Cultivo de Tejidos Vegetales (HISTORIA)

ROGER J. GAUTItERET

Quai aux Fleurs, 75004, Pars, Francia

Origen del concepto

La historia de cultivo de tejidos vegetales se inicia en 1838-1839, cuando Schleiden
(1838) y Sehwann (1839) establecieron independientemente la base de la teora
celular e implcitamente postularon que la clula es capaz de tener autonoma e
incluso que es totipotente. Esto es obvio en el caso de los huevos y las esporas que
son capaces de transformarse en organismos completos. Pero Schleiden y Schwann
no tenan evidencia experimental para demostrar que, las clulas somticas tambin
son capaces de esto. Casi 130 aos se requeran hasta que la totipotencia celular
pudiera ser demostrada solamente despus de una bsqueda muy larga y tortuosa.

Trcul (1853) describe un proceso de cicatrizacin de heridas y la formacin de callos

que afecta a numerosas especies y Vchting (1878) report muchos casos de
desarrollo de callos; algunos de ellos eran muy gruesos. Dos aos ms tarde, Sachs
(1880-1882) resume los resultados obtenidos en el callo y la cicatrizacin de heridas
y sugiri que las plantas contienen sustancias formadoras de rganos que se
distribuyen polarmente. Esto fue propuesto nuevamente por Wiesner (1884) que
dirigi la atencin sobre el fenmeno de la transformacin de las clulas inactivas en
clulas que se dividen en la cicatrizacin de heridas.
Primer enfoque
Un enfoque importante de cultivo de tejidos fue descubierto por Rechinger (1893)
que intent determinar experimentalmente el lmite de la divisibilidad de la planta que
permite la proliferacin de tejido. Utiliz brotes aislados, cortes de races, tallos y
otros materiales. Los explantes se colocaron en la superficie de arena humedecida
con agua del grifo. Concluy que desarrollaran trozos ms gruesos de 1.5 mm. Pero
l no utiliz nutrientes o condiciones aspticas; sus cultivos apenas podan ser
llamados cultivos de tejidos. Sin embargo, los experimentos de Rechinger fueron
influenciados por un concepto relacionado con los principios de cultivo de tejidos; l
era un verdadero pionero en este campo.

Los principios de cultivo celular fueron claramente formulados nueve aos ms

tarde por Haberlandt (1902). Donde Rechinger haba tratado de determinar los
lmites de la divisibilidad de materiales vegetales, Haberlandt comenz directamente
de la teora celular y asume que no haba lmites de divisibilidad. Por lo tanto, opt
por trabajar con clulas individuales y solucin de Knop, sacarosa, asparagina y
peptona servido como nutrientes. Las clulas estaban todava vivos despus de 20 a
27 das. Exhibieron en los mejores casos un aumento de once veces en el volumen
original pero sin divisin. Los resultados fueron por lo tanto decepcionante. Los
resultados fueron por lo tanto decepcionantes.

Haberlandt se volvi luego hacia un enfoque indirecto de la cultura de tejidos

similar al trabajo de Rechinger, pero a un nivel mucho ms avanzado. Se llev a
cabo muchos experimentos que fueron interpretados cuidadosamente, y fue el
precursor de las investigaciones modernas (Haber-Landt, 1913, 1922). El uso de
piezas de tubrculo de patata madura, descubri que "la divisin celular se produjo
en discos de tejido pequeas y delgadas casi sin excepcin cuando los discos
contenan un fragmento de haz vascular." La precisin de estos y otros experimentos
es muy impresionante y Haberlandt lleg a la conclusin lgica de que "El leptoma
(vaso criboso) secretara uno o ms estmulos que se difunden a travs del tejido de
almacenamiento adyacente".

Si Haberlandt habiese continuado estas investigaciones y utilizado en lugar de

tejido de patata algunos otros materiales comunes tales como el sauce o zanahoria,
que ahora se sabe que proliferan sin sustancias de crecimiento, se habra obtenido
los primeros cultivos de tejidos. Haherlandt parece haber estado obsesionado por la
teora celular y no sospechaba que los experimentos sobre el callo podra ser un
paso hacia el tejido e incluso cultivos celulares.

Simon (1908) observ el desarrollo de segmentos de tallo de lamo que

produjeron callos, races y brotes. La base del cultivo de callos e incluso de
micropropagacin fue as estab-cado. Sin embargo, sus culturas no eran asptica;
Por lo tanto, se ignoraron sus resultados.

