MONOFLUOTM KIT

MONOFLUO TM KIT INFLUENZA

2 X 45 PRUEBAS

52209

MONOFLUO TM KIT ADENOVIRUS

45 PRUEBAS

52210

MONOFLUO TM KIT PARA-INFLUENZA 1+2

45 PRUEBAS

52211

MONOFLUO TM KIT PARA-INFLUENZA 3

45 PRUEBAS

52212

DETECCION DE LA INFLUENZA A Y B, LA
PARAINFLUENZA 1 Y 2, LA PARAINFLUENZA 3 O
EL ADENOVIRUS MEDIANTE LA
INMUNOFLUORESCENCIA

IVD

INDICE
1 VALOR CLINICO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31
2 - PRINCIPIO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
3 COMPOSICION DEL KIT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
4 PRECAUCIONES DE USO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .35
5 - MUESTRAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36
5.1 TCNICA PARA LA RECOGIDA DE MUESTRAS . . . . . . . . . . . . . . . . . .36
5.2 TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS ANTES DEL EXAMEN I.F. . . . . . . .37
5.3 - AISLAMIENTO DEL VIRUS EN EL CULTIVO DE CLULAS . . . . . . . . . .37

6 - PROCEDIMIENTO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38
6.1 MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38
6.2 RECONSTITUCIN Y CONSERVACIN DE LOS REACTIVOS . . . . . . . . . . .39
6.3 - PROCEDIMIENTO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39

7 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40

7.1 CONTROL DE CALIDAD . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
7.2 LECTURA E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS . . . . . . . . . . . . . . . . . .40

8 LIMITES DE LA PRUEBA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41

9 CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
10 CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
11 REFERENCIAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41

30

1- VALOR CLINICO
Los virus Respiratorio Sincitial, Influenza A y B, para-influenza 1, 2 y 3 y
los Adenovirus son los responsables de las infecciones respiratorias
graves en nios, ancianos y enfermos. El diagnstico del origen vrico o
bacteriano de estas infecciones es fundamental para aplicar las medidas
teraputicas adecuadas.
El diagnstico de estas enfermedades vricas se basa en el aislamiento
del virus. De hecho, el diagnstico sexolgico no ofrece unos resultados
satisfactorios; los ttulos de anticuerpos aumentan significativamente a los
10 15 das despus de empezar los sntomas clnicos y generalmente
son difcilmente detectables en los nios.
El mtodo de referencia se refiere al aislamiento del virus del cultivo de
clulas (clulas Hela, KB, Hep2 o lneas celulares fibroblsticas de origen
embrionario) y su identificacin, desde una muestra naso-farngea o un fluido
de lavado bronco-alveolar. La muestra se obtiene durante la fase de mxima
excrecin del virus, 1 6 das despus de la aparicin de la enfermedad.
La asociacin de los anticuerpos monoclonales tpicos de estos virus con
el tropismo respiratorio y la tcnica de la inmunofluorescencia
permitieron el rpido diagnstico de estas enfermedades (mediante el
examen directo de las muestras) sin necesidad de recurrir al mtodo de
cultivo de clulas, que es bastante difcil de realizar.
Para cada uno de estos virus, se han seleccionado los anticuerpos
monoclonales dirigidos contra las protenas del virus, primero por su
especificidad y segundo por la calidad de la imagen observada en una
aplicacin de la inmunofluorescencia; el aspecto habitual es un
fluorescencia granular o formada por partculas claramente visible en el
citoplasma de las clulas infectadas. Estos anticuerpos monoclonales
tambin pueden utilizarse para identificar a cada uno de estos virus tras
aislarlos del cultivo de clulas.
La prevalencia de estas diversas infecciones hizo que Bio-Rad propusiera
la elaboracin del rpido diagnstico de las enfermedades de etiologa
vrica, con arreglo a lo siguiente:
El Virus Respiratorio Sincitial (RSV) es el responsable de ms del 60%
de estas infecciones; MONOFLUOTM SCREEN R.S.V. se utiliza para
identificar este virus mediante una tcnica de inmunofluorescencia
directa de fase nica en las muestras recogidas.
Los virus de la Influenza A y B, de la para-influenza 1, 2 y 3 y el
31

