7

Metodos de esterilizaci6n
del medio de cultivo y del aire

La tecnologia microbiana es (inica, en el sentido de que requiere que los

procesos sean operados sin contaminacion biologica. En general se necesita un
alto grado de limpieza y se procura que las operaciones sean asepticas.
Antes de analizar los metodos empleados para mantener condiciones
asepticas, conviene discutir los problemas que encierra este concepto. En
primer lugar, no existe un metodo cuantitativo seguro y confiable para medir
el numero 0 la concentraci6n de contaminantes en el sistema. Los contaminan-
tes individuales varian mucho en su efecto potencial.
Un proceso tfpico de fermentacion es susceptible de contaminarse de
muchas maneras, pero se consideran los siguientes elementos como los mas
crHicos: 1
a) el medio,
b) el inocula y el proceso de inoculacion,
c) el suministro de aire,
d) la adicion de nutrientes, antiespumante, etc., durante el proceso,
e) el fermentador en sl mismo.
En la practica, la contaminaci6n ocurre principalmente por un disefio
defectuoso de los sellos del reactor 0 durante las tecnicas de transferencia ya
sea de inoculo, aditivos u otros.

ESTERILIZACION DEL MEDIO

Existen muchos metodos para efectuar la esterilizacion del medio, ya sea par
eliminacion fisica de los posibles contaminantes 0 por destrucci6n de los
mismos. Sobre la base de estos criterios, Cooney2 indica los siguientes
metodos:

[ 115)
116 Metadas de esterilizaci6n del media de cultivo y del aire

A. Eliminacion flsica
a. Filtracion *
b. Centrifugacion
c. Flotacion
d. Atraccion electrosta tica
e. Intercambio ionico
f. Adsorcion de virus par carbon

B. Destruccion
a. Calor humedo*
b. Calor seco*
c. Radiaci6n electromagnetic a*
d. Radiacion sonica
e. Agentes quimicos*
De los metodos anteriores la filtracion es eficaz para la eliminacion de
bacterias y fagos, aunque las caidas de presion son altas y los flujos son bajos;
se emplea comercialmente pero este metodo esta limitado por el tamano de la
particula; tiene la ventaja de que no dana el medio de cultivo.3,4
La destruccion de los microorganismos es mejor y mas faclL generalmente
se utiliza la esteriJizacilm par calor, pero se suelen emplear agentes quimicos
cuando en el medio hay sustancias sensibles al calor, en la industria alimenta-
ria el uso de la radiacion electromagnetica (principalmente radiacion LJV) esta
muy extendido.5
La esterilizacion por calor ha sido estudiada par muchos investigadores,
entre los que destacan Aiba et at.. 6 Deindoerfer 7 y Humphery8 por haber
propuesto diversos modos de aplicaci6n considerando el punto de vista de
ingenier!a.
Primero se tratani eI concepto basico de mortalidad termica de los
microorganismos y despues los aspectos teoricos y practicos de su aplicacion,
as! como algunos problemas encontrados.

MORT ALIDAD TERMICA DE LOS MICROORGANISMOS

Se han planteado muchas teorias para explicar el mecanismo de la inac-

tivacion termica de Jos organismos, pero aqui solo se tratara Sll aspecto cinetico.
La destrucci6n de los microorganismos depende de muchas variables: pH
del medio, estado vegetativo de las celulas, iones metlilicos.6 En la figura
7.1 b aparecen 3 tipos de curvas de tasas de mortalidad. La curva A representa
celulas vegetativas en una solucion buffer; la curva B es tfpica de esporas, y
la C es caracteristica de organismos dafiados 0 particularmente sensibles al
calor. Sus tasas de mortalidad tambien varian, siendo constantes para las
celulas vegetativas A; para B la tasa es menor al principio del tratamiento pero
aumenta con el tiempo. En el caso C, una vez eliminadas las celulas
defectuosas 0 sensibles, las sobrevivientes tienen una tasa similar a la de A.

