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Equipo de Electrospinning
2012
Equipo de Electrospinning
Agradecimientos
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INDICE
Agradecimientos....1
ndice.....3
Resumen..5
Introduccin 1....6
Electrospinning 1.1..6
Ingeniera de Tejido 1.2..8
Tecnologia para fabricacin de scaffolds 1.3....11
Descripcin de la tcnica de electrospinning 2.....18
Modelizacin del proceso de electrospinning 2.1.22
Aplicaciones biomedicas del electrospinning 3....24
Diseo y fabricacin de la maquina de electrospinning 4...27
Diseo del sistema en AUTOCAD 3D 4.1..28
Fabricacin y/o Descripcin de los diferentes Mdulos 4.2....30
Colector rotativo 4.2.1...30
Aguja, tubo de conexin y jeringa 4.2.2.46
Generador de alta tension 4.2.3..47
Bomba de infusin 4.2.4...49
Caja protectora 4.2.5.50
Materiales fungibles 4.2.6.50
Mtodo de produccin de scaffold 5....52
Sustancias aptas para trabajar con electrospinning 5.1..52
Parmetros del proceso de electrospinning 5.2....57
Anlisis de seguridad elctrica 6...60
Prueba de rigidez dielctrica del aire en continua 6.1.60
Anlisis de proteccin contra los riesgos de choque elctrico 6.263
Pruebas realizadas 6.2.1..64
Resultados obtenidos 6.2.2..66
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RESUMEN
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CAPTULO 1:
INTRODUCCIN
En este captulo se realizara una breve descripcin del proceso de electrospinning, una
introduccin a la ingeniera en tejido y se explicaran brevemente algunas tcnicas para la
fabricacin de scaffolds
1.1
Electrospinning
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En electrospinning solo se utilizan polmeros porque estos son los nicos que tienen las
propiedades fsicas y qumicas requeridas para formar fibras que sean resistentes, elsticas y
duraderas.
Los polmeros son dielctricos, que en presencia de un campo elctrico puede considerarse
como un arreglo de dipolos elctricos microscpicos compuestos por cargas positivas y
negativas cuyos centros no coinciden perfectamente, y que tampoco se trata de cargas libres,
las cuales no contribuyen al proceso de conduccin. Ms an, se mantienen en su lugar por
accin de las fuerzas atmicas y moleculares, y solo pueden cambiar su posicin ligeramente
en respuesta a fuertes campos elctricos externos. Son llamadas cargas ligadas, en
contraposicin a cargas libres que determinan la conductividad en otro material conductor.
Las cargas ligadas pueden ser tratadas como cualquier otra fuente de campo electroesttico.
Muchos tipos de polmeros, naturales y sintticos, se utilizan en aplicaciones en el campo
biomdico pero la mayora son producidos industrialmente a gran escala. Entre el poli (cloruro
de vinilo) (PVC), el poliestireno (PS), el PE y el polipropileno (PP) ya suman ms del 85% del
mercado de los polmeros en el campo de los biomateriales. Los polmeros especiales suponen
un 2%, de los cuales la mayora son biodegradables (ejemplo: poli (cido gliclico), poli (cido
lctico), PCL y PEO). Todos ellos se emplean a menudo en la ingeniera de tejido debido a la
aprobacin de biocompatibilidad de la Food and Drug Administration (FDA) y su capacidad para
ser metabolizados en agua y dixido de carbono.
En este trabajo se utilizo para corroborar el buen funcionamiento del sistema diseado el
polmero alcohol polivinilico (PVA), el cual es una resina sinttica representada por la frmula
(CH2-CHOH)n, el peso molecular medio oscila entre 500 y 5000. Se prepara a partir de la
hidrlisis de un 85 a un 89 % de Polivinil Acetato, y es fcilmente soluble en agua tibia.
Anton Formhals , Artificiald Thread and Method of Producing Same , U.S. Patent 2187306, July 28, 1937.
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Hacia el final del siglo XX ha surgido una nueva disciplina, la Ingeniera de Tejidos, cuya
definicin ms aceptada es la de Langer y Vacanti, dos investigadores pioneros en este campo,
que la definieron como la aplicacin de principios y mtodos de la ingeniera y las ciencias
biolgicas para el entendimiento de las complejas relaciones entre la estructura y la funcin de
los tejidos, que permitan el desarrollo de sustitutos para restaurar, mejorar o mantener la
funcin de dichos tejidos.
La Ingeniera de Tejidos se nutre con los conocimientos de otras disciplinas como la medicina,
la biologa, la qumica, la ingeniera, la fsica, la ciencia de los materiales. As, mediante los
fundamentales aportes del trabajo interdisciplinario, est ofreciendo novedosas estrategias de
implementacin de sustitutos biolgicos en distintas especialidades de la medicina. Los
importantes avances cientficos en el campo de los biomateriales, las clulas stem, los factores
de crecimiento y diferenciacin, y el conocimiento del microambiente tisular, han generado la
posibilidad de fabricar tejidos en el laboratorio mediante la combinacin de matrices
extracelulares "scaffolds", clulas, y molculas biolgicamente activas.
El desarrollo de sustitutos titulares necesita dos ingredientes fundamentales: las clulas y los
biomateriales, entendiendo adems que estos pilares estn ntimamente interrelacionados a
travs de complejas interacciones clula-clula, clula-scaffolds, a lo cual se agrega la accin
de factores solubles, tanto de origen local como sistmico, que tambin participan en estas
interacciones. Uno de los grandes desafos que enfrenta la Ingeniera de Tejidos es la
necesidad de lograr que los sustitutos tengan la funcionalidad suficiente como para que sean
capaces de cumplir su funcin, as como la estabilidad biomecnica como para que puedan
insertarse en el medio ambiente donde sern trasplantados.
