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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA


Programa: Ingeniera Agroforestal
PREINFORME: Laboratorio Bioqumica Metablica-LBM
Nombre y Apellido: Jorge Alejandro Caldern Cdigo: 1121830477 Fecha: 13-10-2013

BIOQUIMICA METABOLICA
PREINFORMES DE PRCTICAS

JORGE ALEJANDRO CALDERON


CODIGO 1121830477

TUTOR
ANDRES LUCIANO QUINTERO
GRUPO: 352001_64

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD


ESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE.
PROGRAMA DE INGENIERIA AGROFORESTAL
CEAD CUMARAL
2013

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD


Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA
Programa: Ingeniera Agroforestal
PREINFORME: Laboratorio Bioqumica Metablica-LBM
Nombre y Apellido: Jorge Alejandro Caldern Cdigo: 1121830477 Fecha: 13-10-2013

PRCTICA 2: Capacidad Amortiguadora


1.3.3. Diagrama de Flujo

INTRODUCCIN
La capacidad amortiguadora se usa para comparar
soluciones amortiguadoras y es igual a las mili-equivalencias
de cido o base fuerte que puede neutralizar la solucin
amortiguadora sufriendo as un cambio de PH en su unidad.
Tal capacidad depende de las concentraciones absolutas del
sistema y la proporcin relativa de las formas disociadas y
sin disociar y da como mxima cuando el cociente, es decir,
la sal o acido es prxima a la unidad.

Rotular

Alistar
titulacion

Evaluar
el PH
final

Adicionar
concentrados
Registrar
PH

Mentefacto o diagrama conceptual

2.

TABLA DE DATOS

MUESTRAS
Concentrad
o
Harina
Forraje
Sangre
Orina

Wm (g)

Valores Evaluados
Vm (mL)
Ph1

Ph2

3. RESULTADOS ESPERADOS:

1. MATERIALES Y MTODOS
1.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo

Caractersticas

Erlenmeyer

De 125ml

Pipetas Graduadas

De10ml

Se espera que la capacidad amortiguadora sea mayor con


la sangre que con el buffer, y que este sea mayor en
comparacin con la leche.

Se espera que al diluir sustancias como concentrado


pulverizado y agua destilada, igualmente con harina y
forraje picado para comparar su PH (potencial bufferante),
se espera que el concentrado sea mayor en la sangre y en
la orina.

Esptula Metlica

GLOSARIO

Agitador De Vidrio
Probeta Graduada

De 100ml

Bureta

De 25ml
Metlico, con pinza para
bureta

Soporte Universal
Beaker

Vaso precipitado De 250ml

Potencimetro
Equipo De Titulacin
Balanza

Digital

Soluciones amortiguadoras: Son aquellas soluciones cuya concentracin


de hidrogeniones vara muy poco al aadirles cidos o bases fuertes. El
objeto de su empleo, tanto en tcnicas de laboratorio como en la finalidad
funcional del plasma, es precisamente impedir o amortiguar las variaciones
de pH y, por eso, suele decirse que sirven para mantener constante el Ph.
Homestasis: Homeostasis es el conjunto de fenmenos de
autorregulacin que llevan al mantenimiento de la constancia en las
propiedades y la composicin del medio interno de un organismo; es la
caracterstica de un organismo vivo, por la cual mediante la absorcin de
alimentos y vitaminas (metabolismo) puede regular las funciones que

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Muestras Biolgicas

Concentrado ,Orina, Sangre


Y Forraje

Acido dbil: es aquel cido que no est totalmente disociado en una

1.2 Reactivos a utilizar

Reactivo
Hidrxido de Sodio
cido Clorhdrico
Fenolftalena
Rojo De Metilo
Agua Destilada
Solucin Buffer
Fosfato

existen dentro de l, para mantener una condicin estable y constante. La


homeostasis es posible gracias a los mltiples ajustes dinmicos del
equilibrio y los mecanismos de autorregulacin.

Frmula
NaOH
HCl
C20H14O4
C15H15N3O2
2
HO

Concentracin
0,1N
0,1N

disolucin acuosa. Aporta iones


al medio, pero tambin es capaz de
aceptarlos. Si representramos el cido con la frmula general HA, en una
disolucin acuosa una cantidad significativa de HA permanece sin disociar,
mientras que el resto del cido se disociar en iones positivos
negativos

HPO42

, formando un equilibrio cido-base.