El primer cultivo de tejidos: Utilizacin de Auxina

La historia de cultivo de tejidos empez en 1934. Como muchos

otros, intent
cultivar las clulas aisladas y las puntas de las races sin obtener cultivos de tejidos
(Gautheret, 1932, 1933). Despus de estos fracasos, di vuelta hacia al tejido
participar en la cicatrizacin de heridas. Sola primera piezas de corte cambium de
los rboles, especialmente Acer pseudoplatanus, Sambucus nigra y capraea Salix.
Los intentos preliminares con medio lquido fallaron completamente. Ms tarde, los
explantes se colocaron en la superficie del medio solidificado con agar. Para mi gran
sorpresa cuando los inspecciono unos dos meses ms tarde, la superficie de los
explantes fue cubierto con callos blancos que parecan muy saludable. El examen de
estos callos con un microscopio, pude reconocer las clulas turgentes y muchos de
ellos estaban dividiendo (Gautheret, 1934). Mis resultados fueron verificados
inmediatamente en Italia por Gioelli (1938). Por desgracia, la actividad de mis cultivos
ces despus de unos seis meses. Ellos fueron claramente afectadas por una
deficiencia.

En este momento, Kgl et al. (1934) justo haba establecido que la sustancia de
crecimiento descubierto por Went (1926) fue el cido indoleacetico y Snow (1935)
demostraron que esta sustancia crecimiento fue capaz de estimular la actividad
cambial. Gracias a cido indoleacetico, la proliferacin de cultivos de tejidos mis
cambium se mejor y subcultivos se hizo posible, a pesar de su actividad, sin
embargo, ces despus de 18 meses. Este xito incompleta hecho blanca realizar
ms estudios. Y Nobcourt, un patlogo de plantas francs, recordado resultados de
Rehwald con rodajas de zanahoria. Por ltimo, la posibilidad de cultivar tejidos
vegetales para un tiempo ilimitado se anunci casi simultneamente por White
(1939a), Nobeourt (1939) y yo mismo (Gautheret, 1939).
White haba usado tejidos de tumores producidos espontneamente por el
hbrido Nicotiana glauca, mientras que Nobcourt y yo habamos trabajado con
tejidos de zanahoria. As termin una larga lista de fracasos que sin embargo haba
preparado el camino para el xito final . Este xito fue anunciado unos meses antes
del comienzo de la Segunda Guerra Mundial. Y durante seis aos, cientficos
estadounidenses y franceses trabajaron sin conocimiento de sus resultados mutuos.
A pesar de las dificultades encontradas durante la guerra, pude recibir algunos
colaboradores en mi laboratorio y uno de ellos, Georges Morel, fue particularmente
capaz y entusiasta. Mientras trabajaba en rganos carnosos, especialmente
achicoria, alcachofa de Jerusaln y Brassica napus, Morel estableci cepas de
lianas, herbceas y rboles. Al mismo tiempo, volv a mi primer material y logr
cultivar tejidos de Salix y Jacquiot (1964) aislaron cepas de tejidos de muchos
rboles.

La variabilidad de los cultivos de tejidos: Energia

Observando cuidadosamente el ajuste de las cepas de zanahoria y tejidos
scorzonera, tuve la oportunidad de descubrir algunas variaciones en su sensibilidad
con respecto a las auxinas (Gautheret, 1942c). Los explantes iniciales muestran
dbiles respuestas a la accin estimulante del crecimiento de esta sustancia.
Despus de unos subcultivos, su sensibilidad aument considerablemente y se
mantuvo en un nivel alto. Esto se explica por el hecho de que la multiplicacin de las
clulas parenquimatosas produce pequeas clulas que responden ms
intensamente con respecto a la auxina. Pero despus de muchas transferencias, en
algunos casos, not un nfasis en el crecimiento y una desaparicin concurrente de
la sensibilidad celular con respecto a las auxinas y su capacidad para formar
rganos, clulas diferenciadas e incluso productos secundarios. Para este artefacto
comn, propuse el trmino de "accoutumance" que fue traducido como "habituation"
en ingls. Ms tarde, observ que la prdida de reaccin con respecto a la auxina era
el aspecto principal de la "accoutumancia" y propuse reemplazar esta palabra por
"anergia", procedente del griego (falta y accin).
Esta curiosa transformacin fue verificada por Henderson (1954) y muchos otros.
En los Estados Unidos, White continu sus intentos con tejidos tumorales y con
la colaboracin de Braun (White y Braun, 1941, 1942) aisl las cepas de la corona
Tejidos de las vesculas. Despus de la guerra, otros patlogos estadounidenses
se interesaron en el cultivo de tejidos vegetales. Hildebrandt (1951) cepas aisladas
de tejidos de la vescula biliar de Tagetes erecta y Chrysanthemum frutescens,
mientras que Black (1946) y Nickell (1952) cultivaron tejidos del tumor del virus de la
herida de Rumex acetosa.

