UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

MANUAL DE PRCTICAS
DE LABORATORIO
ANALISIS INSTRUMENTAL

6to. Semestre

2016-2017
Ciclo I

Tabla de contenido
PORTADA1
PRESENTACION......................................................................................................................... 4
INTRODUCCION ........................................................................................................................ 5
REQUISITOS NORMATIVOS PARA LA EJECUCION DE LAS PRACTICAS ........................................... 6
INTENCIONALIDAD (OBJETIVO GENERAL) .................................................................................. 7
COMPETENCIAS ESPECIFICAS DE ASIGNATURA .......................................................................... 8
PRACTICA No. 1
EJERCICIOS PARA LA PREPARACIN DE
SOLUCIONES ESTANDARES Y DILUCIONES .................................................................... 9
PRACTICA No. 2
USO DE LA BALANZA
MEDICION DE VOLMENES CON PIPETAS AUTOMATICAS
Y VOLUMETRICAS
EJERCICIO DE APLICACIN ESTADISTICA..10
PRACTICA No. 3
METODOS INSTRUMENTALES DE ANALISIS
LA RADIACION ELECTROMAGNETICA EN EL ANALISIS
INSTRUMENTAL ......................................................................................................................... 13
PRACTICA No. 4
ESPECTRO DE ABSORCION PARA EL
ION PERMANGANATO (MnO4) ............................................................................................. 14
TALLER No. 1..

16

PRACTICA No. 5
CURVA ESTANDAR DE CALIBRADO PARA EL
ION (MnO4)- A PARTIR DEL
PERMANGANATO DE POTASIO ............................................................................................ 17

PRACTICA No. 6
CURVA ESTANDAR DE CALIBRADO PARA EL ION (CrO4)=
A PARTIR DEL CROMATO DE POTASIO ALCALINO ....................................................... 20
PRACTICA No. 7
DETERMINACION CUANTITATIVA DE ION PERMANGANATO
EN UNA SOLUCIN MUESTRA
DETERMINACION CUANTITATIVA DE ION CROMATO
EN UNA SOLUCIN MUESTRA ............................................................................................. 22
PRACTICA No. 8
CONTROL DE CALIDAD DE LA CURVA DE
CALIBRADO PARA EL ION CROMO (QC) ............................................................................. 26
PRACTICA No. 9
VALIDACION DE METODOS DE ENSAYO
REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD ............................................................................ 28
TALLER No. 2............................................................................................................................... 30
PRACTICA No. 10
DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE
VITAMINA B12 ........................................................................................................................... 31

PRACTICA No. 11 A
DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE
FLAVONOIDES (QUERCETINA) ............................................................................................ 33
PRACTICA No. 11 B
DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE
FLAVONOIDES (QUERCETINA) ............................................................................................ 35
BIBLIOGRAFIA ........................................................................................................................... 38

PRESENTACION

La asignatura de Anlisis Instrumental comprende las generalidades de los mtodos

instrumentales

de

anlisis,

estudio

de

la

Radiacin

electromagntica,

Espectrofotometra de absorcin de radiacin UV, VIS, IR, espectrofotometra de

Emisin de radiacin.
El Anlisis Instrumental tiene su aplicacin directa en la planificacin industrial, en el
anlisis y control de los Procesos de fabricacin y dems. Estos Mtodos de Anlisis
se consideran como elementos o conjunto de elementos que abarcan procesos
anlogos a las diversas industrias qumicas y otros en general.

INTRODUCCION
Las caractersticas generales de la qumica analtica, fueron establecidas a mediados
del siglo 20. Los mtodos gravimtricos eran preferidos, por lo general, a los
volumtricos y el empleo del soplete era comn en los laboratorios, autores como
Heinrich Rose 1795-1864 y Karl Fresenius 1818 -1897, publicaron influyentes obras
durante estos aos que establecieron las caractersticas generales de la disciplina, el
cual cre un importante laboratorio dedicado a la enseanza de la qumica analtica y
a la realizacin de anlisis qumicos para diversas instituciones estatales e industrias
qumicas.
El desarrollo de los mtodos instrumentales de anlisis qumico se produjo en el ltimo
cuarto del siglo 19, gracias al establecimiento de una serie de correlaciones entre las
propiedades fsicas y la composicin qumica. Los trabajos de Robert Bunsen y Gustav
Kirchhoff establecieron las bases de la espectroscopia e hicieron posible el
descubrimiento de numerosos elementos. Nuevos instrumentos pticos como el
colormetro y el polarmetro simplificaron e hicieron mucho ms rpido una gran
cantidad de anlisis de importancia industrial.
Las leyes electroqumicas establecidas por Michael Faraday 1791-1867 y los
medicamentos se basan en las investigaciones de autores como Oliver Wolcott Gibbs
1822-1908, y la creacin de laboratorios de investigacin como el de Alexander
Classen 1843-1934 que permitieron que las tcnicas de anlisis electroqumico ganen
importancia en los ltimos aos del siglo 19.
Otra de las tcnicas importantes que iniciaron su andadura en esos primeros aos del
siglo 20 fue la cromatografa que desarrollo enormemente en las dcadas posteriores.
El siglo 20 estuvo tambin caracterizado por la llegada de nuevos instrumentos como
el medidor de pH y el gran desarrollo de los mtodos espectroscpicos,
particularmente la espectroscopia infrarroja y la resonancia magntica nuclear, que
tuvieron una gran aplicacin en muchas reas de la qumica especialmente en los
mtodos que emplea el anlisis qumico analtico.
Por lo tanto, la qumica analtica e instrumental moderna, trata de los mtodos para
determinar la composicin qumica de muestras de materia. Un mtodo qumico
cualitativo, proporciona informacin relacionada con la identidad de la especie
atmica, molecular o de los grupos funcionales que se encuentran presentes en la
muestra.

