UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

QUMICA INDUSTRIAL

TRABAJO RECEPCIONAL

INDUCCIN Y MULTIPLICACIN DE CALLOS

DE BARBASCO (Dioscorea compositae)

PRESENTA
ADRIANA PALACIOS CORTS

DIRECTOR DEL TRABAJO RECEPCIONAL

M.C. Miriam C. Pasteln Solano

ORIZABA, VER.

Diciembre/2010

NDICE GENERAL
Pginas
NDICE DE CUADROS

III

NDICE DE FIGURAS

IV

LISTA DE ABREVIATURAS

VI

I.

INTRODUCCIN.

1.1

Justificacin.

1.2

Objetivos generales.

1.3

Objetivos especficos.

1.4

Hiptesis.

II.

MARCO TERICO.

2.1

Generalidades del barbasco (Dioscorea compositae).

2.1.1

Clasificacin taxonmica.

2.1.2

Descripcin botnica.

2.1.3

Distribucin geogrfica.

11

2.1.4

Importancia econmica.

11

2.1.5

Variedades de barbasco.

14

2.2

Metabolismo secundario.

14

2.2.1

Diosgenina.

15

2.2.2

Diosgenina en barbasco.

19

2.2.3

Usos de la diosgenina de barbasco en la Industria Qumica.

21

2.3

Cultivo in vitro.

23

2.3.1

Cultivo de callos.

25

2.3.1.1

Diferenciacin celular.

27

2.3.1.2

Desdiferenciacin celular.

28

2.3.1.3

Cultivo de clulas en suspensin.

29

2.3.1.4

Factores que afectan el cultivo de callos

32

2.3.1.5

Produccin de metabolitos secundarios in vitro

33

-I-

III.

MATERIALES Y MTODOS

35

3.1

Material biolgico.

36

3.2

Medio de cultivo.

36

3.3

Condiciones ambientales.

36

3.4

Efecto del tipo de explantes in vitro para la induccin de callo de barbasco.

37

3.5

Efecto del fotoperiodo en la induccin del callo de barbasco.

37

3.6

Efecto de la relacin 2,4-D y kinetina en la induccin de callo.

37

3.7

Variables a evaluar.

39

3.8

Multiplicacin del callo en explantes de barbasco.

40

IV.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

41

4.1

Efecto de la posicin de explantes de yemas in vitro para la induccin de

callo.

42

4.2

Efecto del fotoperiodo en la induccin del callo de barbasco.

43

4.3

Efecto de la relacin 2,4-D y kinetina en la induccin de callo en explantes

de barbasco.

44

4.4

Multiplicacin del callo en explantes de barbasco.

50

V.

CONCLUSIONES

53

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

55

ANEXOS

60

GLOSARIO

65

- II -

NDICE DE CUADROS
Cuadro

Pginas

Clasificacin taxonmica de Dioscorea compositae.

Especies de barbasco de mayor importancia.

14

Especies de Dioscoreas que presentan diosgenina.

16

Efecto de la interaccin del 2,4-D y Kinetina en la

induccin de callos.

Respuesta en la induccin de callo en diferentes

explantes in vitro de barbasco.

42

Respuesta en la induccin de callo expuestos a

diferentes fotoperiodos

37

42

reas porcentuales de los callos obtenidos a los 64 das

de haber inducido a la callognesis.

46

NDICE DE CUADROS DE ANEXO

1A

Compuestos inorgnicos del medio de cultivo de MS

(Murashige y Skoog,1962).

60

2A

Vitaminas. Mtodo de preparacin.

61

3A

Composicin del medio para induccin de callo de

Dioscorea compositae utilizado.

4A

Medio para multiplicacin de callo de Dioscorea

compositae utilizado.

5A

61

reas en mm de los callos formados.

61
62

- III -

NDICE DE FIGURAS
Figuras

Pginas

Barbasco (Dioscorea compositae).

rganos vegetales del barbasco (Dioscorea compositae).

Caractersticas fsicas del barbasco.

10

Distribucin geogrfica de barbasco en Mxico.

11

Produccin industrial de cortisona y progesterona.

13

Las saponinas pueden ser mortales para una gran

variedad de peces.

15

Transformacin de la diosgenina en hormonas.

18

El origen de la diosgenina.

19

Russell Marker durante sus aos en la investigacin con

el barbasco.

20

10

Sntesis de esteroides a partir de barbasco.

21

11

El barbasco puede combatir enfermedades por medio

del uso de infusiones.

22

12

Multiplicacin in vitro.

24

13

El cultivo in vitro posee numerosas aplicaciones.

25

14

Desdiferenciacin de una clula vegetal.

29

15

Metabolitos secundarios empleados en la industria

como

saborizantes,

fragancias,

colorantes,

medicamentos, etc.
16

34

Pruebas para induccin de callos con diferentes

explantes.

36

17

Frmula de medicin del rea de callo.

38

18

Diagrama de flujo para la induccin y multiplicacin de

callos de D. compositae.

19

39

Desarrollo de callos en diferentes posiciones de

explantes.

41

20

Desarrollo de callos en diferentes fotoperiodos.

43

21

Callos de D. compositae oxidados.

44

22

Callos obtenidos de D. compositae, a los 64 das de

haberse inducido.

44

23

Efecto de la escasez de 2,4-D en el medio de cultivo.

45

24

Mtodo de medicin no destructivo.

45

25

Respuesta del callo a diferentes concentraciones de

2,4-D

47

- IV -

26

Respuesta del callo a diferentes concentraciones de

kinetina.

27

48

Consistencia presente en los callos de D. compositae a

los 64 das de la inoculacin.

28

Incitacin de la multiplicacin de callos de

49
D.

compositae.

49

29

Tcnica de propagacin de callos.

50

30

Callos de D. compositae multiplicados.

51

-V-

LISTA DE ABREVIATURAS

Abreviatura

Significado

2,4-D

cido 2,4- Diclorofenoxiactico

c. Nicotnico

cido nicotnico

ANA

cido naftalen actico

BA

Bencil amino purina

D. compositae

Dioscorea compositae

DR

Das a reaccin

NEC

Nmero de explantes cultivados

- VI -

I. INTRODUCCIN

Toda planta es til y todas benefician al hombre de alguna manera. Como podr
notarse, la relacin hombre-planta es tan antigua como la misma civilizacin, y es la
inteligencia del hombre la que establece la diferencia en cuanto a la utilidad a que
stas se refieren. [1]
Es en este punto en el cual la biotecnologa moderna puede ayudar a la explotacin
comercial de dichas especies sin causar daos en la biodiversidad del pas. Tcnicas
de cultivo in vitro como lo son la induccin de embriones somticos, micropropagacin
masiva y organognesis a partir de callo, pueden beneficiar al agricultor en la
obtencin de cultivos sostenibles de produccin no tradicional; logrando la
independencia de los modelos usuales de produccin agrcola. [2]
Una de las opciones para incrementar la variabilidad gentica es a partir de callos
utilizando el 2,4-D (2,4-diclorofenoxiactico) aumentando de forma proporcional a su
concentracin las variaciones somaclonales transmisibles a la descendencia. El cultivo
de callos con fuente de variabilidad gentica y la posterior regeneracin de plantas de
barbasco se puede utilizar con fines de mejora gentica.

En este trabajo se realizaron experimentos para determinar la influencia de las

concentraciones de sales MS y hormonas vegetales en el medio de cultivo para las
plantas in vitro sobre las fases de callognesis de barbasco (Dioscorea compositae).

El barbasco es una flor silvestre comn que puede crecer casi en todos lados. Alcanza
varios pies de altura y aloja una espiga de diminutas flores amarillas densamente
compacta. El barbasco ha servido para varios propsitos a travs de los siglos, desde
su empleo como anticonceptivo hasta el uso medicinal, fue usado principalmente para
tratar la diarrea, enfermedad respiratoria y hemorroides.

[1]

Adems de ser una planta con alto potencial industrial y medicinal tambin puede ser
usada en la acuicultura, que se emplea en la fabricacin de preparados para erradicar
peces depredadores o indeseables en pozas, estanques o piscinas antes de iniciar
una crianza. [3]
Tpicamente, para el cultivo in vitro de plantas los explantes aspticos son cultivados
bajo intensidad luminosa controlada, en pequeos contenedores con un medio de

cultivo artificial que contiene: sacarosa, sales minerales, vitaminas y reguladores de

crecimiento que exceden los niveles registrados en el medioambiente natural. Estas
condiciones unidas a las modificaciones que introducen las plantas durante su
crecimiento pueden favorecer o limitar la presencia de bacterias. [4]

1.1 Justificacin

El barbasco es una planta de gran importancia para la Industria Qumica, pero tambin
para el ecosistema; esta planta se est extinguiendo, por el excesivo uso que se le ha
dado a nivel industrial, y es necesario dar lugar a la regeneracin de esta especie.

Por ser un tema de gran inters general, ha motivado de manera particular, realizar
algunos anlisis y experimentos como la desdiferenciacin celular y multiplicacin de
callos de barbasco, lo que permite dar un poco ms a conocer acerca de esta
maravilla aportada por la naturaleza.

As, en unos aos, se conocer ms acerca de los beneficios que provee esta planta,
dndole un uso moderado, pero implementado mtodos que permitan la propagacin
masiva de la misma, en las mejores condiciones posibles de nutricin.

-4-

1.2 Objetivo General

Evaluar la capacidad de desdiferenciacin de barbasco (Dioscorea compositae) para

la induccin de callo.

1.3 Objetivos Especficos

Determinar el efecto de la posicin del explante para la induccin de callos de

Dioscorea compositae.

Establecer el fotoperiodo para la induccin de callos de Dioscorea compositae.

Evaluar el efecto de la concentracin de 2,4-D y kinetina para la induccin de callos de

Dioscorea compositae.

Inducir la multiplicacin de los callos de Dioscorea compositae.