Comparacin de los resultados americano y francs mostr claramente que

tejidos normales requieren auxina mientras que los tejidos tumorales y energizados
pueden ser cultivadas sin sustancias de crecimiento. En mi laboratorio, y Kulescha
Gautheret (1948) descubrieron las razones de esta diferencia; Los tejidos normales
que se mantienen in vitro producen una concentracin insignificante de auxina,
mientras que los tejidos tumorales sintetiza una cantidad bastante importante de esta
sustancia de crecimiento. La misma propiedad se ve con tejidos energizados.
Cuando las condiciones para el uso de auxina para cultivo de tejidos se conocen
correctamente, cientficos americanos lograron cultivos de tejidos normales. El primer
xito se obtuvo por Ball (1950). Sin embargo, este xito no resolvi los problemas
integrales de cultivo de tejidos. Los medios que contienen auxinas inducen la
proliferacin de la cambium y el desarrollo de los tejidos capaces de diferenciarse en
el cambium. Este fue especialmente el caso de muchos tejidos dicotiledneas y
gimnospermas. Por otro lado, tejidos monocotiledneas y pteridophyte crecieron muy
mal con la auxina. La Rue (1947) inici cultivos de endospermo Zea mays y
subcultivos obtenidos. Esto llev al primer intento exitoso para cultivar tejidos
monocotiledneas.

Poderosa actividad de leche de coco: Descubrimiento de citoquininas

Alrededor de 1940, el famoso genetista Blakeslee trat de obtener hbridos entre
varias especies de Datura. La fertilizacin cruzada tuvo xito, pero los embriones
hbridos murieron despus de un desarrollo muy leve. Blakeslee supone que rodea el
vulo era txico y pens que los embriones deben ser cultivadas fuera de su entorno
natural. Sus colaboradores Conklin y Van Overbeek sugirieron que un medio lquido
tales como la leche de coco sera un buen medio para el cultivo de embriones. Las
pruebas experimentales, demostr la validez de su hiptesis y Blakeslee estaba
encantada de obtener pleno desarrollo de varios Datura hbridos. Caplin y Steward
(1948) aplicaron la leche de coco en el campo de cultivo de tejidos por primera vez.
Gracias a este producto natural, que obtiene con la zanahoria explantes con una
proliferacin mucho ms activo que la observada con la auxina. Por lo tanto, estaba
claro que la sustancia estimulante de la leche de coco no era una auxina. La
caracterizacin de esta sustancia era un problema interesante, pero la exploracin de
sus propiedades no requera su aislamiento. El uso de un medio enriquecido con
leche de coco, Morel (1950a) obtuvo el crecimiento indefinido de un tejido procedente
de una especie monocotiledneas,Amorphophallus rivieri y en el mismo ao, logr el
mismo resultado con el helecho cinnamomea osmunda (Morel, 1950b).

Las poderosas propiedades de la leche de coco incitaron investigaciones

bioqumicas. Ahora, en este momento, la intervencin de cido nucleico en la
divisin celular empez a ser entendido y Skoog estaba convencido de que contena
sustancias que eran capaces, como adenina, para inducir la proliferacin de tejido.
Con la colaboracin de Miller, Okumura, Von Saltza y Strong (1955a, b), emprendi
experimentos con cido nucleico extrado de esperma de arenque; timo de ternera y
la levadura. Los extractos de materiales frescos no indujeron la divisin celular. Pero
extractos preparados con material antiguo eran activos y finalmente Skoog y sus
colaboradores extrado de la levadura en autoclave extractos de un derivado de
adenina, la 6-furfurilaminopurina, que induce la proliferacin de clulas de tabaco y la
formacin de brotes en presencia de cido indolactico.