Ley logaritmica de rnortalidad

La dcstruccilJD de microorganismos es en general similar a una rcaccion
* Impliea aplicaeion industrial 0 esc ala preparativa.
Mortalidad termica de los microorganism os 117

quimica de primer orden, es decir, la tasa de destrucci()n en cualquier tiempo

es proporcional al numero de celulas vivas a una temperatura especifica (curva
a de la tigura 7.1). Matematicamente se expresa asi:

dN
-kN [1 )
dt

en donde N es el numero de celulas vivas en cualquier tiempo; t, tiempo y k

la constante de velocidad de esterilizacion. La figura 7.2 muestra una relacion
lineal en tre el logaritmo del numero de celulas vivas y el tiempo de
esterilizaci6n, relaci6n conocida como la ley logaritmica de mortalidad. No
debe olvidarse, sin embargo, que algunos microorganismos siguen un comporta-
miento diferente al indicado por la ecuacion [1).

Expresiones para la tasa de esterilizacion

Existen varias formas de expresar la mortalidad de los microorganism os,
principal mente porque hace tiempo, las introdujeron algunos microbiologos y
con la pnictica quedaron consagradas.
a) Punto de muerte termica (la temperatura minima requerida para destruir
a todas las celulas en 10 minutos). Es una medida pnictica pera depende de
las condiciones particulares; para cuesti6n de exactitud deben darse las
condiciones experimentales.
b) Tiempo de muerte termica (tiempo requerido para destruir a todas las

Tiempo
Figura 7.1. Curvas que i1ustran el proceso de destruccion microbiana. A, celulas vegetativas;
B, esporas; C, organismos daiiados.
118 Metodos de esterilizaci6n del medio de cultivo y del aire

10'

=
~
~ 106
:J
:m
.!d. 10'
'">
co 10-
'>
'"co 103
:J
:m 102
u
10'

23456 7
Tiempo (min)

Figura 7.2. Destruceion tennica de Bacillus subtilis a diferentes temperaturas.

celulas a una temperatura dada). Depende del microorganismo y de las

condiciones experimentales.
c) Metodo del porcentaje. Expresa la destrucci6n por esterilizacion como el
porcentaje de celulas vivas sobrevivientes a la exposici6n al calor par unidad
de tiempo.
d) Tiempo de reduccion al decimo. EI TRD es el tiempo que tarda
un numero de celulas en reducirse al 1()O;6 de su numero inicial al exponerlas al
calor. Tambien se Ie conoce como el valor D. Si integramos la ecuaci6n entre
No, celulas vivas en el t = 0, y N, celulas vivas en tiempo t = t se tiene

In(N~) -k = (t) [2]

ahora si No/N = 10, se tiene:

In 10 = k t [5]

= 2.3/k = D [6]

Si se consideran 2 suspensiones de las mismas esporas sometidas a 2

temperaturas, T 2 > T 1, se encuentra que un aumento en la temperatura de
calentamiento disminuye la constante D (ver figura 7.2).

Efecto de la temperatura en la constante de velocidad de esterilizaci6n, k

Teoria de Arrhenius
Se ha comprobado experimentalmente que el efecto de la temperatura en k,
puede expresarse como una ecuaci6n de Arrhenius:
Mortalidad termica de los microorganismos 119

- A 0 e -E/RT
k - [7]

donde T es la temperatura absoluta (K), R es la constante de los gases, E es

fa energia de activacion yAel factor de frecuencia. La figura 7.3 confirma la
validez de la ecuacion [7]. De manera similar se han obtenido k para
diferentes microorganismos y sustancias.

Teoria QIO

Se expresa el efecto de la temperatura en reacciones qUImIcas como una

relacion entre kT (la constante de velocidad de reaccion a TOK) y kT -1 0 (la
constante de velocidad de reaccion a T -lOOK). Se puede demostrar que:

kT
[8]
~-10

Cualquiera de las dos teorias requiere el conocimiento de los valores de k,

E y de los rangos de temperaturas en que son aplicables. La tabla 7.1 presenta
algunos ejemplos.
Los valores de E se encuentran entre 50 y 100 Kcal/mol en el caso de
celulas vegetativas y esporas, mientras que para enzimas 0 vitaminas son del
orden de 2 a 20 Kcal/mol.