El origen de las clulas, su aislamiento, la posibilidad de cultivarlas y su trasplante abren un
abanico de variadas opciones. Podran plantearse varias posibilidades: las clulas implantadas
reparan el dao por s mismas; las clulas implantadas inducen a las clulas sanas residentes
a reparar el dao; o bien las clulas implantadas secretan o estimulan la secrecin de factores
de crecimiento que son los responsables de producir la reparacin.
Las clulas a usar pueden provenir de distintas fuentes: lneas celulares establecidas (clulas
genticamente transformadas), clulas stem (clulas indiferenciadas con gran capacidad de
divisin en cultivo y que pueden dar origen a distintos tipos de clulas especializadas), o
clulas primarias, (las obtenidas a partir de la disgregacin enzimtica o mecnica de rganos
o tejidos). Tambin pueden clasificarse segn el individuo que les da origen, como clulas
autlogas (las clulas a usar se extraen del mismo paciente en el que se implantarn), clulas
homlogas o alogeneicas (clulas de otro individuo de la misma especie), o clulas heterlogas
o xenogeneicas (clulas de un individuo de otra especie). Indudablemente las propiedades
inmunognicas de las clulas son un punto crtico relacionado a la posibilidad de rechazo de
las clulas implantadas. La eleccin del tipo de clula a usar en cualquier desarrollo de
Ingeniera de Tejidos depende del objetivo que se persiga.
Por otro lado, no es de menor importancia la eleccin de los biomateriales, las clulas son
frecuentemente implantadas o sembradas en una estructura artificial capaz de soportar la
formacin de un tejido tridimensional. Estas estructuras, llamadas andamios (scaffolds en
ingls), son crticas, tanto en su comportamiento in vitro como in vivo, dado que deben ser
capaces de recapitular el medio ambiente existente in vivo y permitir a las clulas ejercer su
influencia sobre dicho microambiente.
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En teora, los materiales a usar deben permitir una o ms de las siguientes funciones:
Durante los aos 60 y 70, tuvo lugar la primera generacin de biomateriales. En este perodo
de tiempo, la meta era obtener materiales cuyas propiedades fsicas se adaptaran lo mejor
posible a las del tejido a reemplazar, y que reaccionaran mnimamente con el tejido
circundante, es decir, materiales inertes. A partir de los aos 80, surge una segunda
generacin de biomateriales. Esta vez, el objetivo era crear materiales que indujeran una
reaccin controlada por parte del tejido vivo, es decir, materiales bioactivos como los vidrios
bioactivos de silicio y la hidroxiapatita. Durante esta segunda generacin, tambin tienen lugar
los materiales bioabsorbibles, como los polmeros biodegradables principalmente.
Actualmente nos encontramos en la tercera generacin de biomateriales. Los materiales
diseados en esta generacin, buscan interactuar con el tejido de forma especfica, mediante
estmulos a nivel celular y molecular, y combinan las propiedades de bioabsorbabilidad y
bioactividad dentro del mismo material. Por lo que cada vez, los criterios se van acercando ms
a lo que sera el biomaterial ideal. La ingeniera de tejidos es una de la reas con ms potencial
dentro de la medicina regenerativa.
La gran mayora de los andamios desarrollados para aplicaciones en el campo de la Ingeniera
de Tejidos est constituida por estructuras elaboradas a partir de materiales polimricos.
Los polmeros sintticos bioabsorbibles con capacidad de degradarse gracias a reacciones de
hidrlisis en condiciones fisiolgicas dentro del cuerpo, y eliminarse completamente por vas
metablicas son los materiales ms atractivos para la elaboracin de andamios en Ingeniera
de Tejidos. Los andamios elaborados a partir de este tipo de polmeros ofrecen la posibilidad
de crear tejidos completamente naturales dejando de lado los problemas de infeccin y
formacin de tejido fibroso, asociados a los implantes permanentes.
Los soportes constituidos por nanofibras pueden fabricarse con geometras que permitan
rellenar defectos anatmicos y su arquitectura puede disearse para obtener las propiedades
mecnicas necesarias para soportar el crecimiento, proliferacin, diferenciacin y movilidad
celular. Una propiedad inherente de las nanofibras es su alta capacidad de imitar la matriz
extracelular de los tejidos y rganos; un complejo compuesto formado por protenas fibrosas,
protenas solubles y otras molculas bioactivas que permiten la adhesin y el crecimiento
celular. Sin embargo, los estudios de las interacciones clula-nanofibra, la elucidacin y el
entendimiento completo de la influencia de las nanofibras en las rutas bioqumicas y los
mecanismos de las seales que regulan el comportamiento celular requieren de mayor
investigacin.
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Gel Casting
Stereolitografa
Solid Ground Curing
Sintetizado laser Selectivo
Escritura Directa
Solid Freeform fabrication
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(Figura 3) Fabricacin de estructuras porosas por espuma con gas / lixiviacin de partculas:
partculas de sal efervescente se dispersan en el polmero gel , fundido en un molde de tefln para la
evaporacin del disolvente, se sumerge en agua para espuma con gas / lixiviacin de sal, y se liofiliz
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Pasos de la produccin
1- Creacin de cada capa, la superficie de trabajo es rociada con una
resina fotosensible.
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4- Luego de que la capa est seca, una aspiradora recoge toda la resina
que no se endureci para reciclarla, dejando las partes endurecidas
intactas. Esta capa se pasa debajo de la lmpara de rayos UV para
endurecerla por completo y solidificar las partculas.
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5-
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(Figura 11) Equipo comercial para la fabricacin de scaffolds 3D y ejemplo de escaffolds obtenidos con dicha
tecnologa.
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CAPTULO 2:
DESCRIPCION DE LA TECNICA DE
ELECTROSPININNG
En este captulo se realizara una descripcin profunda de la tcnica de electrospinning.
