DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE

GLUCOSA EN ALMIDN
Alfaro Molina Willy Javier1, Choque Alegre Devora Lizeth1,
Paredes Aari Melanie Shirley1, Uztegui Ibez Mara del
Rosario1.
1

Programa Profesional: Farmacia y Bioqumica, Facultad de Ciencias

Farmacuticas, Bioqumicas y Biotecnolgicas, Campus U.C.S.M.,
Arequipa Per.

1. RESUMEN
Este proyecto consisti en la produccin de glucosa a partir de almidn,
utilizando la hidrlisis enzimtica. Para ello se probaron muchas
variables como enzimas obtenidas de Aspergillus niger, Bacillus subtilis
y Aspergillus oryzae, a diferentes temperaturas, pH y concentraciones
de sustrato, y se estandarizo condiciones de proceso, permitiendo que
sirvan como parmetro, para el diseo tanto del proceso como de los
equipos necesarios para industrializar la produccin de la glucosa,
utilizando como sustrato el almidn de yuca producido en el Cauca. Esta
hidrlisis de almidn de yuca (Manihot sculenta Crantz) producido en el
Departamento del Cauca por la Cooperativa de Rallanderos
(COPRACAUCA), con enzimas comerciales alfa-amilasa BAN 480 de
Bacillus amyloliquefaciens y amiloglucosidasa AMG 300 L de Aspergillus
nger. Despus de realizada la hidrlisis completa del almidn el jarabe
se filtr para ser sometido a tratamiento trmico de 85 C por 5 minutos,
se concentr y cristalizo obteniendo un producto con un valor Dextrosa
Equivalente (DE) de cercano a 90%.
PALABRAS CLAVES: Almidn, amilosa, amilopectina,
hidrlisis enzimtica, alfa amilasa, glucoamilasa y Glucosa.

2. ABSTRACT

This project was going to production the glucose from starch, using the
enzymatic hydrolysis. For it many variables like enzymes obtained from
Aspergillus niger, Bacillus subtilis y Aspergillus oryzae, to different
temperatures, pH and concentrations of substrate and giving to
conditions standar for the process, allowing that serve like parameter,
for the design the process as of the equipment necessary to industrialize
the production of the glucose, using like substrate the starch of yucca
produced in the Departamento del Cauca. This starch hydrolysis of yucca
(Manihot sculenta Crantz) produced in the Department of the Cauca by
the Cooperative of Rallanderos (COPRACAUCA), with commercial
enzymes alpha-amylase BAN 480 of Bacillus amyloliquefaciens and
amiloglucosidasa AMG 300 Ls of Aspergillus Niger. After made complete
hydrolysis of the starch the syrup filter to have been put under heat
treatment of 85 C by 5 minutes, The concentrate was crystallized
obtaining a product with an equivalent dextrose (DE) near to 90%.
KEY WORD:
Starch, amylose, amilopectine, enzymatic
hydrolysis, alpha-amylase, gluco-amylase, glucose.
3. INTRODUCCIN
La yuca (Manihot sculenta) es una planta
originaria de la Amrica tropical. Los
principales pases productores son Brasil,
Zaire, Nigeria e Indonesia (1).
La yuca, uno de los productos tradicionales
de la agricultura nacional, se convirti en
fuente bsica del desarrollo econmico y
social en el norte del Cauca generando un
perfil industrial que beneficia directamente
a casi 28 mil e indirectamente a miles de
personas ms. Es as como en el norte del
Cauca se encuentran 170 rallanderas con capacidad de procesamiento
de 1.000 - 2.500 Kg. de yuca fresca/da. De 100 Kg. de yuca fresca, se
producen 20 Kg. de almidn, 6.5 Kg. de afrecho (subproducto de
mediana finura constituido por fibra y porciones de races) y 1.5 Kg. de
mancha.