Temperatura
115 110 105

40

20

10
7
.S' 7
E
c.: 5

2.55 2.6 2.65 2.7

~ (0 K J I X 10-3
T

Figura 7.3. Constante de velocidad de esterilizacion (k) vs. temperatura.9

120 Metodos de esterilizacibn del medio de cultivo y del aire

log t

TDR Bacillus thermoacidurans

TDR
10% tiamina

zona en que se
destruye men os
de 10% de la tiamina

Temperatura de calentamiento

Figura 7.4 Determinacion de una zona de esterilizacion en que se destruyen las esporas de
Bacillus thermoaciduransy menos dellO% de la tiamina del media de cultivo.

La diferencia en energias de activaci6n entre los componentes del medio

crea problemas pnlcticos, que deben ser siempre considerados. En la figura 7.4
se presenta un caso hipotetico de un medio con Bacillus thennoacidurans
(esporas) y tiamina, en que se desea determinar la zona de tratamiento en la
eual se destruya menos de lOOA> de la tiamina. Se debe recurrir a altas
temperaturas y tiempos de tratamiento bajos, pues debido a las ecuaciones [6]
y [7] la energia de aetivacion domina.

DlSENO DE ESTERILIZADORES BATCH 0 DE LOTES

La estenlizacion batch del medio en el fermentador sigue siendo la mas

comWl; en este metodo el medio y el fermentador son esterilizadosjuntos y
no es necesaria la transferencia de medio, con 10 que se evita una posible
fuente de eontaminacion.
El disefio de esterilizadores se inicia estableciendo la cantidad de contami-
nantes en el media; cuando no se canace, se considera de 104 a 106

TABLA 7.1

Algunos ejemplos de va/ores de k y E para esterilizacibn termica

de celulas vegetativas, esporas y proteinas9
MateriJll TIC) k(ser' X 10 -3) E(cal./mol)
Bacillus subtilis 110 450 74000
Esporas de
B. subtilis 121.1 51.2
B. mycoides 95.100 820 70398
B. megaterium 95-100 14.77 50034
B.natto 95-100 6.51 77 314
B. stearothermophilus 104 0.57 67700
131.4 250 67 700
Clostridium botulinum 104 7.0 82 100
CL sporogenes 121.1 29.5
Anaerobico putrefacto NCA 3679 104 1.04 72 400
127 193 72 400
Hemoglobina 60.5-68 0.105 76900
Tripsina 5(}'60 0.028 40800
Lipasa pancreatica 4(}'50 0.113 46000
Disefio de esterilizadores continuos 121

celulas/ml. Se fija un nivel de esterilidad, por 10 general una celula por cada
1 000 corridas, 0 sea 10-3 celulas/volumen total.
Generalmente no se conoce la especie 0 especies contaminantes y es preciso
defmir una k, para casos generales:

k espora I min-1 (esporasa 115).

k celula 1010 min-I (celulas vivas a I ISe).

Como toma un tiempo relativamente largo elevar la temperatura en un

tanque agitado, debe determinarse el perm tiempo-temperatura. EI perm
puede estar afectado por las siguientes condiciones:
a) la capacidad de suministro de vapor y de agua de enfriamiento
b) las limitaciolles de tiempo impuestas por horario de operacion
c) el area de transferencia de calor
d) se deben tomar precauciones especiales si los nutrientes son sensibles al
calor 0 hay solidos presentes.
Aiba et al.6 presentan una tabla en la cual se dan los diferentes perfiles
tiempo-temperatura para proceso batch, dependiendo de la forma de calenta-
miento. En forma general el diseno se efectua resolviendo la siguiente
ecuacion:

No
In -- Ao f t e -E/RT dt [9]
N o

donde No = C O~;el) X volumen a esterilizar (expresado en ml) N =: 10-3 cel.