En cambio un mtodo qumico cuantitativo proporciona informacin

numrica, como la cantidad relativa de uno o ms componentes. Este propsito se

5

lleva a cabo mediante la utilizacin de instrumentos pticos, electrnicos y

computarizados que constituyen el anlisis instrumental moderno.

REQUISITOS NORMATIVOS PARA LA EJECUCION DE LAS PRCTICAS

1. Las prcticas de laboratorio se efectuaran segn horario establecido para
las mismas, fuera del cual ningn estudiante podr hacer uso del laboratorio
sin permiso del profesor, por consiguiente la practica correspondiente
deber realizarla en el grupo asignado.
2. No se permitir realizar la prctica al estudiante que llegue una vez iniciada
la sesin de trabajo.
3. Dada la naturaleza de los materiales y aparatos que se usan en el
laboratorio se recomienda al estudiante el uso de mandil y de guantes, que
deber traerlos al momento de ingresar al laboratorio. El estudiante ser
responsable del material y del equipo que vaya a emplear, por lo tanto
cualquier material daado o roto, ser repuesto por el estudiante.
4. La duracin de la prctica depender de las caractersticas de la misma.
5. El Manual de prcticas ser enviado al correo electrnico del estudiante, el
mismo que deber imprimir y traer al laboratorio en cada sesin de trabajo.
6. Durante la prctica el profesor aclarar dudas a los estudiantes y adems
ampliar la informacin de la misma, si todava no se logra el entendimiento
completo, al final de la experiencia el profesor dar o brindar ms
elementos de juicio.
El objetivo es que el experimento se haga con el mayor rendimiento
didctico, a fin de que el estudiante obtenga de toda sesin de laboratorio
un aprendizaje que justifique la inversin del tiempo que exige cada
practica.
7. El estudiante tomara conciencia de que en toda practica existe una mayor o
menor posibilidad de no llegar a resultados exactos, el objetivo principal de
una prctica no es determinar con precisin absoluta ciertas propiedades de
un sistema, sino de adquirir un conocimiento solido sobre el procedimiento
del trabajo a seguir en la determinacin, esto no autoriza al estudiante para
no trabajar cuidadosamente. Se le pide honestidad en el trabajo, ya que
solo la continua ejecucin de prcticas con esta actitud le dar una
experiencia aceptable.
8. Es obligacin del estudiante hacer un reporte de la prctica de laboratorio
que se ha realizado, dicho informe ser solicitado por el profesor al inicio
de la clase siguiente. Las normas o requerimientos del reporte sern de
6

absoluta responsabilidad del estudiante, quedando a su criterio el contenido

y presentacin del reporte. No se receptar informes posteriores a la
fecha de la revisin.
9. Se tomara en cuenta para su evaluacin: actuacin en clase, trabajo en
equipo, los reportes, el orden, rendimiento y comportamiento que el
estudiante conserve durante la prctica.

INTENCIONALIDAD (OBJETIVO GENERAL)

a) Aplicar correctamente las propiedades bsicas de la radiacin electromagntica
en los diferentes mtodos de anlisis.
b) Diferenciar los componentes bsicos de un instrumento de medicin de una
propiedad fsica con la finalidad de aplicarlos eficientemente.
c) Aplicar los mtodos qumicos de tratamiento de muestras para su posterior
lectura en los diferentes instrumentos analticos con eficiencia.
d) Manejar adecuadamente las diferentes zonas de la radiacin electromagntica
en el anlisis qumico instrumental
e) Interpretar la informacin qumica generada del analito en estudio a travs de
los instrumentos manejados con destrezas.
f) Utilizar correctamente las diferentes herramientas matemticas y de estadstica
descriptiva para generar resultados confiables

Competencias Especficas de Asignatura

Proceso

Tipo

Formulacin

Descripcin

Estndar

Aplicacin de
diferentes
metodologas
y tcnicas
analticas

Aplica mtodos
estandarizados,
de la USP,
Standard
Methods,
AOAC, Normas
TULA.