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La disolucin del polmero previamente preparada, se carga en una jeringa de inyecciones que,
mediante un tubo de plstico inerte, se conecta a una aguja. Una bomba de infusin o
perfusin unida al mbolo de la jeringuilla genera una presin y un flujo constante que a travs
del tubo se trasmite a la disolucin del polmero en la aguja. Por el efecto de la polarizacin y la
carga originadas por el campo elctrico, la solucin es arrojada en forma de jet hacia una
superficie conductora conectado con tierra (por lo general una pantalla metlica) a una
distancia entre los 5 y 30cm del cono o aguja. Durante la creacin del jet, el solvente
gradualmente se evapora, y el producto obtenido se deposita en forma de manta de fibra notejida compuesta de nano fibras con dimetros entre 50 nm y 10 m.
En el flujo electro-hidrodinmico del jet, las cargas son inducidas en el fluido a travs de la
distancia de separacin de los electrodos (punta de aguja y colector metlico), rompindose la
tensin superficial a travs del campo elctrico y descomponindose en dos fuerzas
electrostticas una tangencial (t) y otra normal (n), formando el cono de Taylor. La figura 14
muestra la distribucin de las cargas a travs del jet.
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A medida que el jet adquiere una aceleracin significativa, su dimetro disminuye en magnitud;
finalmente el jet se solidifica convirtindose en una fibra de medidas nanomtricas y
presentndose una corriente del orden de micro Amperios sobre el jet.
La corriente que circula por el haz de polmeros (jet), proporciona informacin sobre la
densidad superficial de carga. Esta densidad es un parmetro importante para determinar la
estabilidad del jet.
La gota lquida est sujeta el extremo de la aguja por su tensin superficial, hasta que la
repulsin mutua de las cargas en la superficie de la misma es ms fuerte, lo que provoca una
fuerza en sentido contrario a la contraccin de la gota. La superficie de la gota sufre
progresivamente el efecto de esta fuerza hasta que comienza a alargarse y a formar un cono
inverso, llamado cono de Taylor. El proceso de elongacin llega a un lmite en el que la
concentracin de la carga es tan elevada que sobrepasa a la tensin superficial y da lugar a un
haz en la punta del cono. El haz recorre varias trayectorias inestables durante las cuales se
alarga, reduce su dimetro y pierde todo el disolvente (o se solidifica).
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Aumento de las oscilaciones y elongacin del haz (puede ser simultneo a la divisin y /
o ramificacin).
Vc en kV, H es la distancia entre los electrodos, L es la longitud del tubo capilar, R es el radio
del tubo y es la tensin superficial del fluido (unidades: H, L y R en cm; en DyN / cm).
El potencial mnimo para el electrospraying de una gota hemisfrica conductora colgando en el
aire (ec. 2) fue calculado por Hendricks como:
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Sin embargo, recientemente se ha demostrado que la reduccin del dimetro del haz es debida
a una oscilacin o inestabilidad asimtrica que causa curvaturas y estiramientos del haz a altas
frecuencias.
Adicionalmente, mientras el haz hace su recorrido hasta el colector puede ser que se divida o
se ramifican.
Baumgarten se fij en que en viscosidades ms elevadas la gota cambiaba de forma
hemisfrica a cnica.
Realizo los clculos haciendo una aproximacin por lneas equipotenciales y dio la frmula (ec.
3) para calcular el radio de la gota esfrica (haz) como
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CAPTULO 3:
APLICACINES BIOMEDICAS DEL
ELECTROSPININNG
Existen mltiples y recientes aplicaciones de las fibras de electrospinning en
diversos campos cientficos. En los ltimos aos se han realizado numerosas
patentes, la mayora estadounidenses, que demuestran su utilidad.
El campo de la medicina es en el que ms se extiende la aplicacin de las fibras de
electrospinning. El motivo es que la mayora de los tejidos y rganos humanos como los
huesos, el colgeno, el cartlago o la piel estn estructurados jerrquicamente en redes
nanofibrosas.
Esta rea de aplicaciones de las fibras para electrospinning tiene un gran potencial y es la que
est actualmente ms fomentada y extendida. A continuacin se muestran diferentes tipos.
Prtesis mdicas:
Otro campo que destaca es el de los biomateriales, es el diseo de refuerzos ptimos que sean
capaces de imitar las estructuras y funciones biolgicas de la matriz extra-celular.
Generalmente las fibras de dimetros menores que el tamao de las clulas humanas han sido
mejores para la adhesin de las clulas. Por tanto, es necesario desarrollar estructuras fibrosas
para la adhesin y la proliferacin de las clulas. A lo largo de los ltimos aos se ha dedicado
una mayor investigacin para generar refuerzos a partir de polmeros sintticos biocompatibles
y/o biodegradables. [4]
Proteccin de heridas:
Las heridas o quemaduras en la piel se pueden tratar con capas polimricas de nanofibras.
Tambin se han diseado dispositivos hemostticos con caractersticas particulares. El
recubrimiento de las heridas con capas se podra aplicar directamente creando un campo
elctrico local. De esta manera se impulsa el crecimiento de la piel y se evita la formacin de
cicatrices. Una de las limitaciones de este mtodo recae en que, como es lgico, el hueso y la
piel no pueden ser tratados con el mismo tipo de fibra, ya que segn su procedencia polimrica,
en unos casos ser efectiva y en otros no. La investigacin en este campo evoluciona con
rapidez y se espera que pronto forme parte de una nueva tcnica mdica consolidada. [5]
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Administracin de medicamentos:
Cuando se suministran frmacos a los seres vivos, stos se distribuyen en el organismo segn
sus propiedades fsicas, tales como la solubilidad, coeficiente de particin y carga. En
consecuencia, los frmacos pueden alcanzar gran variedad de tejidos y rganos, tanto los que
necesitan el frmaco como otros que no lo necesitan.