Esta sustancia estimulante, llamado kinetina, era un artefacto; posee la misma

actividad que la leche de coco, pero su descubrimiento no resolvi el problema de
kinetins naturales, citoquininas con nombre. El primer paso se produjo en 196],
cuando Miller (1961) detectada en el endospermo de maz joven una sustancia que
posee propiedades quinetina. Esta sustancia, llamada zeatina, se aisl por Letham
(1963) que con Shannon y McDonald (1964) estableci su estructura molecular. Por
ltimo, se demostr que la citoquinina de leche de coco se ribosilzeatina (Letham,
1974), que fue verificada por Van Staden y Drewes (1979). Por lo tanto, el trabajo
esboza 34 aos antes por Blakeslee haba sido realizada. Con auxinas y kinetina,
cultivo de tejidos ya estaba lista para su potente desarrollo.

El medio fue mejorada por medio de Murashige y Skoog (1962). Un cuidadoso

anlisis de las necesidades nutricionales de los tejidos de tabaco anergied,
propusieron un medio revisada, lo que facilit el crecimiento de clulas de muchos
tipos de tejidos. Pero este medio contiene una gran cantidad de sales minerales y es
al mismo tiempo enriquecida en 2,4-D, que induce anergia o alteracin hyperhydric.
Ambos son artefactos y el comportamiento de los tejidos afectados ya no puede ser
considerado como normal. Estas indicaciones engaosas eran a menudo la fuente
de fallos o interpretaciones incorrectas.

El desarrollo de la explosin de cultivo de tejidos

Antes de que el establecimiento definitivo de la tcnica, todos los esfuerzos
haban sido dominados por un solo objetivo y ahora que esto se ha logrado, muchas
personas se le pregunt "qu puedo hacer ahora?". Despus se introdujo el nuevo
mtodo en las principales reas de biologa de las plantas tales como la
multiplicacin vegetativa, determinismo de la histognesis y la organognesis, la
sntesis de productos secundarios, patologa e incluso la gentica.

Las investigaciones sobre la morfognesis

Fue muy fcil de entender que el cultivo de tejidos podra ser un buen medio
para investigar los factores de diferenciacin celular y la formacin de rganos.
Comparacin de las estructuras histolgicas obtenidas porin vitrocultura y la de
plantas enteras llevaron a descubrimientos sobre el mecanismo de su formacin. Por
ejemplo, en el caso de la proliferacin de dicotiledneas, los explantes con
frecuencia producen clulas parenquimatosas dispuestos en archivos paralelas con
el floema diferenciar primero y las traqueidas posteriores (Gautheret, 1941a, 1944),
los dos tipos de elementos separados por el cambium y la totalidad representando
haces vasculares. Si el tejido de la planta inicial consiste en xilema, la parte xilema
del haz vascular est en contacto con l. La disposicin opuesta se produce cuando
el explante se compone de floema (Gautheret, 1959). En el curso de las subculturas,
este fenmeno se repite continuamente y las colonias se cultivan en masa
parenquimatosa espolvoreado con haces vasculares. Con cantidades excesivas de
auxina, la estructura no es muy definido, y algunas sustancias como el cido
naftilftalmico inducen estructuras muy aberrantes. Se encontraron giberelinas para
incrementar la diferenciacin vascular (Gautheret, 1964a, b). Por medio de
experimentos de injerto, Camus (1949) demostr que los brotes pueden inducir
histognesis. Sus resultados fueron verificados y se extendieron por Wetmore.
Kuroda (1960, 1961) inform que el mismo tipo de induccin histogentica puede
obtenerse mediante el injerto de los haces vasculares.

Cultivo de tejidos monocotiledneas muestra un tipo muy diferente de la

histognesis. Su proliferacin requiere en la mayora de los casos 2,4-D o de otra
auxina muy activo. En estas condiciones, una especie de desdiferenciacin se lleva
a cabo en el explante que se roci
Cortar la auxina es causa frecuente de estos grupos se conviertan en las races o
brotes. la formacin de rganos por cultivos de tejidos se ha observado hace mucho
tiempo con Ulmus y con explantes de races de Achicoria (Gautheret, 1942a). En
algunos casos, los tejidos producen slo las races o slo las yemas pero en otros
casos, las plntulas completas y se obtienen embriones incluso somticas. El
determinismo de estas neoformaciones se analiz con cuidado. Estos procesos
organogentico plante dos cuestiones importantes. En primer lugar, cul es el
determinismo de la organizacin y en segundo lugar, estn los rganos e incluso los
embriones producidos a partir de clulas individuales? En otras palabras, las clulas
son totipotentes? La primera pregunta llevado a innumerables investigaciones. El
ms famoso fue el de Skoog y Miller (1957), con tejidos de tabaco. El cultivo de
explantes en medimn que contienen diferentes concentraciones de auxina y kinetina,
observaron que la organognesis estaba controlado por un equilibrio entre estas dos
sustancias, la antigua iniciacin de las races inducir y la segunda organizacin de
raz. Esto es muy claro en el caso del tabaco y muchos otros materiales, pero no es
una regla y por esta razn, la multiplicacin in vitro de cualquier planta por lo general
requiere un ajuste especial. Esta primera pregunta, obviamente, tiene implicaciones
para las aplicaciones.