Utiliza los
instrumentos de
medicin y
software
especializados

Estudiar a nivel
bsico los
fundamentos de
los diferentes
mtodos
instrumentales de
anlisis

Desempeo

Personal
Social

Intelectual

Aplicar con
pertinencia
principios y leyes
que permiten
modificar los
mtodos ya
existentes

Ejecuta tcnicas
instrumentales
con precisin
Utiliza
eficientemente los
diversos
instrumentos
empleados en las
tcnicas modernas
de anlisis
instrumental
moderno

Desarrollar
nuevos mtodos
con adaptacin con
la distinta
instrumentacin
Laboral

PRACTICA No. 1
EJERCICIOS PARA LA PREPARACIN DE
SOLUCIONES ESTANDARES Y DILUCIONES
OBJETIVO:
Reforzar los conocimientos adquiridos sobre los clculos a realizar para la
preparacin de soluciones estndares y preparacin de diluciones de
diferentes concentraciones, para elaborar curvas de calibrado.
CONTENIDO:
Soluciones ppm, ppb, Molaridad, Normalidad, Equivalente qumico, milimoles,
Porcentaje, P/V, P/P
MATERIALES:
Tabla peridica
Calculadora
Pizarra acrlica
Marcadores borraseco
ACTIVIDADES:
Basndose en lo expuesto por el profesor, investigue y ample los conceptos
dados en el contenido.
Realice 5 ejercicios relacionados con el tema.

PRACTICA No. 2
USO DE LA BALANZA
MEDICION DE VOLMENES CON PIPETAS AUTOMATICAS Y
VOLUMETRICAS
EJERCICIO DE APLICACIN ESTADISTICA
OBJETIVO:
Recordar los mtodos gravimtricos a travs del uso de la balanza y su
relacin con el anlisis qumico instrumental.
Aplicar en el laboratorio el uso de la Estadstica como herramienta
primordial en el anlisis qumico.
CONTENIDO:
1. Balanza analtica
2. Estadstica descriptiva
3. Calibracin de material volumtrico
EQUIPOS Y MATERIALES:
Balanza analtica
Pipetas volumtricas (1 y 2 ml)
Pipetas automticas y puntas (100 1000 L)
Vasos de precipitacin
PROCEDIMIENTO:
Realizar cada estudiante 5 mediciones de acuerdo al siguiente esquema:
Grupo 1: pipeta volumtrica

1 ml

Grupo 2: pipeta automtica

500 L

Grupo 3: pipeta automtica

100 L

Grupo 4: pipeta volumtrica

2 ml

Grupo 5: pipeta automtica

1000 L

Registrar los datos obtenidos.

ACTIVIDADES:
Con los datos obtenidos en las diferentes mediciones, realice los clculos
estadsticos respectivos (Promedio, Desviacin estndar, Coeficiente de
Variacin)
Incluya en el reporte:
1. Objetivo del equipo de trabajo
2. Conclusiones del equipo de trabajo
3. Recomendaciones

10

TABLA DE DATOS:

11

CALCULOS ESTADISTICOS (Promedio, Desviacin estndar, Coeficiente de

Variacin)

12

PRACTICA No. 3
METODOS INSTRUMENTALES DE ANALISIS Y
LA RADIACION ELECTROMAGNETICA EN EL ANALISIS INSTRUMENTAL
OBJETIVO:
Reconocer mediante el uso de un Modular las partes fundamentales de las
que consta un instrumento de medicin de una propiedad fsica como la
absorcin de radiacin y que son comunes en todos los modelos.
Aplicar los conocimientos adquiridos sobre la Radiacin electromagntica
como herramienta fundamental en los instrumentos, utilizados en el anlisis
qumico cualitativo y cuantitativo.
CONTENIDO:
Un instrumento para anlisis qumico no genera datos cuantitativos directos
(resultado final), sino que en primera instancia convierte informacin qumica en
una forma ms fcilmente observable y que posteriormente podr ser cuantificada.
Este objetivo se logra en varios pasos que son:
1.- Generacin de una seal
2.- Transformacin de la seal en una de naturaleza diferente, llamada
transduccin.
3.- Amplificacin de la seal transformada, y
4.- Presentacin de la seal, la misma que vara de acuerdo a los diferentes
modelos existentes.
MATERIAL:
Modular de enseanza
Fotocolormetro LUMETRON
ACTIVIDADES:
Basndose en lo expuesto por el profesor, investigue y ample los
conceptos dados en el contenido. Incluya en su trabajo, esquemas de
diferentes modelos de instrumentos que sirvan para medir absorcin
de radiacin. Radiacin electromagntica: concepto.- Divisin.Propiedades: onda, partcula.
No olvide redactar un Objetivo y las respectivas Conclusiones y
Recomendaciones del equipo de trabajo.