Estos volmenes de produccin de almidn benefician al sector agrcola

al dar un valor agregado a la yuca, pero al mismo se le puede dar un
mayor valor si se lo somete a un proceso de transformacin nivel 2,
como el de la hidrlisis enzimtica para la produccin de glucosa. (2)
La hidrlisis del almidn se puede hacer por dos vas: cida o
enzimtica. La hidrlisis cida del almidn a glucosa es una tcnica que
tiene muchas desventajas: formacin de productos no deseables y
flexibilidad muy pobre (el producto final slo se puede modificar
cambiando el grado de hidrlisis), por ltimo es necesaria que el equipo
resista el cido y las temperaturas requeridas durante el este proceso.
La hidrlisis enzimtica en los ltimos 30 aos ha desplazado la hidrlisis
cida, debido a que se dispone de nuevas enzimas. Hoy en da la mayor
parte de la hidrlisis de almidn se realiza usando enzimas, ya que esta
tcnica presenta ventajas como: control de la formacin de productos no
deseables y mayor flexibilidad del producto.
La alfa-amilasa (Alfa 1,4-D- Glucan Glucano-hidrolasa) hidroliza los
enlaces glucosdicos alfa-1,4 de los polisacridos que poseen 3 o ms
unidades de D-glu cosa en unin alfa-1,4. El ataque se hace en forma no
selectiva (tipo endoenzima) sobre varios puntos de la cadena
simultneamente, aunque los primeros productos de la hidrlisis son
siempre oligosacridos de 5-7 unida-des de glucosa, o un nmero
mltiplo.
La amiloglucosidasa (Alfa-1,4- D-Glucan glucohidrolasa) es una
exohidrolasa tambin conocida como glucoamilasa, que hidroliza los
enlaces glucosdicos alfa-1,4 y alfa-1,6 de la amilosa y la amilopectina
separando unidades de glucosa a partir del extremo no reductor de la
cadena (3).

GELIFICACIN: Los grnulos de almidn son insolubles en agua fra,

pero pueden contener agua al aumentar la temperatura, es decir los
grnulos de almidn sufren el proceso denominado gelatinizacin o
gelificacin.
Durante la gelatinizacin se produce la lixiviacin de la amilosa, la
gelatinizacin total se produce normalmente dentro de un intervalo ms
o menos amplio de temperatura, siendo los grnulos ms grandes los
que primero gelatinizan.

Los diversos estados de gelatinizacin pueden ser determinados. Estos

estados son: la temperatura de iniciacin (primera observacin de la
prdida de birrefrigencia), la temperatura media, la temperatura final de
la prdida de birrefringencia (TFPB, es la temperatura a la cual el ltimo
grnulo en el campo de observacin pierde su birrefringencia), y el
intervalo de temperatura de gelatinizacin.
Al final de este fenmeno se genera una pasta en la que existen
cadenas de amilosa de bajo peso molecular altamente hidratadas que
rodean a los agregados, tambin hidratados, de los restos de los
grnulos.

Tipo de
almidn

Maz

Trigo

Amilosa
Forma del
grnulo
Tamao
Temperatura
de
gelatinizacin
Caracterstica
s del gel

27 %
Angular poligonal, esfrico

24 %
Esfrico o lenticular

5-25 micras
88-90 C

11-45 micras
58-64 C

Tiene una viscosidad

media, es opaco y tiene
una tendencia muy alta a
gelificar.

Viscosidad baja, es
opaco y tiene una alta
tendencia a gelificar.

Anlisis de la Raz
La raz de la yuca (Foto 2) se compone de tres tejidos: el
periderma (cascarilla), el parnquima cortical (corteza) y el
parnquima interior (Figura 1).
Periderma o cascarilla
Parnquima cortical
Parnquima interior

Figura 1.

Corte transversal de la raz de yuca.

