UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

AO DE LA INVERSION NACIONAL PARA EL

DESARROLLO RURAL Y LA SEGURIDAD
ALIMENTARIA

E.A.P. BIOTECNOLOGA

CICLO I

CURSO: INTRODUCCIN A LA BIOTECNOLOGIA

DOCENTE: WILLIAN CAPPA

BIOTECNOLOGIA ROJA

FECHA: 15/07/13

INTEGRANTES:

DAVILA ESCUDERO, YEIK MANUEL.

PUPPI CONTRERAS, NORA TAIS.

LINEA DE INVESTIGACION A NIVEL DE

INULINASA

Introduccin.
De hecho, cuando se habla del sector biotecnolgico, se
identifica como el de las empresas que se dedican a temas
del mbito biomdico, aunque sea un sesgo no real de lo
que es biotecnologa a causa de su impacto en la salud de
la poblacin. Los medicamentos de origen biotecnolgico
aparecieron con la insulina recombinante en 1983 y ahora
representan ms de 100 molculas diversas, indicadas para
tratar ms de 200 enfermedades diferentes, desde la
artritis

al

cncer,

enfermedades

muy

prevalentes

enfermedades raras como la fibrosis qustica. ejemplos

como la insulina, la hormona del crecimiento, el factor IX de
coagulacin, la eritropoyetina y sus variantes, el interfern,
etc. y los del siglo XXI, los anticuerpos monoclonales, el
enbrel o las vacunas contra el papiloma y el cncer de
crvix. A todo este nuevo arsenal de medicamentos hay
que aadir los avances espectaculares en el sector
diagnstico, donde los anticuerpos monoclonales, la PCR
(reaccin en cadena de la polimerasa) y el abaratamiento
de los costes de secuenciacin del DNA, junto con una
capacidad cada vez mayor de procesamiento de muestras y
datos gracias a la nanotecnologa y la bioinformtica, hacen

cada vez ms prxima la posibilidad de hacer medicina

personalizada.

Problemtica a nivel regional.

El programa de diabetes de EsSalud registr en lo que el ao el
ingreso de dos mil 600 personas que padecen este mal en la provincia
del Santa, regin ncash.
La jefa del rea de Enfermedades Crnicas de la referida institucin,
Ivn Linares, dijo que lo preocupante es que en los ltimos meses se
ha incrementado en 30% los casos de personas entre 30 y 40 aos
con esta enfermedad.
Refiri, adems, que quienes sufren de obesidad, colesterol e
hipertensin estn propensos a enfermarse de diabetes y precis que
entre el 2010 y el 2011 se han inscrito cinco mil personas
hipertensas, de las cuales el 50% es diabtica.
Linares dio estas declaraciones durante una campaa de despistaje
que realiz EsSalud en la Plaza de Armas de la ciudad portea de
Chimbote, con motivo del Da Mundial de la Diabetes.
La profesional recomend caminar media hora al da, comer verduras
y frutas, hacer ejercicios, reducir la ingesta de harinas y de productos
envasados, pues tienen altos niveles de azcar, para prevenir la
diabetes.
*En la actualidad las cifras de pacientes con problemas de diabetes se
ha incrementado significantemente en la regin Ancash, debido a
diversos factores de causa de este mal de salud, como es el del mal
habito alimenticio, el mismo que tiene mucha relacin con esta
enfermedad.

QU ES LA DIABETES?

La diabetes es una enfermedad crnica que aparece debido a que el

pncreas no fabrica la cantidad de insulina que el cuerpo humano
necesita, o bien la fbrica de una calidad inferior. La insulina, una
hormona producida por el pncreas, es la principal sustancia
responsable del mantenimiento de los valores adecuados de azcar
en sangre. Permite que la glucosa sea transportada al interior de las
clulas, de modo que stas produzcan energa o almacenen la
glucosa hasta que su utilizacin sea necesaria. Cuando falla, origina
un aumento excesivo del azcar que contiene la sangre
(hiperglucemia). De hecho, el nombre cientfico de la enfermedad es
diabetes mellitus, que significa "miel".

