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Informe de Prctica de Laboratorio

BIOQUIMICA.

FACULTAD
DE
CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES

ANALIS, EXTRACCION Y EVALUACION DE LOS METABOLITOS SECUNDARIOS DE EL


FOLLAJE DE EUCALIPTO (EUCALIPTUS SSP)
Luisa Fernanda pineda
Sergio Andrs Ortiz
Daniel Andrs castro
Fecha de presentacin 18/05/2015
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Resumen
Ante la necesidad que presenta la sociedad de reemplazar los productos qumicos por productos orgnicos o
naturales en la agricultura, es de importancia el estudio de los diferentes extractos vegetales as como su
obtencin y produccin a gran escala. Es por eso que el presente estudio se llev a cabo un estudio fotoqumico
del eucaliptus ssp con el fin de identificar que tipos de metabolitos secundarios presenta y adems de su
actividad toxica aplicable a la agricultura.
Palabras Clave: marcha fotoqumica, metabolitos secundarios, bioensayos, eucalipto, espectrofotometra.
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INTRODUCCION

mejor dicho no se ha descubierto aun una funcin

Un gran porcentaje de los principios activos de la

metablica en la cual ellos intervienen; son

planta estn comprendidos dentro de los llamados

considerados artculos de lujo en la planta. Es por

productos naturales o metabolitos secundarios, que

esto que se ha hecho necesario el estudio ms a

son

estructura

fondo de los metabolitos secundarios y de su

relativamente compleja y de distribucin ms

extraccin con el fin de comprobar algunas de sus

restringida y ms caracterstica de fuentes botnicas

propiedades

especficas, que los llamados metabolitos primarios;

agronmicas.

estos estn universalmente distribuidos y participan

Para la utilizacin en diferentes industrias es muy

en la actividad celular de todo ser viviente. De los

importante tambin el aprovechamiento de los

primeros,

beneficios econmicos que el residuo de la tala

compuestos

productos

qumicos

naturales

de

metabolitos

secundarios, podemos decir que son indispensables

qumicas

como

mdicas

proporciona [Polis, 1986].

en las plantas que ocurren; no intervienen o quiz,


1

En esta ocasin trabajaremos con el eucalipto

Una vez recolectado el material se tomaron 64 g del

(Eucaliptus ssp) el eucalipto es natural de Australia

mismo se picaron lo ms finamente posible y se le

y de Tasmania donde se pueden encontrar ms de

agregaron 400ml de etanol en un frasco de vidrio

300 especies del genero eucaliptus.

previamente tapado, dejndolo por una semana para

Por la rapidez de su crecimiento, se pueden

que el material se fuera disolviendo.

encontrar cultivados en muchas regiones del mundo

Pruebas cualitativas.

para la produccin de madera, la fabricacin de

Para estas pruebas se utilizaron tres mtodos: los

pulpa de papel y la extraccin de aceites esenciales.

tubos de ensayo, la cromatografa de capa fina y

Ha sido utilizado para sanear zonas pantanosas al

espectrofotometra.

eliminar la humedad de las mismas.

Se tom parte del extracto crudo de etanol con las

Actualmente los eucaliptos son plantas de mucha

hojas de eucalipto y se llev a centrifugar a 4500

importancia industrial por ser fuente de pulpa y

revoluciones por minuto por 5 minutos una vez

papel; no obstante los productos qumicos asociados

centrifugado del sobrenadante se sacaron muestras

no han recibido el inters adecuado como fuente de

para 9 tubos de ensayo a los que se les agrego 1 ml

molculas activas. Se conoce por ejemplo que en

de la muestra y 2 gotas de los reactivos.

sus hojas y en el aceite se encuentran varias

Para la cromatografa de capa fina se realizaron dos

sustancias que exhiben diferentes actividades

cromatografas las cuales tuvieron como fase mvil:

biolgicas y entre estas un fuerte efecto aleloptico

una hexano-acetato 1:1 y la otra cloroformo-metano

(Behera et al., 2003; El-Darier, 2002; Saginga et al.,

1:1.