El 80% del peso fresco de la raz, aproximadamente, corresponde al

parnquima o pulpa, que es el tejido en que la planta almacena el
almidn.
El contenido de materia seca de la raz de yuca flucta entre el 30%
y el 40%.
La materia seca del parnquima est constituida, en su mayor parte
(90% a 95%), por la fraccin no nitrogenada, es decir, por
carbohidratos (almidn y azcares).
El resto de esta materia seca corresponde a fibra (1% a 2%), grasas
(0.5% a 1.0%), cenizas o minerales (1.5% a 2.5%) y protena (2.0%).
El almidn representa, adems, la mayor parte de los carbohidratos
(96%) y es, por tanto, el principal componente de la materia seca de
la raz.
Las variedades cultivadas para uso industrial deben tener un alto
contenido de almidn (Wheatley, 1991).

Foto 2.
Races de yuca ya cosechadas.
externa parcialmente desprendida.
OBJETIVOS

Ntese la corteza

Incrementar la produccin de glucosa en el almidn de

yuca.
Poder sacar el rendimiento de proceso de la obtencin de
glucosa a partir del almidn de yuca (Manihot Sculenta).
Mejorar las tcnicas de produccin de los derivados del
almidn de yuca.

4. MATERIALES Y REACTIVOS

Micropipeta de 10 -100 ml
Bureta graduada
Erlenmeyers de 50, 100,
250 y 500 ml
Papel filtro
Pipetas volumtricas de 5,
10, 25 ml
Soportes
Balones volumtricos
Vasos de precipitado
Cpsulas de porcelana
Campana de desecacin
Mortero y piln,
Tips para micropipeta otros
Solucin de yodo diluida
(1:5)
NaOH al 1% y 40%

HCl al 1%
Solucin de Fehling A,
reactivo de Fehling B,
Indicador
de
azul
de
metileno al 1%
H2SO4 0.25N
NaOH 0.25N
Soluciones buffer de 4 y 7
Papel indicador universal
Almidn soluble
Tampn acetato 0.1M pH:
3
Buffer
CaCl2
NaCl
NaH2PO4
NaHPO4

Extractor Soxhlet
Refractmetro
Equipo Kjeldahl
Nevera
Espectrofotmetro.

EQUIPOS:
-

Agitador magntico
Balanza analtica
Bao termosttico
Rotaevaporador
Estufa
Mufla
METODOS DE ANALISIS:

Determinacin
Determinacin
Determinacin
Determinacin

de
de
de
de

humedad
ceniza
grasa
protena (Mtodo Kjedhal)

Determinacin de la fibra bruta (Mtodo segn AOAC 9.008)

Determinacin de carbohidratos (Mtodo de Diferencia) Relacin
amilosa/amilopectina (segn el CIAT)

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Caracterizacin de las enzimas
Para realizar la hidrlisis del almidn, la industria Novo Nordisk,
productor de enzimas, suministro dos tipos de enzimas diferentes con
las que se realizaron las pruebas de laboratorio. Cada enzima tiene
rangos de funcionamiento ptimos.
En la caracterizacin de las enzimas utilizadas en la hidrlisis de almidn
de yuca (BAN, AMG), se estudi el comportamiento de la actividad de las
mismas con relacin al pH y a la temperatura, siendo la actividad de
cada enzima la variable respuesta al ensayo.
De esta manera se encontraron las condiciones ptimas de las enzimas.
(Articulo "CARACTERIZACION ENZIMATICA DE ALFA-AMILASA Y
GLUCOAMILASA FUNGICA EN LA HIDR-LISIS DE ALMIDON DE YUCA
(Manihot sculenta). Grupo de Investigacin Asubagroin, Universidad del
Cauca. 2003.)