Adems, en muchos de ellos, puede que se encuentren fuera de su intervalo teraputico, que
sean inactivos, o que su accin sea indeseada o nociva, y por tanto, con efectos secundarios
negativos.
Actualmente, la administracin de frmacos se realiza asocindolos a otras sustancias que
mejoran su funcionamiento. En la mayora de las modernas formulaciones de frmacos, se
incluyen sustancias de naturaleza polimrica. Existen dos mtodos generales para optimizar la
accin de los frmacos:
Es importante destacar que estamos ante una investigacin que an se halla en su primera
etapa, es poco el conocimiento de este tipo de mtodos y si finalmente da buen resultado, no
ser hasta dentro de algunos aos su aplicacin en pacientes. [6]
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Referencias:
[1] Angelo G. Scopelianos, Piezoelectric biomedical device, U.S. Patent 5522876, July 4, 1996.
[2] The University Of Akron, Nanofiber structures for supporting biological materials, U.S. Patent
EP1888331A4, July 8, 2009.
[3] M. Stenoien, W. Drasler, R. Scott, M. Jenson, Silicone composite vascular graft, U.S. Patent
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CAPTULO 4:
DISEO Y FABRICACION
DE LA MAQUINA DE
ELECTROSPINNING
En este captulo se detallan los aspectos constructivos del sistema de electrospinning. Se
incluyen los mtodos de fabricacin de las piezas mecnicas, circuitos electrnicos usados y
eleccin de los componentes que componen el sistema que utiliza para realizar electrospinning.
Colector de fibras
Aguja, tubo de conexin y jeringa
Generador de alta tensin
Bomba de infusin
Caja protectora
Materiales fungibles
Tambin debe tenerse en cuenta que se precisa de un sistema ptico, un microscopio, que nos
permita visualizar y medir las fibras obtenidas.
Existe un sistema de electrospinning en Instituto de Investigaciones en Ciencia y Tecnologa de
Materiales, INTEMA, Mar del Plata, Argentina. Realice una visita a dicho lugar con el fin tener
una reunin con el Dr. Gustavo Abraham responsable del Laboratorio de Polmeros
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4.2
Cilindro
Tapas del cilindro
Soportes
Eje
Poleas
Rulemanes
Motor
Control de velocidad
Tacometro
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Cilindro
Para el cilindro se utilizo un cao de acero inoxidable de instalaciones sanitarias sin costuras el
cual tuvo que ser cortado y torneado en las dimensiones 20cm de largo y 10cm de dimetro
Preparacin de moldes
Fundicin del aluminio
Torneado de la piezas
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Una vez realizada la fundicin del materia (figura 26) se coloca en los moldes y se realiza el
enfriamiento (Figura 27) para obtener las piezas en un estado bruto.
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Etapa de torneado
1. Tapas del cilindro
Tapa de cilindro
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2. Soporte
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Soporte
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3. Eje
Eje
Eje
Una vez terminado el proceso de fabricacin de las piezas se puede ensamblar el colector
rotativo completo. (Figura 36)
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Motor
El colector tiene que moverse de manera rotativa, para esto necesitamos un motor y un control
de velocidad.
El motor usado es un C2162-60006 hp, el cual fue obtenido de una impresora en desuso.
Caractersticas:
Tensin de alimentacin: 12 V
Corriente : 2,5 Amp
Torque: 18,4 N/cm
Velocidad sin carga :1950 Rpm
Potencia max : 34,2 W
Para realizar el proceso de electrospinning el colector debe poder variar su velocidad desde
unos 300-1000 Rpm, eligiendo una velocidad dentro de este rango es muy probable que el
proceso tenga resultados satisfactorios, siempre teniendo en cuanta que el xito del proceso no
solo depende de la velocidad del colector ms adelante se vern detallamente cada variable a
tener en cuenta para obtener buenos resultados.
Como podemos observar la mxima velocidad del motor es 1950 Rpm, por lo que se necesita
hacer una reduccin de velocidad, esto se logro mediante el clculo de las poleas, para esto
usamos la relacin entre poleas y velocidades.
V1*D1=V2*D2= i (relacin de velocidad) Donde :
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Entonces teniendo que V1= 1950 Rpm , V2=1000 Rpm y adoptando D2= 500 mm, obtengo
que la polea conductora tiene que tener un dimetro de 256 mm
Control de velocidad
Para controlar la velocidad del cilindro y obtener el rango necesario, requerido por el proceso,
se utiliza un control de velocidad por modulacin de ancho de pulso (PWM, siglas en ingls de
pulse-width modulation ).
La modulacin por ancho de pulsos de una seal o fuente de energa es una tcnica en la que
se modifica el ciclo de trabajo de una seal peridica, ya sea para transmitir informacin a
travs de un canal de comunicaciones o para controlar la cantidad de energa que se enva a
una carga.
El ciclo de trabajo de una seal peridica es el ancho relativo de su parte positiva en relacin
con el perodo. Expresado matemticamente:
D es el ciclo de trabajo
es el tiempo en que la funcin es positiva (ancho del pulso)
T es el perodo de la funcin
Esta es una tcnica utilizada para regular la velocidad de giro de los motores elctricos de
induccin o asncronos. Mantiene el par motor constante y no supone un desaprovechamiento
de la energa elctrica. Se utiliza tanto en corriente continua como en alterna, como su nombre
lo indica, al controlar: un momento alto (encendido o alimentado) y un momento bajo (apagado
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El circuito (Figura 39) se basa en un integrado NE555 el cual genera el tren de impulsos
necesario para controlar el transistor, el cual acciona por pulsos el motor de continua. El diodo
en paralelo con el motor impide que, cuando se quita la corriente, el transistor se queme. Los
componentes entre los terminales 2, 6 y 7 del integrado regulan la frecuencia de oscilacin del
circuito y, por ende, la velocidad del motor. El transistor, con un buen disipador de calor, puede
manejar hasta 75W de potencia.