1.4 Hiptesis

H1.- Las elevadas concentraciones de 2,4-D en el medio de cultivo, tienen influencia

positiva en la formacin de callos en explantos de barbasco (Dioscorea compositae).

H0.- Las elevadas concentraciones de 2,4-D en el medio de cultivo, no tienen

influencia positiva en la formacin de callos en explantos de barbasco (Dioscorea
compositae).

-5-

II. MARCO TERICO

2.1 Generalidades del barbasco (Dioscorea compositae)

El barbasco (Dioscorea compositae) es una planta mexicana, conocida popularmente

como cabeza de negro o gordolobo. [5]
Pertenecen a la familia Dioscoreacea (Figura 1), que comprende 670 especies a nivel
mundial, de las que se registran entre 64 y 70 en Mxico, de las cuales solo tres tienen
valor comercial en la industria qumica: barbasco rojo, amarillo y blanco cuyos
presentes en Oaxaca contienen alrededor del 5% de diosgenina.

Figura 1.- Barbasco (Dioscorea

compositae)

El nombre de barbasco se le atribuye popularmente a un grupo de plantas trepadoras,

helifilas (que buscan la luz), con hojas en forma de corazn y que desarrollan un
tubrculo irregular que llega a una profundidad de 5 m y puede pesar hasta 30 kg.

Los nombres vulgares del barbasco varan de acuerdo a la regin en donde se

encuentre, por ejemplo en Chiapas se le conoce como barbasco, en Tabasco
corrimiento, en Jalisco tepecamote, en Oaxaca cabeza de negro, camote matapecado
y barbasco de camote (Martnez, 1979).

-7-

2.1.1 Clasificacin taxonmica

Taxonmicamente el barbasco se le ha clasificado de la manera que se describe en el
cuadro 1.
Cuadro 1.- Clasificacin taxonmica de Dioscorea compositae.

TAXONOMA
Dominio: Eukaryota
Reino: Plantae
Subreino: Viridaeplantae
Filo: Tracheophyta
Subfilo: Euphyllophytina
Infrafilo: Radiatopses
Clase: Liliopsida
Subclase: Liliidae
Superorden: Dioscoreanae
Orden: Dioscoreales
Familia: Dioscoreaceae
Gnero: Dioscorea
Epteto especfico: compositae - Hemsl.
Nombre cientfico: Dioscorea compositae Hemsley. [6]

2.1.2 Descripcin botnica

El barbasco es una planta trepadora, helifila, que nace de una raz parecida a un
camote color blanco o rosa, que llega a una profundidad de 5 metros y puede pesar
hasta 30 kilogramos.
Las hojas tienen forma acorazonada, de color verde y rgidas, que aparecen
recubiertas de una vellosidad llamada borra, es bastante espesa y da una coloracin
blanca o amarillenta.

-8-

Las hojas son alternadas u opuestas, pecioladas, simples, palminervias tiene de 7 a 9

nervaduras longitudinales, de 3-13 nervaduras bsicas, las venas son intersticiales
reticulares (Figura 2) (Garca y Flores, 2008).

Figura 2.- rganos vegetales del barbasco (Dioscorea compositae).(a) Rama

con inflorescencias estaminadas; (b) detalle de una inflorescencia estaminada;
(c) flor estaminada en vista lateral; (d) flor estaminada vista desde arriba; (e)
rama con inflorescencia pistiladas; (g) y (h) flores postiladas en detalle; (i) detalle
de la columna estilar; (j) infrutescencia; (k) cpsula; (l) semillas.

Las flores son verdes y pequeas, las masculinas estn agrupadas en nmero de 2 a
3, en la unin del tallo y las hojas, cuentan con la peculiaridad de poseer el cliz y la
corola soldados en una sola pieza y divididos ambos en cinco lbulos.

Se localizan en la parte final del tallo, las femeninas forman racimos colgantes largos y
compactos. Las flores generalmente son unisexuales (existen plantas dioicas,

-9-

raramente monoicas), a veces son bisexuales, solitarias, o en cmulos, racimos,

agrupados a veces en panculas.

Las flores masculinas poseen 6 lbulos del perianto, en 2 espirales, 6 estambres a

veces

reducidos a 3, insertado en el perianto o receptculo; con un ovario

rudimentario o ausente.

Las flores femeninas son similares a las masculinas; pero los estambres estn
ausentes; el ovario es inferior, con 2 vulos generalmente (ms de 2 en algunos
pequeos gneros) 3 estilos libres y forman racimos colgantes.

Los frutos tienen forma alargada, en forma de una cpsula o baya tienen forma
alargada y contienen 4 semillas lisas y con alas.

Las semillas poseen un ala membranosa; endospermo presente; embrin pequeo.

Cerca de nueve gneros y 650 especies son distribuidos extensamente en regiones
tropicales y templadas, especialmente en Amrica tropical. Asociada a bosques
tropicales caducifolio, subperennifolio y perennifolio (Garca y Flores, 2008).
El tubrculo de D. compositae (Figura 3) contiene las sapogeninas esteroidales,
dioscna, diosgenna (tambin presente en hojas, tallos y raz), un glicsido de este
compuesto y trilln; el bencenoide batatasn II, y el compuesto policclico batatasn I.
En las hojas y tallos se han detectado los esteroles colesterol, estigmasterol y betasitosterol. [7]

Figura 3.- Caractersticas fsicas del barbasco. (a) tubrculo, (b) planta masculina, (c) planta
femenina.

- 10 -

2.1.3 Distribucin Geogrfica

Las especies conocidas como barbasco (Dioscorea compositae) se desarrollan en
regiones clido hmedas (selvas altas y medianas perennifolias) de 0 a 1200 msnm
del centro y sur de Mxico (Morelos, Estado de Mxico, Guerrero, Jalisco, Oaxaca,
Veracruz, Chiapas, y Pennsula de Yucatn) (Figura 4). [8]

Figura 4.- Distribucin geogrfica de barbasco en Mxico.

2.1.4 Importancia econmica

En la historia de qumica ha sido de gran inters el descubrimiento de las hormonas
sexuales, o andrgenos, molculas tales como la testosterona, el estrgeno y la
progesterona.

De estos, la progesterona fue quizs el ms interesante porque es el precursor

qumico para otra clase de esteroides, los glucocorticoides. Los glucocorticoides y los

- 11 -

andrgenos juegan un papel decisivo en el control de muchos de los procesos de la

vida.

La eliminacin metablico de los carbohidratos, las protenas y los lpidos, las

respuestas inflamatorias vital para el funcionamiento del sistema inmunolgico, el
mantenimiento de la sangre de hidratacin, el pH y los niveles de sal, as como el
desarrollo sexual y la funcin confan en el buen funcionamiento de varios esteroides.

El enorme poder de las hormonas no pas desapercibido para los mdicos, y por la
dcada de 1930, la progesterona se utiliza para tratar trastornos menstruales,
embarazos problemticos, y los cnceres ginecolgicos.

Sin embargo, la progesterona era tan cara que la investigacin y los esfuerzos
mdicos fueron bloqueados a menudo. La nica forma que se conoca para aislar la
hormona, era una sntesis laboriosa e ineficiente (Raber, et.al., 1999).
Algunas se conocen como ames o camotes y son comestibles, de las cuatro especies
conocidas como barbasco dos son txicas y se usan para embarbascar estanques y
corrientes de agua y facilitar la pesca.
Durante 35 aos se explotaron indiscriminadamente dos especies: Dioscorea
compositae y Dioscorea floribunda, por cuatro compaas farmacuticas extranjeras
(Syntex, Ciba-Geigy, Beisa y Diosynth).
Las poblaciones silvestres quedaron considerablemente mermadas, circunstancia que
oblig al gobierno de Mxico a decretar la nacionalizacin del recurso y racionalizar su
explotacin (Martnez, 1979).
Es posible que una de las plantas mexicanas ms importantes para la industria
farmacutica de este siglo y, paradjicamente, muy poco conocida sea el barbasco.

Esta planta ha sido utilizada para la produccin industrial de las hormonas esteroides
(Figura 5), en particular de la progesterona y sus derivados (que se utilizan como
anticonceptivos), y de la cortisona, un potente antinflamatorio.

[9]

- 12 -

Figura 5- Produccin industrial de (a) cortisona y (b) progesterona.

Originalmente la obtencin de esteroides se hacia partir de vsceras de bovinos y orina

de equinos, lo cual implicaba un trabajo laborioso.
Buscando una alternativa de materia prima se encontr la Discorea mexicana o
cabeza de negro que contiene alrededor del 2% de diosgenina. El aprovechamiento de
barbasco mexicano (Dioscorea mexicana) con alto contenido de diosgenina, data de la
dcada de los cincuenta. Sin embargo, ante el descubrimiento de Dioscorea
compositae inici el auge de la comercializacin de barbasco en Mxico.

[10]

De 1940 a 1976, Mxico produjo ms barbasco que cualquier otro lugar del mundo,
cubriendo las necesidades de esteroides para la fabricacin de ms de 200 productos
comerciales. En el periodo 1940 a 1945 cubri el 80% de las necesidades mundiales,
en 1945 a 1965 el 70% y de 1965 a 1975 el 60%.

[8]

En la dcada de los setenta la diosgenina fu la nica fuente para algunos frmacos y

sus precios han ido aumentando considerablemente. Recientemente la economa de
produccin de esteroides ha cambiado un poco debido a que China est exportando
grandes cantidades de diosgenina (Arroyave, 2003) y a que se han descubierto
diversas sapogeninas, que manejan diferente especificidad para la produccin de
mltiples frmacos (Reinhard, 2003).

- 13 -

2.1.5 Variedades de barbasco

Pertenecen a la familia Dioscoreacea que comprende 670 especies a nivel mundial,
de las que se registran entre 65 y 70 para Mxico, en donde destacan algunas
especies por tener mayor importancia econmica (Cuadro 2). Algunas se conocen
como ames o camotes y son comestibles, de las tres especies conocidas como
barbasco dos son txicos y se usan para "envarbascar" estanques y corrientes de
agua y facilitar la pesca (Martnez, 1979).
Cuadro 2. Especies de barbasco de mayor importancia.

