Se centrifugan 1,6 mL de cultivo de E.coli 5 a 4C 10000 RPM. Se descarta el sobrenadante. (esta parte no la vamos a hacer, van a estar los pellets directamente) Al pellet bacteriano se lo resuspende en 100 uL de solucin de lisis c/lisozima. Se deja incubar 15. Se le agrega 200 uL de solucin alcalina (SDS 1%/NaOH 0,2N) bien y se deja incubar en hielo 5.
se mezcla
Se agrega 150 uL de acetato de sodio 3 M pH:4,8/5,2. Se agita hasta
aparicin de un flculo blacuzco, se coloca en hielo y se deja 30. Se centrifuga 15 a 10000 RPM 4C. En otro eppendorf rotulado se coloca 1 mL de EtOH absoluto en frio. El sobrenadante de la centrifugacin se mezcla con el alcohol y se deja 2. Se lleva a centrifugar 15 a 10000 RPM 4C. Se descarta el sobrenadante, y se lava el pellet con alcohol 70%. Se deja secar a T. Amb. o en estufa de 37C. Se resuspende con 50 uL de agua o TE pH:8.0.