Demostracin de totipotencia
La segunda cuestin tiene importancia terica ya que es una parte de la teora
celular. Una clula totipotente puede dar lugar a un organismo completo. Esta
propiedad pertenece primero en el huevo. Pero en algunas plantas tales como
helechos, la espora es capaz de producir un organismo completo, la prothallium, la
forma de lo que es bastante diferente de la forma foliada. Uno se pregunta ff esporas
de un fanergamas, es decir, los granos de polen exhibiran una totipotencia bajo
ciertas condiciones. Naturalmente, desde el punto de vista de los pioneros, que
tuvieron que hacer frente a dificultades tcnicas extremas, tales conceptos eran
sueos. Pero estos sueos pronto se convirti en real.

Me acercaba totipotencia somtica en 1942 cuando he observado el desarrollo

de los brotes en los cultivos de tejidos de Ulmus y de plntulas en cultivo de tejidos
de achicoria (Gautheret, 1942b). Pero las investigaciones histolgicas no pudieron
demostrar que una planta entera fue derivada de una sola clula. Dos aos ms
tarde Buvat (1944-1945) enfrent la misma duda. Otro enfoque aproximado fue
realizado por Levine (1947) con el cultivo de tejidos de zanahoria. Cultivada en
medios que contienen una alta concentracin de cido indolactico, el tejido
proliferaron sin organizacin pero la eliminacin de la formacin de yemas auxina
inducida. Levine consignado sus culturas para m porque yo estaba interesado en la
diferenciacin de tejidos zanahoria y emprend observaciones histolgicas. Yo era
capaz de ver muchas etapas de la yema y de plntulas formaciones, algunos de ellos
se compone de un nmero muy pequeo de clulas. En 1958, Reinert (1958)
publicado en Planta un informe detallado que se describe para la primera
embriognesis somtica tiempo en los tejidos de zanahoria. Las fotografas en este
documento mostraron varias etapas entre una clula en divisin, embrin y plntulas.
Pero la tcnica que consista en comparar varias secciones no permitir certificar que
estas etapas son las etapas sucesivas de la ontogenia. Similares observaciones
realizadas por Steward plantearon la misma objecin. En todos estos experimentos
no haba pruebas de que una sola clula podra transformarse en una plntula. La
demostracin de esto requerira un comienzo a partir de clulas aisladas.
Ahora Sandford et al. (1948) haban alcanzado la divisin de clulas animales
aisladas con medios acondicionados. La clula aislada se coloc en un tubo de vidrio
muy finas y esta se sumergi en un medio que contiene numerosas clulas. Bajo
estas condiciones, la clula aislada estaba bajo la influencia de sustancias
desconocidas secretadas por las clulas circundantes y estas sustancias inducidas
su multiplicacin. Seis aos despus, Muir et al. (1954) se comprometi a transponer
el "principio acondicionado" a las clulas vegetales. Sin embargo, la tcnica utilizada
para clulas animales tuvo que ser modificado. Muir establece una clula de tabaco o
Tagetes erecta en un pequeo fragmento de papel de filtro y se coloca este en la
parte superior de una colonia. El ocho por ciento de estas clulas aisladas se
multiplicaron. Este mtodo fue simpli-fied por Lutz (1963). La colocacin de una
clula en un medio solidificado cerca de una colonia condujo a la multiplicacin de la
clula aislada. Bergmann (1959) mezclar un pur de clulas en un medio de agar no
completamente fro y se volvi esta mezcla en una placa de Petri. El veinte por ciento
de las clulas aisladas se multiplicaron.