Si como se ve en la figura 7.5b, el perfil tiempo-temperatura se obtiene

gnificamente, la relacion entre e- E/R T Y t tambien puede obtenerse gnifica-
mente para el periodo de aumento de la temperatura, el periodo estacionario y
el periodo de enfriamiento. La suma 0 integraci6n gr:.ifica de todo el periodo
da el grado de esterilidad.
Si se utilizan las ecuaciones de la tabla 7.2, es posible resolver analiticamen-
te la ecuacion [9]. Ambos metodos han sido empleados con exito.
Los argument os en contra de la esterilizacion por lote son que conswne
demasiado tiempo y que a menudo no es uniforme. En fermentadores grandes
toma varias horas calentar y en friar el medio, mientras que el periodo de
esterilizacion dura de 30 a 60 minutos. La no uniformidad no es un problema
tan serio, puesto que las propiedades del medio esteril varian mas por mal
manejo y falta de control que por el proceso de esterilizacion en S1.

D1SENO DE ESTERILIZADORES CONTINUOS

Los esterilizadores continuos ofrecen muchas ventajas sobre los procesos
discontinuos; se ahorra tiempo, vapor, electricidad y agua de enfriamiento, el
control de calidad es mas facil y el rendimiento del producto se puede mejorar
al producir un medio esteril mas uniforme en sus propiedades.
EI equipo que se emplea para el proceso continuo consiste basicamente en
cambiadores de calor6,9 cuyo principal problema de disefio consiste en tener
122 Metodos de esterilizaci6n del medio de cultivo y del aire

150

~ 100
~
'Q";
Q.
E
'"
f- 50
temperatura
temperatura
-- de
del medio fermentaci6n
a A
a 2 3 4
Esterilizaci6n continua

150

~
~
E
'"E
Q.

50
'"
f- temperatura
--- --de
fermentaci6n
a B
a 234
Esterilizacion batch

Figura 7.5. Perfiles tiernpo-ternperatura para diferentes tipos de esterilizacion.

flujo tap6n que evite el retromezcIado con 10 cual los tiempas de esterilizaci6n
son continuos. En la figura 7.Sa se muestra el perfil temperatura-tiempo para
esterilizaci6n continua. La ecuaci6n [9] se emplea para disefio, aunque en este
casu el periodo de calentamiento y el de enfriamiento contribuyen muy poco
alcanzar el nivel de esterilidad deseado. Lin lOy atros han analiza do te6ricamen-
te este tipo de esterilizador y sus estudios permiten hacer cam bios en el proceso
y establecer los panimetros de escalamiento.
Probablemente, entre los factores que limitan el uso de la esterilizaci6n
continua, el mas importante sea el de las plantas de fermentaci6n. EI numero
de productos y el tamafio de los fermentadores es tal, que resulta inconvenien-
te desde el punto de vista econ6mico operar un esterilizador continuo.

EFECTO COMBINADO DE CALOR Y ALCALIll

Debido a los requisitos del proceso productor de protefna microbiana a partir

de bagazo de cafia, se estudi6 cual era eI efecto de la concentracion de alcali
en la esterilizaci6n por calor del bagazo. Sin NaOH, bagazo y esporas
presentaron un D = 130 min a 75C; con 1% de NaOH, D disminuy6 a 2
min, ala misma temperatura. EI ejemplo anterior puede ser de importancia para la
Limpieza y esterilizaci6n del aire 123

utilizaci6n de productos naturales (v. gr. materiales celul6sicos) que requieran

de alglin pretratamiento qUlmico 0 flsico.

LIMPIEZA Y ESTERILIZACION DEL AIRE

Los procesos aer6bicos de fermentaci6n requieren de grandes volumenes de

aire por volumen del Hquido por minuto (generalmente I VVM), y todo ese aire
debe estar esteril antes de entrar al fermentador.
Los sistemas de esterilizaci6n en uso son:
a) esterilizacion termica, y
b) fIltracion.
Para casos especiales se empie an algunas otras alternativas, por ejemplo,

TABLA 7.2

Perfiles tiempo-temperatura de esterilizacion en lote6

Tipo de transferencio
de calor Perfil tiempo-temperatura a." 0 'Y

hs
Vapor directo
MepTo

(hiperbolico) S/M

q
Calentador electrico T = To (l + at) a =
(lineal) MCpTo

VA
Calentamiento con a =
vapor en la camisa

(exponencial) {3

Enfriamiento con T = T r (l. + 13e -a t) 13 = To - TrlTr

refrigerante

(exponencial)

