Cmo podemos detectar la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa?

INTRODUCCIN:
Las enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, qumicamente son protenas. Como catalizadores,
las enzimas actan en pequea cantidad y se recuperan indefinidamente. No llevan a cabo reacciones que
sean energticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios qumicos, sino que aceleran
su consecucin.
La enzima succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa del cido succnico es una oxidorreductasa que cataliza la oxidacin del succinato para formar fumarato siendo la coenzima el FAD. Esta enzima se localiza en
eucariotes en la membrana mitocondrial interna.
El H2 cedido por el succinato puede ser transferido del FADH2 a un colorante susceptible como el azul de
metileno que al cambiar su estado redox pasa de coloreado a incoloro o viceversa.
OBJETIVO:
Apreciar mediante prctica en el laboratorio la actividad de la enzima Succinato Deshidrogenasa mediante
una reaccin colorimtrica aplicada en hgado de rata.
MATERIAL:
2 Tubos de ensaye
2 pipetas de 5 Ml
Bao Mara a 50C
Pinzas para tubo de ensaye
REACTIVOS:
NaOH al 10%
cido succnico al 3% neutralizado con NaOH al 10%
hasta pH=7.4
Fenol al 90%
Azul de metileno al 0.1%
Aceite mineral
Hgado de rata

OBSERVACIONES:
Al agregar los reactivos en los tubos siguiendo la
indicacin de la tabla se colorearon ambos tubos
con el color peculiar del azul de metileno en su estado oxidado, dando un verde azulado. De ah se
procedi a agregarlos a bao mara a 50C, una vez
transcurrido el tiempo se percat un cambio de coloracin en el tubo No. 2, en el tubo No. 1 no hubo
cambio (figura 1).
Este tubo No. 2, no se le agrego lo que fue el fenol,
siendo este en el cual se observ el cambio de coloracin de azul verdoso a un rojo o marrn.

METODOLOGA:

Figura 1. Observacin de los tubos 1 y 2 de la prctica.

DISCUSIN DE RESULTADOS:
En la prctica pudimos observar dos reacciones en dos tubos
distintos, en el tubo uno no se obtuvo ningn cambio de coloracin debido a que en este agregamos la presencia del fenol, ya que este inhibe la actividad enzimtica ya que desnaturaliza
a
las
protenas.
De manera general en el tubo dos se observa que hay un
cambio de coloracin debido a la enzima succinato deshidrogenasa que elimina los hidrgenos del succinato para
oxidarlo y formar el fumarato, siendo el FAD el aceptor de
electrones; el cual se reduce y se transforma en FADH2.
En el caso de la prctica, la enzima succinato deshidrogenasa acta de manera reversible, ya que una vez formado el fumarato + FADH2 , el azul de metileno acta como aceptor
de electrones del complejo succinato-FADH2 quedando entonces FAD oxidado y azul de metileno reducido el cual es
incoloro y por tanto en el tubo 2 desaparece el color azul.
Con estos datos se puede evaluar la efectividad de la prctica para determinar la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa, y se observa que es positiva en el tubo dos, ya
que ocurre una reaccin de xido reduccin provocada por
el FADH2 y el azul de metileno

CUESTIONARIO:
1. Cules son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y reducido?
El azul de metileno slo presenta un color azulado cuando est en su estado oxidado. Cuando se encuentra en estado reducido se vuelve incoloro.
2. Cul es la funcin del fenol en la reaccin?
El fenol es un corrosivo de tejidos como su propia ficha de seguridad lo dice, por tanto desnaturaliza a las protenas; en este caso a la enzima succinato deshidrogenasa, provocando la prdida de su actividad.
3. En qu va metablica est involucrada la enzima succinato deshidrogenasa?
La oxidacin de succinato a fumarato est involucrada en la reaccin 6 del ciclo de Krebs; el succinato formado a
partir del succinil-CoA es oxidado a fumarato por la flavoprotena succinato deshidrogenasa.
En eucariotas, la enzima succinato deshidrogenasa se encuentra unida fuertemente a la membrana mitocondrial
interna, en procariotas se encuentra en la membrana plasmtica.

CONCLUSIN:
Se cumpli el objetivo, ya que se observ la decoloracin del tubo 2 por la accin de la enzima succinato deshidrogenasa y el FADH2, se puede corroborar con la teora que la reduccin del azul de metileno se logra aadiendo hidrgenos en posicin trans, los cuales fueron cedidos desde el FADH2 quedando como productos finales
FAD oxidado y azul de metileno reducido, por tal razn se adquiri la decoloracin en el tubo en el cual no se
desnaturaliz la protena.
BIBLIOGRAFIA:
http://campodocs.com/articulos-para-saber-mas/article_50271.html
https://books.google.com.mx/books?
id=FXDiqLK6GmAC&pg=PA530&lpg=PA530&dq=succinato+deshidrogenasa&source=bl&ots
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/enzimas%20oxidorreductoras%20flavin%
20dependientes.html
http://es.slideshare.net/nataliamontenegro104/enzima-succinico-deshidrogenasa
http://www.virtual.unal.edu.co/revistas/actabiol/PDF%27s/V9N2/Actividad.pdf