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Apuntes de Espectofotometria
Apuntes de Espectofotometria
Girona
Apuntes de espectrofotometra.
(ver. maig02)
(por Florencio de la Torre)
Indice
Introduccin. 2
El espectro electromagntico. 2
Las molculas absorben radiacin electromagntica. 5
Cuantificacin. 7
Ley de Beer. 7
Errores de medida. Desviaciones de la ley de Beer. 8
Calibracin. 9
Parmetros de Calidad. 9
El espectrofotmetro. 10
Tipos de espectrofotometras. 13
Espectrofotometria de absorcin molecular VIS-UV. 13
Espectrofotometria de absorcin molecular IR. 15
Espectrofotometria de absorcin y de emisin atmica. 16
Espectrofotometra con atomizadores electrotrmicos. 18
Espectrofotometria de emisin con plasma. 19
Espectrofotometria de fluorescencia molecular. 19
Otros mtodos. 20
Resonancia Magntica Nuclear (RMN). 20
Espectroscopia de masas (MS). 20
Bibliografia.
Fundamentos de qumica analtica. D.A. Skoog. 4 ed. Ed. Revert. 1996
Qumica analtica . Gary D. Christian. 2 ed. Ed. Limusa. 1981
Anlisis qumico cuantitativo. Daniel C. Harris. 2 ed. Ed. Revert. 2001
1.
2.
Introduccin.
Si observamos una disolucin acuosa de Cu2+ al trasluz percibimos un color azulado.
Esta coloracin se debe a la interaccin de los iones cobre con la radiacin lumnica
que atraviesa la disolucin. Ms concretamente, se debe a la absorcin de algunas
radiaciones lumnicas que corresponden al color complementario (en este caso el
amarillo) Las radiaciones no absorbidas son las que atraviesan la disolucin sin
obstculo alguno y llegan a nuestro ojo.
Estas radiaciones transmitidas
corresponden al color azul.
Adems, si comparamos el color de dos disoluciones de Cu2+ con diferente
concentracin, observamos que a mayor concentracin corresponde una mayor
intensidad del color azul de la disolucin. Por lo tanto podemos adivinar la
sustancia que hay en una disolucin, segn el color de esta, y an ms podemos
saber la cantidad de esa sustancia, segn la intensidad de ese color.
Esta propiedad de interaccin de la luz con una gran cantidad de especies qumicas
nos permitir identificar y cuantificar analitos, dando lugar a una rama de la
Qumica Analtica denominada espectrofotometra.
Espectrofotometra significa medida del espectro de la luz y se refiere a la
medida del tipo y cantidad de luz que se obtiene de una disolucin. A continuacin
explicamos que es el espectro de la luz y como se produce la interaccin con la
materia.
El espectro electromagntico.
La luz se puede explicar como un conjunto de radiaciones que se mueven por todo
el espacio. Aquellas detectables por nuestro ojo corresponden a la luz visible, pero
la mayora son invisibles para nosotros.
Estas radiaciones se pueden describir como partculas y como ondas.
La
descripcin como onda se basa en que la luz son campos elctricos y magnticos
que oscilan perpendicularmente a la direccin de traslacin por el espacio dando
lugar a ondas transversales.
Una radiacin electromagntica (cualquier fenmeno ondulatorio) se define
generalmente mediante dos parmetros:
Longitud de onda (l): distancia recorrida por un ciclo completo. De cresta a
cresta de la onda.
Frecuencia (n): nmero de oscilaciones completas que realiza la onda por segundo.
3.
campo elctrico
z
campo magntico
=c
n=
3 10 8 m / s 10 9 nm
= 4,6 1014 s -1 = 4,6 1014 Hz
650 nm
1m
Por otro lado, la luz se puede describir como una partcula. En este caso se dice
que es una partcula de energa llamada fotn. Tambin se puede describir como un
paquete de energa. La energa que tiene un fotn es proporcional a la frecuencia
de la radiacin que forma mediante la ecuacin
E =h
donde h es la constante de Planck (=6,6.10-34 J.s)
y tambin se puede relacionar con la longitud de onda
E =h
4.
E =h
= 6,6 10 -34
3 10 8 m/s
= 4,0 10 -18 J
-9
50 10 m
vemos como las radiaciones ultravioletas (con menor l) son ms energticas que las
visibles.