To temperatura inicial del medio

Tv temperatura de la fuente de calor
Tr temperatura del refrigerante
T temperatura de periodo estacionario
h entalpia del vapor
S flujo masico del vapor
M masa inicial del medio
Cp calor especifico del medio
C'p calor especifico del refrigerante
q tasa de transferencia de calor
V coeficiente total de transferencia de calor
A area de transferencia de calor
124 Metodos de esteri/izaci6n del media de cu/tivo y del aire

agentes quimicos 0 radiacion electromagnetica (en cuartos de operacion), etc.

Los sistemas de esterilizacion termica de aire son poco aceptados par diversas
razones: si se quema combustible directamente en la corriente de aire (metodo
seguro y sencillo) se reduce la concentracion de oxfgeno y se forman
productos de la combustion indeseables, que senin absorbidos pm el medio. EI
calentamiento indirecto de la corriente de aire no es confiable, pues la
transferencia de calor a gases es pobre y con variaciones en el flujo y algunas
esporas podrian sobrevivir.
La fIltracion de aire es el metodo mas utilizado, empleandose para ello
fIltros fibrosos, principalmente de lana de vidrio. Su accion es aleatoria, y se
pueden disefiar siguiendo un criterio de baja probabilidad de penetracion. Los
fIltros de membrana son capaces de retener todas las particulas a partir de
eierto tamano y con el avance de los materiales polimerieos es posible
emplearlos a escala industrial.
Antes de describir la teorfa y disefio de filtros, es necesario establecer los
requerimientos que debe cumplir un sistema de esterilizacion de aire:
a) el sistema debe ser de disefio sencillo,
b) su operacion debe ser barata,
c) debe ser estable y resistente a varias esterilizaciones con vapor, y
d) debe acondicionar el aire, ajustando temperatura y humedad.
La tabla 7.3 lista las especies de bacterias y esporas bacterianas mas
frecuentemente deteetadas en el aire, aunque tambien se encuentran levad uras,
mohos y virus. EI tamano de los microorganismos varia entre I y 103 IJ.;
los organism os pequefios son adsorbidos por el polvo del aire y pueden
eliminarse junto con las partieulas de polvo mayores. Por 10 tanto las
particulas que deb en eliminarse durante la esterilizacion del aire son aquellas
cuyo tamano oscila entre 0.5 y I IJ., principalmente bacterias y esporas. Se
ha demostrado que el tamano medio de las partleulas de polvo es de 0.6 IJ..
El numero de organismos presentes en el aire es fundamental para poder
disefiar un sistema de esterilizacion; los valores encontrados varian entre 103 y

TABLA 7.3

Especies representativas de bacterias y esporas bacterianas

presentes en el aire6
Especie Ancho (Il) Largo (Il)

Bacillus cereus 1.3 - 2.0 8.1 - 25.8

B. licheniforms 0.5- 0.7 1.8 - 3.3
B. megaterium 0.9-2.1 2.0 _. 10.0
B. mvcoides 0.6 - 1.6 1.6 - 13.6
B. su'btitis 0.5 - 1.1 1.6 - 4.8
Aerobacter aerogenes 1.0 - 1.5 1.0 - 2.5
Aficrococcus atucus 0.5 - 1.0 0.5 - 1.0
Proteus vulgaris 0.5 - 1.0 1.0- 3.0
Esporas
Bacillus megaterium 0.6 - 1.2 0.9 - 1.7
B. mycoides 0.8 - 1.2 0.8 - 1.8
B. subtitis 0.5 - 1.0 0.9 - 1.8
Limpieza v esterilizacion del aire 125

104 particulas/m3, pero este mimero depende en gran medida del medio
ambiente (ciudad, montana, epoca del ano, etc.) y debe ser considerado para
cada caso particular. 12