Adenovirus causan, de varias maneras segn las regiones y los perodos

del ao, aproximadamente el 30% de estas infecciones. MONOFLUOTM
SCREEN INFLUENZA, PARA-INFLUENZA, ADENOVIRUS se utiliza para
confirmar o anular la presencia de uno de estos virus mediante una tcnica
de inmunofluorescencia directa de fase nica en las muestras; en caso de
respuesta positiva, el virus implicado puede identificarse utilizando:
- MONOFLUOTM Kit INFLUENZA
(cdigo 52209)
- MONOFLUOTM KIT PARA-INFLUENZA 1 + 2
(cdigo 52211)
- MONOFLUOTM KIT PARA-INFLUENZA 3
(cdigo 52212)
- MONOFLUOTM KIT KIT ADENOVIRUS
(cdigo 52210)

2- PRINCIPIO
El kit de prueba MONOFLUO TM KIT Influenza est destinado a la
deteccin del virus de la Influenza A y B en las clulas infectadas por
medio de la tcnica de inmunofluorescencia indirecta que utiliza
anticuerpos monoclonales especficos para cada uno de estos virus.
El kit de prueba MONOFLUOTM KIT Adenovirus est destinado a la
deteccin de las diversas cepas de Adenovirus.
El kit de prueba MONOFLUOTM KIT para-Influenza 1+2 est destinado a la
deteccin de los tipos 1 2 del virus de la para-influenza y el kit de prueba
MONOFLUOTM KIT para-Influenza 3 est destinado a la deteccin del virus
de la para-influenza del tipo 3. Estos anticuerpos monoclonales se unen al
antgeno expresado en el citoplasma de las clulas infectadas obtenidas de
las muestras que contienen secreciones o exudados de las clulas del tracto
respiratorio, o tras aislar el virus de los cultivos de las clulas.
La adicin de conjugado de ratn anti-IgG etiquetado con fluorescena
muestra las clulas que han fijado el fluorescente del anticuerpo
monoclonal. Las clulas que se unen a los anticuerpos monoclonales
especficos dirigidos contra las protenas del virus muestran su
fluorescencia, principalmente citoplsmica, con un aspecto granular o en
forma de partculas cuando se examinan en el microscopio fluorescente.

3- COMPOSICION DEL KIT

En lo que se refiere a las condiciones de almacenaje y a la fecha de
caducidad, consulte la etiqueta de la caja. Los reactivos almacenados a
+2-8C, si no se produce contaminacin bacteriana, se mantienen
estables hasta la fecha de caducidad que figura en la etiqueta (incluso
una vez abierta).
32

MONOFLUOTM KIT INFLUENZA (cdigo 52209)

ETIQUETA
R1a Monoclonal
Antibody
anti-Influenza A
R1b Monoclonal
Antibody
anti-Influenza B
R2 Negative
control

REACTIVOS
Anticuerpos monoclonales (ratn)
Anti-Influenza A (clon IA52/9)
Conservante : azida de sodio < 0.1%
Anticuerpos monoclonales
Anti-Influenza B (clon IB82/2)
Conservante: azida de sodio < 0.1%
Negative control (culture supernatant)
Preservative: < 0.1% sodium azide

PRESENTACIN
1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

R3

R4

Concentrated
Conjugate
(10X)

Mounting
medium

Conjugado concentrado (10X) :

Anticuerpo (oveja), tampn anti-IgG de ratn
etiquetado con isotiocianato de fluorescena
que contiene Evans azul
Conservante: azida de sodio < 0.2%
Medio de ensamblaje (listo para su uso):
Glicerol tamponado para inmunofluorescencia
Conservante: azida de sodio < 0.1%

1 x 1 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 3 ml
(frasco
cuentagotas)

MONOFLUOTM KIT ADENOVIRUS (cdigo 52210)