B B
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Tacmetro
Para poder determinar la cantidad de revoluciones que gira el cilindro, se utiliza un
microcontrolador PIC 16F84A.
El sistema para poder obtener las revoluciones del cilindro est compuesto por:
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Disco dentado
Optoacoplador
Como podemos observar de la figura 42, cuando incide la luz a la base del fototransistor, este
se encuentra en saturacin y aparece un voltaje de 0 VCC en la terminal RA4 TOCK/IN del PIC
16F84A. Cuando la luz es interrumpida el transistor se halla en corte y se aplica un voltaje de 5
VCC en la terminal TOCK/IN del PIC. De tal forma que cuando el disco dentado (Figura 43)
colocado en el eje de giro del cilindro se interrumpen o permite el paso de la luz, se generan los
cambios de voltaje de 0 a 5 VCC. Estos son los pulsos que cuanta el microcontrolador, y de
esta forma de termina la velocidad de giro del cilindro.
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El Display muestra al operario la velocidad del cilindro en revoluciones por segundo, como se
observa en la siguiente figura.
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(1) www.sigmaaldrich.com
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La fuente seleccionada debe trabajar entre 10kV y 30kV, con una corriente de 166uA. Estos
son valores suficientes para ensayos de electrospining segn la bibliografa. [5]
El modelo elegido para formar parte del sistema de fabricacin de scaffolds es ES30P-5W/DAM
cuyas caractersticas son:
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Realizar trabajos con una fuente de alta tensin implica tener ciertos cuidados, estos nos
permita trabajar de manera ms segura y minimizar los riesgos de recibir una descargas
elctrica, que puede poner en riesgo la vida del operador.
Pasamos a citar algunas concejos bsicos de seguridad a tener en cuenta [13], [14]
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Usar correctamente los equipos de proteccin personal que requiera el trabajo, (gafas,
guantes, etc.).
Nombre: Aitecs
Modelo: sp-125
Velocidad de infusin: 0.1 ml/h 99.9 ml/h, con pasos de 0.1 ml/h
Jeringas: 5ml, 10ml, 20ml, 60ml y 100ml
Batera recargable duracin 3hs
Conexin a lnea de 220 v , 50 Hz
Fcil manejo
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Todas estas caractersticas son favorables ya que se podr trabajar y a la vez controlar
visualmente el experimento, aunque a veces a simple vista cueste de ver como se producen las
nanofibras, ya que su tamao es muy pequeo.
El peso es muy importante, nos conviene una mquina ligera por si hay que desplazarla a otro
lugar.
Se le dot de una puerta frontal para poder cerrar el aparato cuando hay tensin elctrica y,
una vez desconectado el suministro elctrico, acceder al interior y recoger las fibras obtenidas
en el ensayo.
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CAPTULO 5:
METODO DE PRODUCCION DE
SCAFFOLDS
En este captulo se citaran las sustancias aptas para trabajar con electrospinning, a
continuacin se describir el polmero utilizado para realizar las pruebas y por ltimo se
explicaran los parmetros involucrados en la proceso de produccin de scaffolds.
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Para realizar la prueba del sistema utilizamos Alcohol Polinilico (PVA). El cual se encuentra en
la lista anterior marcado con un recuadro de color.
ALCOHOL POLIVINILICO :
El alcohol polivinlico es una resina sinttica representada por la frmula (CH2-CHOH)n, donde
el peso molecular medio oscila entre 500 y 5000. Se prepara a partir de la
hidrlisis de un 85 a un 89 % de Polivinil Acetato.
Presenta diversos grados de polimerizacin: alta viscosidad (peso molecular medio,
200.000), viscosidad media (PM, 130.000), baja viscosidad (PM, 30.000)
Es una sustancia que sufre degradacin lenta a 100C y rpida a 200C (se
descompone en cidos fuertes). Incompatible con la mayora de las sales inorgnicas,
especialmente con sulfatos y fosfatos.
A diferencia de muchos polmeros vinlicos, el PVA no es preparado por la polimerizacin del
correspondiente monmero. Dado que el alcohol vinlico es inestable con respecto a la
isomerizacin a acetaldehdo su polmero debe prepararse por mtodos indirectos. El
monmero, alcohol vinlico, existe casi exclusivamente en la forma tautomricas, el
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acetaldehdo. El PVA se prepara por alcohlisis (se emplean tambin los trminos menos
exactos hidrlisis y saponificacin) parcial o total de acetato de polivinilo para eliminar los
grupos acetato.
Caractersticas Fisico-Quimicas
Aspecto: Sustancia granulosa o purulenta de color blanca o blanca- cremosa e
inodora.
Olor: Suave
Solubilidad: Fcilmente soluble en agua. Se solubiliza muy rpidamente en agua
caliente.
PH ( 4% en H2O ) 5,0 - 8,0
Caractersticas de seguridad
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Una vez funciona el proceso electrospinning con una disolucin o polmero disuelto, hay tres
principales puntos de inters en las fibras producidas:
La literatura publicada sobre las investigaciones hechas hasta la actualidad muestra que estos
requerimientos no son realistas y que no se han obtenido fibras que los cumplan los tres.