Cintica de las reacciones

Despus de obtener las condiciones de pH y temperatura adecuadas de
cada enzima, se determin la cintica de la reaccin de cada enzima
para establecer los tiempos ptimos de cada reaccin.
Cintica de la reaccin con alfa-amilasa BAN 480 de Bacillus
amyloliquefaciens
Se prepar una solucin al 30% en peso de almidn de yuca, se agreg
buffer fosfato 0.1 M hasta para ajustar el pH en un valor de 6.0;
seguidamente, se agreg la cantidad de la enzima -amilasa requerida
para la relacin enzima/sustrato fuera del 0.1% en peso. Se ajust la
temperatura a 70 C y se dej reaccionar durante 150 min. Conservando
estables las variables anteriormente mencionadas. Se tomaron muestras
en intervalos de 15 minutos y se determin la concentracin del almidn
presente en la solucin.

Cintica de la reaccin con amiloglucosidasa AMG 300 L de

Aspergillus nger
A la solucin de almidn se le agreg, CaCl 2 y buffer fosfato 0.1 M hasta
ajustar el pH e un valor de 6.0; seguidamente, se agreg la cantidad de
la enzima -amilasa requerida para la relacin enzima/sustrato fuera del
0.1% en peso. Se ajust la temperatura a 70 C y se dej reaccionar
durante 120 min conservando estables las variables anteriormente
mencionadas.
Posteriormente, se ajust de nuevo el pH a 4.8 y manteniendo siempre
la temperatura constante (65 C), se agreg enzima glucoamilasa en
una proporcin enzima/sustrato de 0.25%. Se dej reaccionar la mezcla
durante 43 horas continuas tomando muestra durante intervalos
determinados para establecer la produccin de glucosa.
Desarrollo de la hidrlisis enzimtica
Se prepar una muestra de almidn al 30 % en peso, se le agreg
acetato de sodio buffer 0.1 M para ajustar el pH y la cantidad de enzima
a-amilasa requerida para que la relacin enzima/sustrato fuera la
adecuada; se ajust la temperatura y se dej reaccionar durante el
tiempo apropiado, conservando estables la variables anteriormente
mencionadas.
Terminado el tiempo de reaccin se inactiv la enzima con cido
clorhdrico 0.1 N llevando el pH hasta 3, garantizando tambin la
precipitacin de la protena presente en la solucin.
Posteriormente, se ajust de nuevo el pH y la temperatura de acuerdo
con los resultados obtenidos en la caracterizacin de la glucoamilasa, se
agreg esta enzima en la dosis ptima y se dej reaccionar durante el
tiempo necesario para una adecuada interaccin entre enzima/ sustrato.
Se inactivo la enzima a 80 C por 5 minutos.
Refinacin cristalizacin y purificacin
Luego de finalizada la reaccin de hidrlisis completa del almidn con amilasa y glucoamilasa, el jarabe obtenido se filtr en tres etapas
manteniendo la temperatura a 50 C; la primera se efectu a vaco con
filtro de dimetro de malla de 20 , la segunda a vaco con un filtro de 5
y tierra de diatomceas y la tercera a vaco con un filtro de 5 y carbn
activado.