ETIQUETA
R1 Monoclonal
Antibody
Adenovirus
R2 Negative
control

REACTIVOS
Anticuerpos monoclonales (ratn)
anti-Adenovirus (clon H60 y H72)
Conservante: azida de sodio < 0.1%
Control negativo (capa superior del cultivo)
Conservante: azida de sodio < 0.1%

PRESENTACIN
1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

R3

R4

Concentrated
Conjugate
(10X)

Mounting
medium

Conjugado concentrado (10X) :

Anticuerpo (oveja), tampn anti-IgG de ratn
etiquetado con isotiocianato de fluorescena
que contiene Evans azul
Conservante: azoturo de sodio < 0.2%
Medio de ensamblaje (listo para su uso):
Glicerol tamponado para inmunofluorescencia
Conservante: azoturo de sodio < 0.1%

1 x 1 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 3 ml
(frasco
cuentagotas)

33

MONOFLUOTM KIT PARAINFLUENZA 1+2 (cdigo 52211)

ETIQUETA
REACTIVOS
R1 Monoclonal
Anticuerpos monoclonales (ratn)
Antibody
anti-paraInfluenza 1 y 2 (clon P2 128/14)
paraInfluenza 1 + 2 Conservante: azida de sodio < 0.1%
R2 Negative
Control negativo (capa superior del cultivo)
control
Conservante: azida de sodio < 0.1%

PRESENTACIN
1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

R3

R4

Concentrated
Conjugate
(10X)

Mounting
medium

Conjugado concentrado (10X) :

Anticuerpo (oveja), tampn anti-IgG de ratn
etiquetado con isotiocianato de fluorescena
que contiene Evans azul
Conservante: azoturo de sodio < 0.2%
Medio de ensamblaje (listo para su uso):
Glicerol tamponado para inmunofluorescencia
Conservante: azoturo de sodio < 0.1%

1 x 1 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 3 ml
(frasco
cuentagotas)

MONOFLUOTM KIT PARAINFLUENZA 3 (cdigo 52212)

ETIQUETA
R1 Monoclonal
Antibody
paraInfluenza 3
R2 Negative
control

REACTIVOS
Anticuerpos monoclonales (ratn)
anti-paraInfluenza 3 (clon Pi3 5/12)
Conservante: azida de sodio < 0.1%
Control negativo (capa superior del cultivo)
Conservante: azida de sodio < 0.1%

PRESENTACIN
1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 2,5 ml
(frasco
cuentagotas)

R3

R4

34

Concentrated
Conjugate
(10X)

Mounting
medium

Conjugado concentrado (10X) :

Anticuerpo (oveja), tampn anti-IgG de ratn
etiquetado con isotiocianato de fluorescena
que contiene Evans azul
Conservante: azoturo de sodio < 0.2%
Medio de ensamblaje (listo para su uso):
Glicerol tamponado para inmunofluorescencia
Conservante: azoturo de sodio < 0.1%

1 x 1 ml
(frasco
cuentagotas)

1 x 3 ml
(frasco
cuentagotas)

4- PRECAUCIONES DE USO
La calidad de los resultados depende de la observancia de las siguientes
buenas prcticas de laboratorio:
No utilice reactivos caducados.
En un mismo procedimiento, no mezcle ni combine reactivos de kits
que tengan diferentes nmeros de lote.
Antes de utilizarlos, deje que los reactivos se estabilicen a temperatura
ambiete (+18-30C).
Utilice cristales lavados cuidadosamente y aclarados con agua
desionizada o, preferiblemente, material desechable.
Utilice una nueva punta de pipeta para cada muestra.
Compruebe la calidad del agua desionizada. Si observa organismos
fluorescentes en un control negativo, esterilice el agua usada para el
filtrado.
No deje que el conjugado se seque en el portaobjetos durante el tinte.