Tipos de filtros
Los tipos de (dtros para aire no difieren mucho de los utilizados para
filtraci6n del medio de cultivo. Su cJasificacion se puede hacer considerando la
escala de operaci6n. En escala pequefia se em pie an fiItros millipore. de
asbesto a de porcelana; todos ellos dan buenos resultados y su operacion y
regeneracion es seneilla. En escalas mayores se utilizan filtros granulares,
compuestos generalmente de partfculas de carbon (6-30 mallas); su uso es
limitado 'f aunque tienen la ventaja de no producir una caida de presion
importante presentan peligro de ignici6n a temperaturas mayores de 50C.
Los ftltros fibrosos son de uso general en todas las escalas; son camas
empacadas de lana de vidrio 0 materiales similares. Su diseno y operacion son
muy sencillos y su confiabilidad es buena si se revisan y remplazan peri6dica-
mente. El dhimetro de la fibra utilizada varia entre 3 y 15 J.l. y la caida de pre-
sion en estos fittros es ligeramente mayor que en los flItros de camas empaca.
das con carbon.

Mecanismos de filtracion
La tcoria de la filtraci6n ha sido estudiada detalladamente; se recomienda al
interesado revisar las referencias 6, 8, 12 y 13. El comportamiento de un
filtro para aire se deflne de la siguiente manera:

N . No [10]
X 100 (%)
No

dande ii es la eficieneia total de retencion del fiitra. Sin embargo el concepto

de eficieneia. ii.no es eonveniente para estudiar la relaeion entre ii, y el
meeanismo de reteneion debido a factores como el largo del lecho compacta
(L), la fraecion volumetrica (a), el diametro de la fibra (Of), etc. Por 10 que
para fines de investigacion se introdujo la idea de eficiencia de una sola fibra, 7).
Los mecanislllos de reteneion de partieulas finas par filtros de aire son:
a) impaeto.
b) intercepcion.
c) difusion,
d) sedimentacion. y
e) atraecion electromagnetiea.
Los tres primeros tienen efectos mas pronuneiados, sobre todo en 10 que se
refiere al uso directo en fermentacion, pues el aire que recibe el filtro (previa
compresi6n) ha sido limpiado parcialmente de particulas mayores. por 10 que
la sedimentacion tiene un efecto menor. La carga electrostatica afecta la
retencion de organismos. pero todavia no hay suficiente informacion para
poder emplear el mecanismo (e) en las ecuaeiones de disefio.
La figura 7.6 representa esquematicamente Iineas de corriente de aire
126 Metodos de esterilizaci6n del medio de cultivo y del aire

t
b

Figura 7.6. Diagrama del t1ujo alrededor de una sola fibra cilfndrica.

producidas por el flujo alrededor de una fibra cilindrica. Las lineas continuas
indican que, en ausencia de otras fuerzas, se produce una region curva n la
vecindad de la fibra. Sin embargo, las partlculas que se mueven con las
corrientes no pueden seguir exactamente ese patron debido a su propia inercia
(lfneas discontinuas).
Habra pues tres casos: particulas que choquen directamente con la tibra
(impacto inercial); otras que aunque no choquen directamente, debido al
cambio del patron de lineas tambien seran colectadas por el cilindro (intercep-
cion), y fmalmente las particulas que, sin chocar contra la fibra, debido a su
movimiento irregular l!eguen a estar en contacto con ella y las retenga
(difusion ).

Impacto inerciai (Til)

La retencion por este mecanismo se expresa como:

Til b [ 11]

todos los parametros b y Dr han sido medidos y evaluados teoricamente para

diferentes tamafios y geometrias de las fibras. Si la masa de la particula es
muy pequefia 0 la velocidad del aire muy baja, sucede que la fuerza inercial
no es suficiente para que la particula choque con la fibra. Por ello se
establecio una velocidad critica, Vc' en que los efectos inerciales se vuelven
minimos:

1.125 JJ.a D[
----- [12]
C P D2
P P

donde Vc es la velocidad superficial crltica del aire, JJ.a es la viscosidad del aire,
Pp es la densidad de la particula y C es un factor de correccion de la Ley de
Stokes. Para bacterias de 1 JJ. de diametro, Vc es igual a:
Limpieza y esterilizacion del aire 127

[13]

donde Vc est.i en pies/segundo y Df en mieras.

