GUA DE PRCTICAS

LABORATORIO

TALLER

SIMULACIN

CAMPO

CARRERA: Ingeniera Bioqumica

ASIGNATURA: Ingeniera de las fermentaciones
NIVEL: 7

PARALELO: A

REA ACADMICA: Profesional

DOCENTE: Lic. Danae Fernndez Rivero Mg.

CICLO ACADMICO: Octubre 2016 Marzo 2017

PRCTICA N: 1
I.

TEMA: AISLAMIENTO DE LEVADURAS

II.
OBJETIVO:
Aislar levaduras de la especie Saccharomyces cereviciae mediante su cultivo en medios con
sacarosa y glucosa.
Establecer la relacin entre el nmero de UFC y el peso seco de la levadura.
Identificar el sustrato con mayor aporte energtico y de carbono mediante el crecimiento de
las levaduras en los medios de cultivo con sacarosa y glucosa.
III.
INSTRUCCIONES:
Preparacin de los medios YEPD y YEPS (200 ml de cada uno): Pesar por separado los
componentes del medio de cultivo. Hervir el agua destilada y disolver los componentes de cada
medio a excepcin del agar. Tomar 20 ml de este medio de cultivo y regular el pH a 5,4,
seguidamente colocar 9 ml del medio en dos tubos de tapa rosca. Aadir el agar al resto del medio de
cultivo y regular el pH final del medio a 5,4. Verter 16 ml del medio en 6 tubos de tapa rosca, tapar
sin apretar y esterilizar en autoclave por 15 min a 121 C. Dejar los tubos y su contenido en una
incubadora a 55 C hasta el momento de su utilizacin a fin de que no solidifique.
Agua para dilucin: colocar 9,0 ml en cuatro tubos y 9,9 ml agua destilada en seis tubos
bacteriolgicos y esterilizar.
Esterilizar 20 cajas Petri. Tarar 4 tubos de centrfuga bien lavados (con cepillo). NOTA: no deben
contener residuos adheridos a las paredes de los tubos.
Preparar una suspensin de 1 g levadura en pasta o liofilizada con 9 ml de agua estril. Tomar 1 ml
de la suspensin e inocular a cada tubo con el medio de cultivo lquido (YEPD y YEPS; por
duplicado), mezclar completamente e incubar bajo agitacin (magntica) hasta el da siguiente a
temperatura ambiente. De estos cultivos realizar diluciones hasta 10 -8 en agua destilada estril
despus de extraer las muestras para determinar el peso seco. Las diluciones 10 -1 y 10-2 en los tubos
que contienen 9,0 ml de agua estril y las diluciones restantes en los tubos con 9,9 ml de agua estril.
Determinacin del peso seco celular: Pesar los tubos de centrfuga vacos. Tomar aspticamente 7,5
ml del medio de cultivo lquido, aadir a los tubos y pesar. Hervir los tubos por 5 minutos, enfriarlos
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y centrifugarlos a 5950 rpm por 10 minutos. Eliminar el sobrenadante y lavar el precipitado con 5 ml
de agua destilada y volver a centrifugar. Eliminar el agua de lavado y secar en una estufa hasta peso
constante, a 60 C.
Determinacin de la absorbancia: De las suspensiones de levadura utilizadas para la siembra en las
cajas Petri medir la absorbancia a 700 nm.
Sembrado en estra
a) Dibujar los cuadrantes en la cara externa de la base de cada caja petri.
b) Flamear el asa de siembra asegurndose de que se enfre suficientemente antes de
introducirla en el cultivo lquido.
c) Tomar una muestra del cultivo lquido con el asa, tocar ligeramente la superficie del medio
slido con el asa y deslizar sobre uno de los cuadrantes con un movimiento continuo en
zigzag.
d) Flamear nuevamente el asa de siembra y repetir el proceso desde el cuadrante ya inoculado
hacia el segundo cuadrante.
e) Esterilizar el asa tras cada inoculacin.
f) Repetir el procedimiento hasta completar los 4 cuadrantes y flamear el asa al finalizar el
proceso.
Siembra por vertido (para contaje de levaduras): Aadir 1 ml de la suspensin de levadura de las
diluciones 10-4 a 10-8 a la caja petri estril vaca y aadir aproximadamente 15 ml del agar estril
contenido en los tubos. Mezclar la suspensin de levadura con el medio con movimientos en sentido
vertical, seguido por movimientos en sentido horizontal y con movimientos rotacionales en sentido
horario y antihorario. Dejar solidificar el medio inoculado, invertir las cajas Petri y colocarlas en la
estufa a 30 C por 48 h.
IV.

LISTADO DE EQUIPOS , MATERIALES Y RECURSOS:

Reactivos

Materiales
Medio 2: extracto de
levadura-peptona-sacarosa
(YEPS)/l
Extracto de levadura 10,0 g
Extracto de levadura 10,0 g Asas de vidrio; Asa metlica.
Peptona
20,0 g
Peptona
20,0 Medidor de pH o papel para
Dextrosa
20,0 g
g
medir pH.
Agar
17,5 g
Sacarosa
20,0 Pipetas estriles.
Agua destilada
950 ml
g
Gradillas.
Agar
17,5 Mechero bunsen.
g
Estufa a 30C.
Agua destilada
950 Cajas Petri.
ml
Tubos bacteriolgicos.
Tubos de centrfuga tarados
Levadura de panificacin en pasta o liofilizada
cido clorhdrico 0,1M y 1M;
Etanol al 70%
V.
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
Qu otros mtodos para identificar la pureza de un cultivo conoce?
Medio 1: extracto de levadurapeptona-dextrosa (YEPD)/l

VI.

RESULTADOS OBTENIDOS:
Reportar lo observado en las placas sembradas por estra, el nmero de colonias en las placas en
las que se realiz la siembra en profundidad y el peso seco de la levadura. Correlacionar este
ltimo con las unidades formadoras de colonia, tomando en consideracin las diluciones
realizadas. Comparar los resultados obtenidos al sustituir la fuente de carbono.

VII.

CONCLUSIONES:

El alumno identificar el sustrato de mayor aporte energtico para la levadura utilizada.

VIII.

RECOMENDACIONES:

VALIDACIN DE LAS GUAS DE PRCTICAS

Fecha de elaboracin: 30/09/2016

Lic. Danae Fernndez Rivero Mg.

DOCENTE PLANIFICADOR UTA

Lic. Danae Fernndez Rivero Mg.

Ing. Alex Valencia Mg.

COORDINADOR DE REA

COORDINADOR DE CARRERA