INSTRUCCIONES DE SEGURIDAD
Pngase guantes desechables.
No pipetee con la boca.
Considere todos los materiales que estn en contacto directo con las
muestras como materiales altamente infecciosos y contaminados.
Evite los derrames.
Siga siempre las tcnicas y las precauciones vigents referentes a la
proteccin contra los peligros microbiolgicos, a la manipulacin y a
la eliminacin de los productos materiales y biolgicos utilizados en la
reaccin.

PRECAUCIN: el reactivo R3 (conjugado concentrado) contiene azida de

sodio a una concentracin del <0.2%.
R22-32 : Nocivo si se ingiere. El contacto con los cidos
libera un gas altamente txico.
S28-60 : En caso de contacto con la piel, lvese
Xn - Nocivo inmediatamente con agua abundante. Este material y su
envase debern ser eliminados como un residuo peligroso.
Si nos lo solicita, le facilitaremos la ficha tcnica de seguridad del
material.
35

5- MUESTRAS
Estos virus se limitan a las secreciones y a los exudados de las clulas del
tracto respiratorio superior.
Para proceder a un diagnstico directo a travs de la fluorescencia,
recoja clulas descamadas de las secreciones nasales o trqueobronquiales. Si el virus va a ser aislado de los cultivos de las clulas, la
tcnica de la inmunofluorescencia tambin puede aplicarse a las clulas
que han resultado infectadas in vitro, tan pronto como se detecte el
efecto citoptico.

5.1. TCNICA PARA LA RECOGIDA DE MUESTRAS

Los virus de la Influenza A y B, la para-influenza 1, 2 y 3 y el Adenovirus
se investigan en muestras que contienen secreciones nasals o
traqueobronquiales obtenidas limpiando con un Q-tip de algodn o
mediante la aspiracin o el lavado nasal con una solucin tampn de
PBS. Para el examen directo de las muestras en la inmunofluorescencia,
se recogen las secreciones con un adecuado medio de transporte para
mantener el virus: preferiblemente, una solucin salina o un medio
MEM tamponado (ya que algunos virus con tropismo respiratorio pierden
su naturaleza infecciosa en un medio cido) y enriquecido con
determinadas sustancias para proteger los virus: albmina bovina,
gelatina, suero de pollo, sacarosa y antibiticos. La frmula siguiente es
un ejemplo de ello
MEM, 5 mg/ml de albmina bovina, 4,76 mg/ml HEPES, 0,22 mg/ml
de bicarbonato sdico, 1 500 U/ml de penicilina, 1 000 mcg/ml de
estreptomicina.
Para aislarlas, las muestras deben transportarse congeladas o fras. Un
elemento clave es conseguir una suficiente cantidad de secreciones.
Normalmente es ms efectivo y conveniente recoger secreciones
respiratorias, a menudo mucosas, por aspiracin, utilizando un pequeo
tubo conectado a una botella de recogida de muestras, con el tubo
introducido en la nariz del nio. Este sistema se encuentra disponible
comercialmente con el nombre de bomba de succin de las
mucosidades. Cuando no puede procederse a la aspiracin junto a la
cama del nio, puede utilizarse una jeringa de gran capacidad (50 ml),
una bomba de vaco manual o, si es posible, un sistema de aspiracin
elctrica.
Algunas veces, por ejemplo en los casos de bronquiolitis, la nariz del
36

nio est seca y no es posible conseguir una cantidad suficiente de

secreciones. En este caso, puede utilizarse el lavado con un enema
nasal: en un orificio nasal se instilan unos cuantos millitros de solucin y
despus se aspira este fluido inmediatamente.
En la mayora de los casos, la aspiracin nasal permite recoger, como
mnimo, de 0,2 a 0,5 ml de secreciones. A continuacin, este material se
traslada al laboratorio o se coloca en el medio de transporte adecuado
para el aislamiento del virus en el cultivo de clulas.
A temperatura ambiente (18-30C), el almacenaje durante menos de 3
horas no alterar la calidad de los antgenos virales de la muestra. Se
recomienda almacenar a temperatura fra (+2 8C) en el caso del
aislamiento viral, pero la inoculacin de los cultivos de clulas no debe
retrasarse demasiado ya que su poder infeccioso disminuye incluso
despus de su congelacin a -70C.

