido a que no siempre se comporta un microorganismo de la misma manera al cultivarse en
medio slido que en medio lquido. Una vez aisladas las cepas a estudiar, se les identifica con algn
nombre en clave que permitir su estudio sistematizado. (25)
3. Deben tener un crecimiento rpido y vigoroso, una vez que se han inoculado los tanques
semilla.
7. La cepa debe ser resistente a alteraciones posibles en las condiciones ambientales, debido a
contaminaciones microbianas.
10. El microorganismo debe de ser de fcil manipulacin, de tal forma que se le pueda someter
a programas de mutacin, al mismo tiempo que debe tener la capacidad de corregir algunos
cambios genticos propiciados por la presencia de agentes mutagnicos.
1.1.3.2FUENTES DEAISLAMIENTO
(25)
Las principales fuentes de obtencin de microorganismos de inters industrial
Por ltimo una fuente de aislamiento que contiene gran diversidad de microorganismos productores
de muchos metabolitos distintos, es el suelo de regiones en que hay una gran variedad de vida, tales
como: bosques, selvas y montes. (25)
Desarrollo experimental
De la dilucin apropiada se puede sembrar por vaciado (1 ml) o por espatulado (0.1 ml) en una caja
de Petri conteniendo medio adecuado para el aislamiento. (25)
Tcnica de imprenta
Se usa la muestra de suelo tamizado con la muestra de fruta macerada. Para sembrar se usa una
esponja cilndrica de 7.5 mm. de dimetro por 3 o 4 cm. de longitud. Esta esponja se humedece
ligeramente por uno de sus extremos y con este extremo se toca suavemente el suelo o la fruta
macerada. Inmediatamente se presiona la imprenta sobre la superficie de agar del medio
seleccionado, previamente vaciado en cajas de Petri y enfriados. Se debe tocar el agar
repetidamente de una serie de por 10 menos tres placas, sin volver a tocar la fuente de aislamiento.
(25)
Cultivos de enriquecimiento
Se preparan una serie de cuatro matraces de 250 ml con 50 ml de medio mineral de aislamiento
correspondiente adicionado del sustrato sobre el cual se desea que el microorganismo crezca. Por
ejemplo, paja de trigo, bagazo de caa, residuos quitinosos, metanol, petrleo, etc. (25)
Unos de los matraces se inocula con 1 g de suelo tamizado con 5 ml de la fruta macerada. El matraz
se incuba a 28, 37 u 80 C. Cada 12 o 24 hrs. debern hacerse observaciones al microscopio de la
poblacin de microorganismos creciendo en el matraz. Visualmente deber evaluarse el consumo
de la fuente de carbono En caso de ser necesario se debe ajustar el pH del medio al valor inicial,
con adicin de hidrxido de amonio o cido clorhdrico. Despus de 48 a 72 hrs. se transfiere una
alcuota de ste matraz a un segundo matraz con medio de cultivo de la misma composicin
incubndolo en las mismas condiciones que el primero y haciendo iguales observaciones. De sta
forma se hace la 3era. y 4ta. transferencia. Cuando el matraz de la 4ta. transferencia cumpla de 36 a
48 hrs. se harn diluciones decimales (hasta 10-8), y se usarn stas diluciones para sembrar en
medio con agar en placas. Las cajas sembradas se incubarn a la misma temperatura a la que se
hizo el enriquecimiento y se continuar con los pasos indicados para purificacin y conservacin de
las cepas. (25)
Al final de cada uno de stos procedimientos se siembran seis cajas de Petri como mnimo. Las
cajas se incuban despus de 28 o 37 C. y se hacen observaciones, y cada 12 o 24 hrs. hasta detectar
crecimiento y produccin para proseguir con el aislamiento; de aquellas placas con colonias
seleccionadas se toma una asada de la, o las colonias y se siembra por estra cruzada en placas que
contengan la misma composicin de medio o cualquier otro medio para realizar las cepas. Debern
hacerse observaciones de la morfologa colonial y microscpica con objeto de establecer la pureza
de la cepa. El siguiente paso ser sembrar las cepas aisladas en medio de conservacin en tubos con
medio de agar inclinado, guardando stas cepas a 4C., una vez que se observa crecimiento en los
tubos con agar inclinado. (25)
1. Para arrastrar unas cuantas clulas fuera del margen de la gota de cultivo levadura.
3. Para transportar cada una de estas clulas simples a una gota de mosto estril.
Estas operaciones resultan posibles, porque cada clula se halla rodeada por una diminuta gota de
lquido que se adhiere a la superficie del cubreobjetos por atraccin capilar, igualmente por
atraccin capilar el extremo de la aguja de vidrio se puede utilizar para arrastrar la gota con su
nica clula a cualquier punto deseado del cubreobjetos. Habindose depositado una sola clula en
cada una de las gotas de mosto estril, las agujas se apartan de la cmara, las mangas laterales se
taponan con algodn estril y la cmara se incuba durante 24 a 48 hrs. a la temperatura
conveniente. La inspeccin microscpica mostrar despus si los cultivos han crecido a
satisfaccin, y cualquiera de ellos se podr separar absorbindole en el extremo de una pequea tira
de papel de filtro estril, que entonces se inocula en seguida en mosto estril, obtenindose as el
cultivo monocelular deseado. (25)
Productos txicos.