BIBLIOGRAFIA

1.3 Procedimiento

Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela


De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente.
ECAPMA.

http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r5
5275.PDF

Definicin de homeostasis - Qu es, Significado y Concepto


http://definicion.de/homeostasis/#ixzz2RuVsvh9Q

1.3.1. En campo:
Recolectar en campo las muestras de Leche (20mL), harina
(5gr), Forraje picado (5gr), sangre (20mL) de acuerdo a los
protocolos establecidos para tal efecto; las muestras se
empacarn en bolsas negras, las cuales se rotularn con los
datos de origen.

1.3.2 En Laboratorio
Mtodo de titulacin volumtrica: con agua destilada,
solucin buffer y leche.
Tcnica potenciomtrica: con agua destilada,
Clorhdrico, harina y forraje picado.

cido

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PRCTICA 3: CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES


INTRODUCCIN

1.3.3. Diagrama de Flujo

Los carbohidratos no estructurales se dan debido a la


acumulacin de carbohidratos solubles en los tejidos de las
plantas, se produce cuando la tasa de formacin de glucosa
durante el proceso de fotosntesis supera la cantidad
necesaria para el crecimiento y la respiracin.
En esta prctica se determinaran
los carbohidratos no
estructurales, se les llama as al no hacer parte de la pared celular,
estn muy activos y representan azucares libres que se almacenan
en los rganos de reserva.

Compuestos

Carbohidratos
No
Estructurales

Activos

Planta

Raiz-Tallo-Corona
Metabolismo

1. TABLA DE DATOS

Mentefacto o diagrama conceptual


CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES
Son

Formados

Compuestos
Activos

por
Carbono

No Forman

En el

Hidrogeno
Oxigeno

Parte

Metabolismo

de la Pared
Celular

De la

Tabla. Datos para la cuantificacin de CNE

Planta
Posee

Almacenados
En

Fermentacin

Races Tallos Coronas

Rpida y total

1. MATERIALES Y MTODOS
1.1. Materiales y equipos requeridos

3. RESULTADOS ESPERADOS:

Material / Equipo

Caractersticas

Balanza Analtica
Bao Termosttico
Beaker

Se espera aprender mediante el mtodo de Fenol acido


Sulfrico determinar la cantidad de carbohidratos totales
No estructurales, extraerlos basndose en su contenido de
almidones hidrolizables y azcares solubles y medir por
medio de la lectura espectrofotomtrica.

De 100 - 200 - 400 ml

Varilla de vidrio

Se espera adquirir conocimientos suficientes sobre los


carbohidratos no estructurales, como son estos
compuestos activos en el metabolismo de las plantas.

Papel de filtro
Tubos de Ensayo

Con gradilla

GLOSARIO
Carbohidrato: es un compuesto orgnico con la frmula general
CM (H 2 O), n, es decir, que consta slo de carbono, hidrgeno
y oxgeno, los dos ltimos en la relacin atmica 2:1. Los

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carbohidratos pueden ser vistos como los hidratos de carbono, de


ah su nombre. Es esencialmente un sinnimo de sacrido, una
gran familia de los hidratos de carbono naturales que llenan
numerosos papeles en los seres vivos.

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo

Frmula

Glucosa

C6H12O6

Agua destilada
Fenol

Concentracin

H2O
C6H5OH

1.3 Procedimiento
Extraccin
Depositar en el vaso de precipitados y agregar 50ml de
solucin de HCl, agitar por 3 minutos y llevar al Beaker con
la solucin al bao termosttico a 90C por 20 min.

Glucosa: La glucosa es un monosacrido con frmula molecular


C6H12O6, la misma que la fructosa pero con diferente posicin
relativa de los grupos -OH y O=. Es una hexosa, es decir, que
contiene 6 tomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo
carbonilo est en el extremo de la molcula.
Transmitancia: se define como la cantidad de energa que
atraviesa un cuerpo en determinada cantidad de tiempo.
Se define tambin como la fraccin de luz incidente, a una longitud
de onda especificada, que pasa a travs de una muestra.
Espectrofotmetro: instrumento de anlisis qumico utilizado para
medir en funcin de la longitud de onda la relacin entre dos
valores de la misma magnitud fotomtrica.
Es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un haz de
Radiacin Electromagntica.

BIBLIOGRAFIA
Dejar enfriar por 5 min y filtrar, medir el volumen filtrado y
llevar 5ml de este a un tubo de ensayo en el cual se
adicionara 5 ml de NaOH y agitar por 15 seg. Tapar y rotular
as FCNE (filtrado para carbohidratos NE).

Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela


De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente.
ECAPMA.

http://www.es.wikipedia.org/wiki/Carbohidratos

http://www.fao.org/docrep/field/008/AB489S/AB488S00.carbo
hidratos no estructurales.htm

http://www.slideshare.net/LINEYANDREA/carbohidratos4402131

Cuantificacin:
Rotular 3 tubos de ensayo as B (blanco), St (estndar), m
(muestra y adicionar los reactivos en el orden que se indica
en la tabla 1, agitar por 20 seg. Y llevar al bao mara por 3
min. Sacar y agitar 10 seg. Dejar enfriar completamente.
Cuantificacin Agronmica:
Mezcla reactiva: Rotular 7 tubos de ensayo as 1, 2, 3, 4,
5,6, B, colocar en bao de hielo y adicionar los reactivos
indicados en la tabla 1.

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PRCTICA 4: Actividad de Catalasa


1.3.3. Diagrama de Flujo

INTRODUCCIN
La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos
vivos y cataliza la descomposicin del perxido de
hidrgeno (H202) en oxgeno y agua.

Catalizar

2 H2O2
2 H2O + O2
La catalasa como biocatalizador de origen proteco, es una
enzima xido - reductasa que participa en la degradacin del
perxido de hidrgeno (H2O2), hasta Oxgeno molecular
(O2) y agua (H2O).
Dicha biomolcula, est presente en peroxisomas y
mitocondrias
de
clulas
animales
y
vegetales,
protegindolas de la toxicidad de los radicales libres
perxido, impidiendo su acumulacin y beneficiando el
metabolismo celular.
Mentefacto o diagrama conceptual

Enzima
Presente en

Celulas vivas
Animal

vegetal

descomposicion rapida
de

perxido de hidrogeno
en

agua

oxigeno

2. TABLA DE DATOS

Organismos

Tabla 1 Datos para Actividad Cataltica de Catalasa (ACAT)

que

Vivos

actan
Animales
Vegetales
como
Pueden
catalizadores
descomponer
son
perxido de hidrogeno
sustancias que
por

TUBOS

Vs (mL)

aceleran las

enzimas
reacciones qumicas
responsables
sin ser
de la
destruidas o alteradas
Actividad qumica
tienen
En
intervalo de temperatura
El H2O2 es toxico para la mayora de los

2
3
4
5

1. MATERIALES Y MTODOS
1.1. Materiales y equipos requeridos

Material / Equipo

Caractersticas

Soporte Universal

Metlico, con pinza para


bureta

Pipetas Graduadas

mL de KMnO40,01N

De10ml

Beaker

De 400 ml

Erlenmeyer

De 125ml

Probeta Graduada

De 100ml

Bureta

De 25ml

Tubos de Ensayo

Con gradilla

3. RESULTADOS ESPERADOS:

Se espera determinar la actividad de catalasa por medio


del mtodo permanganomtrico.

Se espera cuantificar la actividad enzimtica de la catalasa


en muestras de origen vegetal y animal; enzima que se
puede encontrar en todos los seres vivos
catalasa,
necesaria para descomponer el perxido de hidrgeno, un
compuesto txico, que se produce durante el metabolismo

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Muestras Biolgicas

celular.

Concentrado, frutas o
verduras, Orina y Sangre.

Se espera aprender y familiarizarse con las propiedades de


los enzimas y observar la actividad de la catalasa

1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo
Perxido de
Hidrogeno
cido Sulfrico
Permanganato de
Potasio

Frmula
H2O2

Concentracin
0.05 M

H2SO4
KMnO4

2N
0.01 M

Extractos de
Catalasa (ECAT)

1.3 Procedimiento
1.3.1Extraccin
Frutas , verduras concentrados
Pesar 2g de muestra picada pulverizada y colocarla en un
tubo de centrifuga ,luego adicionar 10mL de solucin fra de
buffer fosfato 0,05M, pH=6,8-7,0, agitar, con agitador de
vidrio (3min) y centrifugar a 2500rpm ,durante 5min Sacar el
sobrenadante, pasarlo a una probeta, medir su volumen,
registrarlo como : Vs y tomar 5 mL de ste para depositarlo
en un tubo de ensayo ,taparlo, rotularlo como
:EVCAT(extracto de verdura para catalasa )
EFCAT(extracto de fruta para catalasa), ECCAT (extracto
de concentrado para catalasa), colocarlos inmediatamente
en bao de hielo.