El jarabe se someti a tratamiento trmico cuyas condiciones fueron: 85

C durante 10 minutos. Este procedimiento se realiz garantizando una
agitacin continua para evitar que el jarabe se quemara en la pared
interior del recipiente de esterilizacin.
Inmediatamente terminado el tratamiento trmico, el jarabe se
concentr en un rotaevaporador hasta lograr el 78% en peso de slidos
con vaco (92 mm Hg.) para alcanzar la ebullicin del agua a 50C, la
cual es inferior a la temperatura mxima recomendada, 65 C, para
evitar las reacciones de pardeamiento del tipo Maillad.
El jarabe a 50 C se coloc en un rotaevaporador, en un bao mara a 15
C. De esta forma la temperatura se baj de 50 C hasta 20 C, sta se
mantuvo durante 52 ho-ras, en las cuales se mantuvo el jarabe en
agitacin, a 20 rpm. Seguidamente se baj la temperatura del jarabe
hasta 10 C, por imersin en un bao mara a 8 C, con agitacin a 20
rmp.
Finalizando este tiempo, parte de los slidos presentes en la solucin
cristalizaron como dextrosa.
La cristalizacin se realiz lentamente con el fin
de garantizar la formacin de cristales de gran
tamao, los cuales son fciles de separar de la
solucin residual. En el proceso industrial, la
cantidad restante de solucin se reprocesa y es
fuente adicional de glucosa.
Para separar los cristales de la solucin se utiliz
el mtodo de filtracin. La purificacin de los
cristales se efectu lavndolos con el 10% de
agua destilada y desionizada respecto al peso de
los slidos cristaliza-dos. Se realiz un secado
posterior de los cristales hasta una humedad del
8.5% en peso que est por debajo de la humedad
de equilibrio para este producto que es del 9.1%, aproximadamente (4).
Anlisis del Producto Final
Para el anlisis y caracterizacin del producto se utiliz Cromatografa
Lquida de Alta Presin (HPLC), por ser sta una tcnica que permite
determinacin directa y rpida de azcares, incluyendo oligosacridos,
con una mnima preparacin de muestra y brindando una precisin igual

a la de otras tcnicas cromatogrficas (cromatografas de: gas, papel,

capa delgada, particin lquida, intercambio inico y permeacin con
gel). El anlisis fue hecho bajo las siguientes especificaciones:
-

Columns: Shodex AFpak AGO-494

Eluent:
Acetonitrile - water (80/20)
Flow rate: 0.2mL/min.(Eluent)
0.4mL/min.(Reagent)
Detector: Shodex CL
Column temp.: 37deg-C

6. RESULTADOS Y DISCUSIN

Composicin del almidn de yuca

Segn el anlisis proximal el almidn de yuca (Cuadro 1.) utilizado como
materia prima en la hidrlisis enzimtica para produccin de glucosa,
posee una humedad por encima de la reportada como parmetro por el
ICONTEC para almidones. Una humedad del 16.42%, aunque no afecta
directamente el rendimiento del pro-ceso planteado en este trabajo, es
un riesgo en el almacenamiento del almidn, ya que se genera una
actividad de agua (Aw) propicia para el ataque de microorganismos, que
no slo afecta la calidad de este, sino tambin la calidad del producto
final por la acumulacin de pirgenos (5).
Los contenidos de protena, cenizas y fibra, tambin, se encuentran por
encima de los parmetros establecidos por el Instituto Colombiano de
Normas Tcnicas, sealando una falta de refinamiento del producto o
fallas en el proceso de extraccin.
El contenido de amilosa en el
almidn fue del 18 % valor superior
a los normalmente sealados para
la yuca por otros autores, quienes
dan un rango entre 15 y 17% (6).

CUADRO 1. Anlisis proximal

almidn de yuca.

pH

3.3 Cintica de
CUADRO
a-amilasa

2.

amilas
a
6.0

Temperatu 70C
ra
Concentrac 0.1%
in
Enzima
(
g
enz./g
sust.)

glucoamil
asa
5.5
60C
0.25%0
(g enz./g
sust.)

las reacciones
Cintica de la

GRFICO 1: Concentracin sustrato vs. Velocidad

Caracterizacin de las enzimas

Segn el artculo "CARACTERIZACION ENZIMATICA DE ALFA-AMILASA Y
GLUCOAMILASA FUNGICA EN LA HIDRLISIS DE ALMIDON DE YUCA
(Manihot sculenta). Grupo de Investigacin Asubagroin, Universidad del
Cauca 2003." Las condiciones ptimas de operacin de las enzimas en la
hidrlisis son:
Cintica de la reaccin con alfa-amilasa BAN 480 de Bacillus
amyloliquefaciens
A continuacin se presentan los datos obtenidos (Cuadro 2) y el
comportamiento del sustrato durante la reaccin (Grfico 1).
Teniendo en cuenta el sustrato disponible en todo momento para la
hidrlisis, se efectu el anlisis de la reaccin de la hidrlisis siguiendo la
teora de Michaelis-Menten.