Intereepcion (rl2)

5i la partieula es esferiea y sus eentros eoineiden con las lineas de corriente de

aire que pasan a una distaneia Dp/2 de la fibra, choeanin con ella y tambien
senin detenidas. La eficiencia de este tipo de retenci<'ln depende del tamafio de
la particula y del patron de flujo alrededor del cilindro. La expresion
matematica es:

--_._-- ((1 + NRe) In (l + NRJ-(1 +N ) [14 ]

Re
2(2 - In NRe)

Df Vp
+ -NR: +1)
donde V = velocidad del aire.

Difusi6n (r/3)
La difusividad de las particulas finas, 15, puede expresarse como una funcion
de Dp' y si consideramos a Do como el diametro efectivo de las partlculas,
debido a la difusion tendremos:

(2(K) InK- K + L) [ 15]

en donde

l16]

y D = Ck T /31111 Dp, donde k es la constante de BoHzman y T es la temperatura

absoluta.
Relaci6n entre la efieiencia total i1 y las eficiencias
de una sola particula (17j)
La efieieneia total de una sola fibra, 7)0, es igual a la suma de las efieiencias
por diferentes mecanismos:

[ 17]

Para una eama empaeada y porosa de un filtra real el valor de 170 y la ~17i
pueden diferir por depender de condiciones de operacion diferentes. Para un
filtro real la efieiencia 1701 se define asi:
128 Metodos de esterilizaci6n del media de cultivo y del aire

1T (l - a) Dr
-------
4aL
In [_1. ]1-'1
[ 18]

habiendose encontrado experimenta1mente que:

17", == (1 + 4.5 a) ii 0< a< 0.1

La figura 7.7a presenta el comportamiento tipico de un filtra para aire; es

evidente que para las bacterias, a medida que varia la velocidad superficial del
aire predominan diferentes mecanismos. En la zona anterior al minimo es la
difusion la que predomina; despues es el impacto inercial; la intercepci6n
contribuye en todo el rango de velocidades de aire. En el caso de una
particula de diametro menor ese cambio no es tan dnistico, pues con
velocidades de aire razonables solo los efectos difusionales son importantes.

Metodos de disefio
La penetracion de micraorganismos en un filtra es de naturaleza logaritmica es
decir, los organism os que entran (No) y los que salen (N) estan en relacion
con la 10ngitud del filtra (L) de 1a manera siguiente:

dN = -k'N [19]
dL

In (~) = -k'L (20]

bacteria

~fagO
"
Velocidad del aire

A. Comportamiento tipico de un filtro para aire

0.1

0.Q1

'70
0.001

0.000 1 L..-.......
-J'---'-_L..-..J....
2 4 df 10 20
B. Eficiencia de una fibra para la colecci6n de par- TJo= eficiencia de una sola fibra
ticulas de lit de diametro. por intercepci6n df = diametro de la fibra en micras
directa
Figura 7.7. Esterilizacion de aire por filtracion.
Limpieza y esterilizaci6n del aire 129

donde k es funcion de la velocidad del aire, densidad del ftltro, tamafio de las
fibras y tamafio y densidad del microorganismo eliminado.
Se puede expresar la constante de filtraci6n, k', en terminos de la
profundidad del filtro como la longitud para eliminar 90% de No, es decir L90

No 2.3
In (L) [21]
N

La tabla 7.4 muestra datos tipicos de L90; de nuevo se aprecia la

interaccion entre la velocidad del aire, el tamafio de la particula y los
mecanismos de ftltracion.
Los valores de No ya han sido mencionados pero el criterio de disefio es
que N 1 debe ser 10 -3 par fermentaci6n. Si en una fermentacion batch un
solo microorganismo pasase el filtro y tuviese un tiempo de duplicaci6n de 30
min, alcanzaria un nivel de 108 microorganismos/ml en 1Y horas para un fermen-
tador de 5 litros y en 26 h para uno de 20 000 gal.
Se ha encontrado experimentalmente que la ecuaci6n [21] es igual a:

No 1.27 7]0 (1 + 4.5)a L

In ------------- [22]
N (1 -a) Df

(la ecuacion fue obtenida con aerosoles)

donde Q es la fracci6n volumetrica de las fibras en el filtro.