5.2. TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS ANTES DEL EXAMEN I.F.

En el laboratorio se proceder a varios lavados sucesivos del material
aspirado para conseguir una suspensin de clulas nasales libres de
mocos.
Prepare el volumen necesario de tampn de PBS para los tratamientos
y lavados diluyendo una solucin concentrada 10 veces en agua
destilada estril.
Aada 5 ml de PBA a aproximadamente 0,5 1 ml de secreciones.
Agite suavemente.
Centrifugue durante 10 minutos a 500 g y a +2 8C. Trasvase el
fluido que sobrenada.
Aada 5 ml de PBS al precipitado y centrifugue. Repita el
procedimiento de lavado 2 3 veces hasta eliminar totalmente las
mucosidades.
Tras el ltimo centrifugado, aada 1 ml de PBS al precipitado de las
clulas. Homogenice la suspensin pipetendola.
Coloque las clulas en los portaobjetos
Proceda a la fijacin de las clulas y al tinte (vase tcnica del tinte)

5.3. AISLAMIENTO DEL VIRUS EN EL CULTIVO DE CLULAS

Puesto que algunos de estos virus con tropismo respiratorio son
termolbiles, es importante inocular cultivos de clulas lo antes posible
tras la recogida de las muestras.
37

En el laboratorio, congele y descongele las muestras de prueba de

manera que las clulas se abran y suelten las partculas de los virus.
Centrifugue durante 10 minutos a 500 g y a +2 8C para eliminar los
residuos celulares (2.000 rpm)
Inocule el cultivo de clulas destinado para ello con las muestras obtenidas.
Las clulas utilizadas son las Hep2, la Hela o la Kb, as como las lneas
celulares diploides procedentes de los fibroblastos embrinicos humanos en
un medio MEM que contiene de un 5 a un 8% de suero fetal de ternera.
Segn el frasco utilizado para el cultivo de clulas, variarn los
volmenes de inculo u del medio de cultivo.
Si utiliza tubos Leighton, inocule con 1 ml de muestra. Incube a 37C
durante 2h30m y despus diluya hasta 12 ml con el medio de cultivo.
Si utiliza un frasco de 25 cm3, inocule con 1 ml de muestra. Incube a
37C durante 2h30m y despus diluya hasta 12 ml con el medio de
cultivo. Incube la clulas a +37C hasta que observe el efecto citoptico
del virus (de unos 4 a 6 das).

Observacin del efecto citoptico

Observe la clula inoculada con un microscpico ptico de fase inversa y
siga el desarrollo del efecto citoptico: progresiva separacin de pequeas
clulas ms o menos redondas y refringentes con algunas inclusiones
nucleares en el caso de los virus de la Influenza y la para-Influenza, grandes
clulas redondas formando conglomerados en el caso del Adenovirus.
Si, al cabo de 6 u 8 das, todava no se observa el efecto citoptico, tras
inocular una muestra proceda de todos modos al tinte. La multiplicacin
viral puede ser suficiente para ser detectada en esta fase por la
inmunofluorescencia.
Si es as, se podra considerar un segundo paso por las clulas.

6- PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
6.1 MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO

38

Agua destilada o totalmente desionizada

Blanqueador
Papel absorbente
Guantes desechables
Tampn de fosfato (PBS) pH 7,2 para IF (concentrado 10X) 50 ml
cdigo 74901
Acetona

 Pipetas Pasteur estriles

Pipetas automticas o semiautomticas, ajustables o preconfiguradas
para dispensar de 10 a 200ml y 1 mL.
Tubos de ensayo graduados de 10 ml 25 ml
Tubos desechables
Tubos para el centrifugado
Portaobjetos para la inmunofluorescencia cdigo 50569 (2 pozxos)
50566 (6 pozos)
Cubreobjetos
Microscpico fluorescente
Contenedor de residuos biocontaminantes

6.2 RECONSTITUCIN Y ALMACENAJE DE LOS REACTIVOS

R3 : Diluya el contenido del vial con 9 ml de tampn de fosfato para
obtener una dilucin de la solucin lista para su uso. Tras la dilucin,
conjugado anti-IgG de ratn, almacene a +2-8C y, en ausencia de
contaminacin microbiana, se mantendr estable durante 3 meses-.