CAUSAS
La diabetes afecta al 6% de la poblacin. Las posibilidades de
contraerla aumentan a medida que una persona se hace mayor, de
modo que por encima de los setenta aos la padece alrededor del
15% de las personas. Es esencial educar a los pacientes para que
controlen su diabetes de forma adecuada, ya que puede acarrear
otras enfermedades tanto o ms importantes que la propia diabetes:
enfermedades cardiovasculares, neurolgicas, retinopata (afeccin
ocular que puede conducir a la ceguera) o nefropata (enfermedad del
rin). El momento de aparicin de la enfermedad, as como las
causas y sntomas que presentan los pacientes, dependen del tipo de
diabetes de que se trate.
Diabetes tipo 1. Las edades ms frecuentes en las que aparece son
la infancia, la adolescencia y los primeros aos de la vida adulta.
Acostumbra a presentarse de forma brusca, y muchas veces
independientemente de que existan antecedentes familiares. Se debe
a la destruccin progresiva de las clulas del pncreas, que son las
que producen insulina. sta tiene que administrarse artificialmente
desde el principio de la enfermedad. Sus sntomas particulares son el
aumento de la necesidad de beber y de la cantidad de orina, la
sensacin de cansancio y la prdida de peso.
Diabetes tipo 2. Se presenta generalmente en edades ms
avanzadas y es unas diez veces ms frecuente que la anterior. Por

regla general, se da la circunstancia de que tambin la sufren o la han

sufrido otras personas de la familia. Se origina debido a una
produccin de insulina escasa, junto con el aprovechamiento
insuficiente de dicha sustancia por parte de la clula. Segn qu
defecto de los dos predomine, al paciente se le habr de tratar con
pastillas antidiabticas o con insulina (o con una combinacin de
ambas). No acostumbra a presentar ningn tipo de molestia ni
sntoma especfico, por lo que puede pasar desapercibida para la
persona afectada durante mucho tiempo.
Diabetes gestacional. Se considera una diabetes ocasional. Se
puede controlar igual que los otros tipos de diabetes. Durante el
embarazo la insulina aumenta para incrementar las reservas de
energa. A veces, este aumento no se produce y puede originar una
diabetes por embarazo. Tampoco tiene sntomas y la deteccin se
realiza casi siempre tras el anlisis rutinario a que se someten todas
las embarazadas a partir de las 24 semanas de gestacin.

SNTOMAS DE DIABETES
Entre los principales sntomas de la diabetes se incluyen:
Frecuencia en orinar (fenmeno de la "cama mojada" en los nios).
Hambre inusual.
Sed excesiva.
Debilidad y cansancio.
Prdida de peso.
Irritabilidad y cambios de nimo.
Sensacin de malestar en el estmago y vmitos.
Infecciones frecuentes.
Vista nublada.
Cortaduras y rasguos que no se curan, o que se curan muy
lentamente.
Picazn o entumecimiento en las manos o los pies.
Infecciones recurrentes en la piel, la enca o la vejiga.
Adems se encuentran elevados niveles de azcar en la sangre y en
la orina

PREVENCIN
Para la diabetes tipo 1 no existe ningn mtodo eficaz por el
momento. En cambio, est comprobado que la de tipo 2, que es la
que aparece con ms frecuencia, al estar relacionada con
la obesidad se puede tratar de evitar en gran medida adoptando unos
hbitos de vida saludables:
Evitando el sobrepeso y la obesidad.
- Realizando ejercicio fsico de forma regular.
- Abandonando el tabaco y las bebidas alcohlicas.
Siguiendo una dieta alimentaria sana. Para prevenir las
hipoglucemias, los diabticos deben tener en cuenta lo siguiente:
-Ajustar las dosis de los medicamentos a sus necesidades reales.
-Mantener un horario de comidas regular en la medida de lo posible.
-Tomar cantidades moderadas de hidratos de carbono antes de
realizar ejercicios extraordinarios.
-Llevar siempre azcar consigo. En cuanto aparezcan los primeros
signos de hipoglucemia, hay que tomar azcar (2 o 3 terrones),
galletas (de 3 a 5 unidades) o beber un vaso (150 ml) de alguna
bebida que contenga hidratos de carbono de absorcin rpida (zumos
de frutas, cola, etc.). Los sntomas suelen pasar en 5 o 10 minutos. Si
la hipoglucemia es grave o la persona pierde la conciencia, es
necesario inyectarle una ampolla de glucagn por va subcutnea
(igual que la insulina) o intramuscular (en la nalga). El glucagn
moviliza las reservas de glucosa del organismo y hace efecto en unos
10 minutos. Si no hay recuperacin, el afectado debe recibir
asistencia mdica.