Para aplicar la teora cintica de Michaelis- Menten es necesario

presuponer que nada del producto se revierte al sustrato inicial.

Teniendo en cuenta que la velocidad cataltica es igual al producto de la

concentracin del complejo ES y k3; la velocidad de formacin de ES es
igual al producto de E, S y k1; la velocidad de descomposicin de ES es
igual al producto ES por la suma de k2 y k3.
Bajo condiciones de estado estacionario, se igualan las expresiones y se
obtiene:

La velocidad mxima se obtiene cuando los centros de la enzima se

encuentran saturados de sustrato.

En este momento la expresin {[S] / ([S] + [Km] ) } se aproxima a 1. Del

cuadro 2, se tiene que la velocidad mxima es aproximadamente:

Se determin entonces, que la reaccin es de primer orden, donde la

velocidad es exactamente proporcional a la concentracin de un
reaccionante. De acuerdo con esto, se estableci que tiempo de reaccin
adecuado es de dos horas para obtener una concentracin de almidn
remanente del 9.1% del almidn inicial.

Cintica de la reaccin con amiloglucosidasa AMG 300 L de

Aspergillus nger
Teniendo en cuenta que el sustrato disponible en todo momento para la
hidrlisis, es la diferencia de los slidos totales en la solucin y la
fraccin de glucosa existente en un tiempo dado de reaccin, se efectu
el anlisis de la reaccin de la hidrlisis siguiendo la teora de MichaelisMenten (Cuadro 3).
Para aplicar la teora cintica de Michaelis- Menten es necesario
presuponer que nada del producto se revierte al sustrato inicial.

velocidad de formacin de ES es igual al producto de E, S y k 1; la

velocidad de descomposicin de ES es igual al producto ES por la suma
de k2 y k3.
Bajo condiciones de estado estacionario, se igualan las expresiones y se
obtiene:

La velocidad mxima se obtiene cuando los centros de la enzima se

encuentran saturados de sustrato.

En este momento la expresin { [S] / ([S] + [Km ] ) } se aproxima a 1. Del

cuadro 3, se tiene que la velocidad mxima es aproximadamente:

CUADRO 3. Cintica de
la glucoamilasa

GRFICO
2.
Concentracin sustrato vs. Velocidad reaccin con glucoamilasa

Segn la cintica realizada la reaccin es de primer orden y el tiempo de

reaccin adecuado es de 40 horas para obtener una concentracin de
glucosa del 90.6% de los slidos presentes en la solucin.
A partir de este momento el incremento en la produccin de glucosa es
muy bajo (menor del 2%) a costo de un gran periodo de tiempo de
reaccin adicional y bajo el riesgo de aparicin de los indeseables
productos de reversin.
Desarrollo de la Hidrlisis Enzimtica

Al observar los resultados obtenidos en las caracterizaciones de cada

una de las enzimas, se decidi realizar la dextrinizacin (reaccin con la
-amilasa) y la hidrlisis (reaccin con glucoamilasa) bajo las siguientes
condiciones:
Reaccin con la -amilasa:
-

pH: 6.0 Temperatura: 70 C

Concentracin de enzima: 0.1% (g enz./g sust.) Tiempo de
reaccin: 120 min.
Reaccin con Glucoamilasa: pH: 5.8
Temperatura: 65 C
Concentracin de enzima: 0.25% (g enz./g sust.) Tiempo de
reaccin: 36 h.