Sangre y orina
En un tubo de ensayo, colocar 0,2 mL de sangre y 10 mL de
buffer fosfato fro, agitar vigorosamente hasta obtener
mezcla completa, tapar, rotular: SSCAT (Solucin sangunea
para catalasa) y guardar en refrigeracin bao de hielo. En
el caso de la orina, mezclar 4 mL de muestra con 6 mL de
buffer fro, agitar, tapar, rotular: SOCAT (solucin de orina
para catalasa), colocar en bao de hielo.
1.3.2 Cuantificacin

GLOSARIO
Enzima Catalasa: La catalasa es en una enzima que la podemos
encontrar en muchos organismos vivos, y cataliza la reaccin de
descomposicin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno.
La catalasa cumple una funcin protectora contra determinados
microorganismos patgenos, sobre todo anaerobios. Las bacterias
anaerobias, mueren al estar en contacto con oxgeno, es por esta
razn que el oxgeno producido por esta enzima tiene efecto
bactericida sobre estos microorganismos.

Perxido de hidrgeno: H2O2, es uno de los productos del


metabolismo celular en diversos organismos, pero dada su
potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima
catalasa.
Se produce durante la oxidacin de las coenzimas FAD y FMN,
biomolculas importantes en la oxidacin de sustratos a partir del
oxgeno molecular .Tambin se genera por la oxidacin de cidos
grasos (AG) en los peroxisomas.
Perxido de hidrxido, conformada espacialmente en su estructura
cuaternaria como una protena homotetramrica de peso molecular
que oscila entre 210 a 280 Kilodaltons(kD) con 4 subunidades
idnticas, constitudas por un grupo prosttico de protoporfirina y el
grupo hemo (Fe-III), representando estos, un 1,1 % y 0,09 %
respectivamente del peso molecular total de la
Enzima.

Mtodo permanganomtrico: el cual se titula el perxido residual,


es decir, el que no particip en la RBE, con una solucin de
permanganato de potasio (KMnO4) de concentracin conocida.
Para deteccin de Perxido residual en rehso de filtros Este
procedimiento permite una rpida determinacin de la ausencia de
Perxido en el agua de enjuague del filtro de dilisis.
BIBLIOGRAFIA

Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela


De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente.
ECAPMA.

http://www.enzima
catalasa
|
La
Gua
Qumica http://quimica.laguia2000.com/conceptosbasicos/enzima-catalasa#ixzz2S4klkgGo

Agronmica
Mezcla Reactiva
Alistar 7 tubos de ensayo y rotularlos as: B, 1, 2,3, 4,5, 6,
colocarlos en bao de hielo y adicionar los reactivos en el
orden dado.

de

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Titulacin permanganomtrica
Montaje de titulacin, colocar el Erlenmeyer debajo de la
bureta y titular adicionando lentamente el KMnO4, agitando,
hasta que aparezca y permanezca un color rosado violeta
plido, por 30 segundos, en la solucin reactiva, registrar los
mL de permanganato gastados en este proceso.

Zootecnia
Mezcla reactiva
Cinco tubos de ensayo para los reactivos que se indican
para la realizacin de esta prctica.

http://www.es.wikipedia.org/wiki/Catalasa

http://www.www.acienciasgalilei.com/qui/formulacion/peroxid
os.htm

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PRCTICA 5: CUANTIFICACIN DE NITRGENO NO


PROTEICO (NNP) (Fraccin A de Van Soest)
1.3.3. Diagrama de Flujo
INTRODUCCIN
Los compuestos que forman el NNP son los que contienen
amonaco, nitritos y nitratos y otros como la urea, el Biuret o
el cido rico.

Nitrogeno No Proteico
Utilizado por
Bacterias

Son
Compuestos

En el laboratorio, el nitrgeno no proteico (NNP), que est


incluido en: rea, amonaco y pptidos, es tradicionalmente
aquel que pasa en el filtrado despus de la precipitacin con
un reactivo especfico para protena.

Excretado
Nitrgeno
Amoniacal
Urea

para separar el nitrgeno insoluble del soluble (NNP), esto


se realiza mediante la lisis de
polipptidos, hasta pptidos der menor peso molecular , de
tal forma que son
metablicamente ms cercanos a la protena soluble(PS)
4.

En forma de Orina

TABLA DE DATOS

Mentefacto o diagrama conceptual

NITROGENO
NO PROTEICO
Son

Nitrgeno
Amoniacal
Urea

Utilizado

Compuestos que
Pueden ser
Convertidos en
Protenas

por
Bacterias
Para Fabricar
Aminocidos

Tabla: Datos para Nitrgeno no proteco (NNP)


Tubos
Wm (g)
Vf (mL)

Estndar (st)
Excretado

En forma de orina

3. RESULTADOS ESPERADOS:

3. MATERIALES Y MTODOS
3.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo
Papel Filtro

m
Tipo y origen de
la muestra

Se espera determinar con el resultado del anlisis una


buena aproximacin al contenido de protena en el
alimento, ya que el nitrgeno tambin proviene de
componentes no proteicos.