13

PRACTICA No. 4
ESPECTRO DE ABSORCION PARA EL
IN PERMANGANATO (MnO4)OBJETIVO:
Demostrar su habilidad y destreza en el manejo de los instrumentos para
medir absorcin de radiacin.
Identificar la longitud de onda ideal, de acuerdo al espectro de absorcin
obtenido de la especie absorbente.
CONTENIDO:
Interaccin de la Radiacin Electromagntica con la materia
Espectros de absorcin.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

MnO4K

Balanza Analtica

Pipetas Volumtricas

Agua destilada

PROCEDIMIENTO:
1. Preparar 500 ml de una solucin estndar de Permanganato de potasio que
contenga 500 g de ION PERMANGANTO (MnO4)-/ml
2. A partir de esta solucin tome una alcuota de:
SUBGRUPO
1
2
3
4
5

ALICUOTA
2
3
4
5
6

ml
ml
ml
ml
ml

VOL. DILUCION
25
25
25
25
25

CONCENTRACION
g (MnO4)-/ml

ml
ml
ml
ml
ml

PARTE INSTRUMENTAL:
1. Encienda el instrumento (10 a 15 minutos) antes de ser utilizado.
2. Seleccione las longitudes de onda, desde: 490 nm hasta 570 nm, con
variaciones de 10 en 10 nm.
3. Configure el instrumento utilizando agua destilada como blanco.
4. Coloque en el recipiente de la muestra la cantidad necesaria de la dilucin
preparada, lleve a la marcha de los rayos y realice las diferentes lecturas.
ACTIVIDADES:
1. Calcule Cuntos gramos de Permanganato de potasio se necesitan para
preparar la solucin estndar?
14

2. Cul es la concentracin en g del ion permanganato/ml de la dilucin de

trabajo?
3. Exprese con sus palabras lo que es un espectro de absorcin y para qu
sirve en el anlisis.
4. Con los datos obtenidos en una hoja milimetrada, haga el grafico
correspondiente:
ABSORBANCIA vs. Longitud de onda
5. Incluya en el reporte:
a) Objetivo
b) Conclusiones
c) Recomendaciones
CALCULOS:

15

TALLER No. 1

TEMA:
MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN AREAS DE:
FARMACIA, QUIMICA CLINICA Y CONTROL
DE CALIDAD EN ALIMENTOS

16

PRACTICA No. 5
CURVA ESTANDAR DE CALIBRADO PARA EL
ION (MnO4)- A PARTIR DEL PERMANGANATO DE POTASIO
OBJETIVO:
Comprobar el enunciado de la Ley de Lambert-Beer y su aplicacin en el
laboratorio.
CONTENIDO:
Ley de Lambert-Beer: concepto y expresin matemtica
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

MnO4K

Balanza Analtica

Pipetas Volumtricas

Agua destilada

PROCEDIMIENTO:
1. Preparar una solucin estndar de Permanganato de potasio que contenga
500 g ION (MnO4)-/ml
2. A partir de esta solucin tome una alcuota y prepare una dilucin primaria:
SUBGRUPO

ALICUOTA

1
2
3
4
5

6 ml
8 ml
10 ml
12 ml
15 ml

VOL. DILUCION
25
25
25
25
25

CONCENTRACION
g (MnO4)-/ml

ml
ml
ml
ml
ml

3. Luego, de esta dilucin prepare 5 estndares de trabajo en matraces

volumtricos de 10 ml, enrase con agua destilada.
Las concentraciones de los estndares de trabajo, sern escogidas de
acuerdo al criterio del subgrupo:

Dilucin primaria

ALICUOTA

Segn el subgrupo
de trabajo

ml
ml
ml
ml
ml

VOL. DILUCION
10
10
10
10
10

CONCENTRACION
g (MnO4)-/ml

ml
ml
ml
ml
ml

17

PARTE INSTRUMENTAL:
1. Encienda el instrumento.
2. Seleccione la longitud de onda ideal para el Permanganato de potasio.
3. Configure el instrumento utilizando agua destilada como blanco.
4. Coloque en el recipiente de la muestra la cantidad necesaria de cada una de
las diluciones preparadas, lleve a la marcha de los rayos y realice las
diferentes lecturas.
ACTIVIDADES:
1. Realice los clculos para la preparacin de la solucin stock, la dilucin
primaria y los estndares de trabajo.
2. Con los datos obtenidos haga el grafico correspondiente utilizando el
programa de Excel, recuerde incluir como primer dato el valor de Cero,
tanto para la concentracin como para la absorbancia:
ABSORBANCIA vs. CONCENTRACION
3. Segn el grafico: Cul es la relacin que existe entre las variables?
4. Detect alguna desviacin?
5. En qu grado afectan a la linealidad fotomtrica y como se corrigen?
6. Segn el trabajo realizado. Qu es una curva estndar de calibrado y para
qu sirve?
7. Incluya en el reporte:
Objetivo
Conclusiones, las mismas que se escribirn de acuerdo al objetivo
planteado.
Recomendaciones
PASOS PARA LA ELABORACION DE GRAFICOS
EN EXCEL
a. Ingresar a Excel
b. En la hoja de trabajo ingresar los valores de Absorbancia y
Concentracin de los estndares de trabajo, incluya el CERO como
primer valor de la curva, tanto para absorbancia como para la
concentracin.
c. Seleccionar las columnas de datos
d. Ir a INSERTAR y buscar DISPERSION (xy), escoger el primer
grfico.
e. Verificar el rango de datos
f. Dar formato al grfico: nombre de las variables, titulo, etc.
g. Colocar el cursor sobre uno de los puntos de la curva y hacer CLICK
derecho
h. Escoger agregar LINEA DE TENDENCIA, click, ir a opciones
18