La dextrinizacin y la hidrlisis del almidn se realiza-ron en un solo

proceso.
A la solucin de almidn al 30% en peso se le agreg, CaCl 2 y buffer
fosfato 0.1 M hasta ajustar el pH en un valor de 6.0; seguidamente, se
agreg la cantidad de la enzima -amilasa requerida para la relacin
enzima/ sustrato fuera del 0.1% en peso. Se ajust la temperatura a 70
C y se dej reaccionar durante 120 min conservando estables las
variables anteriormente mencionadas. Terminado el tiempo de reaccin
se inactiv la enzima con cido clorhdrico 0.1 N llevando el pH hasta 3,
garantizando tambin la precipitacin de la protena presente en la
solucin.
Posteriormente, se ajust de nuevo el pH a 4.8 y para mantenerlo se
adicion acetato de sodio buffer 0.1M y manteniendo siempre la
temperatura constante, 65 C, se agreg enzima glucoamilosa en una
proporcin enzima/sustrato de 0.25%.
Refinacin cristalizacin y purificacin del jarabe
Luego de finalizada la reaccin de hidrlisis completa del almidn con amilasa y glucoamilasa, el jarabe obtenido se filtr en tres etapas
manteniendo la temperatura a 50 C; la primera se efectu a vaco con
filtro de dimetro de malla de 20 , la segunda a vaco con un filtro de
5 y tierra de diatomceas y la tercera a vaco con un filtro de 5 y
carbn activado. La cantidad de tierra de diatomceas y carbn
activado, utilizado correspondi al 10% de la solucin a filtrar, para cada
una de ellas.

El jarabe se someti a un proceso tratamiento trmico bajo las

condiciones descritas anteriormente. Inmediatamente terminado el
tratamiento trmico, el jarabe se concentr hasta lograr el 78% en peso
de slidos, segn la metodologa planteada.
El jarabe concentrado se someti a enfriamiento para obtener la glucosa
cristalizada. Finalizando el tiempo de cristalizacin, parte de los slidos
presentes en la solucin cristalizaron como dextrosa (52.4 % en peso).
Por lo tanto, la cantidad cristalizada de glucosa es:
Dext. crist. = 500 g soluc. X (23.2 g almidn/100 g soluc.) x 0.524 =
60.78 g glucosa
La cristalizacin se realiz lentamente con el fin de ga-rantizar la
formacin de cristales de gran tamao, los cuales son fciles de separar
de la solucin residual.
Para separar los cristales de la solucin se utiliz el m-todo de
filtracin. La purificacin de los cristales se efectu lavndolos con el
10% de agua destilada y desionizada respecto al peso de los slidos
cristaliza-dos, se realiz un secado posterior de los cristales hasta una
humedad del 8.5% en peso que est por debajo de la humedad de
equilibrio para este producto que es del 9.1%, aproximadamente.
La eficiencia del proceso es:
Cant. Mx. glucosa = 500 g soluc. X (23.2 g gluc./100 g soluc.) = 116
g
Cant. Crist. Dextrosa = 60.78 g glucosa
Eficiencia del Proceso = (glucosa crist) x 100 / (gluco-sa mx. crist.) =
52.4%

ANLISIS DEL PRODUCTO FINAL

Para el anlisis y caracterizacin del producto se utiliz la Cromatografa
Lquida de Alta Presin (HPLC), por ser sta una tcnica que permite una
determinacin di-recta y rpida de azucares, con una mnima
preparacin de muestra y brindando una precisin igual a la de otras
tcnicas.

El anlisis fue hecho en un laboratorio externo, bajo las siguientes

especificaciones:

Columna
Efluente
Flujo
Detector
Temperatur
a
La glucosa que
especificaciones:

se

utiliz

:
Shodex
AFpak
AGO-494
: Acetonitrilo - agua
(80/20)
: 0.2mL/min.
: Shodex CL
: 37deg-C

como

Dextrosa
equivalente
Humedad
Acidez (ml. NaOH
0.02N/5 g)
Cenizas
Metales pesados
Arsnico
Cloruros
Sulfatos
Dextrina
Almidn soluble
Color
Cuenta Estndar
Hongos
Levaduras
Coliformes
E. colli
Salmonella

patrn

de

comparacin

tena

100.0%
0.05%
<0.30
0.06%
<5 ppm.
0 ppm.
<180 ppm.
<250 ppm.
Pasa Prueba
Pasa Prueba
Pasa Prueba
<10 ufc/g
<10 ufc/g
<10 ufc/g
<3 nmp/g
Negativo
Negativo