ESPECIES

NOMBRE COMN

Dioscorea composita Hemsl

barbasco rosa

Dioscorea floribunda Mart y Gal

barbasco amarillo

Dioscorea mexicana

cabeza de negro

Dioscorea speculiflora Hemsl

barbasco blanco

Entre otras se encuentran la: Dioscorea alata, Dioscorea bartletii, Dioscorea bulbfera
L., Dioscorea compositae, Dioscorea convolvulcea, Dioscorea cruzencis, Dioscorea
cyanisticta, Dioscorea deamii, Dioscorea densiflora, Dioscorea floribunda, Dioscorea
liebmannii, Dioscorea mexicana, Dioscorea orizabensis, Dioscorea pilosiuscula,
Dioscorea polygonoides, Dioscorea spiculiflora, Dioscorea urophylla.

[8]

2.2 Metabolismo Secundario

Los conocimientos que se adquieren acerca de los metabolitos secundarios y de su
biosntesis son necesarios, no solo por el conocimiento en s, sino para aprovechar
mejor los componentes sintetizados por las plantas, especialmente las nativas.
Conocer la regulacin de una va metablica en particular dar mayores posibilidades
de producir el compuesto deseado en mayor cantidad. En este caso, la bioqumica, el
cultivo de clulas vegetales y la gentica tendrn un papel muy importante.

[11]

- 14 -

2.2.1 Diosgenina
Los esteroides son un grupo de productos naturales de gran inters por la gran
variedad de sus compuestos, la importancia biolgica de la mayor parte de ellos, sus
actividades fisiolgicas y sus aplicaciones farmacolgicas (Primo, 1995).

Ejemplo de esteroides son los esteroles, saponinas, alcaloides esteroidales, alcoholes

y cidos biliares, glucsidos cardiotnicos, estranos, etc.

Las saponinas reducen la tensin superficial de las soluciones acuosas y, como los
jabones, causan la formacin de espumas estables, por esto se han utilizado
ampliamente por sus propiedades detergentes (Anaya, 2003).

Las saponinas se han usado tambin como veneno de peces (Figura 6), macerando
en agua un poco del rgano vegetal que lo contiene, con la ventaja de que los peces
muertos por este procedimiento no son txicos.

[12]

Figura 6.- Las saponinas pueden ser mortales para una gran variedad de peces.

Las saponinas tienen elevado peso molecular y su aislamiento en estado puro ofrece
ciertas dificultades.

Existen dos tipos de saponinas:

Esteroides (neutras)

15

Triterpenoides (cidas)

Las saponinas esteroides no estn tan ampliamente distribuidas en la naturaleza,

como las triterpenoides; las saponinas esteroides abundan especialmente en las
monocotiledneas.

Algunos ejemplos de saponinas esteroides son: sarsaponina, digitonina, gitonina y

dioscina. Sin duda la ms til de todas las saponinas esteroides es la diosgenina, que
es el producto de la hidrlisis por cidos, bases fuertes, o las enzimas de saponinas.

Este metabolito est disponible en grandes cantidades (5 a 10 %) en los rizomas de

las plantas, y es utilizado como materia prima en el proceso industrial de fabricacin
de cortisona y hormonas sexuales como la progesterona (Anaya, 2003).
Las hormonas esteroidales, sexuales y corticoides, as como los anticonceptivos, son
productos de transformacin, de sntesis parcial, cuya materia prima es de origen
vegetal. La materia prima diosgenina, es aislada de tubrculos del gnero Dioscorea,
principalmente la Dioscorea compositae (Cuadro 3).

Cuadro 3.- Especies de Dioscoreas que presentan diosgenina.

Especie

Origen geogrfico

% de Diosgenina

Dioscorea compositae Mxico

13

Dioscorea floribunda

Mxico y Amrica Central

10

Dioscorea deltoidea

India

Dioscorea sylvatica

frica del Sur

Dioscorea speculiflora Mxico

15

Dioscorea prazeri

India

4.5

Dioscorea belizensis

Honduras

Estas plantas son nativas de Mxico y Guatemala. Las dioscoreas son difciles de
cultivar, siendo necesaria la utilizacin de plantas nativas para la extraccin de la
diosgenina.

16

La transformacin de las materias primas en esteroides farmacolgicamente activos

fue ideada por el descubridor de la estructura qumica de la diosgenina (Russell E.
Marker).
La figura 7 muestra las posibilidades de conversin de la diosgenina en diversas
clases de hormonas esteroidales (Sharapin, 2000).

17

DIOSGENINA

Oxima

Pregnenolona
16-D

Dihidroandrosterona

Acetato de 16
dehidropregnenolona16D

Progesterona

Epxido

5a-androstano-3a,17b-diol

Hidrocortisona

Testosterona

17-OH
Derivados
Fluorocorticoides

Estrona

Etisterona

Estradiol

9 Fluorocorticoides
19 nor-compuestos

19-Noretisterona

Figura 7.-Transformacin de la diosgenina en hormonas.

18

2.2.2 Diosgenina en barbasco

El barbasco es una planta que contiene una sustancia jabonosa, txica para los
animales, que despert la curiosidad cientfica del doctor Russell Marker (Figura 8).

(3,25R)-spirost-5-en-3-ol

Figura 8.- El origen de la diosgenina. (a) Dr. Russell E. Marker; (b) estructura qumica de la
diosgenina.

Este investigador descubri que la diosgenina era la responsable de la toxicidad del

barbasco y logr sintetizar, a partir de ella, hormonas esteroides muy demandadas en
la medicina mundial que a mediados del siglo XX slo se podan obtener de animales
que resultaban muy costosos y producan muy poco. [5]
Esto oblig a la bsqueda de sustancias similares o precursoras de la progesterona en
el reino vegetal y motivo que, en 1939, un grupo de cientficos, encabezados por el
doctor Marker E. Russell, explorara vastas regiones del sur de Estados Unidos y norte
de Mxico, logrando examinar ms de 400 especies pertenecientes a familias
botnicas caractersticas de esa regin (Agavaceae, Amarilidaceae, Cactaceae,
Lileaceae, etc.).
Como resultado obtuvieron datos de su composicin qumica, particularmente de las
sustancias conocidas como sapogeninas que se consideraban la materia prima
fundamental para la sntesis de hormonas.
Sin embargo, los resultados fueron pobres y en muchos casos infructuosos lo que
oblig al Dr. Russell a explorar la regin sureste de Mxico (Figura 9) en la que exista
la prctica de pescar utilizando la raz molida de una planta denominada barbasco.

19

Figura 9.-Russell Marker durante sus aos en la investigacin con el

barbasco.

Esta al consumir el oxgeno disuelto del agua produca espuma (indicio de la presencia
de sapogeninas), que ocasionaba la asfixia de los peces y facilitaba su captura.
Al analizar la planta, conocida tambin como cabeza de negro, encontraron en el
rizoma un elevado contenido de una sapogenina a la que bautizaron con el nombre de
diosgenina en referencia a su nombre botnico (Dioscorea mexicana). [13]
Gracias a este descubrimiento, el barbasco mexicano result ser fuente de grandes
cantidades de cortisona y abri muchas ms posibilidades mdicas y farmacolgicas
(Figura 10).
Durante aos, las compaas de este tipo explotaron la selva veracruzana y obtuvieron
de ella tanto barbasco como necesitaron, por desgracia no emprendieron ningn
programa para su cultivo o para renovar el recurso explotado.
Por el contrario, las grandes utilidades que produjo dicha explotacin, y que llev a la
produccin de la pldora anticonceptiva, benefici poco a la poblacin que lo
recolectaba. [5]

20

RAZ DE BARBASCO

RAZ DE BARBASCO SECO

MOLIDO
(Harina de barbasco)
DIOSGENINA
16-DHP

Oxima

Etinil Estradiol

Mestranol

Frmula anticonceptiva

EPXIDO

Pregnenolona

Compuesto-S

Progesterona

Hidrocortisona

Hormona
femenina

Lneas de
corticoides

Figura 10.-Sntesis de esteroides a partir de barbasco.

2.2.3 Usos de la diosgenina de barbasco en la Industria Qumica

La gran riqueza que generaba este recurso llev incluso al Ejecutivo Federal, durante
los aos setentas, a la intencin de nacionalizarlo, pero jams se adelant ningn
estudio ni se aplic ninguna poltica coherente al respecto.
Cuando la industria farmacutica retir sus inversiones, se perdieron las vas de
comercializacin de esta planta mexicana, y nuestro pas dej de ser exportador
mundial, convirtindose en importador de hormonas.

21

El uso del barbasco en la tradicin de la herbolaria mexicana est muy difundido. Se

toman infusiones de pequeos trozos de su raz para combatir la artritis, la citica, la
gota y fiebres reumticas (Figura 11).

Figura 11.- El barbasco puede combatir enfermedades por medio del uso de infusiones.
a) Artritis, b) citica, c) reuma.

Tambin se aplica en cataplasmas sobre las partes afectadas utilizando hojas

machacadas de la planta. Con esta ltima forma de aplicacin, tambin se utiliza para
combatir la sarna, la tia, sabaones y empeines.

Para combatir fiebres intermitentes, calosfros y calenturas, se toma entre comidas una
cucharada de vino blanco mezclado, a partes iguales con jugo de la raz del barbasco.
Contra clicos, diarrea crnica y heridas internas, se toma en ayunas, durante tres
semanas consecutivas; contra la retencin de la orina, clculos y catarro de la vejiga,
beber varias veces al da el cocimiento de un trozo de raz de barbasco en un litro de
agua. [5]
El polvo extrado del ame silvestre se aade a las cremas y ungentos vaginales, y a
las soluciones utilizadas para el masaje del seno. Diosgenina en el ame silvestre se
ha demostrado tambin un papel importante en el aumento de la fertilidad.