i.

Marcar: ECUACION EN EL GRAFICO y el VALOR DE R

j. Click en ACEPTAR
k. Anotar la frmula de la ecuacin.
CALCULOS:

19

PRACTICA No. 6
CURVA ESTANDAR DE CALIBRADO PARA EL
ION (CrO4)= A PARTIR DEL CROMATO DE POTASIO ALCALINO
OBJETIVO:
Elaborar la curva de calibrado utilizando como herramienta el programa de
Excel de su computadora
CONTENIDO:
Desviaciones de la Ley de Lambert-Beer.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

Cromato de potasio

Balanza Analtica

Pipetas Volumtricas

Hidrxido de potasio
Agua destilada

PROCEDIMIENTO:
Preparar 1000 ml de una solucin 0.05 N de Hidrxido de potasio
Preparar 1000 ml de una solucin estndar de Cromato de potasio que
contenga 70 g de ION CROMATO /ml. Utilice como disolvente la solucin
0.05 N de hidrxido de potasio.
A partir de esta solucin prepare 5 estndares de trabajo, tome las
siguientes alcuotas de:
ALICUOTA
0,6 ml
1,2 ml
1,8 ml
2,4ml
3 ml

VOL. DILUCION
(Sol. 0.05 N KOH)
10
10
10
10
10

CONCENTRACION
g/ml

ml
ml
ml
ml
ml

PARTE INSTRUMENTAL:
1. Encienda el instrumento
2. Seleccione la longitud de onda, 370 nm.
3. Configure el instrumento utilizando la solucin 0.05 N de Hidrxido de
potasio como blanco.
4. Coloque en el recipiente de la muestra la cantidad necesaria de la dilucin
preparada, lleve a la marcha de los rayos y realice las diferentes lecturas.

20

ACTIVIDADES:
1. Realice los clculos para la preparacin de las soluciones y para cada uno de
los estndares de trabajo.
2. Con los datos obtenidos haga el grafico correspondiente:
ABSORBANCIA vs. CONCENTRACION
3. Incluya en el reporte:
Objetivo
Conclusiones, las mismas que se escribirn de acuerdo al objetivo
planteado.
Recomendaciones
CALCULOS:

21

PRACTICA No. 7 (leccin)

DETERMINACION CUANTITATIVA DE ION PERMANGANATO
EN UNA SOLUCIN MUESTRA
OBJETIVO:
Demostrar las habilidades y destrezas adquiridas durante su proceso de
enseanza-aprendizaje.
CONTENIDO:
Curva de calibrado: concepto, descripcin, usos, importancia
Aplicaciones de la Curva de calibrado en el Control de calidad.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

Muestra problema

Pipetas Volumtricas

Agua destilada

PROCEDIMIENTO:
A partir de la solucin entregada, determine la concentracin de in
permanganato presente en la muestra.
Utilice todas las herramientas que estn a su alcance, tales como:
preparacin de diluciones, curva de calibrado (realizada en la clase
anterior), herramientas estadsticas y dems clculos necesarios para llegar
el resultado final.
Recuerde trabajar la muestra por triplicado:

REPLICAS

CONCENTRACION
g/ml muestra

PROMEDIO

DESVIACION
ESTANDAR

COEFICIENTE DE
VARIACIN (5%)

A
B
C
PARTE INSTRUMENTAL:
1. Encienda el instrumento 15 minutos antes de ser utilizado.
2. Seleccione la longitud de onda para el permanganato de potasio
3. Configure el instrumento utilizando agua destilada como blanco.
4. Coloque la muestra en el recipiente y lea en el instrumento, realice el mismo
procedimiento con las rplicas preparadas.

