CUANTIFICACION DE FLAVONOIDES TOTALES

CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES TOTALES EN EL EXTRACTO METANLICO DE Glycine max (SOYA) Y SU

EFECTO LARVICIDA CONTRA Aedes aegypti

RESUMEN
Los flavonoides son compuestos fenlicos caractersticos a los colores amarillo-naranja,
atribuyndole propiedades antioxidantes, larvicida y efecto cardiovascular. En este trabajo se
realiz la marcha fotoqumica preliminar del extracto metanlico de la semilla de Glycine max, el
cual mostr la presencia de flavonoides, fenoles, taninos y aminocidos. Se cuantificaron los
flavonoides totales expresados como quercetina por espectrofotometra UV-Vis a 258 nm. El
contenido de flavonoides totales fue 16.528% de quercetina. Por HPLC se determin el contenido
de isoflavonas como daidzena 4.779x10-3 mg/mL, genistina 0.012002 mg/mL, gliciteina 0.065597
mg/mL, genisteina 0.00008 mg/mL. La evaluacin de la actividad larvicida del extracto acuoso de
Glycine max result negativa frente al Aedes aegypti.

1. INTRODUCCION
Actualmente es reconocida la utilizacin emprica de las plantas como agentes en los estados no
deseados de salud en mltiples culturas del mundo transmitida a travs de generaciones. Este
saber ha ido perfeccionndose a lo largo de la historia, teniendo su aplicacin en la medicina actual
(Caigueral, 2003).
Las enfermedades transmitidas por vectores son responsables del 22.8% de los eventos, y en la
ltima dcada se ha observado un aumento del 28.8%. Este aumento se le atribuye a los cambios
climticos que han ocurrido en la dcada de los 90, que han contribuido a que los vectores sean
sensibles a las condiciones medioambientales como la lluvia, la temperatura; convirtindose en un
problema de salud pblica
(Woolhouse, 2005). Una de estas enfermedades es el dengue, el cual ha aumentado el nmero de
personas afectadas en los ltimos 10 aos (Rose, 2001). 2,5 mil millones de personas de la
poblacin mundial, corren el riesgo de contraer la enfermedad por vivir en zonas propensas donde
se desarrolla el vector que transmite la enfermedad (Hernndez, 2009). Por lo anterior Surge la
necesidad de implementar diferentes alternativas de prevencin, control y erradicacin del dengue
en la poblacin colombiana (Vargas, 1998), por tal razn las investigaciones de control de vectores
han encaminado a encontrar compuestos bioactivos de plantas a los cuales se les atribuye actividad
larvicida como es el caso de los compuestos fenlicos (Kotkar, 2002).
La especie Glycine max perteneciente a La familia de las leguminosas, posee un fruto en forma de
vaina dehiscente con suturas conteniendo de tres a cuatro semillas. La semilla es rica en protenas y
en aceites. En algunas variedades mejoradas presenta alrededor del 40-42% de protena y del 2022% en aceite, respecto a su peso seco. En la protena de soja hay un buen balance de aminocidos
esenciales, destacando lisina y leucina (Toledo, 2011).
El objetivo de este estudio es cuantificar los flavonoides totales del extracto metanlico de Glycine
max (soya), usando espectrofotometra UV-VIS y cromatografa HPLC; y evaluar la actividad
larvicida.

2. MATERIALES Y METODOS
Recoleccin y tratamiento del material vegetal. El material vegetal consisti en las semillas de
Glycine max (soya), adquirido de forma empacada en los almacenes Olmpica ubicados en la ciudad
de Barranquilla (Atlntico).

