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2012, 8: 2
Resumen
Se describen los procedimientos que se llevan a cabo, antes durante y posterior a un
examen de necropsia en reptiles, como parte integral del diagnstico veterinario en
este grupo de animales, reconocindolo como herramienta para una aproximacin
sistemtica al comportamiento de las enfermedades de los pacientes, til adems
para la aplicacin de medidas preventivas en coespecficos. Las tcnicas de
necropsia tienen algunas variaciones segn la especie y en este caso se detallan
tres grupos: lagartos y cocodrilos, serpientes y tortugas.
Palabras clave: necropsia, reptiles, lesiones, muestras, patologa.
Introduccin
El examen de necropsia, hace parte integral de un diagnstico clnico y
permite determinar la causa de enfermedad y muerte de un animal. Es un
complemento esencial para la prctica mdica veterinaria y debe estar
acompaado con la toma de muestras para anlisis de histopatologa,
microbiologa, parasitologa, virologa y toxicologa. La prctica de necropsia
en fauna silvestre permite reconocer el comportamiento de una enfermedad y
aplicar medidas preventivas y correctivas en los dems animales, as como
usar tratamientos adecuados; en poblaciones silvestres, permite
tambiidentificar factores que estn alterando la sobrevivencia y el hbitat de
los animales.
Como en otras especies, la necropsia en reptiles debe tener en cuenta las
diferencias anatmicas y biolgicas de las especies, para poder identificar
cambios y lesiones durante un examen post mortem [7]. Tambin es
importante, conocer los cuidados especiales que se deben tener durante su
realizacin, como por ejemplo en el caso de especies venenosas o sospecha
de enfermedades zoonticas [5, 6].
Para que la necropsia sea exitosa debe asegurarse la recoleccin de la
mayor cantidad de informacin clnica del cadver, realizar un anlisis
detallado, sistemtico y organizado de las lesiones macroscpicas y tomar
los muestreos complementarios para obtener un diagnstico acertado y
concluyente de acuerdo a los objetivos de la necropsia y las circunstancias
de la muerte. Los resultados obtenidos de la necropsia deben interpretarse
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Historia Clnica
La recopilacin de datos es indispensable para la realizacin de la necropsia.
Los datos suministrados en historia clnica son de vital importancia para
orientar el diagnstico macroscpico y la toma de muestras complementarias
[5]. Una historia clnica debe incluir datos como: nutricin, sintomatologa y
curso de la enfermedad, tratamientos suministrados, cambios en la dieta o
alojamiento, presencia de otros animales enfermos o muertos, historia de
traumas o accidentes y datos clinicopatolgicos realizados antes de la
muerte. [5, 7]
Elementos de Trabajo
Los elementos necesarios para la realizacin de la necropsia de reptiles
varan segn la especie, el tamao del animal y su anatoma. Los elementos
bsicos son: tijeras curvas y rectas de diferentes tamaos, pinzas con y sin
garra, bistur o cuchillos dependiendo del tamao, tabla para cortar los tejidos
y segueta.
Para la toma de muestras complementarias, tubos con y sin anticoagulante
para muestras de sangre, frascos plsticos de boca ancha con formol
buferado al 10% para muestras de histopatologa, un equipo de diseccin
estril, bolsas estriles, hisopos con y sin medio de transporte para cultivos
microbiolgicos o muestras para virologa, laminas y laminillas para
extendidos, citologas o improntas.
Finalmente, un formato donde se consignen los hallazgos de necropsia, una
cmara fotogrfica y elementos para la identificacin de las muestras como
cinta de enmascarar y marcadores de tinta indeleble.
Examen de Necropsia
Examen Externo
Antes de iniciar el examen externo, se confirma la identificacin del animal y
se pesa. El examen externo permite identificar condiciones nutricionales y de
hidratacin. [5] Los ojos hundidos son indicadores de deshidratacin severa
o malas condiciones nutricionales. La condicin corporal se evala por medio
de la observacin de la masa muscular y prominencias de las estructuras
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Examen Interno
En la clase REPTILIA, existe una diversidad de caractersticas anatmicas en
cada especie. Para desarrollar el procedimiento de tcnicas de diseccin y
examen interno, se determinan ciertas diferencias en cada una de las
principales especies, como son lagartos y cocodrilos, serpientes y tortugas.