Por lo tanto la energa es inversamente proporcional a la longitud de onda y
directamente proporcional a la frecuencia. La luz roja (con mayor l y menor n) es
menos energtica que la luz azul (con menor l y mayor n)
El conjunto de radiaciones electromagnticas se llama espectro electromagntico
y es conveniente agruparlas en regiones para poder conocer sus propiedades. En la
fig. siguiente se muestran las zonas del espectro segn la clasificacin ms
aceptada. Como se puede observar la zona del visible (radiaciones percibidas por
nuestro ojo) es muy pequea en comparacin con la gran amplitud del espectro.
Ten en cuenta, tambin, que aunque hablamos de una radiacin determinada (l),
fsicamente es imposible aislar dicha radiacin. Siempre podremos obtener un
rango de radiaciones pequeo segn la exactitud del dispositivo de seleccin
(difractores de radiacin y filtros), pero nunca una sola. De la misma manera que
no podemos obtener o aislar un punto de una recta, sino un trozo pequeo (un
conjunto de puntos)
5.
0,1-10 nm
10-380 nm
380-780
780 nm- 300 mm
300 mm 0,01 m
0,01 10 m
fluorescencia
absorcin/emisin
absorcin/emisin/colorimetras
infrarrojos
resonancia electrnica /nuclear
absorcin
M*
estados excitados
energ
a
M + h n
emisin
estado fundamental
absorcin
emisin
transiciones electrnicas
tomos
6.
energa requerida
molculas o iones
7.
Cuantificacin.
Ley de Beer.
La cantidad de radiacin electromagntica absorbida por un analito se puede
relacionar cuantitativamente con la concentracin de dicha sustancia en disolucin.
Se define la transmitancia (T) como la fraccin de radiacin incidente transmitida
por la disolucin. Si la potencia radiante que incide sobre la disolucin es Po i P la
potencia radiante que sale, entonces
T=
Po
P
Po
c
Adems se observa que la potencia de la energa
transmitida
disminuye
geomtricamente
b
(exponencialmente) con la concentracin c
y con la
distancia b recorrida a travs de la disolucin.
T = 10 -kc
c
donde k y k son ctes de proporcionalidad,
logaritmos
T = 10-k'b
b
y combinando ambas y aplicando
T = 10-abc
- log T = a b c = A
que es la expresin matemtica de la Ley de Beer y que indica la relacin directa
entre la absorbancia de un analito y su concentracin en disolucin.
a es la absortividad. Es una constante e indica la absorcin de cada analito por
unidad de concentracin y unidad de distancia recorrida por el haz. Cuando se usan
unidades molares se llama absortividad molar (e) y se expresa en L/mol.cm
8.
Ejemplo:
Cual ser la transmitancia y la absorbancia de una disolucin de 1,00 mg de Fe en
100 mL en una celda espectrofotomtrica de 1 cm. Absortividad del Fe es 15,5
L/g.cm
A = a b c = 15,5
g
L
1cm 0,01 = 0,155 unidades de absorbancia
g cm
L
9.
pueden seleccionar una radiacin de una nica l, sino un rango. Esto introduce un
error ya que hay interacciones con otras absorciones . En la medida que el aparato
sea ms exacto en la seleccin de la l, este error se minimiza.
Errores qumicos:
Hay analitos que tienen una ionizacin parcial y la especie ionizada puede tener
diferente absorbancia que la especie molecular. Esto condiciona la absorbancia al
desplazamiento del equilibrio
AH
A- + H+
absorbe
transparent
En este caso el error se puede evitar fijando el pH de la disolucin con un tampn.
Otro error esta relacionado con la variaciones en el ndice de refraccin de la
disolucin. Este efecto es significativo en disoluciones de elevada concentracin.
En estos casos una manera de evitar el error es realizar la calibracin de la tcnica
con patrones que se mezclan con la disolucin problema. Ver el mtodo de
Calibracin mediante Adiciones Mltiples. De esta manera los efectos afectan por
igual al analito que a los patrones.
Calibracin.
Dado que hay una serie de fenmenos que no permiten la aplicacin de la ley de
Beer, en la prctica se realiza siempre una calibracin de la tcnica de medida, con
la cual obtenemos una relacin matemtica entre la concentracin y la absorbancia.
El procedimiento de la calibracin se basa en medir la absorbancia de varias
disoluciones patron (de concentracin conocida), en las mismas condiciones que se
mide la absorbancia de la disolucion problema, y se hace una interpolacin.
de la asignatura: Mtodos de Cuantificacin en
Espectrofotometras, se describe con detalle todo el procedimiento y se incluyen
problemas numricos de ejemplo.
