EXTRACCIN ADN ANIMAL Y VEGETAL

OBJETIVOS
1. Utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN de un producto
natural.
2. Observar la estructura fibrilar del ADN.
INTRODUCCIN
El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, bilogo
suizo, en los ncleos de las clulas del pus obtenidas de los vendajes
quirrgicos desechados y en el esperma de salmn. l la llam a la sustancia
nuclena, aunque no fue reconocida hasta 1943 gracias al experimento
realizado por Oswald Avery. La estructura del ADN es una pareja de largas
cadenas de nucletidos, descubierta en 1953 por James Watson y Francis Crick.
Una larga hebra de cido nucleico esta enrollada alrededor de otra hebra
formando un par entrelazado. Dicha hebra mide 3.4nm de paso de rosca y
2.37nm de dimetro, y est formada en cada vuelta, por 10.4 pare de
nucletidos enfrentados entre s por sus bases nitrogenadas. La extraccin de
ADN de una muestra celular, se basa en el hecho de que los iones salinos son
atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y
posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar la clula mediante un
detergente, vaciando su contenido molecular en una disolucin tampn en la
que se disuelve el ADN. En este momento el tampn contiene ADN y otros
restos celulares moleculares como: ARN, carbohidratos, protenas y otras
sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN de gran
longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separadas de l
por accin del detergente, Solo queda por tanto extraer el ADN de esta mezcla
de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol.
MATERIAL Y REACTIVOS
Hielo

Algodn / Gasa

Alcohol Etilico 96

Mortero

Detergente lquido

Tubo De Ensaye

Solucin De NaCl 5m

Vaso De Precipitado De 100ml

Higado y jitomate (Platano o Fresa)

Palito De Madera

Embudo

Probeta de 25ml

PROCEDIMIENTO

1. Elegir la muestra de la cual vamos a extraer ADN, 2.5cm x 2.5cm de la

muestra, pasar a un mortero y agregar 25ml de una solucin de cloruro de
sodio al 5M.
2. Triturar la muestra hasta que se mezcle perfectamente.
3. Separar los restos ms grandes hacindolo pasar por un algodn y embudo
lo ms fino posible y colocar en un tubo de ensaye. Llenar aproximadamente
1/3 o 1/2 del tubo.
4. Agregar 3ml de detergente lquido, mezclar sin formar burbujas por 10 min y
dejar reposar en hielo por otros 10 minutos.
5. Agregar un volumen de alcohol etlico fro. Se debe dejar escurrir lentamente
el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo este inclinado. El alcohol
quedara flotando sobre el tampn.
*Colocar el tubo en el hielo y observar cmo se forma un precipitado
algodonoso.
RESULTADOS
El producto filamentoso obtenido no es ADN puro ya que, entremezclado con
l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin profesional se realiza aadiendo
enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se una al ADN.
Resulta curioso comparar este mtodo de extraccin con el correspondiente
protocolo de extraccin que siguen los laboratorios de anlisis QUIAGEN de
purificacin de ADN. Realizar un esquema del procedimiento y explicar porque
se observa de forma filamentosa el ADN.
CUESTIONARIO
1) Qu funcin tiene la enzima papana en el buffer de extraccin?
2) Cul es la funcin de NaCl en el buffer?
3) Qu otros mtodos de extraccin se conocen para ADN?
4) Qu funcin tiene el alcohol en esta prctica?