DIAGNSTICOS
Se establece el diagnstico de diabetes cuando una persona tiene
valores anormalmente elevados de azcar en la sangre. A menudo se
controlan los valores de azcar en la sangre durante un examen anual
de rutina o durante una exploracin clnica que se realiza antes de la
incorporacin a un nuevo empleo o de la prctica de un deporte.
Tambin pueden realizarse anlisis para determinar la posible causa
de sntomas como aumento de la sed, la miccin o el hambre, o si
existen factores de riesgo caractersticos como antecedentes
familiares de diabetes, obesidad, infecciones frecuentes o cualquier
otra complicacin asociada con la diabetes.
Para medir la concentracin de azcar en la sangre se obtiene una
muestra de sangre del paciente, quien deber estar en ayunas por lo
menos 8 horas antes de la prueba, pudindose tambin obtener

despus de comer. En las personas mayores de 65 aos es mejor

realizar la prueba en ayunas, dado que los ancianos tienen un mayor
incremento de las concentraciones de azcar en la sangre despus de
comer.
Hay otra clase de anlisis de sangre, llamado prueba de tolerancia
oral a la glucosa, que se realiza en ciertos casos, como cuando se
sospecha que una mujer embarazada tiene diabetes gestacional. En
esta prueba se obtiene una muestra de sangre en ayunas para medir
el valor de azcar y se suministra a la paciente una solucin especial
para beber, la cual contiene una cantidad estndar de glucosa.
Durante las 2 o 3 horas siguientes se obtienen varias muestras de
sangre.

TRATAMIENTOS
El tratamiento de la diabetes mellitus se basa en tres pilares: dieta,
ejercicio fsico y medicacin. Tiene como objetivo mantener los
niveles de glucosa en sangre dentro de la normalidad para minimizar
el riesgo de complicaciones asociadas a la enfermedad. En muchos
pacientes con diabetes tipo II no sera necesaria la medicacin si se
controlase el exceso de peso y se llevase a cabo un programa de
ejercicio fsico regularmente. Sin embargo, es necesaria con
frecuencia una terapia sustitutiva con insulina o la toma de frmacos
hipoglucemiantes por va oral.
Frmacos hipoglucemiantes orales. Se prescriben a personas con
diabetes tipo II que no consiguen descender la concentracin de
azcar en sangre a travs de la dieta y la actividad fsica, pero no son
eficaces en personas con diabetes tipo I.
Tratamiento con insulina. En pacientes con diabetes tipo I es
necesario la administracin exgena de insulina ya que el pncreas es
incapaz de producir esta hormona. Tambin es requerida en diabetes
tipo II si la dieta, el ejercicio y la medicacin oral no consiguen
controlar los niveles de glucosa en sangre. La insulina se administra a
travs de inyecciones en la grasa existente debajo de la piel del
brazo, ya que si se tomase por va oral sera destruida en aparato
digestivo antes de pasar al flujo sanguneo.
Solucin biotecnolgica al problema de la diabetes en la
regin Ancash.
Sustratos fuente de inulina
La inulina es el componente base de un sustrato empleado como
fuente de carbono para la produccin microbiana de inulinasa, sea

como inulina pura o como extracto de materiales vegetales o

materias primas renovables.
La hidrlisis completa de la inulina genera fructosa y glucosa con un
grado de concentracin proporcional al DP inicial del polisacrido. El
DP y la ramificacin dependen del origen vegetal de la inulina.
Comercialmente existe inulina de achicoria, dalia y alcachofa
Jerusalem, con un DP promedio de 28. Se han publicado que las
propiedades de la inulina no solo dependen del tipo de planta sino
tambin del manejo agronmico y almacenamiento que se haya dado,
como son los casos de las races de achicoria, esprragos y
yacn.
Una propiedad limitante del uso de inulina es su baja solubilidad en
agua (6% a 10 C y 35 % a 90 C). Sin embargo el proceso de
extraccin a partir de vegetales es sencillo, tal como lo de muestran
la produccin de extracto de yacn y concentrado de inulina de
races de achicoria y dalia y turiones de esprragos.
Contenidos de inulina de la cebolla, alcachofa, ajo, pltano, y
achicoria, observndose los que tienen mayor contenido del
polisacrido son la alcachofa Jerusalem y la achicoria con 19 y 20 %
peso respectivamente (base hmeda). Los rendimientos en inulina de
las races y tubrculos son altos.