Curiosamente, si bien inicialmente ha ganado prominencia como una droga

antifertilidad, diosgenina, cuando se toma en pequeas dosis, se ha incrementado la
fertilidad. [14]

22

La mayor contribucin del barbasco a la humanidad es la obtencin de los derivados

hormonales para la pldora anticonceptiva.
En la actualidad se calcula que se han obtenido ms de 1 200 frmacos o compuestos
a travs de la diosgenina, entre los que destacan: productos hormonales (tratamiento
de disfunciones diversas como amenaza de aborto, cncer uterino, cncer prosttico,
impotencia sexual, etc.); corticoides (tratamiento de alergias, artritis reumatoide,
procesos inflamatorios, lesiones cutneas, etc.); anablicos (tratamiento de trastornos
metablicos); anticonceptivos (control de la natalidad) y hormonas para control
biolgico.
A todos los productos obtenidos de la diosgenina y otras sapogeninas de origen
vegetal o animal se les conoce genricamente como esteroides.

[15]

2.3 Cultivo in vitro

El trmino genrico cultivo de tejidos vegetales involucra a diferentes tcnicas de
cultivo de material vegetal diverso, incluyendo a los protoplastos (clulas desprovistas
de su pared celular), clulas, tejidos, rganos y plantas completas.

Mediante stas y otras tcnicas de cultivo, es posible obtener plantas libres de

microbios en un medio nutritivo asptico (estril) en condiciones ambientales
controladas.
Tambin se lo conoce como cultivo in vitro de plantas por realizarse en recipientes de
vidrio (hoy tambin de otros materiales (Figura 12 a) (Muoz, 2006).
El cultivo in vitro es un mtodo de propagacin de plantas de aplicacin profesional,
puesto que se realiza en laboratorio, en unas condiciones estriles y con unas
instalaciones especiales (Figura 12 b).
El cultivo in vitro consiste en tomar un segmento de hoja, un embrin, una porcin
pequea de tallo (de 0,2 a 1 mm) o cualquier otra parte de una planta ponerla a
cultivar en un tubo de ensayo sobre un medio acuoso nutritivo.

[16]

23

Figura 12.- Multiplicacin in vitro. (a) Corte de explantos sobre papel estril, (b) cultivo in vitro
en un laboratorio profesional.

Lo fundamental es que se hace en unas condiciones muy controladas y totalmente

estriles.
La planta ya desarrollada en el cultivo in vitro necesita una primera aclimatacin en el
laboratorio; en el invernadero y despus una segunda aclimatacin en el campo. Los
viveros grandes realizan ambas operaciones; otros slo se encargan del primer
paso.[16]
Hoy esta tcnica tiene numerosas aplicaciones (Figura 13):

Propagacin masiva de plantas, especialmente para especies de difcil

propagacin por otros mtodos, o en vas de extincin

Clonacin de individuos de caractersticas agronmicas muy deseables durante

todo el ao

Obtencin de plantas libres de virus

Produccin de semillas sintticas

Conservacin de germoplasma

Obtencin de metabolitos secundarios

Produccin de nuevos hbridos

Mejora gentica de plantas (incluyendo obtencin de plantas transgnicas)

Germinacin de semillas.

Produccin de haploides.

Estudios fisiolgicos diversos (Muoz, 2006).

24

Figura 13.-El cultivo in vitro posee numerosas aplicaciones,

puede utilizarse para la germinacin de semillas, propagacin y
mejora gentica de plantas, e incluso la clonacin de las mismas.

2.3.1 Cultivo de callos

Antes de que los procedimientos de multiplicacin clonal por explantes con estructura
organizada (como pices caulinares o yemas laterales) se empiezan a utilizar, la
variacin se considera, por lo general como una consecuencia de los cambios
cromosmicos ocurridos durante el proceso del cultivo. Se cree que el fracaso en la
formacin de callos o en las clulas cultivadas para organizarse y producir plntulas,
es el resultado de una amplia gama de trastornos citolgicos.

El callo es un tejido obtenido por medio del aislamiento de rganos o tejidos

diferenciados, comnmente son seleccionadas aquellas partes de la planta que se
encuentran en divisin activa, como las regiones meristemticas, siendo desinfectadas
(si provienen de explantes ex vitro) y colocadas en la superficie en un medio de cultivo.
El material biolgico es llevado a una desdiferenciacin celular formando una masa
amorfa de tejido, como resultado de la proliferacin continua y acelerada de las
clulas.

Los callos son la proliferacin y crecimiento desorganizado de clulas parenquimticas

in vitro que pueden originarse de un explante procedente tanto de material in vitro
como ex vitro y que son el resultado de las lesiones provocadas a los tejidos por el

25

corte y en respuesta a la segregacin de hormonas endgenas o proporcionadas a

travs del medio de cultivo.

La proliferacin de callos se puede iniciar casi a partir de cualquier tejido u rgano

vegetal: hoja, raz, polen, embriones, semillas, entre otros (Roca, et.al., 1991).

El desarrollo de los tejidos puede tomar dos rutas alternas en cuanto a su

diferenciacin. De esta manera, el crecimiento puede ser organizado (si se inicia
mediante rganos que siguen su crecimiento manteniendo sus caractersticas
estructurales); o desorganizado (fragmentos u rganos que producen tejidos sin
estructura definida o callo, de origen limitado a unos pocos tipos de clulas
especializadas, a partir de las cuales se forman embriones para la regeneracin de
plantas) (Muoz, 2006).

Se puede definir como callo a una masa de clulas meristemticas sin organizacin
interna aparente, que se origina mediante la proliferacin de las clulas
parenquimticas del explante inicial. Normalmente estn libres de elementos
diferenciados o estructuras anatmicas definidas, es decir, no tiene equivalencia en
ningn tejido normal de las plantas. Entre los factores que ms afectan la callognesis,
se pueden mencionar el tipo de explante y las condiciones fsicas y/o qumicas del
medio (Garca y Flores, 2008).

La totipotencia puede definirse como la capacidad que posee toda clula de regenerar
un tejido completo; toda clula puede ser inducida a un proceso de desdiferenciacin,
para formar callo y luego rediferenciarse en un tejido establecido mediante la accin
de reguladores del crecimiento.

La induccin de callo es un proceso importante para los programas de mejoramiento

gentico y seleccin de germoplasma. Por ejemplo, a partir de los callos obtenidos de
tejidos meristemticos de Digitaria eriantha, especie forrajeras se seleccionaron
aquellos que resistieron las bajas temperaturas y con ellos, se regeneraron plantas
resistentes a las heladas. Los callos tambin se han empleado para la produccin de
metabolitos secundarios, ya que se pueden obtener mejores rendimientos por medio
del cultivo de callos en bioreactores, en comparacin con los obtenidos a partir en
plantas completas (Prez, 1988).

26

Entre otras cosas, el cultivo de callos facilita muchos aspectos entre los que se
encuentra: el aislamiento de clulas y protoplastos; la produccin de metabolitos
secundarios de inters biolgico; el desarrollo de los trabajos de organognesis
(produccin de brotes y races); el desarrollo de la embriognesis somtica; la
conservacin de germoplasma y la introduccin de nueva variabilidad gentica.
Los callos en cultivo in vitro son resultado de las lesiones provocadas al tejido
diferenciado y en respuesta a hormonas ya sea endgenas o exgenas, estas ltimas
proporcionadas a travs del medio de cultivo utilizado (Garca y Flores, 2008).

Durante muchos aos se ha reconocido que los cultivos aspticos, especialmente los
callos, de clulas libres y de protoplastos, producen progenies que difieren
considerablemente del material inicial.

La situacin particular que se presenta al cultivar estas clulas es su inestabilidad

gentica que produce diversificaciones fenotpicas en los somaclones y esta
variabilidad susceptible de producirse en las plantas obtenidas mediante tcnicas de
cultivo in vitro, representa la base de las mutaciones genticas, por eso la conversin
de los callos es valiosa para resguardar determinadas lneas celulares y no para
preservar los recursos filogenticos (Roca, et.al., 1991).

2.3.1.1 Diferenciacin celular

Las diversas partes de una planta se desarrollan a travs de un complejo sistema de
divisin y diferenciacin celular, el cual sigue un patrn determinado genticamente.
Se entiende por crecimiento un aumento en la masa del organismo, mientras que la
diferenciacin es una variacin cualitativa de la forma o funcin de las clulas.
Las clulas vegetales, a diferencia de las clulas animales, tienen paredes rgidas, por
lo que no pueden desplazarse.

[17]

Paralelamente al aumento de tamao y nmero, las clulas sufren modificaciones en

la estructura de su protoplasma, en el que aparecen organelas especializadas en
funciones determinadas, hasta que toda la clula aparece con una serie de estructuras
que estn en relacin con su funcin, por lo que se llama clula especializada o

27

diferenciada. La planta as va desarrollando tejidos y rganos y su metabolismo

general se modifica: va madurando.

En casos de heridas o en procesos regenerativos, una clula que ya est diferenciada

puede volver a recuperar su capacidad meristemtica. En esos casos se produce una
desdiferenciacin de algunas clulas adultas hasta el estado meristemtico, varias
divisiones celulares, y una nueva diferenciacin.

En la planta normal, el crecimiento y la diferenciacin transcurren paralelamente y, por

ello, a menudo es ms frecuente referirse a un proceso que llamamos desarrollo. [18]

2.3.1.2 Desdiferenciacin Celular

Las clulas adultas vivas, aunque hayan alcanzado especializacin y estabilidad
fisiolgica, pueden recobrar su actividad meristemtica cuando son adecuadamente
estimuladas (Prez, 1988).
Este proceso recibe el nombre de desdiferenciacin. No puede ocurrir cuando ha
ocurrido una modificacin muy profunda del protoplasto o su desaparicin. Ocurre
naturalmente en las plantas cuando se originan los meristemas secundarios. Por
ejemplo, el felgeno, que se origina por desdiferenciacin de clulas epidrmicas y/o
subepidrmicas. [19]
Desde el punto de vista de su capacidad reproductiva y funcional, las clulas madre se
han definido como aquellas que pueden dividirse simultneamente para mantener por
un lado su auto-renovacin (Figura 14), con produccin de ms clulas madre
semejantes a ella, y por otro lado, generar clulas hijas comprometidas con diferentes
linajes celulares que se diferencian en diversos tipos de clulas especializadas, no
solo morfolgicamente, sino tambin funcionalmente.
De acuerdo con su estado evolutivo, las clulas madre se clasifican en embrionarias y
somticas o adultas. [20]

28

Figura14.- Desdiferenciacin de una clula vegetal.