1992; Singh et al., 2003), convirtindose en una

La espectrofotometra se realiz en longitud de onda

alternativa en la bsqueda de molculas naturales

de 200 a 700 nanometros con intervalos de 20

con potencial accin herbicida.

nanometros.

Es por esto que este trabajo nos propusimos

Extraccin del metabolito.

estudiar a fondo los metabolitos secundarios en la

Una vez identificado el metabolito que se iba a

planta eucaliptus para realizar su extraccin y una

extraer y ya sabiendo que era un poli fenol se hizo

previa utilizacin en el sector agrcola.

de la siguiente manera:
Se tom la mitad de la muestra que haba en el

MATERIALES Y METODOLOGIA

frasco y se filtr con el fin de dejar solo el extracto,

La recoleccin del material se llev a cabo el 02 de

en un beaker se llev el filtrado a bao mara hasta

marzo del 2015 en la ciudad de Manizales caldas en

que el etanol se evaporo y quedo una goma a la

el sector de la escuela de carabineros se

cual se le adiciono 30ml se agito y se devolvi a

recolectaron hojas de eucalipto de rboles que

bao mara hasta que nuevamente quedo una goma.

estuvieran ms salvajes es decir sin la mano del


hombre.
2

Una

vez

estuvo

seca

totalmente

la

goma

espectrofotometria del EC

nuevamente se le agrego 5ml de metanol con el fin


3

de sacar dos muestras:


1 cromatografa utilizando como fase mvil metanol
la cual posteriormente se revelo con lmpara de luz
ultravioleta.
2 para espectrofotometra de 200 a 700 nanmetros

2
1
0
200
-1

250

300

350

400 450

500 550

600

-2

con intervalos de 20 nanmetros.


Bioensayo.
Para el bioensayo se utiliz artemia salina, se
tomaron los huevos de la artemia y se llevaron a
incubacin en un litro de agua con 25g de sal

puntos de
recorrido
1
2
3
4

marina una vez eclosionadas las artemias lo que se


hizo fue traspasar de a 10 organismos a tubos de
ensayo previamente preparados a concentraciones
de 250 500 y 1000 mg/l de a 3 tubos por
concentracin y un patrn una vez que los 10 tubos

Extraccin

CCF 1

CCF2

3.2cm
3.4cm
3.7cm
3.9cm

2.8cm
3.0cm
3.4cm
3.7cm

del

metabolito

tuvieran en promedio 10 organismos se hizo


monitoreo constantes a las 4-6-8-12-24 horas con el
fin de evaluar la toxicidad del metabolito.

espectrofotometria del metabolito

RESULTADOS Y DISCUSION

Pruebas cualitativas

2.5

Tabla 1
reactivo
Mayer
Baljet
Wagner
dragendof
Kedde
liberman
FeCl3 10%
shinodo

color
+
+
+
+
+

Precipitado
+
+
+
-

1.5
1
0.5
0
100
-0.5

200

300

400

500

600

700

800

Bioensayo.
Tabla 3

TIEMPO/DILU
CION
4
6

250
0

EC
PROMEDIO
500
0,333333
333

1000

0,33333
333

CL50
0,666666
(ppm) 0,333333
667
333
TIEMPO/EXTR
EC
12
0
1,666666
ACTO
667
4
0
24
2,666666
7
6
0
667
8
47
12
9.958
24
1617,20
5787,78
TRA
Promedio
CL50
BIOACTIVIDAD
35
8

TAM (g/m
MUY
IEN
L)
ACTIVO
TO
( 100
g/mL)

ACT
IVO
(100
-500
g/
mL)

0
1
5

MUERTOS

TIEMPO/DILUCION

NO
ACT
POTENCIA
IVO
LMENTE
(
NO ACTIVO
100
(501 - 999
0
g/mL)
g/
mL)