Enzimas inulasa
La enzima que cataliza la hidrlisis de enlaces -D-(2-1)- fructosdicos
en la inulina originando fructosa y glucosa se le denomina inulasa o D-(2-1)- fructano fructohidrolasa (E.C. 3.2.1.7), comnmente conocida
como inulinasa, perteneciendo al grupo de clasificacin de enzimas
hidrolasas glicosidasas.
Las enzimas inulinasas se pueden dividir en exoinulinasas y
endoinulinasas. Las exoinulinasas catalizan la remocin de unidades
de fructosa desde el inicio hasta el final de la cadena con la hidrlisis
del residuo de sacarosa. Las endoinulinasas catalizan la hidrlisis de
los enlaces internos de la molcula de inulina, originando inulotriosa,
inulotetrosa e inulopentosa sin actividad invertasa para hidrolizar el
residuo de sacarosa.
La inulinasa puede ser obtenida a partir de especies vegetales y de
muchos microorganismos, siendo los ltimos capaces de producir
suficiente enzima para aplicaciones industriales. Por esta razn en
stas tres ltimas dcadas se han realizado esfuerzos significativos
por encontrar u obtener la mejor fuente microbiana para la
produccin de inulinasa, incluyendo hongos filamentosos, levaduras.

Microorganismos productores de inulinasa

La evaluacin de la produccin de una enzima por fermentacin
microbiana se determina por los parmetros de rendimientos (unidad
de actividad/ml de caldo de cultivo o unidad de actividad/mg de
clulas) de la enzima obtenida y por las propiedades de la enzima que
dependen del tipo de microorganismo empleado, del modo de
fermentacin, del medio de cultivo y las condiciones de incubacin.
Muchas cepas de mohos, levaduras y bacterias son capaces de
producir inulinasa y varios de ellos han sido cultivados con xito y la
enzima extrada, concentrada y purificada, como lo reportado en
sendas publicaciones de revisin. Estos trabajos muestran
cronolgicamente nuevos conocimientos sobre el mejoramiento de la
produccin de inulinasas, caracterizacin de nuevas inulinasas,
clonacin y expresin de genes de inulinasas y sus respectivas
aplicaciones. Tambin se confirm que los microorganismos ms
comnmente
utilizados
son
las
cepas
de
mohos
como
el Aspergillus sp y cepas de levadura como Kluyveromyces sp,
aunque las cepas de levadura producen ms inulinasa que las cepas
de hongos y bacterias.
Entre las levaduras, adems de Kluyveromyces marxianus que
tienen alto potencial para producir inulinasa con altos
rendimientos aceptables comercialmente, se han publicado
ltimamente que, se han seleccionado y mutado nuevas cepas
como Geotrichum candidum aunque esto involucra mayores tiempos
de fermentacin.
los Estados Unidos y en la Unin Europea respectivamente, son
preferidos para la produccin de inulinasa con fines
alimentarios y biotecnolgicos
Adems de ser la inulinasa una enzima nativa de la levadura
lechera Kluyveromyces marxianus, es especialmente adecuada para
la aplicacin industrial, por tener la mejor velocidad de crecimiento
que cualquier otro microbio eucariote, termotolerante, con habilidad
para crecer sobre los 52 C, capacidad de asimilar un amplio rango
de azcares claves, como la lactosa e inulina y una alta capacidad
secretoria de enzimas lticas, hacen de ste microorganismo lder de
todas las levaduras para muchos procesos biotecnolgicos.
Kluyveromyces marxianus es una especie que incorpora muchos
sinnimos,
se
describe
como
una
levadura
homotlica,
hemiascomyceto, es filogenticamente relacionada a Saccharomyces
cerevisiae y
es
una
especie
hermana
de
la
mejor
conocida Kluyveromyces lactis.

Clulas de levadura Kluyveromyces marxianus creciendo en glucosa, bajo

condiciones aerbicas, cultivadas en matraces shaker a 45 C y 120 rpm
(Madeira, 2004).