Antibiticos.
Actividades enzimticas indeseables.
Color, olor y textura del producto final.
Los cultivos de microorganismos presentes en fuentes heterogneas de aislamiento, como son las
fuentes naturales, es en algunas ocasiones difcil separar al microorganismo de otras poblaciones
presentes en el cultivo, pero conociendo las necesidades nutricionales que se buscan as como de
otras caractersticas, se puede llegar al aislamiento de ste. (25)
1.1.3.3SELECCINDEMICROORGANISMOS
1.1.3.3.1SELECCINPRIMARIA
Los principales pasos a seguir en la seleccin primaria de los microorganismos son (25):
1.1.3.3.2SELECCINSECUNDARIA
1.1.4MTODOSDECONSERVACIN
Cualitativos
Las cepas pueden ser almacenadas a corto plazo (semanas o meses) con medios relativamente
fciles y de bajo costo. (25)
Resiembra peridica .
Aceite mineral.
Agua destilada. a corto plazo
Tierra estril.
Slica gel.
Papel filtro.
Perlas de porcelana.
Cuantitativos
Las cepas son almacenadas por tiempos prolongados, requieren de sustancias crioprotectoras
(aseguran la supervivencia de los cultivos) y tienen alto costo de mantenimiento. (25)
Liofilizacin.
Criopreservacin. a largo plazo
Congelacin.
Nitrgeno lquido.
1.1.4.1RESIEMBRAPERIDICA
El intervalo entre cada transferencia vara con el microorganismo. Algunas bacterias pueden ser
transferidas peridicamente durante solo algunas semanas o meses. La mayora de los hongos
pueden crecer en agar papa o en agar malta. El periodo entre la resiembra vara dependiendo del
hongo, para algunos es de 2 a 4 semanas o de 2 a 4 meses; en cuanto a otros pueden sobrevivir 12
meses sin transferirse. (25)
Los medios diferenciales selectivos son los preferidos, porque disminuyen el metabolismo de los
microorganismos y por lo tanto prolongan el periodo entre las transferencias. Algunas bacterias
requieren un medio complejo para su crecimiento o tambin necesitan de estos compuestos para
preservar determinadas caractersticas fisiolgicas. (25)
Ventajas (25):
Bajo costo.
No requiere equipo especializado.
Su manejo es sencillo.
Desventajas (25):
El equipo empleado, el cual repercute en los costos para mantener la cepa en una coleccin
microbiana.
Prdida de las caractersticas morfolgicas o fisiolgicas.
Seleccin de clulas atpicas (mutantes).
Riesgo de contaminacin.
Supervisin especializada.
No es recomendada para mantener cepas de microorganismos por periodos largos de
tiempo.
1.1.4.2SUELO ESTRIL
La tierra es un reservorio natural para muchos microorganismos y pueden ser recuperados despus
de almacenamiento prolongado. La tierra estril ha sido usada para inducir esporulacin de bacilos
aerobios y anaerobios. (8)
Ventajas (8):
Estabilidad en el cultivo.
Inculos sucesivos de un mismo tubo.
Bajo costo de material y mano de obra.
Buena sobrevivencia a causa de su bajo promedio metablico.
Desventajas (8):
Su cuantificacin es difcil.
1.1.4.3LIOFILIZACIN
Este es uno de los mtodos ms eficaces en la preservacin a largo plazo de los cultivos de
microorganismos. (8)
Son requeridos agentes crioprotectores para resultados ptimos cuando se liofilizan los
microorganismos para conservacin durante largo tiempo. Los agentes crioprotectores ms
comnmente usados son el polvo de leche desnatada o la sacarosa. (8)
La liofilizacin es particularmente til cuando los cultivos conservados no necesitan ser trasladados
a superficies de agua antes de ser transportados; adems no se necesitan de refrigerar los cultivos
liofilizados. (8)
Procedimiento (8):
Hacer una mezcla homognea del agente crioprotector y la suspensin del microorganismo.