2.3.1.3 Cultivo de clulas en suspensin

El sistema en cultivo de suspensin de clulas vegetales es un poderoso implemento
para llevar a cabo estudios en la induccin de embriognesis somtica, crecimiento y
diferenciacin, organognesis, ciclo celular, gentica, nutricin, bioqumica y
metabolismo, as como en la obtencin de metabolitos secundarios.

[9]

La idea de cultivar clulas vegetales in vitro, fue propuesta inicialmente por Haberlant
en 1902, pero Muir, et.al., (1954) demostraron la posibilidad de cultivar clulas
vegetales en suspensin.
Es apenas a partir de 1975, partiendo de los trabajos de Zenk, se constat por primera
vez que clulas cultivadas in vitro eran capaces de biosintetizar metabolitos
secundarios.
El cultivo celular se establece aleatoriamente y de esta forma pueden obtenerse, a
partir de un explante, numerosas fuentes celulares, cada una con un fenotipo
particular.
La variabilidad espontnea que ocurre cuando se establece un cultivo permite esperar
una produccin de metabolitos secundarios variables en calidad y cantidad. En algn
caso, un cultivo puede producir metabolitos secundarios en cantidades superiores a
los de la planta madre, lo que ocurre raramente, que frecuentemente un cultivo no

29

produce produce muy poco de dichos metabolitos. En otros casos, un cultivo puede
producir nuevas molculas.

[21]

Curva de crecimiento de clulas. Uno de los aspectos ms fascinantes de los

organismos vivientes es su capacidad para crecer y desarrollarse.
La sntesis continua de macromolculas a partir de iones y molculas pequeas no
slo conduce a la formacin de clulas ms grandes sino tambin ms complejas. Ms
an, no todas las clulas crecen y se desarrollan de igual forma, lo que resulta en una
planta madura compuesta por numerosos tipos de clulas.

[18]

Las curvas de crecimiento son una expresin generalizada del crecimiento de las
plantas.
Crecimiento y desarrollo son palabras usadas para indicar el incremento en tamao y
los cambios en forma y complejidad que ocurren en una planta a lo largo de sus ciclos
de vida (Crdoba, 1976).
Estos cambios anatmicos y fisiolgicos que experimenta la planta son susceptibles
de medirse a travs de peso altura o algn otro atributo similar que normalmente se
incrementa con la edad. En una planta superior el crecimiento est asociado tanto con el
incremento en el nmero de clulas, como con el aumento en su tamao y ocurre por
efecto de la fotosntesis. [22]
Desde que germina la semilla, a medida que pasa el tiempo, la planta va creciendo.
Sus clulas se dividen y multiplican y luego se alargan; el efecto, por supuesto, es que
la planta aumenta en tamao y peso.

Sin embargo, el crecimiento no es uniforme en toda la planta. Se encuentra localizado

en las zonas meristemticas, las que producen clulas que formarn nuevos tejidos y
rganos.

Estas zonas se encuentran ubicadas en los pices tanto del tallo como de la raz, en
las axilas de las hojas, en la base de las hojas de gramneas, y en los tallos, lo que les
permite crecer en grosor.

[18]

30

El hecho de que existan los meristemas en los vegetales permite establecer

diferencias con el crecimiento de los animales:

a) El crecimiento de los vegetales es indefinido o indeterminado. El vegetal

contina creciendo durante toda la vida del individuo o al menos mientras las
condiciones ambientales permitan. En el animal el tamao es definido por la
especie y menos susceptible a cambios por factores externos.

b) El crecimiento se produce en reas localizadas, los meristemas. En animales el

crecimiento se produce en el organismo todo en etapas tempranas hasta que
cesa y nicamente se produce divisin celular para reemplazar clulas
viejas.[21]
Estos cambios anatmicos y fisiolgicos que experimenta la planta son susceptibles
de medirse a travs de peso altura o algn otro atributo similar que normalmente se
incrementa con la edad.

En una planta superior el crecimiento est asociado tanto con el incremento en el

nmero de clulas, como con el aumento en su tamao y ocurre por efecto de la
fotosntesis.
Debido a la existencia de controles genticos dentro de las plantas, los productos
fotosintticos se distribuyen de una manera particular en cada planta, generando una
expresin morfolgica caracterstica en cada especie o cultivar. Como ejemplos, se
pueden pensar en la gran diversidad de estructuras de frutos y semillas presentes
entre las especies cultivables, y la gran diferencia morfolgica que existe entre una
variedad de mango criolla y unas variedades mejoradas (Crdoba, 1976).
Los factores ambientales influyen sobre esta expresin gentica de la forma
modificando, en cierta medida los patrones de crecimiento caractersticos de cada
cultivo. As la forma y proporciones que adquiere una planta a lo largo de las diferentes
etapas de su desarrollo son una expresin de la interaccin entre los factores
externos, internos y los ambientales o externos.
Estos factores externos son: luz, agua, dixido de carbono, oxigeno, temperatura y
nutrimentos. Para aplicar los conocimientos sobre el crecimiento vegetal en las

31

recomendaciones nutricionales para los cultivos resulta til analizar la curva que
normalmente sigue este fenmeno en las plantas, los ndices que se usan para
evaluarlo, y los aspectos de las plantas que son vitales de conocer para valorar su
comportamiento nutricional. [22]
Podemos definir al crecimiento como un aumento irreversible y permanente de
volumen de una clula, tejido, rgano o individuo, generalmente acompaado de un
aumento de masa. No basta que haya solamente divisin celular.

Algunos parmetros normalmente utilizados para la cuantificacin del crecimiento son:

altura, peso seco, peso fresco, rea foliar, longitud foliar y produccin de macollos en
gramneas. [18]
El crecimiento de las plantas difiere de acuerdo al tiempo que necesita para completar
su desarrollo por lo cual se clasifican en anuales y perennes. [22]

2.3.1.4 Factores que afectan el cultivo de callos

Temperatura. La temperatura es un factor importante en el cultivo de clulas
vegetales, pues juega un papel fundamental en la estabilidad de las protenas, en la
activacin de la transcripcin de genes y en los procesos de transferencia de calor y
masa.
El rango de temperaturas generalmente empleado est entre 15-35 C. La temperatura
afecta diferentes variables relacionadas con el crecimiento, como la velocidad
especfica de crecimiento, la acumulacin de compuestos intracelulares de reserva
(biomasa inactiva) y la velocidad de consumo de oxgeno.

pH. El crecimiento ptimo de las clulas vegetales en suspensin se encuentra entre

un pH de 5,06,0, el cual puede cambiar durante el curso del cultivo ya que
generalmente no se controla. Se ha demostrado que cambios en el pH inicial del
medio de cultivo pueden afectar la acumulacin de metabolitos secundarios.

Iluminacin. Las caractersticas de la irradiacin luminosa, como longitud de onda,

intensidad y fotoperiodo, influyen sobre el crecimiento y la produccin de metabolitos
secundarios en cultivos celulares hetertrofos de manera especie-especfica. [23]

32

Medio de cultivo.

Los medios usados ms frecuentemente para promover la

callognesis son Murashige y Skoog (1962); White (1963) y Gamborg (1968).

La sacarosa es generalmente una de las fuentes carbonadas que se utilizan en los

estudios de callos; aunque en algunas circunstancias la concentracin de sacarosa
puede alterar la pigmentacin del callo.
Este efecto tambin lo hace la proporcin auxina citocinina favoreciendo la formacin
de yemas. La sacarosa puede asimismo estimular la formacin de callos y cambiar la
textura de los mismos.

La concentracin de carbohidratos tambin afecta el potencial osmtico del medio. Se

sabe que aproximadamente una tercera parte de la sacarosa en el medio mantiene el
potencial osmtico requerido para la formacin de callos. [24]

2.3.1.5 Produccin de metabolitos secundarios in vitro

El cultivo de clulas vegetales ha surgido como una alternativa para la obtencin de
metabolitos de

alto

valor agregado,

producidos en

las plantas en

bajas

concentraciones y para los cuales, no existen procesos de sntesis qumica conocidos;

sin embargo, para la implementacin de esta tecnologa es necesario el desarrollo de
estrategias que permitan incrementar la productividad de los cultivos in vitro.

Por mucho tiempo los seres humanos han usado las plantas como fuente de
fragancias, saborizantes y medicinas (Figura 15).

Usualmente estos compuestos cumplen un rol ecolgico mediando la interaccin de la

planta con su ambiente, encontrndose generalmente en muy bajas concentraciones,
por lo cual se hace necesario utilizar gran cantidad de material vegetal para obtener
cantidades significativas del compuesto de inters. [23]
Tradicionalmente el aprovechamiento de estos compuestos ha estado determinado por
la capacidad de disear procesos de extraccin efectivos para las molculas de
inters; sin embargo, durante la ltima mitad del siglo pasado surgi la alternativa del

33

cultivo de clulas vegetales para obtener estas molculas sin necesidad de utilizar la
planta completa (Hoyos, 1985).

Figura 15.- Metabolitos secundarios empleados en la industria

como saborizantes, fragancias, colorantes, medicamentos, etc.

La utilizacin de esta estrategia para la produccin de metabolitos secundarios,

requiere la determinacin de las condiciones de produccin ptimas, as como el
empleo de metodologas como la ingeniera gentica y/o la elicitacin con el fin de
incrementar la produccin de los metabolitos de inters. Sin embargo, dificultades
asociadas con el escalamiento, han hecho que la utilizacin comercial de esta
tecnologa est aun limitada a unos pocos procesos.