Una de las principales variables cuantificables del proceso electrospinning es el dimetro de las
fibras. Esta variable depende en su mayor parte del tamao del haz y de la concentracin de
polmero que ste contenga. Segn los fundamentos fsicos publicados sobre el
electrospinning, no hay un consenso total del proceso que el haz sufre en el recorrido entre la
punta y el colector. Puede ser o no, que el haz se divida en ms haces y que estos resulten en
diferentes dimetros de fibras. En el caso de que no haya esta particin, la viscosidad se
convierte en una de las variables ms determinantes para el dimetro de las fibras.
Cuando los polmeros se disuelven, la viscosidad de la disolucin es proporcional a la
concentracin de polmero. Por tanto, cuanto ms alta sea la concentracin, mayor ser el
dimetro de las fibras resultantes. El voltaje tambin es un parmetro respecto al cual el
dimetro de las fibras es directamente proporcional, debido a que generalmente hay ms
disolucin en el haz.
Las fibras producidas por electrospinning, a menudo, presentan defectos como son los poros y
las aglomeraciones (ver figuras siguientes). La literatura indica que la concentracin de
polmero afecta la formacin de aglomeraciones de tal manera que cuanto ms concentrada en
polmero sea la disolucin para electrospinning, menos aglomeraciones presentarn las fibras.
Algunas investigaciones han desarrollado ideas de los parmetros de los cuales depende la
formacin de aglomeraciones.
Algunos investigadores atribuyen el hecho de que no se formen aglomeraciones a la baja
tensin superficial. Otros relacionan la baja concentracin superficial en la concentracin de
polmero. Cabe destacar que la tensin superficial vara en funcin del disolvente y por este
motivo el electrospinning no siempre es ptimo a tensiones superficiales bajas.
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Equipo de Electrospinning
El control sobre estas variables determina la estabilidad del sistema y la calidad del material
fabricado. Una descripcin de las variables se menciona a continuacin:
Velocidad de recoleccin de las fibras: El colector de fibras, puede ser fijo o puede
tener movilidad dependiendo del grosor requerido de las fibras. Si es mvil, la velocidad
de recoleccin de fibras debe ser cuidadosamente seleccionada para no romper las
fibras y para evitar la acumulacin de grumos.
Variacin del potencial elctrico: Para esta aplicacin, se requiere de una fuente que
proporcione una variacin de voltaje entre los 0 y +/- 50kV.
El voltaje que se aplica va ligado a la distancia entre la punta de la aguja y la
superficie del colector o de la placa metlica.
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Equipo de Electrospinning
Variables mecnicas del sistema: Las variables mecnicas de las fibras como son la
resistencia, elasticidad y grosor, dependen fuertemente de las condiciones iniciales del
sistema, es decir, la clase de polmero, las caractersticas del solvente, los clculos de
energa potencial y el voltaje aplicado.
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Equipo de Electrospinning
CAPTULO 6:
ANALISIS DE SEGURIDAD
ELECTRICA
En este captulo, se realizo el estudio de la seguridad elctrica del equipo, realizando dos
pruebas, de rigidez dielctrica del aire y riesgo de choque elctrico.
Para poder estudiar la rigidez elctrica del aire que asla la diferencia de potencial entre la
aguja-colector de la caja de proteccin y chasis del equipo, se realizo un ensayo en el
Laboratorio de Alta Tensin de la Facultad de Ciencias Exactas y Tecnologa de Tucumn a
cargo del Dr. Daz.
El ensayo fue realizado con una fuente de alta tensin que alcanza un valor mximo de 40 kv.
En el ensayo se genero una diferencia de potencial de 0-40 kv, en pasos de 10kv (un 10% ms
de lo que el equipo trabaja) entre la aguja y el colector (que estaba unido al chasis del equipo
para generar que el chasis tambin este a esa diferencia de potencial) la distancia entre la
aguja y el colector fue de 10 cm, se eligi esta distancia por qu sera el caso ms desfavorable
ya que los procesos de electrospinning por lo general no utilizan distancias menores a esta.
El ensayo fue realizado a una temperatura de 25 C, una humedad de 40%, condiciones de
presin atmosfrica 1010,2 hpa = 0,99 atmosfera y tiempo de duracin de 3 minutos
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Equipo de Electrospinning
No se observo durante el ensayo ningn tipo de ruptura de la rigidez dielctrica del aire.
A continuacin se muestra (Figura 56) la distribucin de las lneas de campo generadas en la
prueba, la simulacin se realizo con el programa Quickfield, para realizarla se tuvieron en
cuenta los parmetros utilizados en la prueba.
Parmetros:
Tensin Aguja : 40 kv
Tensin colector: 0 kv
Distancia aguja-colector : 10 cm
Aguja
Se observa en la figura 56 que el campo elctrico en los bordes del equipo es suficientemente
bajo y el riesgo de ruptura dielctrica del aire dentro de la cmara es bajo.
El campo elctrico no excede los 30 kV/cm en ninguna parte del sistema.
En el ensayo, tambin se puedo medir una corriente de fuga a tierra menor a 10 micro
Amperes, este valor cumple con lo establecido en la norma IRAM 4220-2-7 (Generadores de
alta tensin para equipo de Rayos X). Donde establece que para generadores de alta tension la
corriente de fuga a tierra tiene que ser menor o igual a 2 mili Amperes.
Se utilizo esta norma como referencia, ya que no existen normativas para la aplicacin de alta
tensin en equipos de elctrospinning
Por estas razones se concluye que el equipo es seguro para el usuario mientras se est
produciendo el proceso de electrospinning.
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Equipo de Electrospinning
Caractersticas de la fuente:
Marca: Protonics
Tensin de salida: 0-40kv Dc
Tensin de alimentacin : 220 v
Positivo a tierra
Medidor analgico de tensin de
salida
Medidor analgico de corriente de
salida
La fuente (Figura 57) tiene su positivo conectado a tierra, lo que implico conectar todo el chasis
a tierra.