22

ACTIVIDADES:
Con la curva de calibrado para el Ion permanganato de la clase anterior
obtenga la concentracin aproximada de cada una de las diluciones
preparadas (tres replicas) que llevo al instrumento.
Realice los clculos para obtener la concentracin de la muestra entregada,
en microgramos de Ion permanganato por ml de muestra. Aplique sus
conocimientos sobre estadstica.
Investigue el contenido de la practica
Segn el trabajo realizado: considera importante el uso de la curva de
calibrado en el laboratorio? Sustente su respuesta.
Qu otras aplicaciones tiene una curva de calibrado, en el laboratorio?
Incluya en el reporte:
Objetivo (uno)
Conclusiones
Recomendaciones
CALCULOS:

23

DETERMINACION CUANTITATIVA DE ION CROMATO

EN UNA SOLUCIN MUESTRA
OBJETIVO:
Demostrar las habilidades y destrezas adquiridas durante su proceso de
enseanza-aprendizaje.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

Muestra problema

Pipetas Volumtricas

Solucin 0.05 N KOH

PROCEDIMIENTO:
A partir de la solucin entregada, determine la concentracin de in
CROMATO presente en la muestra.
Utilice todas las herramientas que estn a su alcance, tales como:
preparacin de diluciones, curva de calibrado (ecuacin de la recta),
herramientas estadsticas y dems clculos necesarios para llegar el
resultado final.
Recuerde trabajar la muestra por triplicado:

REPLICAS

CONCENTRACION
g/ml muestra

PROMEDIO

DESVIACION
ESTANDAR

COEFICIENTE DE
VARIACIN
(5%)

A
B
C

PARTE INSTRUMENTAL:
5. Encienda el instrumento 15 minutos antes de ser utilizado.
6. Seleccione la longitud de onda para el Cromato de potasio alcalino.
7. Configure el instrumento utilizando la solucin 0,05 N de KOH como blanco.
8. Coloque la muestra en el recipiente y lea en el instrumento, realice el mismo
procedimiento con las rplicas preparadas.
ACTIVIDADES:
Con la ecuacin obtenida en la curva de calibrado, calcule la concentracin
para el Ion Cromato de cada una de las diluciones preparadas (tres replicas)
que llevo al instrumento.
Realice los clculos para obtener la concentracin de la muestra entregada,
en microgramos de Ion Cromato por ml de muestra. Aplique sus
conocimientos sobre estadstica.
24

 Incluya en el reporte:
Objetivo (uno)
Conclusiones
Recomendaciones
CALCULOS:

25

SEGUNDO PARCIAL
PRACTICA No. 8
CONTROL DE CALIDAD DE LA CURVA DE
CALIBRADO PARA EL ION CROMO (QC)
OBJETIVO:
Aplicar el control de calidad QC en la elaboracin de la curva de calibracin
como herramienta para la posterior Validacin de mtodos de ensayo.
CONTENIDO:
Investigue sobre los parmetros del control de calidad en el anlisis qumico
instrumental.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

Dicromato de Potasio

Balanza Analtica

Pipetas Volumtricas

Agua destilada
cido Sulfrico

PROCEDIMIENTO:
1. Preparar una solucin estndar de Dicromato de potasio que contenga 500
g ION Cromo/ml
2. De esta solucin prepare 5 estndares de trabajo en matraces volumtricos
de 25 ml, enrase con agua destilada.
ALICUOTA

VOL. DILUCION
25
25
25
25
25

ml
ml
ml
ml
ml

CONCENTRACION
g Ion Cromo/ml
10
20
30
40
50

NOTA: Antes de enrasar, adicione a cada una de las diluciones,

aproximadamente 0,4 ml de cido Sulfrico concentrado y diluya a la marca
con agua destilada.
3. Prepare un estndar de trabajo (QC) adicional, que tenga una concentracin
igual al punto medio de la curva de calibrado (30 g Cromo/ml)
PARTE INSTRUMENTAL:
Longitud de onda: 430 nm,
26

 Lea las absorbancias de los estndares de la curva de calibrado y del QC

preparado.
NOTA: Recuerde, no incluir en la curva el valor de absorbancia del QC
ACTIVIDADES:
1. Con los datos obtenidos, grafique la curva de calibrado utilizando EXCEL.
Registre la ecuacin y el valor de R.
2. Con ayuda de la ecuacin , calcule la concentracin real de su QC preparado
y determine el porcentaje de recuperacin, el mismo que debe estar entre
el 80 y 120%
Valor calculado
------------------------ x 100 = % de RECUPERACION
Valor terico

3. Realice el informe correspondiente para la prxima clase considerando

todos los componentes que ha venido desarrollando en los Informes
anteriores.
CALCULOS:

27

PRACTICA No. 9
VALIDACION DE METODOS DE ENSAYO
REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
OBJETIVO:
Aplicar dos parmetros utilizados en la Validacin de Mtodos de Ensayo,
utilizando como base la curva de calibracin para el ion cromo a partir de
Dicromato de potasio.
CONTENIDO:
Investigar sobre los dos parmetros que se estn aplicando.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