6.3 - PROCEDIMIENTO
6.3.1. APLICACIN Y FIJACIN CELULAR
Examen directo de la muestra
- Coloque 20 l de la muestra tratada (residuos de centrifugacin de
la clula) en un pozo del portaobjetos.
- Seque con aire los portaobjetos utilizando un secador o a
temperatura ambiente (18-30C).
- Colquela en un bao de acetona a -20C durante 5 minutos.
- Deje secar el portaobjetos al aire.
Cultivo de clulas en el portaobjetos
- Lave el portaobjetos dos veces durante 1 minuto en un bao de PBS
- Deje secar el portaobjetos al aire
- Colquela en un bao de acetone a -20C durante 5 minutos..
Cultivo de clulas en un frasco
- Retire el medio. Recoja las clulas mediante raspado en 1 ml de PBS
- Vuelva a suspender las clulas aspirando y descargando varias
veces utilizando una pipeta afilada.
39

- A continuacin, proceda a la aplicacin y fijacin de las clulas

para poder examinar directamente la muestra.

6.3.2. APLICACIN DEL ANTICUERPO

1. Prepare el volumen necesario de tampon de fosfato (PBS) para lavar y
diluir la solucin 10 veces concentrada en agua destilada estril.
2. Prepare el Conjugado R3 (vase el captulo 6.2)
3. Coloque una gota de los anticuerpos especficos monoclonales R1
(R1a y R1b para la Influenza A y B) en los primeros pozos (primer y
segundo pozo para la Influenza A y B) asegurndose que toda la
superficie del crculo quede cubierta.
4. Coloque una gota de control negativo (R2) en el siguiente pozo.
5. Incube el portaobjetos durante 30 minutos a +37C en una
incubadora hmeda.
6. Una vez finalizada la incubacin, lave cuidadosamente el
portaobjetos con PBS utilizando un frasco de lavado.
7. Lave dos veces de 2 a 5 minutos con PBS. Agite suavemente.
8. Deje secar el portaobjetos al aire
9. Agite suavemente el conjugado diluido (R3); coloque una gota de
conjugado diluido (R3) en cada pozo.
10.Incube durante 30 minutos a 37C en una cmara hmeda.
11.Tras la incubacin, lave cuidadosamente el portaobjetos con PBS.
Agite suavemente.
12.Sumerja el portaobjetos (unos pocos segundos) en agua destilada.
13.Deje secar el portaobjetos al aire.
14.Ensamble con el cubreobjetos utilizando el glicerol tamponado (R4).
Compruebe que el portaobjetos no contiene burbujas de aire. Recubra
el portaobjetos con el barniz.

7- INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

7.1 CONTROL DE CALIDAD
Tinte al mismo tiempo un portaobjetos de referencia que utilice clulas
positivas y negativas.

7.2 LECTURA E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Examine los portaobjetos utilizando un microscpico fluorescente a una
magnificacin de X100 y X400:
40

 Lectura del pozo de control negativa: no se observa ninguna clula

fluorescente tras examinar todo el pozo.
Reaccin positiva: fluorescencia granular intra-citoplsmica entre otras
clulas rojizas; se observa como mnimo una clula fluorescente
caracterstica.
Reaccin negativa: no se observa ninguna clula fluorescente tras
examinar todas las paredes.

Nota: Lea los portaobjetos inmediatamente para conseguir unos mejores

resultados. No obstante, puede guardar los portaobjetos a +2 8C en la
oscuridad durante 24 horas.

8- LIMITACIONES DE LA PRUEBA
nicamente puede establecerse el diagnstico de una reciente infeccin
sobre la base de una combinacin de las observaciones clnicas y los
datos sexolgicos. El resultado de una nica prueba no constituye la
prueba suficiente para diagnosticar una reciente infeccin.

9- CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA

Los resultads de los MONOFLUO TM KITS se controlan utilizando
portaobjetos recubiertos con controles positivos y negativos.
Los resultados son los siguientes:
Con anticuerpos monoclonales: presencia de clulas fluorescentes,
intensidad ++
Con cultivo que sobrenada: ninguna clula fluorescente.

10- CALIDAD DE CONTROL DEL FABRICANTE

Todos los reactivos fabricados se someten a nuestro Control de Calidad,
desde la recepcin de las materias primas a la comercializacin final del
producto. Todos los lotes se someten a las evaluaciones del control de
calidad y nicamente se procede a su lanzamiento al mercado una vez
se ha demostrado su conformidad con los criterios de aceptacin
previamente establecidos. Los registros relacionados con la produccin y
el control de todos y cada uno de los lotes se efectan con Bio-Rad.

41

11- REFERENCES
1. AYMARD M. Les orthomyxovirids : les virus grippaux. Virologie
mdicale par J. MAURIN, 1985, 448-473 (Edit. Flammarion,
Mdecine - Sciences).
2. BREESE-HALL C., GLIMAN J.M., BREESE B.B., DOUGLAS R.O. Jr.
Parainfluenza viral infections in children. Correlation of shedding with
clinical manifestation. J. Pediatr. 1977, 91, 191-198.
3. DENOYEL C.A., REGNIER L., ALOTH B. Anticorps monoclonaux et
diagnostic des infections oculaires Adnovirus. Biologie Prospective Colloque, 1988, Pont Mousson, France.
4. FREYMUTH F., QUIBRIAC M., PETITJEAN J., DAON F., BESNARD A.,
PIERRE C. Mise en vidence des antignes viraux par
immunofluorescence : mthode rapide de dtection et d'identification
des virus respiratoires. Revue Franaise des Laboratoires, 1985, 137,
21-24.
5. GADNER P.S., MC QUILLIN J., MC GUCKIN R., DITCHBURN R.K.
Observations on clinical and immunofluorescence diagnosis of
parainfluenza virus infections. Br. Med. J., 1971, 2, 7-12.
6. SINGER M., Dveloppement d'un ractif pour le diagnostic du virus
respiratoire syncitial par Immunofluorescence Directe, Mmoire
C.N.A.M. en bio-inductrielle et agro-alimentaire, 1989.
7. LENNETTE E.H, SCHMIDT N.J. Diagnostic procedures for viral,
Rickettsial and Chlamydial infections. Fifth edition "American Public
Health Association", 1979.
8. LUCAS G., POTHIER P., DELAGNEAU J.F. Diagnostic rapide du Virus
Respiratoire Syncytial (VRS) par immunofluorescence indirecte l'aide
d'anticorps monoclonaux. Biologie Prospective - 6me colloque, 1985,
Pont Mousson, France.
9. MARSTON R.Q., VAUGHAN E.R. Parainfluenza 3 assay and growth
in tissue culture Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1960, 104, 56-60.
10. POTHIER P., DENOYEL G.A., GHIM S., PRUDHOMME DE SAINT
MAUR G., FREYMUTH F. Use of Monoclonal Antibodies for rapid
detection of Influenza A virus in nasopharyngeal secretions. Eur.
J. Clin. Microbiol., 1986, 5 N3, 336-339.

11.POTHIER P., DENOYEL G.A., PRUDHOMME DE SAINT MAUR G.,

DROUET E., FREYMUTH F. Rapid diagnosis of Influenza B virus
infections by immunofluorescence with monoclonal antibodies in
nasopharyngeal aspirates. Ann. Inst. Pasteur/Virologie, 1986, 137E,
215-219.
12.WONG D.T., WELLIVER C., RIDDLESBERGER K.R., SUN M.S., OGRA
P.L. Rapid diagnosis of Parainfluenza virus infection in children. J. Clin.
Microbiol., 1982, 16, 161-167.

112

113

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