La primera estrategia para lograr una lnea celular altamente productora de un

metabolito es la seleccin adecuada de la fuente de explante; recomendndose el uso
de una parte de la planta en donde normalmente se haya observado la acumulacin
del metabolito, pues se ha demostrado que lneas obtenidas de diferentes partes de la
planta, presentan productividades diferentes de metabolitos secundarios.

[23]

Una vez establecido el cultivo in vitro se debe seleccionar la lnea celular con base en
su velocidad de crecimiento, niveles de produccin y estabilidad, subcultivando slo
aquellas que presentan la caracterstica de inters (Aristeguieta, 1964).

34

III. MATERIALES Y MTODOS

El presente trabajo de investigacin se realiz en el LADISER de Biotecnologa y

Criobiologa Vegetal y el de Qumica Orgnica y Biotecnologa. Facultad de Ciencias
Qumicas, Universidad Veracruzana, Orizaba, Ver.

3.1 Material biolgico

Se utilizarn vitroplantas del banco de germoplasma de barbasco (Dioscorea

compositae), ubicado en el LADISER de Biotecnologa y Criobiologa Vegetal, en
donde se disectaron yemas de aproximadamente 1.5 cm para iniciar los cultivos de
callos.

3.2 Medio de cultivo

El medio de cultivo utilizado es el MS (Murashige y Skoog, 1962) (Cuadro 1 A),

suplementado con sacarosa (azcar comercial) al 3% (p/v), como agente gelificante
se emple phytagel 2.7 g L-1.

El medio de cultivo as preparado fue distribuido en frascos con capacidad de 45 mL a

los cuales se adicion 10 mL. La esterilizacin del medio se realiz en autoclave a
121 C durante 20 minutos.

3.3 Condiciones ambientales

Los experimentos se realizaron en un cuarto de incubacin de ambiente controlado,

con luz blanca-fluorescente, cuya radiacin fotosinttica activa es de 50 m m2 s-1,
teniendo un fotoperiodo de 16/8 h y una temperatura de 24 + 2 C.

La investigacin fue desarrollada en cuatro etapas: 1) Tipo de explante, 2)

Fotoperiodo, 3) Induccin de callo en barbasco y 4) Multiplicacin de callo.

- 36 -

3.4 Efecto del tipo de explantes in vitro para la induccin de callo de barbasco

Para tener un mayor rendimiento en la formacin de callos, fue necesario realizar

ciertas pruebas en cuanto al tipo de explante y su posicin, que permitiera un mejor
desarrollo del mismo. El primer explante que se utiliz fue el de yemas completas en
posicin vertical (Figura 16a); por otra parte se colocaron yemas en corte transversal,
ubicando sobre el medio de cultivo el fragmento cortado (Figura 16b); y el tercer
explante empleado fueron hojas recortadas por sus 4 lados, dando la forma de un
cuadrado, poniendo sobre el medio de cultivo el haz de la hoja (Figura 16c).

Figura 16.- Pruebas para induccin de callos con diferentes explantes. a) Yema en
posicin vertical, b) yema con corte transversal en posicin horizontal, c) corte de la
hoja por su lado haz.

3.5 Efecto del fotoperiodo en la induccin del callo de barbasco

Se evalu el efecto que ejerce el fotoperiodo en la formacin y desarrollo del callo. El
material fue subcultivado, mantenindolo en condiciones controladas de temperatura
(22 C), una parte del material subcultivado se someti a fotoperodo de 16/8 h a 50
m m2 s-1 en un lapso de 30 das, mientras que la otra parte se someti a oscuridad
constante durante el mismo periodo.
3.6 Efecto en la relacin 2,4-D y kinetina en la induccin de callo

Se disectaron explantes de yemas de aproximadamente 1.5 cm de longitud, los cuales

se cultivaron en un medio conformado por las sales MS 100%, suplementado con
tiamina 40 mgL-1, inositol 100 mgL-1, vitaminas (piridoxina 0.5 mgL-1, .c. nicotnico 0.5
mgL-1, glicina 2 mgL-1 (Cuadro 2A)), sacarosa 30 gL-1, phytagel 2.7 gL-1, ajustando el

- 37 -

pH a 5.7 0.1, variando las concentraciones del cido 2,4 diclorofenoxiactico (2,4
D) y la kinetina (Cuadro 4).

Cuadro 4.- Efecto en la interaccin del 2,4-D y Kinetina en la

induccin de callos de Dioscorea compositae.

Tratamiento
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32

-1

-1

2,4-D (mgL )

Kinetina (mgL )

0
0
0
0
0.5
0.5
0.5
0.5
1
1
1
1
1.5
1.5
1.5
1.5
2
2
2
2
2.5
2.5
2.5
2.5
3
3
3
3
3.5
3.5
3.5
3.5

0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5
0
0.5
1
1.5

- 38 -

El material fu subcultivado en un mismo da; mantenindolo en condiciones

controladas de temperatura y fotoperiodo. Para inducir la desdiferenciacin a callos,
los tratamientos se mantuvieron en oscuridad durante 28 das.

3.7 Variables a evaluar.

Las variables a evaluar a los 13, 20, 27, 34, 41, 50 y 64 das fueron: 1) Oxidacin (%);
2) Nmero de explantes con callo; 3) rea de callo (mm); 4) Contaminacin (%).
rea de callo.

El anlisis del desarrollo de callo se realiz mediante mediciones semanales de

sobrevivencia y desarrollo de callo; as como la eficiencia en la induccin de callo
mediante la determinacin del rea de callo (mtodo de medicin no destructivo), el
cual se resume en la Figura 17.

Figura 17.- Frmula de medicin del rea de callo.

- 39 -

3.8 Multiplicacin del callo en explantes de barbasco.

Una vez inducido el callo, se seleccionaron los explantes, eliminando el tejido no

desdiferenciado y las reas oxidadas, para nicamente dejar las clulas ya
desdiferenciadas tomando en cuanto el tamao del inculo (Figura17).
El medio utilizado fue las sales MS 100%, suplementado con tiamina 40 mgL -1, inositol
100 mgL-1, vitaminas (piridoxina 0.5 mgL-1, .c. nicotnico 0.5 mgL-1, glicina 2 mgL-1
(Cuadro 2A)), BA 1mg-1, ANA 0.5 mg-1, sacarosa 30 gL-1, phytagel (2.7 gL-1), ajustando
el pH a 5.7 0.1.

Las variables a evaluar fueron las caractersticas cualitativas y comportamiento de las

clulas.

Seleccin de vitroplantas de Dioscorea

compositae.

Evaluacin del tipo de explante in vitro para la

induccin de callo
Establecimiento del fotoperiodo en la induccin
del callo

Inoculacin de yemas de D. compositae en

medios de cultivo con diferentes
concentraciones de 2,4-D y Kinetina

Desdiferenciacin celular

Formacin de races

Formacin de callos

Multiplicacin de callos

Figura 17.- Diagrama de flujo para la induccin y multiplicacin de callos de

D. compositae.

- 40 -

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

4.1 Efecto del tipo de explantes in vitro para la induccin de callo de barbasco

Las yemas presentaron la mejor respuesta para la induccin de callo (70%) en

comparacin con hojas (0%). Sin embargo, en explantes de yema la posicin influy
en la desdiferenciacin celular; se observ que cuando se colocaron las yemas de
forma horizontal, la desdiferenciacin celular fue mayor, pues la concentracin del
callo no se concentr en una sola rea del tallo, sino que abarc todo el explante,
mientras que en las que se colocaron en posicin vertical tambin existi produccin
de callo, pero se origin solo en el extremo inferior y/ en el nudo de la yema; por otro
lado los explantes de hojas actuaron de manera contraria, ya que no hubo respuesta
para la formacin de callo (Cuadro 5 , Figura 19).

En otras especies se han utilizado todas las partes de la planta como explantes para la
induccin de callo (Flick, et.al., 1983; Murashige, 1974; Evans, et.al, 1981). No
obstante los tejidos juveniles poseen un alto grado de actividad meristemtica y tiende
a tener ms plasticidad in vitro, por lo que en este trabajo, las yemas fueron los
explantes con mayor produccin de callo.

Figura 19.- Desarrollo de callos en diferentes posiciones de explantes. a) Yema en posicin

vertical, b) yema en posicin horizontal en corte transversal.

- 42 -

Cuadro 5.- Respuesta en la induccin de callo en diferentes explantes in vitro

de barbasco

Explantes

% Callos

NEC

DR

% Oxidacin

Yema vertical

60

100

15

40

Yema horizontal

80

100

15

40

Hoja

100

4.2 Efecto del fotoperiodo en la induccin del callo de barbasco

Los cultivos incubados en oscuridad formaron el callo de barbasco en menor tiempo

(70%) y la produccin de callo se duplic con respecto a los explantes incubados bajo
un fotoperiodo donde se present mayor oxidacin (65%), sobre todo a los ms
pequeos, lo que provoc la muerte de estos sin concluir el proceso de multiplicacin
(Cuadro 6, Figura 20). Resultados contrarios para la induccin de callo se observaron
en stevia rebaudiana en donde se vio favorecido utilizando un fotoperiodo (Oriza,
et.al., 2009).

Cuadro 6.- Respuesta en la induccin de callo expuestos a diferentes

fotoperiodos
NEC

% Callos

DR

% Oxidacin

Oscuridad

100

70

15

40

Fotoperiodo 16/8 h

100

30

15

65

La luz se ha considerado como el factor ms importante para el cultivo de tejidos in

vitro (Murashige, 1974). Dado que el medio de cultivo contiene carbohidratos
(sacarosa 30 gL-1) el efecto de la luz posiblemente no est asociado con la
fotosntesis.

- 43 -

Despus de 25 das los explantes cultivados en oscuridad mostraron etiolacin, por lo

que se procedi a cambiarlos a un fotoperiodo.