Produccin
de
inulinasa
de Kluyveromyces marxianus

por

cepas

Los mejores resultados de produccin de inulinasa son dados por los

mohos Aspergillus nger (75 U/ml) y A. nger A42 (4600 U/g). Tambin
algunas cepas mutantes de levaduras, como K. marxianus var.
marxianus CBS 6556, exhibieron rendimientos de 3000 U/ml; mientras
que las bacterias no mostraron comparables rendimientos de
inulinasa.
Las levaduras tienen la ventaja sobre los mohos de tener una mayor
velocidad de generacin celular y adaptabilidad a diferentes
condiciones y modos de cultivo, y en esto las cepas
de Kluyveromyces marxianus han sido ltimamente ms estudiados.
Cruz-Guerrero et al. (1995) demostraron que la Kluyveromyces
marxianus CDBB-L-278 fue una levadura hper productora de
inulinasa parcialmente constitutiva y, aunque la cepa mostr tener
una alta resistencia al 2-desoxiglucosa, la produccin de inulinasa fue
reprimida catablicamente, al confirmarse que en una fermentacin
en un medio de 4 % de glucosa y 4 % de inulina, la inulinasa comenz
a producirse cuando los niveles de glucosa fueron lo suficientemente
bajos, alcanzndose un rendimiento de 82 U/ml al trmino de las 24
horas.
Tambin
una
levadura
de Kluyveromyces
marxianus var. bulgaricus fue evaluada primero en cultivo continuo
en medios con diferentes fuentes de carbono, en que los ms altos
rendimientos de inulinasa fueron obtenidos con sacarosa como
sustrato limitante, resultando valores de 107 U/ml para una velocidad
de dilucin de 0.05 h-1 y 0.81 U/ml para un valor de 0.45 h -1,
precisndose que los niveles de actividad de inulinasa en cultivos con
sacarosa fueron fuertemente dependientes de la velocidad de dilucin
y la levadura regulada por el azcar residual en el cultivo continuo.
Despus en cultivos en matraces de 250 ml, 50 ml de medio a 30 C,
velocidad de agitacin 200 rpm, despus de 72 horas y de las
respectivas etapas de purificacin se alcanzaron actividades
especficas con inulina de 170 U/mg, la ms alta, respecto con
fructosa 94.2 U/mg, o con glucosa 59.5 U/mg o con sacarosa 35.5
U/mg (Kushi et al., 2000).

Desde un punto de vista industrial es importante sealar que la

inulina proveniente de materias primas vegetales es considerada
como la mayor fuente de carbono, ms que la inulina pura, como ha
sido comprobado en estudios reportados y que se describen a
continuacin.
Se ha evaluado la fermentacin de Kluyveromyces sp. Y-85 en un
medio optimizado usando como fuente de carbono extracto de
alcachofa, la experiencia primero fue realizada en matraces a 30 C
por 24 horas, alcanzndose el mximo rendimiento de 59.5 U/ ml de
medio compuesto por 8.0% de extracto de alcachofa; 2% de rea;
0.2% extracto de carne y 4% de licor dulce de maz. Posteriormente
se evalu el efecto de la aireacin variando los volmenes de medio
sobre la produccin de inulinasa, infiriendo que el oxgeno no
influenci mucho en el rendimiento. Esta propiedad sera muy
importante para el caso de una produccin industrial, en cuanto se
ahorrara costos de produccin.
Se ha publicado la produccin de inulinasa por Kluyveromyces
marxianus var. bulgaricus en extracto de yacn al 30 % (v/v),
habiendo mostrado esta levadura un alto potencial de produccin (4.1
U/ml a las 16 horas de incubacin) y su gran capacidad de adaptacin
en diferentes sustratos y su gran crecimiento a diferentes valores de
pH (pH 3,5 fue el ptimo) y en amplios rangos de temperatura (20 a
40 C).
En 2007 determinaron un medio de cultivo adecuado para obtener el
mayor rendimiento de inulinasa por Kluyveromyces S120. El medio de
fermentacin estuvo compuesto de 12.72 % de inulina, 10.76% de
licor de maceracin de maz como fuente de nitrgeno y 1.61%
(NH4)2SO4, empleando salvado de trigo como sustrato slido,
alcanzndose un mximo rendimiento de inulinasa de 409.8 U/g de
sustrato seco inicial, constituyndose el valor ms alto publicado en
la literatura de esa fecha. En la cintica de fermentacin se observa
que el mximo rendimiento lo alcanz despus de las 96 horas de
cultivo. Debido al decaimiento del crecimiento celular despus de 84
h o la degradacin parcial de inulinasa por enzimas proteolticas, la
produccin de inulinasa decay despus de 96 h; por lo que
sugirieron que la inulinasa producida por Kluyveromyces S120 pudo
ser un ejemplo de un producto asociado al crecimiento.
En un estudio de optimizacin de medio y parmetros de proceso
para la produccin de inulinasa a partir de una nueva cepa
de Kluyveromyces marxianus YS-1 en matraces, demostraron que el
rendimiento de enzima aument con el incremento del pH inicial del
medio hasta un valor de 6.5 a una produccin mxima de enzima de
24.5 U/ml y de ah el rendimiento declin. Se recomend trabajar a un
intervalo de pH inicial de 6.4 a 6.5 y temperatura de 30C para una
produccin ptima con esta cepa. En este estudio tambin se evalu
el efecto de la aireacin y agitacin sobre la produccin de inulinasa.