Lagartos y Cocodrilos
Los lagartos y cocodrilos tienen grandes similitudes en su anatoma y el
procedimiento de necropsia en estos dos grupos se realiza de la misma
manera. Se debe tener especial precaucin con las especies de lagartos
venenosos, como los monstruos de Gila (Heloderma suspectum) y los
dragones barbados (Heloderma spp), que poseen glndulas sublinguales de
veneno que producen neurotoxinas. [2, 5, 6]
Para empezar la necropsia, el animal se pone en decubito dorsal y se hace
una incisin con bistur o con tijera por la lnea media ventral, desde la cloaca
cranealmente hacia el espacio intermandibular. [5] La piel se separa hacia
los lados dejando expuestos los msculos y el tejido subcutneo, en este
momento se deben tomar muestras de tejido muscular. En especies de
lagartos como los camaleones, por sus caractersticas anatmicas es mejor
realizar la diseccin en decbito lateral, removiendo la pared celmica y la
caja costal de un lado completo. [5, 7]
Los reptiles no tienen una cavidad torcica y abdominal separada por un
diafragma muscular como en otras especies, poseen una sola cavidad
denominada cavidad celmica. [4] La cavidad celmica de los lagartos, se
expone con el corte de los msculos y el tejido subcutneo, para las especies
de lagartos de mayor tamao y los cocodrilos, es necesario despus de
incidir la piel, realizar cortes de las uniones costocondrales a ambos lados
para retirar la caja costal. [5] Finalmente, se retira junto con el tejido
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del pericardio. Los lagartos tienen el corazn tricameral y una aorta derecha
e izquierda. Los cocodrilos son los nicos reptiles que tienen el septum
interventricular completo convirtiendo el corazn en tetracameral, dos
aurculas y dos ventrculos con aorta derecha e izquierda. [4, 5, 7] Los
grandes vasos se examinan en busca de aterosclerosis o mineralizacin
distrfica, asociadas a patologas renales, hiperparatiroidismo, deficiencias
nutricionales e hipervitaminosis D3. [4] El corazn se retira, cortndolo desde
la base y se toman muestras para histopatologa.
Para el examen del hgado y el tracto gastrointestinal, se retira el paquete
completo de rganos, cortando con unas tijeras el tejido conectivo que los
adhiere a la carcasa. [5] El hgado se separa de los intestinos para su
examen, es el rgano ms grande y normalmente es color caf oscuro,
fuertemente pigmentado, si su color es caf claro o amarillento, se relaciona
con acumulacin de lpidos y si esta caf oscuro o negruzco se debe a
atrofia. [5] Con un bistur se cortan varias secciones con el fin de determinar
cambios en la consistencia o lesiones que profundicen el parnquima. La
vescula biliar esta ubicada adyacente al hgado. El pncreas se localiza en
la curvatura duodenal, y el bazo es una estructura ovoide, color rojo oscuro,
estrechamente asociado al pncreas y cerca al estmago. [5]
El tracto gastrointestinal de los lagartos y cocodrilos es simple y est
compuesto por estmago, intestino delgado, intestino grueso y finaliza en la
cloaca donde desemboca el colon por el coprodeum, mientras que el
urodeum colecta la orina y materiales reproductivos. [4] Es caracterstico el
pigmento negruzco en la serosa de la cavidad celmica de algunas especies
de lagartos. [5] El intestino delgado de los cocodrilos normalmente es de
paredes gruesas y musculares; su diferenciacin macroscpica con el
intestino grueso suele ser difcil, por lo tanto se deben tomar muestras de
varias secciones. Para el examen del tracto gastrointestinal, se sugiere cortar
con una tijera el mesenterio, facilitando la inspeccin de los rganos,
despus, abrir desde el estmago hasta el intestino grueso, examinando el
contenido gastrointestinal y la apariencia de la mucosa. Si se sospecha de
intoxicaciones, en este momento se toman muestras de contenido gstrico.