Figura 20.- Desarrollo de callos en diferentes fotoperiodos. a) Callo formado en la

oscuridad, b) callo formado en la luz.

4.3 Efecto en la relacin 2,4-D y kinetina en la induccin de callo

Tomando en cuenta las variables oxidacin, nmero de explantes con callo, rea de
callo, contaminacin, se analizaron los resultados, en busca de la mejor opcin para el
cultivo in vitro de yemas de D. compositae para la induccin de callos.

Se obtuvo un 18 % de contaminacin la cual se observ a las 72 h despus del

subcultivo. A los 64 das de haber montado el experimento se present una oxidacin
del 42 % sobre todo en los explantes donde hubo mayor concentracin de
fitorreguladores (Figura 21).

- 44 -

Figura 21.- Callos de D. compositae oxidados. a) Oscuridad, b) fotoperiodo.

A medida que se increment la concentracin de 2,4-D el tiempo de formacin del

callo fue menor, aproximadamente en 13 das se apreci el primer explante con callo
de los tratamientos 26, 30 y 32 (3 - 3.5 mgL-1 de 2,4-D y 0.5 - 1.5 mgL-1 de kinetina.
Los tratamientos que presentaron una concentracin intermedia (1 - 2.5 mgL-1 de
2,4-D y 0 - 1.5 mgL-1 de kinetina), dieron lugar a la formacin de callo en un lapso de
tiempo mayor (27 das), pero estos fueron de mejor aspecto (Figura 22). A los 64 das
de haber montado el experimento, el nmero total de explantes con callos fu de 89.

Figura 22.- Callos obtenidos de D. compositae, a los 64 das de haberse inducido. a) 0.5 mgL-1
de 2,4-D y 1 mgL-1 de kinetina, b) 1 mgL-1 de 2,4-D y 1.5 mgL-1 de kinetina.

- 45 -

Se observ que en ausencia de 2,4-D y kinetina (0 1.5 mgL-1) se induce a la

etiolacin y formacin de races (Figura 29), teniendo el 8.22 % de explantes etiolados
y 22.78 % de explantes con races (Figura 23).

Figura 23.- Efecto de la escasez de 2,4-D en el medio de cultivo. a) Explantes etiolados de D.

compositae, b) formacin de races.

En los explantes que llegaron a formarse callos, se les realiz un anlisis del
desarrollo del mismo (Figura 24), por medio del mtodo de medicin no destructivo, los
resultados de las medidas de cada uno de los callos formados se muestran en el
Cuadro 7.

Figura 24.- Mtodo de medicin no destructivo. a) Corte de la parte del explante no

desdiferenciado, b) medicin del callo.

- 46 -

Cuadro 7.- reas en promedio de los callos obtenidos a los 64 das de haber
inducido a la callognesis.
-1

-1

Tratamiento

2,4-D (mgL )

Kinetina (mgL )

rea de callo mm

0.5

1.5

0.5

0.1

0.5

0.5

0.06

0.5

0.19

0.5

1.5

0.06

0.1

10

0.5

0.21

11

0.13

12

1.5

0.24

13

1.5

0.12

14

1.5

0.5

0.15

15

1.5

0.25

16

1.5

1.5

0.08

17

0.08

18

0.5

0.07

19

0.06

20

1.5

0.06

21

2.5

0.14

22

2.5

0.5

23

2.5

0.14

24

2.5

1.5

0.3

25

0.09

26

0.5

0.14

27

0.12

28

1.5

0.13

29

3.5

0.12

30

3.5

0.5

0.14

31

3.5

0.09

32

3.5

1.5

0.21

- 47 -

La mayor rea del callo fue observada en el material que se cultiv en los tratamientos
12 (2,4-D 1 mgL-1, Kinetina1.5 mgL-1) y 24 (2,4-D 2.5 mgL-1, Kinetina 1.5 mgL-1) (Figura
25). Las diferentes concentraciones de 2,4-D utilizadas causaron diferente respuesta
morfognica.

REA DE CALLOS FORMADOS EN PRESENCIA DE 2,4-D

0.3
3.5

0.25

3
0.2

2.5
-1
2 mg L de

rea de callo
0.15
2
mm

2,4-D

1.5
0.1

1
0.5

0.05

0
0
1

9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 25.- Respuesta del calloTratamientos

a diferentes concentraciones de 2,4-D

La presencia de la kinetina mejor el desarrollo del callo (Figura 26); sin embargo, esto
no present diferencias significativas importantes en cuanto al callo obtenido solo con
2,4D. La presencia de auxina (2,4D) ha demostrado ser necesaria para la iniciacin
de los procesos morfogenticos; sin embargo, las citocininas han mostrado efectos
directos sobre la diferenciacin de tejidos (Halperin et al., 1964).

- 48 -

REA DE CALLOS FORMADOS EN PRESENCIA DE KINETINA

0.3
0.25
0.2

1.5
1 mg L-1 de

rea de callo0.15
2
mm

0.5

0.1

Kinetina

0.05
0
1

9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31

Figura 26.- Respuesta del callo a diferentes concentraciones de kinetina.

El callo de D. compositae mostr un incremento en la desdiferenciacin celular en

presencia de concentraciones de 1 a 2.5 mgL-1 de 2,4-D y de 1 a 1.5 mgL-1 de
Kinetina; siendo el medio con 1 mgL-1 de 2,4-D el que present un mejor desarrollo de
callos con alta friabilidad, mostrando una alta diferencia significativa entre este y los
dems tratamientos.

Se observ que en los tratamientos 1 al 4 la formacin del callo fue nula, mientras que
en el resto de los tratamientos por lo menos alguno de los explantes tena callo.
El callo con dimensiones ms pequeas fue de 0.08 mm2, que corresponde al
tratamiento 11; mientras que los de mayor tamao fueron de 1.82 mm 2 del tratamiento
10, y el de 1.95 mm2 del tratamiento 24. Esto segn los clculos obtenidos de la
frmula de medicin de callos no destructible.

Tambin se observ que los callos de mayor tamao presentaron una consistencia
ms friable, cuando los de menor tamao fueron ms compactos (Figura 27).

- 49 -

41%

Friable
59%

Compacto

Figura 27.- Consistencia presente en los callos de D.

compositae a los 64 das de la inoculacin.

4.4 Multiplicacin del callo en explantes de barbasco.

La multiplicacin de callos es tan importante como la misma induccin, dado que si no

se da lugar a la propagacin, no habr desarrollo del callo, y este se secara sin
permitir emplearlo para sus variadas aplicaciones (Figura 28).

Figura 28.- Incitacin de la multiplicacin de callos de D.

compositae.

Es muy importante tomar en cuenta que se debe eliminar la parte oxidada de los callos
a la hora de someterlos a multiplicacin, pues de lo contrario, el resto de la fraccin
cultivada se ver afectada por la misma oxidacin (Figura 29).

- 50 -

Figura 29.- Tcnica de propagacin de callos. a) Eliminacin total de la seccin oxidada del
callo, b) inoculacin de callos en un medio de cultivo nuevo.

Por otra parte, cuando el medio de cultivo ya se encuentra muy deshidratado, o la

propagacin del callo ha sido abundante, es necesario cambiar de medio de cultivo a
la materia, para permitir que la multiplicacin contine.

Durante el subcultivo de callos, se observ que cada vez se vuelven ms friables, lo

que permite un mejor manejo de ellos, as como la demostracin de que las clulas se
siguen multiplicando, de manera uniforme y en las mejores condiciones deseadas
(Figura 30).

El mejor medio de cultivo para induccin de callos utilizado fue las sales MS 100 %,
suplementado con 2,4-D 2.5 mgL-1, kinetina 1.5 mgL-1, tiamina 40 mgL-1, inositol 100
mgL-1,

vitaminas

(piridoxina 0.5 mgL-1, .c. nicotnico 0.5 mgL-1, glicina 2 mgL-1

(Cuadro 2A)), sacarosa 30 gL-1, phytagel 2.7 gL-1, ajustando el pH a 5.7 0.1; ste
permiti formar callos en D. compositae, los cuales se mostraron con apariencia
friable, color claro y sin pigmentaciones, crecieron a 25 C en 25 - 27 das de la
siembra.

Estos callos fueron transferidos al medio de multiplicacin de sales MS 100 %

suplementado con tiamina 40 mgL-1, inositol 100 mgL-1, vitaminas (piridoxina 0.5
mgL-1, .c. nicotnico 0.5 mgL -1, glicina 2 mgL-1 (Cuadro 2A)), BA 1mg-1, ANA 0.5 mg-1,

- 51 -

sacarosa 30 gL-1, phytagel (2.7 gL-1), ajustando el pH a 5.7 0.1; el cual logr su
multiplicacin.

Figura 30.- Callos de D. compositae multiplicados.

- 52 -

V. CONCLUSIONES

Las yemas en corte transversal, son los explantes adecuados para la induccin de
callos de D. compositae.

La oscuridad favorece la formacin de callo en D. compositae (70%) y disminuye la

oxidacin (40%).
El medio de cultivo con sales MS al 100 % suplementado con 2,4-D 2.5 mgL-1, kinetina
1.5 mgL-1, tiamina 40 mgL-1, inositol 100 mgL-1, vitaminas (piridoxina 0.5 mgL-1, .c.
nicotnico 0.5 mgL-1, glicina 2 mgL-1 (Cuadro 2A)), sacarosa 30 gL -1, phytagel 2.7 gL-1,
ajustando el pH a 5.7 0.1; fue el adecuado para la induccin de callo.
El medio de cultivo con concentracines de 2,4-D bajas (0 - 0.5 mgL-1) favorece la
formacin de races.
El medio de multiplicacin de sales MS 100 % suplementado con tiamina 40 mgL -1,
inositol 100 mgL-1, vitaminas (piridoxina 0.5 mgL-1, .c. nicotnico 0.5 mgL-1, glicina 2
mgL-1 (Cuadro 2A)), BA 1mg-1, ANA 0.5 mg-1, sacarosa 30 gL-1, phytagel (2.7 gL-1),
ajustando el pH a 5.7 0.1; es el indicado para dar lugar a la multiplicacin de callos.

