Centrifugar a 13,500 rpm

por 4 min. Eliminar el

sobrenadante.

Secar al aire por aprox. 10

min (invertir el tubo sobre
papel absorbente).

Resuspender mediante vrtex

en 20 L de solucin de
ARNasa (20 g/mL). Incubar
30 min a 37 C. Almacenar a
-20 C.

Verter 1.5 mL de cultivo en

un tubo de 1.6 mL (el resto
dejarlo como stock a 4 C).
Colocar miniprep 1 en
regriferador

Centrifugar a 13,500
rpm por 1 min.

En campana de extraccin,
agregar 150 L de la Solucin
Miniprep 3 fra, mezclar con
vrtex hasta resuspender. Dejar
reposar en hielo por 3-5 min.

Centrifugar a
13,500 rpm por
5 min.

Recuperar el sobrenadante
en un tubo de 1.6 mL
nuevo. NOTA: Evitar
acarrear el precipitado
(ADN genmico).

En campana de extraccin,
aadir un volumen (450
L) de fenol:cloroformo
1:1 y agitar con vrtex por
1 min.

Lavar la pastilla con 500 L de etanol 70%,

mezclar invirtiendo el tubo varias veces.
Centrifugar a 13,500 rpm por 4 min.
Eliminar todo el sobrenadante. Lavar la
pastilla con 250 L de etanol 100%.

Eliminar completamente el medio de cultivo

con la ayuda de una micropipeta. Centrifugar
nuevamente por 30 s y quitar el medio de
cultivo restante.

Agregar 200 L de la
Solucin Miniprep 2,
mezclar invirtiendo
rpidamente el tubo 10
veces. Dejar en hielo.

Centrifugar a
13,500 rpm por 2
min.

Agitar y dejar reposar a

temperatura ambiente por 10
min. Centrifugar a 13,500 rpm
por 10 min. Eliminar el
sobrenadante completamente.

Agregar 100 L de la
Solucin Miniprep 1
fra, agitar con vrtex
hasta resuspender.

Recuperar la fase acuosa (fase

superior) en un tubo de 1.6 mL
limpio. NOTA: Evitar acarrear
o tocar la interfase que
contiene protenas.

Aadir 2 volmenes de
etanol absoluto y 1/10
volmenes de acetato de
sodio 3 M
(precipitacin).