Por ltimo, varios mtodos permitieron la observacin de clulas aisladas se

multiplican y ofrecen la posibilidad de demostrar totipotencia celular. Vasil y
Hildebrandt (1965) observaron que una clula de tabaco aislado podra dividir y
formar una colonia capaz de producir plantas enteras. Pero ellos no prueban que
toda la planta se debi a la embriognesis somtica que afecta a una sola clula de
la colonia. Prueba para esta ltima etapa se logra slo en 1970 por las partes
posteriores-Hiisemann y Reinert (1970) cuando publicaron una fotografa que
muestra la transformacin de una sola clula de zanahoria en un embrin. Al igual
que sus predecesores, Backs-Hiisemann y Reinert utilizaron un medio condicionado
por la presencia de numerosas clulas. Estos experimentos se realizaron 'con clulas
somticas.
 Sin embargo, experimentos realizados por Tulecke (1953) en Ginkgo biloba
sugirieron que la vocacin de clulas de polen era no slo para dar tubos de polen.
El cultivo de los granos de polen en un medio que contiene vitaminas y un cido
amino, obtuvo colonias de clulas. La inspeccin de sus fotografas revela que
algunos grupos de clulas se parecen a los embriones. Pero Tulecke no continu
este trabajo pionero.
Diez aos despus, Yamada et al. (1963) informaron en la Revista botnico que
antera culturas de Tradescantia reflexa producen tejidos haploides. Sugirieron que el
tejido desarrollado a partir de clulas madre de microsporas. En el prximo ao,
Guha y Maheshwari (1964) publicaron un descubrimiento muy importante en un
papel sin pretensiones que las anteras de Datura innoxia producen embriones
procedentes de los granos de polen inmaduros. Muchas personas fueron excitados
por este descubrimiento y Bourgin y Nitsch (1967) seguidos este trabajo asegurando
el desarrollo de "embriones de polen" de tabaco en plantas enteras. tratamiento con
colchicina puede transformarlas en plantas frtiles diploides. Entonces, en el caso pf
fanergamas, diploides y haploides clulas producen el mismo tipo de embriones,
excepto con respecto a los nmeros de cromosomas.

Solicitud de cultivo de tejidos

Todas las obras consideradas hasta ahora se inspira en la teora celular y debe
ser considerado como una extensin de los intentos de Haberlandt. Durante 35 aos,
estos estudios no tuvieron xito, pero mucho xito coron los esfuerzos iniciales en
los prximos 30 aos. Poco a poco, los estudios sobre las aplicaciones de la
investigacin bsica reemplazados. Sorprendentemente, algunas de las aplicaciones
ms importantes se refiere a los hallados muchos aos antes que haba
permanecido olvidada durante mucho tiempo:

Virus erradicacin
Un ejemplo famoso es el de la erradicacin del virus. White (1934a, b)
demostraron que los meristemas de races infectadas por virus estn libres del
agente patolgico, y la primera micropropagacin se obtuvo por Ball (] 946). Sin
embargo, la conexin entre estos dos hallazgos se realiz slo en 1952 casi de forma
indirecta. Dos pato-logists, Limasset y Cornuet (1949), verificaron que la ausencia de
virus en las clulas meristemticas afect no slo las puntas de las races, segn lo
informado por White (1934a, b) las clulas, sino tambin de raz. Sugirieron sus
colegas Morel y Martin cultivar meristemas de los brotes de las plantas infectadas.
Los intentos fueron un gran xito (Morel y Martin, 1950, 1955) y este mtodo produjo
una planta sana deDaliay la patata que contiene virus. Pero en ambos casos, los
brotes no produjeron races y su propagacin requieren injertos de plntulas sanas.
se obtuvo el enraizamiento de brotes despus de estas investigaciones adicionales
por Quack (1961), Hollings y Stone (1968) y otros. Y, finalmente, de nueve aos
pasaron antes de la aplicacin de la micropropagacin de plantas sanas. La primera
aplicacin de que se trate de propagacin clonal de orqudeas por Morel (1963). En la
actualidad, el cultivo de meristemas es empleado por miles de personas; industrias
hortcolas importantes explotan esta tcnica y sus consecuencias econmicas estn
creciendo en muchos pases. Hoy el"Micropropagacin" representa el "Royale
campaol" de cultivo de tejidos vegetales.