- 54 -

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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22. http://www.scribd.com/doc/12961359/Practica-4-Curvas-de-Crecimiento

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24. http://www.alaquairum.net/hormonas_vegetales.htm#auxinas

- 59 -

ANEXOS

Cuadro 1A.- Compuestos inorgnicos del medio de cultivo de

Murashige y Skoog (1962) (MS) utilizado en la germinacin de las
semillas del rbol del neem.

COMPONENTES

CANTIDAD
-1
(mgL )

Inorgnicos:
NH4NO3

1650

KNO3

1900

MgSO4.H2O

370

MnSO4.H2O

22.3

ZnSO4.7H2O

8.6

CuSO4.5H2O

0.025

CaCl2.2H2O

440

CoCl2.H2O

0.025

KH2PO4

170

H3B3O

6.2

FeSO4.7H2O

27.8

Na2.EDTA

37.3

Tiamina
Inositol

1
100

Orgnicos:

- 61 -

Cuadro 2A.- Vitaminas. Mtodo de preparacin.

gr/250mL.

gr/100mL.

Inositol

100 mgL-1

2.5

Piridoxina

0.5 mgL-1

0.0125

0.005

-1

0.0125

0.005

-1

0.0025

...

0.05

...

c. Nicotnico

0.5 mgL

Tiamina

40 mgL

Glicina

2mgL-1

Cuadro 3A.-Composicin del medio para induccin de callo

de Dioscorea compositae utilizado.

COMPOSICIN
Sales MS

100%

Tiamina

40 mgL-1

Inositol

100 mgL-1

Vitaminas MS

100%

2,4 D

Cuadro 3

Kinetina

Cuadro 3

Sacarosa

30 gL-1

Phytagel

2.7 gL-1

Cuadro 4A.-Medio para multiplicacin de callo de Dioscorea

compositae utilizado.

COMPOSICIN
Sales MS

100%

Tiamina

40 mgL-1

Inositol

100 mgL-1

Vitaminas MS

100%

BA

1 mg L-1

ANA

0.5 mgL-1

Sacarosa

30 gL-1

Phytagel

2.7 gL-1

- 62 -

Cuadro 5A.- reas en mm de los callos formados.

Tratamiento

Explante 1 (mm2.)

Explante 2
2
(mm .)

5B

0.14

0.06

5C

0.12

6A

0.06

7A

0.06

0.48

7B

0.22

0.12

7C

0.10

8C

0.06

9A

0.20

0.06

9B

0.12

0.07

9C

0.05

10A

0.45

10B

0.03

0.2

10C

0.16

11B

0.12

0.02

11C

0.25

12A

0.56

0.25

12B

0.12

12C

0.03

13A

0.12

0.06

13B

0.17

13C

0.14

14A

0.12

0.12

14B

0.30

0.06

14C

0.10

0.20

15A

0.15

0.27

15B

0.15

0.09

15C

0.25

0.09

16B

0.04

0.12

17B

0.04

0.03

17C

0.07

0.2

18C

0.08

0.06

19B

0.06

0.06

20B

0.12

0.02

20C

0.10

0.03

- 63 -

21A

0.09

21B

0.2

23A

0.13

0.22

23C

0.07

24A

0.04

0.63

24C

0.48

0.06

25A

0.03

0.15

26A

0.11

0.12

26B

0.17

0.15

26C

0.21

27A

0.21

0.03

28B

0.20

0.06

29A

0.12

30A

0.10

30B

0.08

0.07

30C

0.32

31A

0.12

31B

0.07

32A

0.18

0.20

32B

0.29

0.12

32C

0.37

0.15

- 64 -

GLOSARIO

Abscisin: Separacin de una parte pequea de un cuerpo cualquiera, hecha

con un instrumento cortante. Interrupcin o renunciacin.
Apical: Perteneciente o relativo a un pice o punta, o localizado en ellos.

pices: Extremo superior o punta de una cosa. Derivado de apical.

Adventicia: Dicho de un rgano o parte de un animal o de un vegetal: Que se

desarrolla en lugar distinto del habitual.
B

Biomasa: Materia orgnica originada en un proceso biolgico, espontneo o

provocado, utilizable como fuente de energa.
C

Cpsula: Fruto seco, con una o ms cavidades que contienen varias semillas
y cuya dehiscencia se efecta segn el plano que no es perpendicular al eje
del fruto; p. ej., el de la amapola.
Cataplasma: Tpico de consistencia blanda, que se aplica para varios efectos
medicinales, y ms particularmente el que es calmante o emoliente.
Cloroplastos: Orgnulo de las clulas vegetales en el que tiene lugar la
fotosntesis.
E

Embarbascar: Envenenar el agua con verbasco u otra sustancia anloga para

atontar a los peces.

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Embriognesis: (De embrin + gnesis). Es el complejo proceso generativo

que conduce a la formacin de un organismo pluricelular, vegetal o animal, a
partir del cigoto.
Estaminada: Cualquier flor que se caracteriza por tener los estambres muy
largos, delgados y llamativos.
Estoln: Rama rastrera que nace de la base del tallo de algunas plantas y
echa races que producen nuevas plantas, como en la fresa.
Estomas: Abertura microscpica en la epidermis de las partes verdes de los
vegetales superiores que permite el intercambio de gases y lquidos con el
exterior.
F

Felgeno: Meristema encargado de la formacin de los tejidos de proteccin

secundarios.
Fenotipo: Manifestacin visible del genotipo en un determinado ambiente.

Foliar: Perteneciente o relativo a la hoja.

Fototropismo: Corresponde a una respuesta del vegetal frente al estmulo

luminoso. Implica un crecimiento de la planta, influenciado por este estmulo.
Cada parte de ella responde de distinta forma a este estmulo.
Friable: Que se desmenuza fcilmente.

Geotropismo: Movimiento de orientacin de un organismo cuyo factor

predominante es la fuerza de gravedad.
Germoplasma: Conjunto de individuos que representan la variabilidad
gentica de una poblacin vegetal

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Gramneas: Familia de plantas angiospermas monocotiledneas de tallo

cilndrico, nudoso y generalmente hueco, hojas sentadas, largas y estrechas e
insertas al nivel de los nudos, flores dispuestas en espiguillas reunidas en
espigas, racimos o panculas y semillas ricas en albumen. Ej. el trigo
H

Helifila: Que busca la luz.

Herbolaria: Conjunto de conocimientos relativos a las propiedades curativas

de las plantas.
Hetertrofo: Dicho de un organismo: Incapaz de elaborar su propia materia
orgnica a partir de sustancias inorgnicas, por lo que debe nutrirse de otros
seres vivos.
Hbrido: Dicho de un individuo: Cuyos padres son genticamente distintos con
respecto a un mismo carcter.
I

Inflorescencia: Orden o forma con que aparecen agrupadas las flores en una
misma rama.
Infrutescencia: Fructificacin formada por agrupacin de varios frutillos con
apariencia de unidad.
Infusin: Bebida que se obtiene de diversos frutos o hierbas aromticas,
como t, caf, manzanilla, etc., introducindolos en agua hirviendo.
L

Latencia: Tiempo que transcurre entre un estmulo y la respuesta que

produce.

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Macollos: Son la unidad estructural de la mayora de las especies de

gramneas. Se forman a partir de las yemas axilares o secundarias del
meristema basal del eje principal
Meristemtico: Tejidos meristemticos son los responsables del crecimiento
vegetal. Sus clulas son pequeas, tienen forma polidrica, paredes finas y
vacuolas pequeas y abundantes.
Mermada: Disminuir algo o consumirse parte de lo que antes tena.

Nervadura: Conjunto de los nervios de una hoja.

ame: Planta herbcea de la familia de las Dioscoreceas, muy comn en los

pases intertropicales, con tallos endebles, volubles, de tres a cuatro metros de
largo, hojas grandes y acorazonadas, flores pequeas y verdosas en espigas
axilares, y raz grande, tuberculosa, de corteza casi negra y cuya carne, cocida
o asada es comestible.
O

Ontogenia: Formacin y desarrollo del individuo, referido en especial al

periodo embrionario.
P

Parnquima:

Tejido

vegetal

constituido

por

clulas

de

forma

aproximadamente esfrica o cbica y con espacios de separacin.

Perenne: Que vive ms de dos aos.

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Perennifolia: Que tiene hojas durante todo el ao.

Pistilada: Que posee pistilo.

Pistilo: rgano femenino vegetal, que ordinariamente ocupa el centro de la

flor y consta de uno o ms carpelos. En su base se encuentra el ovario y en su
pice el estigma, frecuentemente sostenido por un estilo. Su conjunto
constituye el gineceo.
Plntula: Planta joven, al poco tiempo de brotar de la semilla.

Protoplastos: Clula de planta, bacteria u hongo que ha perdido total o

parcialmente su pared celular, para lo cual se usan mecanismos mecnicos o
enzimticos.
R

Reversina: Compuesto que induce a una clula a desdiferenciarse.

Rizoma: Tallo horizontal y subterrneo, como el del lirio comn.

Senescencia: Se denomina as al proceso de envejecimiento normal.

Sesquiterpenoides: Los sesquiterpenos son los terpenos de 15 carbonos

(es decir, terpenoides de un monoterpenoide y medio). Como los
monoterpenoides, muchos sesquiterpenoides estn presentes en los aceites
esenciales.
T

Tubrculo: Parte de un tallo subterrneo, o de una raz, que engruesa

considerablemente, en cuyas clulas se acumula una gran cantidad de
sustancias de reserva, como en la patata y el boniato.

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Yema axilar: Meristema (clula sin diferenciacin) que se encuentra en la

base de las hojas de una planta. Da origen a nuevas estructuras bsicas,
como otras hojas, flores o espinas, que crecern dependiendo de las
necesidades de la planta y de las condiciones ambientales.

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