En
los
apuntes
Parmetros de Calidad.
La calidad de una tcnica espectrofotomtrica expresada en trminos de
incertidumbre, se basa esencialmente en tres parmetros: sensibilidad, lmite de
deteccin y rango de linealidad.
10.
El espectrofotmetro.
Es el nombre genrico de todos los aparatos basados en esta tcnica. A este
trmino se le aaden los adjetivos adecuados a la subtcnica adecuada, ej.
espectrofotmetro de absorcin atmica.
El espectrofotmetro tiene un generador de radiacin lmnica (policrmica), un
separador para obtener la radiacin adecuada y luego mide la potencia radiante
obtenida. Los componentes fundamentales que tienen todos los espectrmetros
son:
fuent
e
monocromador
muestra
detector
(transductor)
registrador
11.
PRISMA
REDES DE DIFRACCION: Es una lmina metlica (Al)
altamente pulida sobre la que se han hecho una gran
cantidad de estras (lneas paralelas). Estas estras
actuan como centros de dispersin de todas las
radiaciones incidentes. Hay una dispersin lineal de
las l de una determinada banda cromtica, por lo
tanto se puede usar en todas las regiones del
espectro. Funciona mejor que el prisma en el IR.
12.
13.
Tipos de espectrofotometras.
En la tabla siguiente se muestra una clasificacin de los principales tipos de
espectrofotometrias agrupados segn el tipo de interaccin luz-molcula
(absorcin o emisin) y segn la zona del espectro en la que se trabaja.
Y a continuacin se describen las caractersticas principales de cada tipo, los
instrumentos utilizados y las aplicaciones analticas ms importantes.
Clasificacin
molecular
UV VIS
IR
RMN
atmica
llama (EAA)
electrotrmica (GF)
atmica
llama (EEA)
plasma (ICP)
molecular
ABSORCION
EMISION
turbidimetria
refractometria
polarimetria
espectroscopia masas (EM)
OTROS
M + h n
absorcin
M*
M*
relajacin
M + calor
14.
15.
nitritos, nitratos
Fe, Co, Mo
Ti, Va, Cr
Bi, Pd, Te
Cu, Pb, Ni , Fe
aguas, suelos,
fertilizantes
aguas
suelos
contaminantes
contaminantes
suelos
Ventajas y aplicaciones.
-
16.
tomo en la llama
17.
emisin
monocromado
detector
absorcin
monocromado
lmpara
detector
fluorescencia monocromado
laser
detector
llama
transicin no radiante
energa
estados excitados
estado fundamental
transicin
absorcin
atmica
transicin
emisin
atmica
transicin
fluorescencia
atmica
18.
CaCl2(s)
Ca(g)
Cl(g)
hY
emisin
Ca*(g)
Los instrumentos utilizados en esta tcnica se denominan Espectrofotmetros de
Emisin Atmica (EEA) y en ingles con las siglas AES. A diferencia de los
anteriores (absorcin) no tienen fuente de radiacin. El resto de componentes es
igual, as como el procedimiento de calibracin y clculo de resultados.
19.
20.
Otros mtodos.
Resonancia Magntica Nuclear (RMN).
Se produce una absorcin de radiacin electromagntica por los ncleos atmicos.
Estos tienen un movimiento de giro, que es cambiado en el proceso de absorcin.
El tipo de radiaciones que se utilizan son de gran l (microondas de baja energia), y
la absorcin depende de la configuracin electrnica que rodea al nucleo y de las
interacciones intramoleculares. Por lo tanto da informacion sobre los enlaces que
tiene un tomo, y el tipo de molcula que se estudia. Las radiaciones involucradas
en esta tcnica no alteran los materiales estudiados (dada su baja energia), por lo
que tiene una gran aplicacin en seres vivos, productos fcilmente alterables, etc.
Los elementos qumicos que se detectan por esta tcnica son H, F, P, B, Cl, N.
Mientras que el C y el O no tienen un momento cintico de giro nuclear.
Esto hace que la tcnica sea muy interesante para identificar molculas orgnicas,
opteniendo espectros de los tomos de H, de los que se deduce todos los enlaces
del H en la molcula.
Esta tcnica tiene una gran aplicacin en medicina (estudios no destructivos de
tejidos de organos del cuerpo humano), determinacin de humedad, estudios de
aceites y grasas, estudios de F en plsticos, etc.