TABLA 7.4

Valores de L90 para di[erentes materiales

[iltrantes y di[erentes microogranismos
Material Df V L.o
filtrante (Ii) Microorganism os (cm/seg; (em) Referencia

Lana de 16 Esporas de 3 4 J4
vidrio B. subtilis 15 9
30 11.5
150 1.5
300 0.4

Fibra de 8.5 Escherichia 3 0.4 3

vidrio coli (fago T-2r) 15 0.6
30 0.7
150 0.8
300 1.1

Carbon negro Esporas de 1.4 1.7 15

(15-30 malla) B. cereus 6.4 1.5

Carbon activado Esporas de 18 17.0 13

(4-9 malla) B. su btilis 28.5 8.75

Lana de 18.5 Serratia 3.9 3.1 16

vidrio marcescens 7.8 3.0
130 Metodos de esterilizacion del medio de cultivo V del aire

El disefio se hace tomando en cuenta las condiciones que producen la efi-

cieneia minima del mtra. La retencion es minima cuando los efectos de in.
tercepcion son calculados a una velocidad menor que Vc (velocidad crtiea en
la eual los efectos inereiales se vuelven cera). Se apliea entonces la ecuacion
[14] escogiendo un tamafio de partlcula (v. gr. 0.6 Jl), Y una densidad de las
particulas micrabianas, a una veloeidad calculada con la ecuaci6n [12], obte-
niendose una grafica de 7]0 vs D f' de la cual se puede derivar una ecuacion de
disefio en la que la efectividad del mtra se expresa en terminos de D f Y Q. La
figura 7. 7b se obtuvo para particulas de una micra de diametro con una den-
sidad igual a la de una espora de bacteria; la velocidad eritica fue de 0.066 Dc
Finalmente el diseno debe considerar los costos del material (tamano del
mtro) y los costos de operaci6n (caida de presion) para poder seleccionar el
tamafio optimo del mtra.

NOMENCLATURA

A area de transferencia de calor (m2 , cm2)

Ao factor de frecuencia
b panimetro [aneho espeeifieo de la eorriente de aire] (p, em)
C factor de correcc;on de la Ley de Stokes
Cp calor especifico del medio
Cp calor especifico del refrigerante
D constante (TRD)
D difusividad de las particulas finas
Do diametro efectivo de desplazamiento de la particula
Df diametro de la fibra (Jl, cm)
Dp diametro de la partieula (11. cm)
E energia de activacion (cal/gmol, kcal/gmol)
h entalpia de vapor
k constante de Boltzmann (1.38 X 10-16 ergtK, molecula)
k constante de la velocidad de esterilizaci6n (min-I)
k' constante de filtraci6n
K 1 + 2Do/Df
L largo dellecho empaeado compacto (m, cm)
L90 longitud neeesaria para eliminar el 90% de No (m, cm)
M masa inicial del medio (kg, g)
N numero de celulas vivas
No numero inicial de celulas vivas
pDfY
NRe ---
I"c
q tasa de transferencias de calor (kcal/min)
R eonstante de los gases (atm l/gmol oK)
S tlujo masico del vapor
T temperatura del periodo estacionario
Referencias 131

To temperatJra inicial del media

Tv temperatura de la fuente de calor
Tr temperatura del refrigerante
t tiempo
U coeficiente total de transferencia de calor (kcal(m2 hOC)
V velocidad del aire
Vc vclocidad superficial cr{tica del aire (cm(seg, ft(seg)
0: fraccioll volumetrica
1] eficiencia de una sola fibra
1]1 retencion par irnpacto inercial
1]2 retencion par intcrcepcion
1]3 retencion por difusi6n
1] eficiencia total de retenci6n del filtro
1]i eficicncia de una sola particula
1]0 etlcicncia total de una sola fibra
1]", eficiencia para un filtro real
Ila viscosidad del aire (g(cm seg)
Pp densidad de la particula (g(cm3)

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