Para examinar el tracto respiratorio que se encuentra adherido a la carcasa
se corta con tijera, abriendo la faringe y la trquea, continuando la incisin
hasta el pulmn. La trquea en cocodrilos tiene anillos completos e
incompletos en lagartos. [2, 7] La trquea se bifurca en dos bronquios
extrapulmonares, que son extensos en cocodrilos adultos y deben
examinarse en busca de exudados o lesiones. Igualmente, se inciden los
pulmones en busca de exudados, ndulos, parsitos o cambios de la
arquitectura. [4, 5]
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Serpientes
Como en caso de algunos los lagartos, antes de iniciar el examen
postmortem de una serpiente se deben tener precauciones especiales si se
trata de una especie venenosa ya que las glndulas del veneno, son
glndulas salivales modificadas que producen potentes componentes
enzimticos con capacidad para causar la muerte de una persona. [3, 5] En
estas especies se debe asegurar la cabeza con la boca cerrada, usando una
cinta adhesiva alrededor de la mandbula o insertando la cabeza en un
recipiente cilndrico de calibre grueso. Sin embargo, es preferible retirar la
cabeza del animal y ponerla en formol para desactivar el veneno y proceder a
la necropsia, despus se toman muestras del cerebro u otra muestra de la
cabeza, segn se requiera. La proteccin debe ser extrema y el manejo de
estas especies debe ser muy cuidadoso, por el riesgo de incidir las glndulas
del veneno. [5]
Para realizar el examen interno de una serpiente, esta se ubica en decbito
dorsal. Se incide por la lnea media ventral, desde la cloaca cranealmente
hasta el espacio intermandibular. En serpientes muy grandes, es necesario
incidir la piel por el borde lateral de las escamas ventrales. Una vez realizada
la incisin de la piel, esta se desplaza hacia los lados a lo largo de todo el
cuerpo del animal exponiendo el tejido subcutneo y muscular. En este
momento se toman muestras de tejido muscular. [5]
Para el examen de la cavidad oral se incide por la unin temporo-mandibular,
permitindo examinar la lengua, la glotis, el esfago proximal y la trquea. Se
observa en busca de erosiones, lceras, gingivitis o lesiones en los dientes y
se toman las muestras de cada uno de estos tejidos.
La cavidad celmica se examina despus de incidir por la lnea media
ventral, cortando el tejido subcutneo y muscular, se observan todos los
rganos in situ; las serpientes con buena condicin corporal tienen cuerpos
grasos en la cavidad celmica, que se extienden cranealmente por la regin
media del cuerpo. [5] Como en otras especies, el timo y la glndula tiroides
se encuentran localizados craneales al corazn, el timo en serpientes es un
rgano pareado con un lbulo craneal y otro caudal. La glndula tiroides en
serpientes es una glndula simple y tiene dos pares de glndulas
paratiroides; uno est localizado entre los lbulos posterior y anterior del timo
y el segundo par en la bifurcacin de la arteria cartida. En este momento se
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Tortugas
Para el examen de rganos internos de la tortuga, esta se pone en decbito
dorsal. El plastrn se remueve cortando con un cuchillo o bistur la piel por
los bordes del plastrn y las adherencias al caparazn a ambos lados con
una segueta. En tortugas marinas, el borde marginal se corta fcilmente con
un cuchillo. [5] Las adherencias de los msculos pectorales y plvicos al
plastrn se cortan con un cuchillo, dejndolos adheridos al cuerpo. Una vez
retirado el plastrn, la piel del rea gular de la mandbula inferior se incide
medial y por los bordes de las ramas mandibulares, esta incisin se extiende
por la orofaringe para exponer la lengua, la glotis y la trquea proximal. Las
tortugas no tienen dientes y usan su pico crneo para la masticacin. [4] Se
examina la cavidad oral en busca de erosiones, cambios de coloracin,
placas y se toman las muestras correspondientes.