La velocidad de agitacin de 150 rpm y una aireacin de 1 vvm ha

sido reportada como ptima para cultivos en matraces. La variacin
de la velocidad de agitacin no solo afecta la disponibilidad de
oxgeno, si no tambin ejerce influencia sobre la disponibilidad de
otros nutrientes en el medio. Por tanto la aireacin y agitacin son
factores crticos para K. marxianus, los que son responsables de la
viabilidad y produccin enzimtica.
Cuando K. marxianus NRRL Y-7571 creci en un cultivo slido
conteniendo bagazo de caa de azcar como soporte y fuente de
carbono y suplementado con licor de maz como fuente de nitrgeno,
la concentracin de inulinasa extracelular alcanz el valor de 391.9
U/g de bagazo seco fermentado (Bender et al., 2006).
Una lista resumen de cepas de K. marxianus productoras de inulinasa
se reporta en la tabla 1, notndose que ellas producen inulinasa con
una alta actividad enzimtica. Para mejorar los resultados mostrados
es importante evitar los efectos de represin por glucosa sobre la
produccin de inulinasa y utilizar fuentes naturales de inulina como
extractos de yacn, esprragos y alcachofas. Por tanto la factibilidad
del escalamiento para la produccin enzimtica industrial est basada
grandemente en el alto rendimiento del microorganismo, el sustrato
base a emplear y el diseo del proceso de fermentacin.
Cepas de Kluyveromyces
inulinasa.

marxianus y

rendimientos

en

Caracterizacin y propiedades de la inulinasa

La inulinasa (E.C. 3.2.1.7) es una enzima miembro de la familia de
glicsido hidrolasa 32(GH32), la cual catalisa la hidrlisis de inulina a
fructosa. La purificacin de inulinasa microbiana extracelular es hecha
por mtodos convencionales de centrifugacin, ultrafiltracin,
precipitacin con solventes o sales, cromatografa de intercambio
inico y de permeacin en gel, mientras que las inulinasa intracelular
requieren disrupcin celular antes de practicar los mtodos
reportados para las enzimas extracelulares.
El proceso de extraccin de la inulinasa, adems de determinar el
rendimiento y si la enzima es extracelular o intracelular, determina
otras caractersticas como su peso molecular (MW), su modo de
accin sobre la molcula de inulina, su actividad hidroltica sobre la
sacarosa, respuesta a los cambios de pH y temperatura, propiedades
cinticas y efecto de la concentracin de sustrato.
Se ha determinado que las inulinasas pueden ejercer dos modos de
accin diferentes sobre la molcula de inulina, una accin extrema y