Se espera cuantificar el nitrgeno no proteico (NNP)


denominado tambin fraccin A de Van Soest, mediante el
reactivo: cido Tricloroactico.

Caractersticas

Capsula de Porcelana

Porcelana

Vaso de Precipitado

Vidrio

Probeta Graduada
Tubos de Ensayo

De 100ml
Con gradilla

Se espera aprender y familiarizar con las propiedades del NNP y


Aplicar tcnicas instrumentales analticas de
Lectura Agite

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1.2 Reactivos a utilizar


Reactivo

Frmula

Concentracin

cido Tricloroactico

Cl3COOH
CO(NH2)2

10%

Urea

Agua Destilada

vigorosamente por 15 seg. Y deje reposar 5 min. A temperatura


ambiente. Espectrofotomtrica: alistar el espectrofotmetro a una
longitud de onda (I) de 540 nm, y calibrarlo con el tubo de ensayo
blanco, leer absorbancia de las dems soluciones, St y m. Y
registrar valores en la tabla de datos.

Kjeldhal y espectrofotomtricas para determinar el


contenido de NNP y Protena verdadera (PV) en forrajes y
concentrados.

Se espera adquirir conocimientos suficientes sobre El NH3


que es el principal nutriente nitrogenado para las bacterias
del rumen; lograr claridad sobre como tener suficientes
fuentes de energa para que stas lo puedan utilizar y as
puedan biosintetizar aminocidos.

0.25

H2O

Cloruro de mercurio

HgCl2

Fosfato pH 7

H3PO4

Indicador de tashiro
Cloruro de hidrogeno

C15H14N3O2Na

1%

HCL

GLOSARIO
1.3 Procedimiento
1.3.1. Extraccin con cido Tricloroactico (ATA).
Forraje: se toman 15 submuestras de 250 gr cada una, se cortan a
la altura del pastoreo evitando lugares donde se pueda alterar la
muestra como orillas de camino zonas prximas alambrados, etc.
Se guarda preferiblemente en una bolsa de papel o plstico en un
lugar con baja temperatura y etiquetar con todos los datos
concernientes al lugar de la toma de la muestra.
Suelo: se toman mnimo 10 submuestras de suelo a profundidad
de 20 cm, retirando la capa vegetal de la superficie y retirando de la
muestra los residuos guardando en una bolsa plstica, dejar secar
a la sombra si est muy hmeda.

Pesar +/-1.0 gr. De muestra pulverizada y registrar como


(Wm), adicionar en vaso de precipitado y agregar 30 mL de
agua destilada fra, agitar por 1 min., luego deje reposar 15
min y adicione 20 mL de solucin de ATA y agite por 1 min.,
deje reposar a temperatura ambiente por 15 min.
Filtre sobre probeta y mida el volumen del filtrado, coloque 5
mL del filtrado en un tubo de ensayo y rotule as FNNP
(filtrado para nitrgeno no proteico, el papel filtro con el
residuo ponerlo en una capsula de porcelana y secar a
105c por 30 min.

Nitrgeno no proteico: se denominan as a los compuestos de


nitrgeno que pueden ser convertidos en protenas por algunos
organismos vivos.
Protena: son macromolculas formadas por cadenas lineales de
aminocidos. El trmino protena proviene de la palabra francesa
protine. Cada clula en el cuerpo humano contiene protena.
La protena es una parte muy importante de la piel, los msculos,
rganos y glndulas.
Amoniaco: es un compuesto qumico cuya molcula consiste en
un tomo de nitrgeno (N) y tres tomos de hidrgeno (H) de
acuerdo con la frmula NH3.
Pptidos: Son un tipo de molculas formadas por la unin de
varios aminocidos mediante enlaces peptdicos.

BIBLIOGRAFIA

Granados M. J. E Mdulo de Bioqumica metablica. Escuela


De Ciencias Agrcolas Pecuarias Y Del Medio Ambiente.
ECAPMA.

http://www.Nitrogeno no proteico/ Gua de Qumica 2000.


com/conceptos-bsicos/Nitrogeno#ixzz2S4klkgGo

http://www.es.wikipedia.org/wiki/Nitrogeno

1.3.2. Cuantificacin:
Cuantificacin de N por mtodo espectrofotomtrico de
Biuret Lowry
Rotular 3 tubos de ensayo as, B (blanco), St (estndar), m
(muestra). Adicionar reactivos segn orden indicado en el
cuadro nmero 2.

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