El uso de cultivo de tejidos con el fin de producir productos secundarios de valor

econmico se ha considerado cuidadosamente sin embargo los datos fundamentales
no fueron alentadores. Hace muchos aos que contienen taninos tejidos (Ball, 1950)
o alcaloides (Telle y Gautheret, 1949) se inform que casi pierden por completo esta
propiedad cuando crecein vitro.Los productos secundarios que se acumula en los
tejidos especiales, tales como canales secretores o elementos laticferos, desaparece
progresivamente en cultivo de tejidos (Paupardin, 1971). Del brote de las colonias se
acompaa de la reaparicin de los productos secundarios porque nuevo aparato
secundario estn formados en los brotes. A pesar de este fondo desfavorable, las
industrias farmacuticas han desarrollado equipos para producir productos
secundarios porin vitroculturas. En los aos 1950 y 1960 se hicieron grandes
esfuerzos en vano por el C. Pfizer Company, a pesar de la intervencin de Nickell, un
distinguido especialista de cultivo de tejidos.

Con el mismo fin, corto et al. (1969) y Wilson et al.(1971) unidades preparadas
para cultivar masas considerables de clulas disociadas. Durante mucho tiempo, los
experimentos tenan ningn valor prctico. Sin embargo, las intensas investigaciones
mostraron que en algunos cultivos de suspensiones celulares de los casos (Zenket
al., 1977) o cultivos de callos (Akasu et al.,1976; DSller, 1978) produjo ms productos
secundarios que toda la planta. Y por clonacin, esta sntesis podra ser
apreciablemente aument (Zenk, 1978).
El establecimiento de conexiones entre cultivos de tejidos vegetales y la gentica
ha sido particularmente prometedor. Primero de todo, la tcnica de micropropagacin
permite el mantenimiento de los caracteres y de las poblaciones de rendimiento de
plantas idnticas para el individuo utilizado inicialmente. Pero este mantenimiento
requiere precaucin y se debe tener cuidado para evitar la induccin de anergia
medios de comunicacin, un fenmeno que es muy comn, pero difcilmente
entendido. Las auxinas muy activos, tales como 2,4-D y una alta concentracin de
compuestos de nitrgeno favorecen anergia, mientras que las citoquininas reducen
esta alteracin. Por otra parte, la clonacin de colonias de clulas revela su
heterogeneidad. Dado que los experimentos de clonacin de Lutz en cultivos de
tejidos de tabaco, en que se obtuvieron una gran variedad de colonias, se han hecho
muchas observaciones similares. Algunas culturas no se diferenciaron mientras que
otros fueron capaces de producir las plntulas y la clonacin parece ser un buen
medio de seleccin. Fue lo mismo con la micropropagacin. Aplica a las plantas
cultivadas que ya estn seleccionados, micropropagacin mantiene sus personajes.
Pero en el caso de las especies silvestres, que revela la heterogeneidad de las
poblaciones y permite el aislamiento de sus tipos de constituyentes. Esta clonacin
por cultivo de meristemas proporciona una excelente y muy rpido medio de la
seleccin y mejora. En otras palabras, la micropropagacin que durante mucho
tiempo se considera que es un mtodo Conservando se utiliza ahora para la mejora.
Pero en el caso de las especies silvestres, que revela la heterogeneidad de las
poblaciones y permite el aislamiento de sus tipos de constituyentes. Esta clonacin
por cultivo de meristemas proporciona una excelente y muy rpido medio de la
seleccin y mejora. En otras palabras, la micropropagacin que durante mucho
tiempo se considera que es un mtodo Conservando se utiliza ahora para la mejora.
Pero en el caso de las especies silvestres, que revela la heterogeneidad de las
poblaciones y permite el aislamiento de sus tipos de constituyentes. Esta clonacin
por cultivo de meristemas proporciona una excelente y muy rpido medio de la
seleccin y mejora. En otras palabras, la micropropagacin que durante mucho
tiempo se considera que es un mtodo de Conservacin se utiliza ahora para la
mejora.

Hoy en da, la investigacin contina en la transformacin y ahora requiere una

estrecha colaboracin entre las disciplinas de la fisiologa, la citologa y biologa
molecular.

Para concluir, recordemos que en 1931, slo el blanco y me trataron de resolver el

problema del cultivo de tejidos, pero ahora, ms de diez mil personas se dedican a
trabajos que impliquen el cultivo in vitro de rganos, tejidos y clulas vegetales. Y el
xito del Congreso Yamanaka (El 5 Congreso Internacional de tejido vegetal y cultivo
celular en el Tokyo y el lago Yamanaka, Japn, julio de 1982) anuncia un futuro
prometedor para este campo.