La trquea y el esfago se retiran en conjunto y se incluyen en el formol. La
trquea tiene anillos cartilaginosos completos y se bifurca en bronquios
principales que se continan con los pulmones. [4, 6] Para exponer la
cavidad celmica, se cortan las extremidades anteriores y posteriores,
desarticulndolas y cortando los msculos asociados. Se observan los
rganos in situ, y se procede a retirarlos de la cavidad, empezando por la
glndula tiroides y el timo. El timo en quelonios es pareado, de color blancoamarillento y se ubica adyacente a las arterias cartida y subclavia. La
glndula tiroides se localiza en la base de las aortas derecha e izquierda, y la
paratiroides es difcil de identificar; se localiza adyacente o entre los lbulos
del timo. [5]
Una vez muestreados los rganos linfoides ubicados cerca al corazn, se
procede a incidir el pericardio, separar y retirar el corazn. El corazn de las
tortugas es tricameral, compuesto por dos aurculas y un ventrculo, el vrtice
del ventrculo se encuentra adherido al pericardio por el gubernaculum
cordis. [5] Se hace una incisin del ventrculo y se incluye en formol.
El hgado en quelonios es grande y bilobulado, se adhiere al estomago por
tejido conectivo y tiene una vescula biliar que puede estar colapsada o muy
distendida. [5] El hgado se inspecciona en busca de cambios de coloracin,
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Toma de Muestras
Es importante tener en cuenta que para llegar a un diagnstico definitivo, se
debe tener un protocolo de muestreo organizado y sistemtico, con el fin de
recolectar todas las muestras necesarias y con las condiciones adecuadas
para los respectivos anlisis complementarios. Los anlisis complementarios
a un examen de necropsia corresponden a histopatologa, citologa,
microbiologa, toxicologa y parasitologa.
Citologa
Las muestras de citologas, son un apoyo durante la necropsia, por su fcil
realizacin y rpidos resultados, que pueden dar una idea de la patologa
presente antes de estar lista la histopatologa. Muchos agentes infecciosos
como Clamydias y hemoparsitos son fcilmente observados en
preparaciones citolgicas. [5]
Se deben tener en cuenta las caractersticas del tejido o fluido a muestrear,
para que la citologa se tome correctamente. La muestra debe quedar bien
distribuida en la lmina y se recomienda realizar por lo menos 3 lminas de
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cada muestra. Las muestras para citologa pueden ser fluidos corporales,
improntas de tejidos o raspados de piel.
Las lesiones con fluidos o material purulento, se colectan por medio de una
aspiracin con jeringa, esta se descarga sobre la lmina, se deja secar y se
procede a realizar coloraciones de rutina; los exudados se pueden tomar con
un hisopo y este se aplica sobre la lmina. Algunos microorganismos como
protozoos y larvas de nemtodos se observan fcilmente en muestras
hmedas y es recomendable aplicar solucin salina y cubrir la lamina con
una laminilla para llevarla al microscopio. [5]
Las improntas de tejidos se toman durante la necropsia, antes de poner el
tejido sobre la lmina debe secarse bien sobre un papel absorbente para
evitar los excesos de humedad; posteriormente si se realiza la impronta
sobre la lmina.
Los raspados de lesiones cutneas, se hacen con una cuchilla de bistur
dejando descargar el material sobre la lmina para su respectiva coloracin
de rutina.
Dependiendo de la enfermedad o el agente del cual se sospeche se usa la
coloracin apropiada. Si se busca un agente bacteriano se realiza coloracin
de gram, para micobacterias coloracin de ziehl neelsen, para hongos azul
de metileno o GMS (del Ingls gomori methamine silver). Para muestras
citolgicas coloracin de Wright-giemsa, y la lmina debe ser fijada con
metanol por 10 segundos antes de la tincin. Adems existen en el mercado
kits comerciales para las coloraciones especiales. [5]
Histopatologa
Los tejidos colectados en la necropsia deben fijarse en formol buferado al
10% por 24 horas. [5, 7] Estos sirven para histopatologa y algunas tcnicas
moleculares.