12

5787,

E.C. 7835

BLANC
O

EC

24

25
0
0
0
0
0
0
0
1
1
0
0
0
0
1
4
3

50
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
2
1
2
1
3
3

100
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
1
0
2
4
8
3

Cuando se empez a trabajar con los extractos se


hizo necesario identificar qu tipo de metabolito
secundario presentaba para esto se utilizaron la
pruebas de los tubos de ensayo las cuales identifican
los metabolitos de la siguiente manera. Mayer,
Wagner, dragendoff revelaron la presencia de
alcaloides. Baljet prueba de coumarinas, liberman
Permite reconocer en un extracto la presencia de
4

triterpenos y/o esteroides, kedee Permite reconocer

decir que el eucaliptus ssp presenta un grado de

en

toxicidad no activo 1000 g/mL.

un

extracto

la

presencia

de

glicsidos

cardiotnicos, FeCl3 10% expresa presencia de


taninos y el de shinodo revela la presencia de
flavonoides.

CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos en este estudio, los

De todo lo anterior podemos deducir que por este

informados sobre actividad toxica de extractos

mtodo es posible detectar una serie de metabolitos

naturales y los encontrados en la literatura cientfica

secundarios en el extracto alcohlico de Eucaliptus

consultada, sobre eucalipto, confirman la hiptesis

ssp., ya que los ensayos indican la presencia de

de que son varios los metabolitos secundarios

saponinas,

involucrados en la actividad toxica

aminocidos

libres,

quinonas.

demostrada

Triterpenos y/o esteroides, alcaloides y flavonoides.

frente a algunos microorganismos.(Barreto et

Especficamente este extracto contiene un alto

al.2007).

contenido de saponinas. De igual forma, el anlisis

La gama de metabolitos secundarios presentes en el

efectuado para determinar flavonoides es positivo,

follaje de eucaliptus ssp. Es amplia, e incluye

lo cual se relaciona con lo propuesto por (Garca,

saponinas, aminocidos libres, quinonas, alcaloides,

Quert & Bcquer et al. 2004).

triterpenos y/o esteroides, flavonoides, taninos,

En el momento de la extraccin del metabolito se

grasas y azcares reductores.

present una contaminacin con alcaloides por lo

La planta de eucalipto pareci no ser toxica aunque

que los resultados de la espectrofotometra del

todo

metabolito no arrojo los resultados esperados.

concentraciones utilizadas.

puede

deberse

las

cantidades

Una vez se tuvo el metabolito aislado se continuo a


probar el bioensayo el cual se hizo con artemia
salina.

REFERNCIAS

Artemia posee varias caractersticas que han


facilitado su uso en estudios de toxicologa, como

Barreto G, Campal A, abreu O. 2006. Eucaliptus

son un corto periodo de generacin, son facilidad de

saligna y Eucalyptus citriodora. Evaluacin de

manejo,

extractos diversos de ambos en la viabiliadad y

almacenamiento,

cultivo

su

disponibilidad. Estas caractersticas coinciden con

expresin

algunas de las recomendaciones hechas en la

enterotoxignica

seleccin de organismos para test de toxicidad.

http://www.monografias.com/trabajos39/eucalyptus

Todas estas razones han propiciado el uso de

extractos/eucalyptus-extractos.shtml [Consultada el

artemia salina en bioensayos.

20 de enero de 2009].

Dichos

bioensayos

arrojaron

los

fimbrial

de

Escherichia

coli

resultados

propuestos en la tabla 3 y siguientes llegando a si a


5

http://www.actaf.co.cu/revistas/rev_forestal/Baracoa2004-1/FAO1%202004/FITOQUIMICA%20DEL

GARCA,

%20EUCALYPTUS%20SSP.pdf

fitoqumico de especies forestales, Documento

H.:

Metodologa

para

anlisis

interno, Instituto de Investigaciones Forestales, La


http://www.botanical-

Habana. 1994.

online.com/eucalipto_toxicidad.htm