Por razones de seguridad no se poda acercar a menos de 2 metros, ya que poda realizarse
una descarga elctrica.
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Equipo de Electrospinning
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Equipo de Electrospinning
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Equipo de Electrospinning
(Figura 61) Esquema de la prueba de resistencia del aislamiento de la red a la tierra de proteccin
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Equipo de Electrospinning
Valor obtenido
(A)
C.N
C.P.D
12,4
0,6
30,8
0,9
Norma IRAM
4220-1
(mA)
C.P.D
C.N
0,5
0,1
Valor obtenido
(ohms)
Resistencia elctrica de la
tierra de proteccin
0,130
1
0,9
Norma IRAM
4220-1
(ohms)
0,2
Todos los valores obtenidos en las pruebas fueron menor a los valores mximos establecidos
por la norma IRAM 4220-1
La prueba de resistencia del aislamiento se realizo a una tensin de 250v, el equipo analizador
acus en su display el mensaje OL M (Figura 63), el cual indica que la aislacin del equipo es
del orden de los Mega ohm, este es orden de aislacin que establece la norma.
En el caso de que la aislacin sea menor a lo establecido por la norma el equipo analizador
indica un valor cuantitativo.
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Equipo de Electrospinning
CAPTULO 7:
PUESTA EN MARCHA DEL
EQUIPO
A continuacin se describen las experiencias realizadas con el equipo y sus respectivos
resultados obtenidos.
7.1.1 Experiencia N 1:
Se realizo la primea experiencia del equipo para poder comprobar el correcto funcionamiento.
Para realizar el ensayo se utilizo una fuente de alta tensin cuyo rango es de 0-40kv, que nos
facilito el Laboratorio de Alta Tensin de la Facultad de Ciencias Exactas y Tecnologa de
Tucuman a cargo del Dr. Daz.
El polmero utilizado para realizar la experiencia fue el alcohol polivinilico (PVA), este nos
proporciona la conductividad necesaria para el proceso de electrospininng.
Velocidad de flujo
Distancia punta de la aguja-colector
Tensin aplicada
Concentracin PVA
Velocidad de recoleccin
Aguja utilizada
8 ml/h
10 cm
20 kv
8 % peso/volumen
10 RPS (600 RPM )
Punta roma, dimetro interno 18G
Longitud 51 mm
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Equipo de Electrospinning
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Equipo de Electrospinning
La escasa deposicin de fibras sobre el colector (Figura 65), fue debido a que el proceso duro
solo 30 minutos ya que se produjo un problema tcnico en la fuente de tensin, lo que llevo a
tener que detener el proceso.
Fibra
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Equipo de Electrospinning
Al visualizar los resultado con un aumento de 100 veces (Figura 67) se puede observa que se
obtuvo deposicin de fibras en el cilindro, para estudiar mejor la morfologa de la fibra obtenida
se visualiza con aumentos de 400 y 1000, en el de 400 (Figura 68) veces mayor se observa la
fibra pero la resolucin todava no permite distinguir bien la morfologa ya que se observa
mucho las imperfecciones de la superficie del colector. En el aumento 1000 veces (Figura 70),
se puede distinguir que se produjo un fenmeno denominado electrospraying, el cual consiste
en la formacin de micro gotas del orden de 100 micrmetros, si bien se obtuvo electrospraying
se puede observar que algunos sectores existe la tendencia a la formacin de hilos
micromtricos (Figura 71) .
Electrospraying
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Leve tendencia a
formacin de fibras
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Caractersticas de la fuente:
Marca: Arion
Tensin de salida: 0-5 kv Dc
Corriente mxima de salida: 2 mA
Medidor analgico de tensin
Salida flotante de tensin
Tension de alimentacin 220 v
Velocidad de flujo
Distancia punta de la aguja-colector
Tensin aplicada
Concentracin PVA
Velocidad de recoleccin
Aguja utilizada
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En estas tres primeras pruebas no se observaron cambio en las dimensiones de la gota que se
forma en la punta de la aguja a medida que se aumenta el potencial desde cero(Figura 75)
hasta alcanzar el valor mximo de 5 kv (Figura 76).
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Equipo de Electrospinning
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Las otras nueves pruebas que se realizaron son iguales a las anteriores solo que se cambio la
concentracin de la solucin a 8/10 % peso/volumen.
No se observaron cambios en el comportamiento del proceso fue igual al de las pruebas con la
concentracin inicial.
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CAPTULO 8:
RESULTADOS Y CONCLUSIONES
En el presente proyecto se ha realizado el diseo, fabricacin y estudio del comportamiento de
una mquina de electrospinning que crea micro o nano fibras a partir de una disolucin de
polmero. El equipo permite variar el tamao de la fibra en funcin de variables tales como la
concentracin del polmero en la disolucin, el voltaje del campo elctrico, la velocidad de flujo
del polmero, velocidad de recoleccin y la distancia aguja-colector.
Se sometido a electrospinning una solucin del polmero Alcohol Ponivinilico (PVA). Si bien las
fibras obtenidas no tuvieron la morfologa deseada, se puede concluir que el funcionamiento de
la maquina es correcto.
La obtencin de nano o micro fibras est relacionado con un mejor manejo de las variables que
intervienen en el proceso de electrospinning.
El proyecto consta principalmente de dos partes:
a. El diseo, compra, montaje del equipo y su puesta en marcha. Para ello, fue necesario
buscar en catlogos internacionales e iniciar trmites de compra en EEUU.
El trmite de compra de la fuente se encuentra por el momento en anlisis, debido a la
restricciones de importacin que sufre el pas en estos momentos (noviembre del 2012).
b. Prueba de electrospinning con el equipo diseado de un polmero comercial (PVA)
Del trabajo realizado se deducen las siguientes conclusiones:
1. Se diseo y fabrico un equipo de electrospinning que consta de los siguientes
componentes: Bomba de infusin, colector rotacional, generador de alta tensin, chasis y
caja protectora.