Para una buena fijacin de los tejidos, las muestras deben tener un grosor
entre 5 8mm y una relacin de 1/9 entre los tejidos y el formol. Si no se
cumple con estos parmetros, se corre el riesgo de una mala fijacin y
descomposicin o autolisis de los tejidos. Los tejidos muy pequeos
colectados durante la necropsia deben ser fijados contenidos en un casette
portatejidos para que no se pierdan a la hora de realizar el corte. Es
recomendable fijar los tejidos seos en un recipiente separado para su
posterior decalcificacin. [5] En casos de enfermedad neurolgica el cerebro
se fija completo para su posterior corte seriado.
Las muestras de tejidos con lesiones, se muestrean de manera que quede
tejido aparentemente normal y parte de la lesin para comparar la transicin
entre las lesiones.
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Toxicologa
Para el anlisis toxicolgico de muestras, estas se toman durante la
necropsia y se mantienen en refrigeracin o congeladas. Su tamao
aproximado de 200g y se depositan en bolsas estriles para su envo al
laboratorio. [5] Dependiendo del txico que se quiere buscar algunas de las
muestras recomendadas para anlisis toxicolgicos son: contenido
estomacal, hgado, rin y msculo esqueltico. [5]
Microbiologa
Las muestras para anlisis microbiolgico deben colectarse con estrictas
medidas de asepsia, con material estril y en bolsas estriles, evitando el
riesgo de contaminacin. Si la muestra es tomada en campo se puede usar
alcohol (etanol) por 5 minutos y un flameador para darle un grado de
esterilidad al instrumental de colecta; una vez flameado se deja enfriar para
evitar que al tomar la muestra el calor mate los microorganismos presentes
en el tejido. [5]
Igualmente se pueden usar hisopos para toma de muestras de fluidos o
secreciones corporales, caractersticas de infecciones bacterianas, para su
posterior anlisis microbiolgico.
Para el envo al laboratorio estas muestras se conservan refrigeradas y
deben enviarse para su procesamiento en un tiempo no mayor a 24 horas.
Parasitologa
El diagnstico de parasitologa incluye ectoparsitos como caros o
garrapatas y endoparsitos como nemtodos, tremtodos y cstodos. Para la
preservacin de ectoparsitos o endoparsitos, se colectan en etanol al 70%.
[5]
Diagnstico Molecular
El diagnstico molecular incluye tcnicas como PCR o hibridacin in situ, y
se emplea para microorganismos bacterianos, virales o micticos. A pesar de
su significado diagnstico, estas tcnicas aun no estn disponibles en
Colombia para el diagnstico de rutina de diversos agentes infecciosos en
reptiles y su utilizacin es limitada. Las muestras para estos anlisis deben
refrigerarse o congelarse entre -20C o -70C, o mantenerse en
contenedores con nitrgeno liquido, con objeto de preservar los patgenos
facilitando su posterior aislamiento. [5]
Despus de la Necropsia
Al finalizar la necropsia se deben tener en cuenta las siguientes
consideraciones: realizar el almacenamiento de las muestras y revisar que
estn correctamente identificadas, rotuladas y conservadas para los anlisis
complementarios, lavar y desinfectar correctamente el material usado
durante la necropsia, as como la ropa y las instalaciones. El hipoclorito y las
soluciones a base de glutaraldehido, soluciones de clorhexidina o soluciones
yodadas son buenos desinfectantes. [5] Asegurarse que la carcasa del
animal y los tejidos sobrantes sean depositados en bolsas rojas para su
posterior recoleccin y manejo como residuo biolgico.
Finalmente, el informe de necropsia se realiza tan pronto sea posible con el
fin de no olvidar detalles importantes para el diagnstico final, este informe
debe ser detallado y organizado por sistemas, describiendo las lesiones
encontradas en cada rgano, as como los rganos en los que no se
observaron lesiones.
Referencias
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