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Se seleccion y separ manualmente el grano para eliminar aquellos que presentaron picaduras de
insectos y/o materia orgnica adherida al tegumento de la semilla. Del cual se tom 1 kg, se moli
manualmente con un molino de cuchillas y se almacen adecuadamente libre de humedad y luz
directa.
Obtencin del extracto metanlico.
Se pes 200.9 g de semillas, se adicion 600 mL de MeOH y se someti a reflujo durante 24 horas a
temperatura controlada de 50C, posteriormente se filtr e hidroliz adicionando 5 mL de cido
clorhdrico concentrado sometido a reflujo por 3 horas. Se enfri, filtr y extrajo con ter de
petrleo, para obtener una fase etrea y una metanlica. Se concentr el extracto en un
rotavaporador Buchi R-205 a 46C y un Buchi Heating Bath B 490.
Marcha fotoqumica preliminar.
Para determinar la presencia de los grupos qumicos mayoritarios del extracto metanlico de la
semilla de Glycine max, se evalu de forma cualitativa los metabolitos secundarios presentes.
Sobre dichas muestras se aplicaron reactivos especficos para confirmar o descartar la presencia de
flavonoides, alcaloides, taninos, antraquinonas, fenoles, saponinas, esteroles y terpenos (Lock,
1994).
Determinacin de flavonoides totales por UV/VIS.
Se pes 0.5252 g del extracto metanlico concentrado, se diluy en 10 mL de MeOH, se llev a 100
mL. Obteniendo la solucin madre, de la cual se prepar las diluciones a diferentes concentraciones
por triplicado. Como solucin patrn se utiliz 0.0445 g de quercetina en 100 mL de MeOH. Estas
soluciones se leyeron a una absorbancia de 258 nm en un espectrofotmetro UV/Vis Hewlett
Packard 8453 (Camacho, 2009).
Se emple la siguiente expresin para la determinacin del contenido total de flavonoides
expresados como quercetina (Gutirrez, 2000):

Dnde:
FI= Contenido de flavonoides totales expresados como quercetina (%).
Am= Absorbancia de la solucin muestra (nm).
Pr= Peso de la sustancia de referencia (g).
Ar= Absorbancia de la solucin de referencia (nm).
Cuantificacin de flavonoides totales por Cromatografa Liquida de Alta Resolucin HPLC.
Se utiliz 6.729 g del extracto metanlico. El anlisis por HPLC, se realiz en un cromatografa
liquido de alta resolucin Agilent Technologies, la columna empleada fue C 18 (250 x 4.6) 5
Vm, volumen de inyeccin de 30VL, detector UV 256 nm, con flujo 1 mL/min a una temperatura de
37C.
Determinacin de actividad biolgica. Preparacin de las soluciones a diferentes
concentraciones. Se prepararon soluciones a diferentes concentraciones en un rango de 1000 a
6500 ppm, siguiendo las directrices dadas por la organizacin mundial de la salud (OMS). Se
prepar la solucin madre disolviendo 200 mg de extracto metanlico en 20 mL de solucin.
Partiendo de la solucin madre, se prepararon diluciones sucesivas a concentracin de 1000, 2000,
4000 y 6500 ppm (WHO, 2005).

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Obtencin de las larvas del IV estadio de Aedes aegypti.
La evaluacin de la actividad larvicida del extracto acuoso de Glycine max sobre las larvas del
mosquito Aedes aegypti, se realiz con larvas del estadio IV del programa de Estudio y Control de
Enfermedades Tropicales (PECET) de la Universidad de Antioquia, la cepa utilizada fue Rokcefeller.
Los huevecillos fueron sumergidos en agua para inducir la eclosin, las larvas que emergieron se
transfirieron a agua limpia para la alimentacin de las mismas, se criaron hasta el IV estadio, se
seleccionaron las larvas necesarias para efectuar el ensayo biolgico (WHO, 2005).
Evaluacin de actividad larvicida.
Se utiliz aprox. 1000 larvas del IV estadio de Aedes aegypti. Se distribuyeron en cuatro (4) bloques,
uno para cada concentracin (1000, 2000, 4000, 6500 ppm), cada bloque lo conformaron 4
unidades experimentales, las cuales contaban con 55 larvas aproximadamente, que se trataron con
el extracto acuoso de Glycine max. Un grupo testigo por cada bloque con 100 mL de agua y 25 mL
del extracto. El conteo de mortalidad se realiz a las 24 y 48 horas. Las larvas se tomaron como
muertas cuando no reaccionaban al ser tocadas por un puntero punta roma en la regin cervical
(WHO, 2005).