una accin interna, correspondiendo dos clases de inulinasas

llamadas exo-inulinasas y endo-inulinasas respectivamente. De este
punto de vista la mejor cepa sera la que tenga ambas propiedades,
como el caso del A. ficuum , dado que una mezcla de endo y exo
inulinasa puede resultar en una mejor conversin de inulina a fructosa
que solo utilizar enzimas puras aisladas, dado que las endo-inulinasas
romperan las molculas de inulina en muchos oligosacridos,
aumentando as los puntos de ataque para las exo-inulinasas, con el
consecuente incremento de la velocidad de reaccin de inulina a
fructosa.
La actividad y estabilidad depende de la respuesta de la enzima a los
cambios de temperatura y pH. Los valores de temperatura y pH
dependen del tipo de microorganismo usado como fuente,
generalmente se da valores ms altos para bacterias y levaduras que
mohos. As se tienen los rango de valores de pH, para mohos 4.5
7.0, para levaduras 4.4- 6.5 y para las bacterias 4.8 7.0.
Determinaron que la exo-inulinasa de Kluyveromyces marxianus YS-1
exhibi considerable actividad a un valor de pH ptimo de 5.5 en que
mantuvo estable su actividad cataltica al 100% durante 3 h a la
temperatura ptima de 50 C. Se observa que todava existe la
necesidad de investigar la actividad y estabilidad de la inulinasa
contra la temperatura, as como los modelamientos y simulacin de
procesos o cintica de desactivacin de la enzima.

Inmovilizacin
Un medio crudo libre de clulas de un cultivo de Kluyveromyces
marxianus var. bulgaricus ATCC 16045 fue inmovilizado en gelatina
tratado con glutaraldehdo resultando con una actividad de inulinasa
del 82.20 %. Sus parmetros cinticos fueron de K migual a 149.28 mM
y Vmax igual a 31.45 U/mg de protena a 55 C y pH 3.5 ptimos. La
inulinasa inmovilizada actu con una eficiencia de conversin de
sacarosa del 58.12 % en un reactor continuo de lecho fijo operando
por 33 das.
Clulas de Kluyveromyces marxianus con actividad de inulinasa,
fueron inmovilizados en alginato de bario tratado con glutaraldehdo,
mantenindose una actividad residual del 85 % y una eficiencia del
sistema () de 0.79 para un dimetro de partcula de 1.43 mm. El

coeficiente de difusin (DE) de la inulina hacia el interior del soporte

fue de 2.5x10-6 cm2s-1 mientras que el mdulo de Thiele () fue
cercano a 1, confirmndose que el factor limitante del sistema fue la
resistencia difusional del sustrato. Sus parmetros cinticos fueron de
Km igual a 0.522 mM y Vmax igual a 113.7 molmin-1 de protena.
Pratima y Argyrios (1985) inmovilizaron clulas Kluyveromyces
marxianus con actividad de inulinasa en una matriz de gelatina de
poro abierto tratado con glutaraldehdo, mantenindose una actividad
residual mayor al 90 %. El procedimiento de inmovilizacin no alter
el valor del pH que fue de 6.0 tanto para las clulas libres como para
las inmovilizadas. La temperatura de hidrlisis de la inulina fue 10 C
ms alto para las clulas inmovilizadas.
Conclusiones
En este estudio de revisin, se han determinado a la actualidad, un
conjunto cepas de Kluyveromyces marxianus con gran potencial
biotecnolgico para producir inulinasa, pero la investigacin para
una fuente vegetal de inulina econmicamente interesante todava
est en curso. Desde un punto de vista industrial, el uso de inulina de
vegetales como materia prima para la produccin de inulinasa por
fermentacin, se vislumbra como promisorio, sobre todo para el
esprrago por ser uno de los cultivos de mayor produccin mundial,
respecto a las materias primas comerciales actuales y de alto
contenido de inulina. Para propsitos de escalamiento del bioproceso
ser necesario tener en cuenta que, la aireacin y agitacin son
factores crticos para la fermentacin de Kluyveromyces maxianus,
los que son responsables de la viabilidad y produccin enzimtica. Se
ha visto que hay necesidad de investigar la actividad y estabilidad de
la inulinasa frente a la temperatura, modelando y simulando la
cintica de desactivacin. Los parmetros cinticos de la inulinasa
estn en funcin al tipo de microorganismo, las condiciones
ambientales de la fermentacin y del modo de accin de la enzima.

Anlisis FODA
Fortalezas
Este descubrimiento es til ya que ayuda a ahorrar recursos y, sobre
todo, cuidar el nivel de glucosa en personas con diabetes.

Oportunidades
, generar empleos
Debilidades
Amenazas
Referencias Bibliogrficas
http://www.rpp.com.pe/2011-11-14-ancash-dos-mil-600-casos-dediabetes-en-lo-que-va-del-ano-en-el-santa-noticia_422151.html