Dicromato de Potasio

Balanza Analtica

Pipetas Volumtricas

Agua destilada
cido Sulfrico

PROCEDIMIENTO:
1. Preparar 500 ml de una solucin estndar de Dicromato de potasio que
contenga 500 g ION CROMO/ml
2. A partir de la solucin estndar prepare 9 rplicas de cada nivel de
concentracin de la curva, de acuerdo al siguiente orden:
SUBGRUPO

ALICUOTA
ml

1
2
3
4
5

0,5
1
1,5
2
2,5

DILUCION

25
25
25
25
25

ml
ml
ml
ml
ml

REPETICIONES
g Cromo /ml

10
20
30
40
50

9
9
9
9
9

PARTE INSTRUMENTAL:
1. Trabaje en el mismo equipo y la longitud de onda de la practica anterior
2. Lea las Absorbancias de cada una de las rplicas preparadas.
ACTIVIDADES:
Con los datos obtenidos en las diferentes mediciones, calcule la
concentracin de cada uno, utilizando la ecuacin de la curva.

28

 Calcule el porcentaje de recuperacin de cada uno, con la frmula de la clase

anterior.
REPLICAS

ABSORBANCIAS

CONCENTRACIONES
g/ml

PORCENTAJE DE
RECUPERACION

1
2
3
4
5
6
7
8
9

Con los porcentajes de recuperacin obtenidos, calcule el Promedio,

Desviacin estndar y el Coeficiente de Variacin
Realice un anlisis de los valores obtenidos en el porcentaje de
recuperacin.
PROMEDIO
DESVIACION ESTANDAR
COEFICIENTE DE VARIACION %

CALCULOS:

29

TALLER No.2
TEMA:

LA NORMA NTE INENISO/IEC17025:2006, DE CALIBRACIN Y

ENSAYOS

30

PRACTICA No. 10
DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE
VITAMINA B12
OBJETIVO:
Comprobar por medios instrumentales (fotomtricos), la concentracin de
un principio activo en un producto farmacutico.
Aplicar los conocimientos adquiridos al realizar una tcnica comn de
control de calidad.
CONTENIDO:
Consulte sobre la clasificacin de las vitaminas, importancia, fuentes de
origen, etc. Incluya en su trabajo la bibliografa correspondiente.
EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

GENESYS 20

Matraces Volumtricos

Solucin estndar de vitamina B12ug/ml

Balanza Analtica

Pipetas Volumtricas

Agua destilada

Pipetas automticas

Muestra de vitamina B12

PROCEDIMIENTO:
o

PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRADO:

Pesar directamente en un matraz de 25 ml, en balanza analtica, 20 mg de
Cianocobalamina (B12), adicione agua destilada, disuelva completamente y
enrase con el agua destilada.
A partir de esta solucin tome 5 alcuotas de:
ALICUOTA
Nivel 1
Nivel 2
Nivel 3
Nivel 4
Nivel 5

VOL. DILUCION
10
10
10
10
10

ml
ml
ml
ml
ml

CONCENTRACION
g/ml
10
20
30
40
50

PREPARACION DE LA MUESTRA:
De una muestra que contenga Vitamina B12 inyectable, que tenga una
concentracin de 1000 g de vitamina B12/ml, tome una alcuota de la muestra
y transfirala a un matraz volumtrico de 10 ml, de tal forma que la
concentracin final de la dilucin preparada sea de 30 g/ml, enrase utilizando
agua destilada.

31

PARTE INSTRUMENTAL:
Lea las Absorbancias de las diluciones de trabajo y de la dilucin de la
muestra preparada a una longitud de onda de 361 nm.
Use agua destilada como blanco.

ACTIVIDADES:
Con los datos obtenidos en las diferentes mediciones de los estndares de
trabajo, grafique la curva de calibrado y obtenga la Ecuacin de la recta y el
valor de R.
Realice los clculos necesarios para llegar a obtener la concentracin de la
muestra entregada. Aplique la estadstica (Promedio, Desviacin estndar,
Coeficiente de Variacin)
CALCULOS:

32

PRACTICA No. 11A

DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE
FLAVONOIDES (QUERCETINA) EN CEBOLLA COLORADA
OBJETIVO:
Comprobar por medios instrumentales (fotomtricos), la concentracin de
un principio activo en un alimento natural, de consumo humano.
Aplicar

los

conocimientos

adquiridos

al

realizar

una

tcnica

de

cuantificacin de un principio activo.