Se realiz un anlisis de glucosa por HPLC del jarabe de glucosa

concentrado sin cristalizar. En el cual se muestra que el jarabe tiene una
concentracin del 76.36% de Glucosa. (Grfico 3)

Segn el reporte del cromatograma del anlisis por HPLC hecho a la

muestra final (grfico 4) tiene una concentracin de glucosa del 88.76
%.
El jarabe glucosa producto del proceso de hidrlisis de almidn de yuca,
se concentr hasta el 78% en peso de slidos, el cual contiene el 76.36%
de glucosa.
Despus de la cristalizacin, el lavado y el secado, se obtuvo un
producto de color blanco, con el 88.76% de DE. Si observamos los
resultados la hidrlisis del almidn a glucosa con los parmetros
establecidos es eficiente, la falla del proceso se encuentra en la etapa
de cristalizacin y purificacin de la glucosa, siendo necesario
estandarizar las condiciones en que se rea-liza esta etapa.
7. CONCLUSIONES
Las condiciones de operacin de las enzimas en los procesos estn
limitadas por las propiedades especficas de cada una de ellas, como
tambin por las propiedades
GRFICO 3. Cromatograma del anlisis de glucosa en jarabe de
glucosa concentrado

Azcares fermentables
Glucosa:

76.36%

GRAFICO 4. Cromatograma anlisis de Glucosa producto final

Azcares fermentables
Glucosa:

88.76%

fsicas y qumicas del sustrato sobre el cual van a actuar. Las

condiciones ptimas de trabajo de la enzima BAN 480L 1,4-alfa-Dglucan-hydrolase (alfa-amilasa) en la hidrlisis de almidn de yuca son:
pH 6.0 y 70 C de temperatura, mientras que para la enzima AMG 300L
1,4-alfa-D-glucan glucohidrolase (glucoamilasa) son: pH 4.8 y 65 C.
Las reacciones contempladas en el proceso son de primer orden, donde
la velocidad de la reaccin es exactamente proporcional a la
concentracin del reaccionante, en este caso el almidn y los
disacridos.
El tiempo de reaccin adecuado para la dextrinacin, es de dos horas
para obtener una concentracin de almidn remanente del 9.1% del
almidn inicial. Pasado este tiempo la dextrinacin del almidn es muy
lento.
Para la sacarificacin el tiempo de reaccin adecuado es de 40 horas para
obtener una concentracin de glucosa del 90.6% de los slidos presentes en la
solucin. A partir de este momento el incremento en la produccin de glucosa
es muy bajo a costo de un gran periodo de tiempo de reaccin adicional y bajo
el riesgo de aparicin de los indeseables productos de re-versin.

Cuando se usa la glucoamilasa para hidrolizar altas concentraciones de

dextrinas no se alcanza la conversin completa a glucosa, ya que la
produccin de glucosa decrece con el tiempo debido a las reacciones de
reversin. No es posible, tampoco una conversin completa porque
existe una fraccin de maltosa que permanece en el jarabe.

El rendimiento del proceso de obtencin de glucosa a partir de

almidn de yuca fue del 40.72%, rendimiento bajo debido a la
deficiente etapa de cristalizacin.

El almidn de yuca tiene un buen

potencial para utilizarse en procesos de
produccin de glucosa y podra sustituir
al almidn de maz, pero en necesario
continuar con la investigacin en busca
de mejorar las tecnologas empleadas en
la produccin de los deriva-dos del
almidn de yuca.

8. BIBLIOGRAFIA
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