3. RESULTADOS Y DISCUSION
La marcha fotoqumica realizada al extracto metanlico de la semilla de Glycine max, confirm la
presencia de flavonoides, dando resultados positivos para las pruebas de Shinoda y Pacheco, de
igual manera mostr resultados positivos para taninos, fenoles, saponinas, aminocidos. (Ver tabla
No 1).
Tabla No 1. Resultados de la Marcha Fotoqumica

El ensayo para taninos present turbidez, en la prueba de fenoles con FeCl3 mostr una coloracin
marrn, la prueba de saponinas dio positiva por la presencia de espuma persistente durante 30
min.
Determinacin de flavonoides totales por UV/Vis.

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El contenido de flavonoides obtenido a una longitud de onda de 258 nm, mostr resultado una
concentracin de 16.53% de flavonoides totales expresados como quercetina. En comparacin con
la especie Dioscorea trifida que es reconocida por su alto contenido de flavonoides totales con
27.63 mg Eq quercetina/100 g de muestra seca (Ramos, 2010), muestra el gran contenido que
posee la misma.

Cuantificacin de flavonoides totales por Cromatografa Liquida de Alta Resolucin HPLC.

El contenido de flavonoides est expresado como isoflavonas totales (Ver Figura No. 1). De igual
forma se determin y cuantific los diferentes tipos de isoflavonas presentes (genisteina,
Daidzeina, glicitena, daidzina, genistina).

El valor promedio de la concentracin obtenida de isoflavonas totales presentes en las semillas de

Glycine max fue 0.13157 mg/mL.
Evaluacin de actividad larvicida.
En la evaluacin del extracto acuoso de la especie Glycine max, se observ que la solucin madre
(250000 ppm) caus mortalidad de las larvas a las 48 horas, mientras las concentraciones restantes
(1000, 2000, 4000, 6500 ppm) no ocasionaron mortalidad frente a las larvas del IV estadio de Aedes
aegypti.

4. CONCLUSION
La marcha fotoqumica preliminar confirm la presencia de los componentes presentes en el
extracto de la semilla de Glycine max como son flavonoides, taninos, fenoles y saponinas. As
mismo, el anlisis por espectrofotometra UV/Vis obtuvo un porcentaje de flavonoides totales de
16.5281% expresados como quercetina, resultado significativo, comparndolo con el contenido de
flavonoides totales de la especie Dioscorea trfida (Ramos, 2010), reconocida por su contenido de
flavonoides.
Observando los resultados del anlisis cromatogrfico (cromatografa HPLC) del extracto
metanlico de Glycine max se identificaron las isoflavonas mayoritarias como es el caso de
daidzena y glicitena; de igual manera se encontraron genisteina, daidzina y genistina.
El efecto larvicida del extracto acuoso de Glycine max sobre larvas del IV estadio de Aedes aegypti
fue negativo, salvo la solucin madre (250000 ppm) donde la mortalidad fue 100% a 48 horas.

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5. BIBLIOGRAFIA
Camacho O, Melgarejo S. (2009); Actividad antioxidante del extracto etanlico e hidroalcohlico y
determinacin qumica de los componentes mayoritarios del fruto de Eugenia jambolana (Uva
venezolana). Tesis Pregrado Programa de Farmacia, Universidad del Atlntico, Atlntico-Colombia.
Caigueral Salvador, Dellacassa Eduardo, Bandoni Arnaldo L., (2003); Plantas Medicinales y
Fitoterapia: Indicadores de Dependencia o Factores de Desarrollo? Lat. Am. J. Pharm. 22 (3): 26578
Gutirrez Gaitn Yamilet Irene, Miranda Martnez Migdalia, Varona Torres Noel, Rodrguez Aida
Tania (2000); Validacin de 2 mtodos espectrofotomtricos para la cuantificacin detaninos y
flavonoides (quercetina) en Psidium guajaba L.; Revista Cubana de Farmacia; 34 (1): pp. 50-55.
Hernndez K, Barrios M. (2009); Evaluacin de la actividad larvicida de aceites esenciales extrados
de flores de Plumeria rubra L (Frangipani) y Plumeria pudica Jacq (Florn) sobre Aedes aegypti.
Tesis Pregrado Programa de Farmacia, Universidad del Atlntico, Atlntico-Colombia.
Kotkar Hemlata et al. (2002); Antimicrobial and pesticidal activity of partially purified flavonoids of
Annona squamosa; Pest Management Science; 58: pp. 33-37.