EQUIPOS Y MATERIALES:
EQUIPOS

MATERIALES

REACTIVOS

Tubos plsticos 50 ml
Eppendorf

Alcohol 80 %

Balanza Analtica

Papel filtro

Solucin 1 M de Acetato de potasio

Sonicador

Pipetas automticas y
puntas

Centrifuga
refrigerada

Matraces Volumtricos

Solucin al 10% de Nitrato de

aluminio
CEBOLLA COLORADA

Licuadora

Pipetas Volumtricas

Espectrofotmetro
GENESYS 20

Vortex

PRIMERA PARTE:
PROCEDIMIENTO
A.- PREPARACION DE LA MUESTRA: Extraccin del principio activo
En

un

tubo

plstico

de

50

ml

Eppendorf,

pese

por

triplicado,

aproximadamente 10 g de la muestra, previamente licuada y dividida

finamente, agregar 20 ml del alcohol al 80% y sonicar por 20 minutos.
Centrifugar a 10000 rpm por 5 minutos y a 4 C.
El lquido sobrenadante, filtrarlo en el matraz volumtrico de 25 ml y luego
enrasar con el alcohol al 80%.
GUARDAR ESTAS DILUCIONES PARA LA SIGUIENTE SEMANA

33

CALCULOS:

34

PRACTICA No. 11B

DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA DE
FLAVONOIDES (QUERCETINA) EN CEBOLLA COLORADA
SEGUNDA PARTE
B.- PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRADO:
1) Pesar en la balanza analtica, directamente en un matraz volumtrico de 50 ml,
alrededor de 20 mg de Quercetina RS (Flavonoide) y diluya cuantitativamente
utilizando el alcohol al 80% (solucin stock).
2) De esta solucin, prepare una dilucin primaria, tomando una alcuota de 0,75 ml
y llvela a un matraz volumtrico de 25 ml.
3) Con esta dilucin primaria prepare los estndares para la curva, tomando
volmenes de:

ALICUOTA

Sol. Acetato
de potasio

Sol.
Nitrato de
aluminio

LLEVAR A VOL.
FINAL con la
solucin de
Etanol 80%

0,200 ml

200 uL

200 uL

4 ml

0,300 ml

200 uL

200 uL

4 ml

0,400 ml

200 uL

200 uL

4 ml

0,500 ml

200 uL

200 uL

4 ml

0,600 ml

200 uL

200 uL

4 ml

CONCENT.
g/ml

4) Dejar en reposo por 40 minutos y leer en el espectrofotmetro.

5) Prepare un blanco de reactivo, o utilice el alcohol al 80% como blanco.
C.- PREPARACION DE LOS EXTRACTOS (Muestra):
De cada una de las diluciones preparadas la clase anterior,

mida 500 uL y

llvela a un matraz vol. de 10 ml y adicione 400 uL de solucin de 1 M de

Acetato de potasio, 400 uL de solucin al 10% de Nitrato de aluminio. Llevar
a volumen con el alcohol al 80%.
Dejar en reposo 40 minutos y leer en el espectrofotmetro junto con los
estndares de la curva de calibrado.
35

NOTA: Al momento de adicionar los reactivos cromgenos, hgalo al

mismo tiempo en los estndares de trabajo y en las rplicas de la
muestra, los 40 minutos deben correr iguales.
3.- PARTE INSTRUMENTAL:
Encender el instrumento 15 minutos antes de hacer las lecturas.
Lea las absorbancias de los estndares para la curva y de la dilucin de la
muestra preparada utilizando como longitud de onda 415 nm.
Use el blanco de reactivo o el alcohol al 80% como blanco.
4.- ACTIVIDADES:
Con los datos obtenidos grafique en su computador, la curva de calibrado,
obtenga la ecuacin de la recta y el valor de r
En la ecuacin de la recta, despeje la variable X y calcule las
concentraciones de las diluciones preparadas de la muestra, y finalmente
determine la concentracin de la muestra, segn la cantidad que pes.
Aplique la parte estadstica, y reporte sus resultados finales en:
mg de Quercetina/100 g de cebolla.
MARCO

TEORICO: Realice la debida consulta bibliogrficamente e

investigue sobre los Flavonoides, importancia, y TODA la informacin que

exista sobre el tema.
Incluya informacin especial con respecto a la cebolla (ALLIUM cepa).
Consulte sobre los reactivos cromgenos y su comportamiento qumico.
No olvide incluir la bibliografa consultada y la utilizada.
RECUERDE ESTE TRABAJO DEMUESTRA SU EVOLUCIN EN EL
PROCESO

DE

ENSEANZA-APRENDIZAJE,

PONGA

SU

MEJOR

ESFUERZO PARA REALIZARLO.

36

CALCULOS:

37

BIBLIOGRAFIA

Skoog, D. A. (2008), Principios del Anlisis Instrumental, Cengage Learning

Editores, Mxico
Rubinson, K. A., Rubinson, J.F. (2001),

Anlisis Instrumental, Pearson

Educacion, Madrid-Espaa.
Hernndez, L. Gonzlez Prez, C. (2002), Introduccin al Anlisis
Instrumental, Ariel ciencia, Barcelona.
Google Academic
Redalyc. ORG
Scielo (Chile)
SCIRUS

38