Trasladar 0.2 ml de la mezcla anterior a cada cultivo, se agita suavemente, y se deja que la
suspensin de clulas se congele rpidamente en el bao.
Mantener la temperatura del bao a -40C durante 90 a 120 minutos.
Despus de 2 horas se eleva la temperatura del bao a temperatura ambiente.
Ventajas (8):
Desventajas (8):
1.1.4.4PERLAS DEPORCELANA
Este procedimiento fue ideado por J.Leiderberg y es utilizado para la mayora de las especies de
bacterias. El procedimiento es el siguiente (8):
1.1.4.5OTROS
ACEITE MINERAL
Muchos microorganismos pueden ser conservados por meses o aos en un medio relativamente
fcil y simple que es el de inmersin en aceite mineral. La contaminacin de cultivos cuando este
mtodo es utilizado ocurre cuando el aceite es esterilizado de manera incorrecta. Para un adecuado
crecimiento, se debe colocar aspticamente el aceite mineral estril sobre la superficie del cultivo a
una altura aproximada de 1 a 2 cm, esto impide la deshidratacin, reduce la actividad metablica,
as como la velocidad de crecimiento del microorganismo, debido a la reduccin de oxgeno. Se
guardan los cultivos cubiertos con aceite mineral en una posicin vertical, en un refrigerador a 4C.
Ventajas (8):
Bajo costo.
No requiere equipo especializado.
Sobrevivencia de especies sensibles a los dems mtodos.
Desventajas (8):
Riesgo de contaminacin.
Accidentes de trabajo.
Perdida de cultivo.
Espacios grandes para el almacenamiento.
AGUA DESTILADA
Muchos microorganismos mueren rpidamente cuando son suspendidos en agua destilada. Sin
embargo los cultivos de Pseudomonas solacearum en agua destilada sobreviven durante ms de 10
aos a temperatura ambiente. Por este mtodo no se detectan cambios genticos. (8)
Ventajas (8):
Desventajas (8):
SILICA GEL
Perkins fue el primero que uso el gel de slice para conservar hongos y para muchos otros
microorganismos. El procedimiento es simple y no requiere un equipo especial. El procedimiento
(8)
es el siguiente :
3. Se preparan tubos con una suspensin de agua en plano inc1inado, usando de 1 a 2 ml de leche
desnatada al 10 %.
4. Se aade 0.5 ml de suspensin a cada tubo del gel de slice para reducir al mximo el color, y se
sumerge el tubo en un bao de hielo.
5. Se agitan para aflojar los granos de gel de slice. Se enfran a 25C y se almacenan en
recipientes cerrados con desecantes, a temperatura ambiente por una semana.
Ventajas (8):
Es de bajo costo.
No requiere de un equipo especial.
Su estabilidad es elevada.
De un mismo tubo se pueden hacer inculos sucesivos.
Ventajas (8):
Fcil manipulacin.
Poco espacio de almacenamiento, ideal para envos por correo.
Bajo costo.
Desventajas (8):
CRIOPRESERVADORES
Ventajas (8):
Los medios de cultivo son mantenidos en condiciones estables en periodos muy largos.
Los cultivos pueden ser completamente sellados, libres de cualquier contaminacin.
Desventajas (8):
Tipo de microorganismo.
El tamao y la complejidad son importantes para determinar la capacidad del organismo
para sobrevivir.
Edad del cultivo.
Puede tener un efecto profundo en la fase de sobrevivencia, una clula en la fase
estacionaria es ms resistente.
Concentracin de clulas.
NITROGENO LQUIDO(8)
Es relativamente caro.
Requiere vigilancia constante.
Procedimiento (8):
Conservacin de cepas
(8)
Objetivo de la conservacin de cepas Fig. 20 Refrigeradores donde se guardan las cepas.
Criterios de conservacin
Habilidad de reproduccin
Los medios cuantitativos, tales como unidades formadoras de colonias o unidades que forman
placas, proveen mucha informacin acerca de la calidad de la tcnica de conservacin. Si estos
ensayos son hechos antes y despus del almacenamiento, proporciona un medio objetivo para
seleccionar el mtodo ptimo. La lesin es definida como dao subletal o reparable, la mutacin es
un cambio permanente, algunas clulas lesionadas ya no pueden desarrollarse en medios mnimos,
pero pueden formar colonias en medios completos, tal como es el agar de soya tripticasa, en otros
casos las clulas requieren nicamente suplementacin con aspartato o pruvato para desarrollarse.
(8)
Propiedades funcionales
Los ensayos de viabilidad proporcionan medios sensibles y cuantitativos de control de calidad que
pueden ser usados para predecir cuando el cultivo debera ser reprocesado. (8)