2. Se realizo prueba de rigidez elctrica del aire, utilizando para el ensayo un 10% ms
tensin de uso y distancia ms desfavorable entre aguja-colector. No observndose
ruptura de la rigidez elctrica
3. Se realizo pruebas de seguridad elctrica con el analizador FLUKE ESA 612, obteniendo
resultados satisfactorios de acuerdo los establecidos por la norma IRAM 4220-1
4. Se ha sometido a electrospinning un polmero biocompatible, Alcohol Polinilico (PVA)
disuelto en agua
5. Se ha realizado una experiencia con una fuente de alta tensin de 20 kv a parmetros
constantes, en el cual se pudo obtener resultados que corroboran el buen funcionamiento
del equipo.
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Equipo de Electrospinning
6. No se consigui que las fibras obtenidas tuvieran la formacin deseada, sin embargo
para ser la primera prueba realizada con el quipo se puede estar conforme con su
funcionamiento, ya que el comportamiento del equipo fue satisfactorio en todos sus
aspectos, la obtencin de fibra con una morfologa aceptable requiere de experiencia en
el manejo de los parmetros del proceso de electrospinning.
7. Se han realizado 18 experiencias con una fuente de tensin mxima de 5 kv en las
cuales se han variado sistemticamente los parmetros siguientes: concentracin del
polmero en la disolucin, velocidad de inyeccin de fluido y distancia aguja-colector.
8. Si bien en estas experiencias no se puedo obtener fibras, debido a la complejidad del
proceso y limitada experiencia en el mismo. Se puedo observar cmo se produce
parcialmente la fsica del proceso.
9. El equipo queda disponible para su uso en el laboratorio de Ingeniera de Tejidos de la
Facultad de Ciencias Exactas y Tecnologa de Tucumn, para realizar futuros trabajos de
investigacin.
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CAPTULO 9:
PERSPECTIVAS FUTURAS
Si bien en la actualidad el electrospinning es una tcnica utilizada solamente en el rea de la
investigacin.
En un futuro podra aplicarse de la siguiente manera:
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Equipo de Electrospinning
En un futuro se podra estudiar la manera de poder realizar el proceso con niveles de tensin
menores.
Esto eliminara la limitacin de adquirir fuentes de alta tensin, cuyo costos son elevado y
difciles de conseguir, solo existen tres fbricas de fuentes para electrospinning en el mundo.
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CAPITULO 10:
REFERENCIAS
10.1 Referencias bibliogracias
[1] Anton Formhals , Artificiald Thread and Method of Producing Same , U.S. Patent 2187306, July 28, 1937
[2] R.Lanza, R. Langer, J. Vacanti , Principles of Tissue Engineering, third edition 2007
[3] IRAM Seguridad en Equipos Electromedicos, IRAM 4220-1
[4] IRAM Generadores de alta tensin para equipos de Rayos X, IRAM 4220-2-7
[5] P. C. Caracciolo, F. A. Buffa y G. A. Abraham, Matrices poliuretanas nanofibrosas obtenidas por el proceso
de electrospininng, Divisin Polmeros, INTEMA (Universidad Nacional de Mar del Plata CONICET) Mar del
Plata, Pcia. de Buenos Aires.2008
[6] T. Andric, A.C. Sampson, J.W. Freeman, T. Andric, A.C. Sampson, J.W. Freeman, Fabrication and
characterization of electrospun osteon mimicking scaffolds for bone tissue engineering. Virginia Polytechnic
Institute and State University, Blacksburg, , USA , 2010
[7] Marcos A. Sabino G, Modificacin de superficies de biomateriales polimricos y estudio de
biocompatibilidad, Departamento de Qumica, Universidad Simn Bolvar, Apdo. Postal. 89000. Venezuela, 2007
[8] Michelle K. Leach, Zhang-Qi Feng, Samuel J. Tuck, Joseph M. Corey,
Electrospinning Fundamentals: Optimizing Solution and Apparatus, Department of Biomedical Engineering,
University of Michigan,2011
[9] Amparo Lpez-Rubio, Ester Sanchez, Sabina Wilkanowicz, Yolanda Sanz, Jose Maria Lagaron,
Electrospinning as a useful technique for the encapsulation of living bifidobacteria in food hydrocolloids, Novel
Materials and Nanotechnology Group, IATA-CSIC, Avda. Agustin Escardino , Paterna (Valencia), Spain, 2012
[10] Zheng-Ming Huanga,, Y.-Z. Zhang, M. Kotaki, S. Ramakrishna, A review on polymer nanofibers by
electrospinning and their applications in nanocomposites. Ed Covent Garden, London, 2005
[11] W. Gamboa, O. Mantilla, V. Castillo, Produccin de micro y nano fibras a partir de la tcnica de
electrospininng para uso farmacolgico, Fundacin Cardiovascular de Colombia , Grupo de Bioingenieria, 2007
[12] C. Cardozo, M. Sabino, J. Ramrez, J. C. Rodrguez, M. Martnez., Dispositivo para la obtencin de
nanofibras polimricas por accin de fuerzas electrostticas, Universidad e Simn Bolvar, 2007
[13] Prevencin del riesgo en el laboratorio. Instalaciones, material de laboratorio y equipos. INSHT,
NTP433,2009.
[14] AKER PREVENCIN (2009,feb,1) Formacin en prevencin de riesgos Laborales [Online]. Available FTP:
www.ucm.es/info/inmuno/personal/ File:MANUAL%20PERS.LABOR.pdf
[15] Burgos J. C., Circuitos Magnticos y Transformadores as, Universidad Carlos III de Madrid, 2007
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